小檗碱上调程序性细胞死亡蛋白4抑制黑色素瘤B16细胞增殖及促细胞凋亡的研究

目的探讨小檗碱对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响。方法使用CCK-8法检测细胞增殖活力;使用流式细胞仪检测细胞周期;使用脂质体转染siRNA敲减程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)基因;使用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)明确敲减情况;使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;使用Western-blotting检测PDCD4增殖、凋亡情况及其相关蛋白表达。结果小檗碱可抑制黑色素瘤B16细胞的增殖活力,并将其细胞周期阻滞于G0/G1期; PDCD4是小檗碱抑制B16细胞增殖、促细胞凋亡的关键基因;小檗碱处理可增高PDCD4、Cleaved Caspase-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平,降低Ki-67、Bcl-2的表达水平,敲除PDCD4能减弱小檗碱对黑色素瘤B16细胞Ki-67、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3的影响。结论小檗碱通过上调PDCD4来抑制黑色素瘤B16细胞增殖并促使其凋亡。     

黄芩素对H_2O_2诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响机制研究

目的探究黄芩素对过氧化氢(H_2O_2)诱导肾小管上皮细胞活性、凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的肾小管上皮NRK52E细胞株随机分为5组,对照组为正常培养,H_2O_2组为500μmol/L H_2O_2干预细胞24 h,H_2O_2组+黄芩素(50μmol/L)、H_2O_2组+黄芩素(100μmol/L)、H_2O_2组+黄芩素(200μmol/L)为加入不同浓度黄芩素和500μmol/L H_2O_2处理细胞;四甲基偶氮唑(MTT)检测细胞的活性,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞的凋亡率,蛋白质印迹法(Western Blot)检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3),试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。结果 H_2O_2诱导NRK52E细胞活性降低(P0.05)、凋亡率增加(P0.05),SOD活性降低(P0.05),MDA活性增加(P0.05),Cleaved Caspase-3蛋白水平显著升高(P0.05);与H_2O_2组相比,不同浓度黄芩素提高NRK52E细胞的活性(P0.05),降低凋亡率(P0.05),提高SOD活性(P0.05),降低MDA活性和Cleaved Caspase-3蛋白水平(P0.05)。结论黄芩素可抑制肾上腺上皮细胞氧化应激反应,并通过下调磷酸化Caspase-3蛋白水平,从而抑制细胞凋亡,减轻细胞损伤。     

HMGB1对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究高迁移率蛋白1(HMGB1)对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法膀胱癌细胞BIU-87分成对照组、siRNA control组、HMGB1 siRNA组共3组,siRNA control组、HMGB1 siRNA组细胞为感染siRNA control慢病毒和HMGB1 siRNA慢病毒的BIU-87细胞,对照组为不感染慢病毒的BIU-87细胞。用Realtime PCR和Western blot检测细胞中HMGB1表达水平。MTT检测膀胱癌细胞增殖活性,流式细胞术检测膀胱癌细胞凋亡,Western blot检测膀胱癌细胞中CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、活化型Caspase-12(Cleaved Caspase-12)、活化转录因子4(ATF4)蛋白水平。结果 HMGB1 siRNA可以下调膀胱癌细胞中HMGB1的表达和转录,siRNA control对膀胱癌细胞中HMGB1表达没有影响。沉默HMGB1后膀胱癌细胞增殖能力下降,细胞凋亡率升高,细胞中凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-12表达水平升高,内质网应激蛋白CHOP、ATF4表达水平也升高。结论 HMGB1沉默可以通过内质网途径诱导膀胱癌细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞增殖。     

