嵌合体外周血细胞异源性补体调节蛋白检测的意义

目的 通过流式细胞术检测人源性补体调节蛋白(hCD55和hCD59)在人脐血干细胞嵌合体大鼠外周血细胞中的分布,分析探讨嵌合体供者诱导异种移植免疫耐受的町能机制.方法 采用宫内胎鼠移植加新生鼠肝内注射人脐血干细胞的方法,制作人脐血干细胞嵌合体大鼠模型.4周后利用流式细胞三色标记法,对hCD45/SSC设门时,不同区域内hCD55和hCD59抗原阳性细胞的分布进行分析.利用补体依赖性淋巴细胞毒性反应,评估嵌合体淋巴细胞的免疫适应性.结果 hCD45/SSC设门时,在hCD45阳性细胞区域中,hCD55和hCD59阳性率分别高达(53.69±18.23)%和(31.8±27.5)%,但仅占全细胞总数的(2.0±1.32)%和(0.76±0.56)%,与全细胞Ⅸ域中hCD55和hCD59阳性细胞的百分率(4.11%±2.83)%和(2.82±1.38%)相比,差异具有显著性意义(t=2.71,P=0.043;t=3.64,P=0.015).嵌合体大鼠补体依赖性淋巴细胞毒性反应为(22.32±15.10)%,低于非嵌合体组大鼠的(57.29±22.65)%,差异具有非常显著性意义(t=4.16.P＜0.001).相关分析显示,嵌合体大鼠补体依赖性淋巴细胞毒性反应与外周血hCD55阳性细胞百分率呈负相关(r=0.679,P=0.031);外周血hCD55阳性细胞百分率和hCD45阳性细胞百分率呈正相关(r=0.658,P=0.038).结论 人脐血干细胞嵌合体内人源性细胞能够表达人补体调节蛋白.人造血细胞嵌合体淋巴细胞具有抵抗人补体对细胞融解、破坏的作用.随着嵌合体嵌合比例的增加,人源性补体调节蛋白表达增多,嵌合体外周血淋巴细胞抵抗人补体的融解、破坏作用增强.嵌合体内异种补体调节蛋白的存在,可能是造血细胞嵌合体供者诱导异种移植免疫耐受的基础.     

干细胞研究在医学中的应用与前景

21世纪是生命科学发展最为迅猛的时代 ,而干细胞的研究又是生命科学领域中最热门和最前沿的课题。干细胞是一种早期未分化细胞 ,具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的一类细胞 ,它所产生的子代细胞具有相同的基因型和表现型。目前 ,干细胞被分为两类[1 \〗:最原始的干细胞称为全能干细胞 ,如早期胚胎干细胞 ,它来自于受精卵发育形成的早期囊胚 ,它的分化能力最大 ,可以不断自我更新并分化为任何类型组织细胞 ;除胚胎外 ,发育成熟的个体中也含有少量干细胞 ,一般将这类干细胞称为成体干细胞 ,它和胚胎干细胞不同 ,缺乏全能分化的能力 ,而…     

利用微卫星多态性检测造血干细胞移植后嵌合体的研究

目的利用微卫星DNA的多态性,检测造血干细胞移植后嵌合体。方法用无关个体的单个核细胞混合标本在体外模拟混合嵌合体,采用聚合酶链反应(PCR)结合聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染色和凝胶成像分析技术半定量检测嵌合体。结果本方法的敏感性为1.25%～5%,不同位点敏感性不同;混合模拟标本扩增产物分析计算所得嵌合率与扩增前供体细胞比例呈显著直线相关(r=0.97～0.98,P<0.001),不同位点间相关性有所差异,以各位点的平均值进行线性分析更趋于直线相关(r=0.998)。结论STR-PCR结合凝胶电泳成像分析技术是一种敏感、准确、可靠、经济的嵌合体半定量检测方法。     