WWOX对胰腺癌细胞活性、凋亡及ATP含量影响及机制初步研究

目的研究含WW域的氧化还原酶(WWOX)对胰腺癌细胞增殖活性、凋亡及细胞中三磷酸腺苷(ATP)含量影响。方法在胰腺癌SW1990细胞中转染WWOX过表达质粒,同时转染对照质粒作为阴性组,设置只加入转染试剂的细胞为对照组。荧光定量PCR和Western blot法检测各组胰腺癌细胞中WWOX的表达水平,用MTT法测定胰腺癌细胞增殖活性,用流式细胞术测定胰腺癌细胞凋亡情况,用JC-1法检测胰腺癌细胞线粒体膜电位,用荧光素酶法测定ATP含量,用Western blot法检测胰腺癌细胞线粒体和胞质中细胞色素C(Cyt C)及细胞中剪切型Caspase-9(Cleaved Caspase-9)、剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果 WWOX过表达质粒转染后的SW1990细胞中WWOX mRNA和蛋白水平高于对照组(P0.05)。高表达WWOX后的SW1990细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中ATP含量降低,线粒体膜电位降低,线粒体中Cyt-C蛋白水平降低,胞质中Cyt-C蛋白水平升高,细胞中Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。阴性组细胞WWOX mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、凋亡率、ATP含量、线粒体膜电位、胞质和线粒体中Cyt-C蛋白水平、细胞中Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3蛋白水平与对照组相比均无显著差异(P0.05)。结论 WWOX可以抑制胰腺癌细胞增殖活性,诱导胰腺癌细胞凋亡,减少细胞中ATP合成,这可能与减少线粒体释放Cyt-C和线粒体膜电位有关。     

MTDH基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭能力的影响。方法在B淋巴瘤细胞Raji中转染MTDH siRNA和siRNA对照,分别命名为MTDH siRNA组和siRNA对照组,将没有转染的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot方法检测细胞中MTDH表达水平,MTT方法检测细胞增殖和黏附能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白水平。结果MTDH siRNA细胞中MTDH mRNA和蛋白水平均明显低于对照组和siRNA对照组(P<0.05)。与对照组和siRNA对照组比较,MTDH siRNA细胞增殖和黏附能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力也降低,细胞中Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTDH基因沉默下调B淋巴瘤细胞增殖能力,抑制B淋巴瘤细胞侵袭和迁移。     

沉默HDAC4抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用机制的研究

目的探究沉默组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)基因表达对多发性骨髓瘤LP-1细胞增殖、凋亡的影响以及作用机制。方法脂质体Lipofectamine 2000转入LP-1细胞中,实验分为对照组(不做任何处理)、阴性组(转入siRNA NC)、siRNA HDAC4组(转入siRNA HDAC4)。CCK-8法检测细胞的增殖活性,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡率,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中HDAC4、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达量。结果转染siRNA HDAC4后,LP-1细胞中HDAC4蛋白的表达量显著低于对照组(P 0. 05);与对照组相比,siRNA HDAC4组细胞的增殖活性显著降低(P 0. 05);而凋亡率显著增加(P 0. 05); siRNA HDAC4组细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05),但Bcl-2蛋白水平显著降低(P 0. 05)。结论沉默HDAC4基因可抑制多发性骨髓瘤LP-1细胞增殖,诱导其凋亡,可能通过降低Bcl-2水平,促进Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9表达发挥作用。     

PDCD4调控STAT3信号通路对肾癌细胞凋亡的影响

目的研究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)对肾癌细胞凋亡和信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路的影响。方法肾癌细胞RC-2中转染PDCD4过表达载体和空载体记为PDCD4组和空载体组,同时以不做转染的细胞作为对照组。在转染PDCD4过表达载体后的肾癌细胞培养液中添加STAT3抑制剂AG490记为AG490+PDCD4组,在不做转染的肾癌细胞培养液中添加STAT3抑制剂AG490记为AG490组。qRT-PCR和Western blot法分别测定细胞内PDCD4 mRNA和蛋白表达。用STAT3信号通路抑制剂处理肾癌细胞,MTT测定各组细胞存活率,流式细胞术测定各组细胞凋亡情况,Western blot测定细胞中STAT3、p-STAT3、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、裂解后的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved PARP)蛋白水平。结果转染PDCD4过表达载体可以提高肾癌细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平,而转染空载体对细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平无显著影响。PDCD4组、AG490组肾癌细胞存活率明显降低,细胞凋亡明显增多,细胞内STAT3磷酸化水平降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。AG490+PDCD4组肾癌细胞存活率降低更多,细胞凋亡率进一步增加,细胞内的Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白水平增加,与PDCD4组、AG490组细胞相比,差异具有统计学意义(P0.05)。空载体组细胞存活率、凋亡率与对照组比,差异无统计学意义(P0.05)。结论 PDCD4可以通过降低肾癌细胞中STAT3激活水平诱导肾癌细胞凋亡。     