异种造血嵌合体模型的免疫耐受机制

目的 在已建立的大鼠→免异种造血嵌合体模型中，了解异种移植免疫耐受机制。方法 通过直接、间接免疫荧光染色技术及补体介导的细胞毒试验等方法，检测大鼠MHC－Ⅰ类分子阳性细胞以及体液免疫。结果 检测出大鼠MHC－Ⅰ类分子阳性细胞比例为31.0%-61.9%，且此细胞体液免疫功能正常；同时在此模型中检测出有较高浓度的兔抗大鼠单个核细胞抗体存在，且受体补体功能正常。结果 （1）用我们所建立的方法进行异种骨髓移植是成功的；（2）在受体补体活性正常的嵌合体模型中大鼠单个核细胞与兔抗大鼠单个核细胞抗体出现的共存现象（即适应accomm-oda-tion），是形成此嵌合体的原因。     

条件培养液改进小鼠胚胎干细胞嵌合体制备效率的观察

目的:探讨如何通过改善小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)的培养条件来维持其未分化状态,提高嵌合体的制备效率.方法:以普通ES细胞培养液为对照,以TX-WES培养液为ES细胞条件培养液分别对15代以上的未工程化ES细胞和糖皮质激素受体(GR)工程化ES细胞进行培养并筛选,通过囊胚注射制作嵌合体来比较2种不同培养液培养ES细胞后嵌合体制备效率的差别.结果:未工程化ES细胞以普通培养液培养其嵌合率为25.0%,以TX WES培养液培养其嵌合率提高到53.8%(P＜ 0.05);GR工程化ES细胞以普通培养液培养其嵌合率为15.0%,以TX-WES培养液培养其嵌合率提高到52.3%(P＜0.05).结论:应用TX-WES培养液改善小鼠ES细胞的培养条件可提高嵌合体的制备效率,该方法为基因剔除小鼠研究的顺利开展奠定了良好的基础.     

造血干细胞扩增及分化为血管内皮细胞研究进展

干细胞是一类具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞。按照来源不同可分为胚胎干细胞和成体干细胞;按照分化潜能不同可分为全能干细胞、多能干细胞和组织专能干细胞。造血干细胞属于成体干细胞的一种类型,同样具有自我复制和多向分化潜能,可以分化为肝脏、肌肉及神经等组织的细胞,一定条件下又可来源于肌肉干细胞、神经干细胞等,而这种分化大多在相应组织病变的情况下完成。由此可以推断,在某种意义上,造血干细胞是全能干细胞存在于成熟个体的一种形式。     

成熟肌肉细胞可逆分化成干细胞

来自于美国scripps研究所的研究人员现已鉴别出一种小分子化合物,该化合物能够诱导细胞进行逆分化,从现有的细胞状态逆分化成原来的前体细胞。这种被称为“逆转素”的小分子化合物能够使按正常程序分化的肌肉细胞进行逆转化,重新回到前体细胞阶段。这些前体细胞具有多向分化能力,可分化成不同类型的细胞。因此,逆转素可用于成熟细胞无限逆转化成为前体细胞的有效工具,从而使一     

小鼠胚胎干细胞制备嵌合体的方法——聚合法初探

目的利用胚胎干细胞株E14．1及新建立的C57BL／6J小鼠胚胎干细胞，采用聚合法进行嵌合体的构建。方法以E14．1及C57BL／6J干细胞为供体细胞，分为由5-10、10-15、15-20、20-25个单细胞组成的干细胞团。分别与C57BL／6J及ICR的8-16细胞期胚胎细胞聚合共培养24h再进行胚胎移植。结果E14．1与C57BL／6J胚胎的聚合及C57BL／6J与ICR胚胎的聚合均以10-15个单细胞组成的干细胞团产生的嵌合体效果最好，分别得到嵌合体小鼠11只和5只，嵌合率分别为27．50％和16．13％。结论使用聚合法成功构建嵌合体，为嵌合体的制备提供了一种简单易行的方法。     

干细胞小知识

干细胞是人体的万能细胞，是脑、血、心、骨、肌肉及皮肤等组织与细胞的根源。胚胎干细胞来自成长数天的胚胎，并几乎能在身体内制造任何一种细胞。它们被称为多功能性干细胞。     