Xklp2靶蛋白对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制研究

目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制。方法慢病毒感染肺癌细胞A549,以感染TPX2小干扰RNA(siRNA TPX2)和siRNA阴性对照慢病毒的细胞作为siRNA TPX2组和siRNA-NC组,同时以不做处理的细胞为Control组,RT-PCR和Western blot检测感染后细胞中TPX2水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,将各组细胞接种到裸鼠皮下,检测各组裸鼠肿瘤体积和重量,Western blot检测肿瘤组织中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、TPX2、p53水平。结果 siRNA-NC组细胞中TPX2 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、凋亡率及Cleaved Caspase-3、TPX2、p53水平与Control组比较,差异无统计学意义(P0.05)。siRNA TPX2组细胞中TPX2mRNA和蛋白均明显低于Control组(P0.05)。siRNA TPX2组细胞增殖活性明显降低,凋亡率明显升高,与Control组比较差异有统计学意义(P0.05)。接种siRNA TPX2组细胞的裸鼠肿瘤体积和重量均低于Control组,而肿瘤组织中Cleaved Caspase-3、p53水平均高于Control组,TPX2水平低于Control组(P0.05)。结论下调TPX2抑制肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡,抑制肺癌细胞裸鼠成瘤能力,这可能与促进p53表达和促进Caspase-3活化有关。     

Wnt信号通路抑制剂对下调PKM2表达后的肺癌A549细胞增殖凋亡及ROS水平的影响

目的研究Wnt信号通路抑制剂对下调丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)表达后的肺癌A549细胞增殖凋亡及活性氧(ROS)水平的影响。方法肺癌A549细胞转染PKM2小干扰RNA(PKM2 siRNA组)和小干扰RNA阴性对照(siRNA-NC组),以没有转染的A549细胞作为对照组。Real-time PCR和Western blot检测三组PKM2水平。用含有5μmol/L的Wnt信号通路抑制剂IWR-1的细胞培养液培养,设置为PKM2 siRNA+IWR-1组和IWR-1组,同时以不含有IWR-1的正常细胞培养液培养PKM2 siRNA组和对照组细胞。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,二氯二氢荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)法检测ROS水平,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平。结果细胞转染PKM2 siRNA后的PKM2 mRNA和蛋白水平、细胞存活率明显下降,细胞凋亡率、ROS水平明显升高,细胞中β-catenin、c-myc水平下降,而Cleaved Caspase-3水平升高,与不转染的对照组细胞相比差异具有统计学意义(P0.01)。Wnt信号通路抑制剂处理A549细胞后,细胞存活率也下降,细胞凋亡增多,细胞中ROS水平升高,Cleaved Caspase-3水平升高,与正常培养的A549细胞相比差异具有统计学意义(P0.01)。Wnt信号通路抑制剂处理转染PKM2 siRNA后的A549细胞,细胞凋亡率最高,细胞存活率最低,细胞中ROS水平最高,与单纯Wnt信号通路抑制剂处理和单纯转染PKM2 siRNA后的细胞相比,差异具有统计学意义(P0.01)。结论 Wnt信号通路抑制剂和下调PKM2均能够抑制肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡,ROS水平升高,并且二者共同作用后抑制肺癌细胞的作用更明显,下调PKM2可能通过抑制Wnt信号通路阻碍肺癌发生。     

下调PDCD4抑制MAP2K3和p38 MAPK的表达减轻LPS诱导的肾小管上皮细胞炎症和凋亡

目的 研究程序性细胞死亡蛋白4(programmed cell death protein 4, PDCD4)在脓毒症诱导的急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)中的作用机制,以及调控PDCD4表达通过丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3, MAP2K3)和p38蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK)对脓毒症AKI起到潜在治疗作用。方法 用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激人肾小管上皮细胞(HK-2)构建脓毒症AKI细胞模型。进一步用腺病毒介导siRNA和过表达载体抑制和上调AKI细胞模型中PDCD4的表达;CCK-8法检测细胞增殖;用DCFH-DA及激光共聚焦显微镜检测细胞中ROS水平,用总SOD活性检测试剂和MDA检测试剂盒检测细胞中SOD和MDA水平;免疫共沉淀验证PDCD4和MAP2K3之间的蛋白相互作用;TUNEL染色法检测细胞凋亡;RT-qPCR和Western blot检测PDCD4及相关基因的mRNA和...     

组蛋白去乙酰化酶1对肝癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对肝癌细胞增殖凋亡的影响。方法肝癌细胞SNU-449转染HDAC1小干扰RNA(HDAC1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control),同时设置不转染的细胞为对照。采用RT-PCR检测细胞中HDAC1mRNA的表达水平,Western blot检测细胞中HDAC1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果肝癌细胞转染siRNA control后,细胞存活率、凋亡率及细胞中HDAC1、Cleaved Caspase-3、STAT3、p-STAT3表达水平与对照细胞相比无显著差异(P0.05)。肝癌细胞转染HDAC1 siRNA后,细胞中HDAC1mRNA和蛋白表达水平与对照细胞相比均受到抑制,并且细胞存活率只有(63.74±8.37)%,而细胞凋亡率升高为(32.84±6.92)%,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,p-STAT3蛋白水平降低。结论干扰HDAC1表达能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖,作用机制可能与STAT3信号通有关。     

银杏叶提取物对高脂喂养胰岛素抵抗大鼠胰岛β细胞凋亡的保护作用

目的:研究银杏叶提取物对胰岛素抵抗大鼠的胰岛β细胞凋亡的保护作用.方法:Wistar大鼠40只,随机分为对照组(NC组)、高脂对照组(HL组)、高脂+罗格列酮组(HL+RSG组)和高脂+银杏叶提取物组(HL+EGb组).实验结束后,TUNEL法检测大鼠胰岛β细胞凋亡率,胰岛β细胞抗凋亡蛋白bcl-2和促凋亡蛋白bax的表达情况.结果:与NC组比较,HL组大鼠胰岛β细胞凋亡率升高(P＜0.05),与HL组比较,HL+EGb组、HL+RSG组大鼠胰岛β细胞凋亡率降低(P＜0.05);与NC组比较,HL组大鼠胰岛β细胞bcl-2蛋白表达水平降低,而bax蛋白水平升高,与HL组比较,HL+EGb组、HL+RSG组大鼠胰岛β细胞bcl-2蛋白表达水平升高和bax蛋白水平降低.结论:银杏叶提取物通过增加抗凋亡蛋白bcl-2表达和降低促凋亡蛋白bax表达,对高脂喂养胰岛素抵抗大鼠胰岛β细胞凋亡起到保护作用.     

脂多糖对巨噬细胞致胰岛β细胞炎症和凋亡的影响

目的探讨脂多糖对巨噬细胞诱导胰岛β细胞炎症反应和凋亡的影响。方法脂多糖处理单独RINm细胞培养组或RINm细胞、NR8383细胞共培养组一定时间,采用Real-time PCR法检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6 m RNA水平,Western blot法检测细胞内IL-1β、IL-6蛋白水平,Annexin-Ⅴ/PI染色法和Caspase-3分光光度计法检测细胞凋亡。多组间比较采用单因素方差分析,多组间的两两比较采用最小有意义差异t检验。结果 (1)脂多糖可促进RINm细胞和RINm细胞、NR8383细胞共培养组中RINm细胞IL-1β、IL-6的表达,且共培养组RINm细胞IL-1β、IL-6水平升高较单独RINm细胞组更为显著(P<0.01);(2)脂多糖可促进NR8383+RINm细胞共培养组中RINm细胞的凋亡(8.41%±0.68%vs.2.69%±0.48%,P<0.01),但脂多糖对单独RINm细胞培养组细胞的凋亡无明显影响(1.69%±0.11%vs.1.34%±0.10%,P>0.05)。结论脂多糖促进巨噬细胞诱导胰岛β细胞凋亡,这可能与脂多糖和巨噬细胞促进IL-1β、IL-6的表达有关。     

MMP-2基因对前列腺癌细胞恶性表型的影响及其机制研究

目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因对前列腺癌细胞恶性表型的影响及其机制。方法 Western blot和RT-PCR检测人正常前列腺上皮RWPE-1细胞和前列腺癌PC3细胞中MMP-2的表达情况;以脂质体Lipfectamine 2000将MMP-2 siRNA和MMP-2 control质粒分别转染至siRNA MMP-2组和siRNA control组细胞中,以不做处理的细胞为对照组。Western blot和RT-PCR检测其转染效果;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞的侵袭和迁移;FCM检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和Cleaved Caspase-8蛋白的表达。结果与RWPE-1细胞相比,PC3细胞中MMP-2蛋白和mRNA的表达水平显著升高(P0.05)。MMP-2在siRNA MMP-2组细胞中的蛋白和mRNA表达显著低于对照组(P0.05),而siRNA control组与对照组间MMP-2的蛋白和mRNA表达水平差异无显著性(P0.05)。siRNA MMP-2组细胞的OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数和VEGF蛋白的表达水平显著下降,而细胞凋亡率和Cleaved Caspase-8蛋白水平显著升高,差异均显著性(P0.05);对照组和siRNA control组间OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数、细胞凋亡率、VEGF和Cleaved Caspase-8蛋白表达均未见显著差异(P0.05)。结论 MMP-2在前列腺癌PC3细胞中高表达,干扰其表达可抑制细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调VEGF蛋白和上调Cleaved Caspase-8蛋白的表达有关。     

黄连素对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的研究黄连素对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法以心肌细胞H9C2为研究对象,分为3组,依次为对照组、模型组、黄连素组,其中模型组和黄连素组进行缺氧复氧处理,黄连素组用黄连素预处理,对照组不做处理。MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)表达。结果模型组细胞存活率、p-STAT3水平、SOD含量均明显低于对照组,而细胞凋亡率、LDH含量、MDA含量和Cleaved Caspase-3水平均明显高于对照组(P0.05)。黄连素组细胞存活率、p-STAT3水平、SOD含量均明显高于模型组,而细胞凋亡率、LDH含量、MDA含量和Cleaved Caspase-3水平均明显低于模型组(P0.05)。结论黄连素能够部分抑制缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡,并且对缺氧复氧抑制心肌细胞活性具有拮抗作用,其作用机制可能与细胞中STAT3信号通路有关。     

Wnt/β-catenin信号通路激活剂对过氧化氢诱导的星形胶质细胞凋亡的影响

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路激活剂对过氧化氢诱导的星形胶质细胞凋亡的影响。方法分离培养大鼠星形胶质细胞,分为5组,依次为:对照组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,其中对照组用正常的细胞培养液培养,模型组用含有400μmol/L的过氧化氢孵育20 h,低剂量组、中剂量组、高剂量组先用10μM、20μM、40μM的Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl处理20 h后再用400μmol/L的过氧化氢孵育20 h。用噻唑蓝(MTT)检测星形胶质细胞活力,流式细胞术检测星形胶质细胞凋亡,ELISA法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc蛋白表达。结果过氧化氢处理后细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中MDA含量增加,细胞培养液中LDH含量也升高。低、中、高剂量的Li Cl预处理后经过氧化氢处理后的星形胶质细胞活力升高,细胞凋亡率降低,细胞中MDA水平降低,培养液上清中LDH水平也下降,细胞中凋亡相关蛋白Cleaved Caspses-3表达水平也明显降低,并且低剂量的LiCl对星形胶质细胞的影响作用最小,高剂量的LiCl对星形胶质细胞的影响作用最大。结论 Wnt/β-catenin信号通路激活剂能够通过减弱过氧化氢对星形胶质细胞的氧化损伤减少星形胶质细胞凋亡。     

叉头框转录因子O亚族1对高糖环境下胰岛β细胞生长及细胞周期分布影响

目的研究叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)对高糖诱导的胰岛β细胞生长和周期分布的影响。方法 INS-1细胞分成对照组、高糖组、阴性+高糖组、干扰+高糖组共4组,处理方法如下:对照组:INS-1细胞不做任何处理。高糖组:用含有25 mmol/L的葡萄糖的细胞培养液培养1 d。阴性+高糖组:用含有25 mmol/L的葡萄糖的细胞培养液培养1 d,细胞为稳定感染shRNA control慢病毒的INS-1细胞。干扰+高糖组:用含有25 mmol/L的葡萄糖的细胞培养液培养1 d,细胞为稳定感染FOXO1 shRNA慢病毒的INS-1细胞。用Western blot和qRT-PCR检测细胞中FOXO1的表达情况,CCK-8测定细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Western blot方法测定细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27蛋白水平。结果高糖组胰岛β细胞中FOXO1表达水平高于对照组,干扰+高糖组胰岛β细胞中FOXO1的表达水平低于高糖组,阴性+高糖组细胞中FOXO1的表达水平与高糖组比较没有变化。高糖组胰岛β细胞增殖能力降低,细胞G0/G1期比率升高,细胞中cyclin D1蛋白水平降低,p27蛋白水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。干扰+高糖组胰岛β细胞增殖能力升高,细胞G0/G1期比率降低,细胞中cyclin D1蛋白水平升高,p27蛋白水平降低,与高糖组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论高糖诱导胰岛β细胞中FOXO1表达,敲低其表达能够逆转高糖对胰岛β细胞的增殖抑制和细胞周期阻滞作用。     

十二指肠空肠旁路术对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞功能恢复的作用

目的:研究十二指肠空肠旁路手术(duodenal jejunal bypass sugery,DJB)对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛β细胞功能恢复的影响。方法:采用高糖高脂饮食联合小剂量STZ腹腔注射建立T2DM动物模型,将成模大鼠随机分为T2DM组(T2DM-C)和T2DM手术组(T2DM-DJB),普通饮食大鼠为空白对照组(WC)。分别检测3组大鼠基础代谢指标、空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMAIR)。术后20周处死大鼠,留取胰腺组织放入4%多聚甲醛中固定。用HE染色、免疫荧光双标法和电镜检测胰岛病理学形态、胰岛β细胞和α细胞比例变化和胰岛超微结构。结果:术后T2DM-DJB组大鼠体重和饮食量较术前无明显改变,T2DM-DJB组与T2DM-C组比较血糖和胰岛素水平明显下降,胰岛素抵抗得到改善;术后HE染色示胰岛形态恢复良好;免疫荧光示胰岛β细胞所占胰岛比例较T2DM-C组升高;电镜示胰岛β细胞超微结构得到改善。结论:DJB手术改善T2DM大鼠葡萄糖代谢和胰岛素抵抗,缓解胰岛β细胞凋亡,改善胰岛β细胞功能。     

胰高血糖素样肽1通过circRNADOCK1/miR-132-3p信号轴调控胰岛β细胞分泌功能的研究

目的 探究胰高血糖素样肽1(GLP-1)通过circRNADOCK1/miR-132-3p信号轴调控胰岛β细胞分泌功能的作用。方法 高糖刺激大鼠胰岛β细胞系INS-1细胞,随机分为6组,对照组,GLP-1类似物组,circRNADOCK1 siRNA组,circRNADOCK1过表达组,GLP-1类似物+circRNADOCK1 siRNA组,GLP-1类似物+circRNADOCK1过表达组。通过钾刺激的胰岛素分泌(KSIS)实验检测INS-1细胞胰岛素分泌功能;运用酸乙醇抽提检测胰岛素含量;采用CCK-8法检测胰岛细胞增殖情况;通过Real-time PCR检测circRNADOCK1和miR-132-3p miRNA表达情况;双荧光素酶报告实验验证circRNADOCK1与miR-132-3p的结合作用。结果 与对照组比较,GLP-1类似物组与circRNADOCK1 siRNA组细胞的KSIS功能、胰岛素含量、增殖率以及miR-132-3p表达明显上升,差异有统计学意义(P<0.05),circRNADOCK1表达明显下降,而circRNADOCK1过表达组明显逆转上述指...     

大黄素对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制研究

【目的】探讨大黄素对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制研究。【方法】肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、模型组、20μg/mL组、40μg/mL组、80μg/mL组、160μg/mL组,对照组细胞常规培养,其余组细胞均经过肺炎链球菌感染,20μg/mL组、40μg/mL组、80μg/mL组、160μg/mL组细胞在感染后24 h分别加入不同浓度的大黄素(20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL)处理。噻唑蓝(MTT)检测各组A549细胞的增殖;流式细胞术检测凋亡率;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;蛋白质印迹法检测A549细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白水平。【结果】与对照组相比,肺炎链球菌感染的A549细胞增殖活性、Bcl-2、β-catenin、Cyclin D1蛋白水平降低(P<0.05),凋亡率及IL-6、TNF-α、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平增加(P<0.05);不同浓度大黄素促进肺炎链球菌感染的A549细胞增殖(P<0.05),抑制其凋亡(P<0.05),降低IL-6、TNF-α水平(P<0.05),增加Bcl-2蛋白水平(P<0.05),下调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平(P<0.05),提高β-catenin、Cyclin D1蛋白水平(P<0.05)。【结论】大黄素可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路从而促进肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞增殖,抑制其凋亡。