小鼠类胚胎干细胞分离培养及用于制作嵌合体小鼠的实验研究

目的探讨分离小鼠囊胚内细胞群类胚胎干细胞及用于制作嵌合体小鼠的方法及应用价值。方法分离3.5d小鼠囊胚内细胞群的类胚胎干细胞作为供体细胞,通过显微注射方法将分离的类胚胎干细胞注射到供体小鼠的囊胚腔中,再将注射后的囊胚移植到假孕雌鼠的子宫中制作嵌合体小鼠。结果分离36枚囊胚的内细胞群类胚胎干细胞,注射256只昆明小鼠囊胚中,移植32只假孕雌鼠子宫中,获产崽2窝,共12只,其中2只获毛色嵌合体小鼠。结论采用该技术分离所获得的类胚胎干细胞作为供体细胞制作嵌合体小鼠获得成功,该方法为ES细胞介导的转基因动物制作增添了一条新的途径,在同种不同品系的动物改良及遗传病基因治疗中有一定的应用价值,尤其是对未能建立ES细胞系的大动物的遗传工程操作具有一定意义。     

电磁场诱导间充质干细胞成骨分化的研究进展

间充质干细胞（MSC）是一种多能成体干细胞,在一定诱导条件下可以分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等多种功能细胞。在骨科领域为各种组织的修复提供良好的细胞来源,是目前组织工程及再生医学领域研究最为深入的种子细胞之一。电磁场(EMF)作为一种非侵入性的物理疗法,在治疗骨不连、骨缺损及骨质疏松等疾病具有良好的优势。因此,近几年对电磁场诱导间充质干细胞成骨分化的机制研究较多,本文就电磁场参数、电磁场类型对不同来源的间充质干细胞诱导成骨分化的相关机制做一综述。     

利用细胞因子和丁酸钠将小鼠诱导多能干细胞高效诱导为有功能的肝细胞

Background  Hepatocyte transplantation has been proposed as an alternative to whole-organ transplantation to support many forms of hepatic insufficiency. Unfortunately, the lack of donor livers makes it difficult to obtain enough viable human hepatocytes for hepatocyte-based therapies. Therefore, it is urgent to find new ways to provide ample hepatocytes. Induced pluripotent stem (iPS) cells, a breakthrough in stem cell research, may terminate these hinders for cell transplantation. For the promise of iPS cells to be realized in liver diseases, it is necessary to determine if and how efficient they can be differentiated into functional hepatocytes.      

Methods  In this study, we directly compared the hepatic-differentiation capacity of mouse iPS cells and embryonic stem (ES) cells with three different induction approaches: conditions via embryonic body (EB) formation plus cytokines, conditions by combination of dimethyl sulfoxide and sodium butyrate and chemically defined, serum free monolayer conditions. Among these three induction conditions, more homogenous populations can be promoted under chemically defined, serum free conditions. The cells generated under these conditions exhibited hepatic functions in vitro, including glycogen storage, indocynine green (ICG) uptake and release as well as urea secretion. Although efficient hepatocytes differentiation from mouse iPS cells were observed, mouse iPS cells showed relatively lower hepatic induction efficiency compared with mouse ES cells.

Results  Mouse iPS cells would be efficiently differentiated into functional hepatocytes in vitro, which may be helpful in facilitating the development of hepatocytes for transplantation and for research on drug discovery.

Conclusion We demonstrate that mouse iPS cells retain full potential for fetal liver development and describe procedures that facilitates the efficient generation of highly differentiated human hepatocyte-like cells from iPS cells in vitro.

     

肿瘤干细胞与肝癌关系的相关研究进展

肿瘤干细胞学说对肿瘤起源的传统理论提出了质疑,并已获得较多的证据支持,正逐渐被人们所接受。肿瘤干细胞学说为恶性肿瘤的基础研究及临床治疗指明了一个新的方向。原发性肝癌在我国的发病率较高,且呈上升趋势。近年来研究发现,肝癌细胞中存在着一群具有特异性的肿瘤细胞,称为肝癌干细胞,其发现促使人们对原有的关于肝癌形成、发展及治疗理论进行重新审视。该文试从干细胞的概念、肿瘤干细胞学说的形成及其生物学特性、肝癌干细胞的来源及表面标志物的研究进展等方面作一综述。     

前列腺干细胞研究进展

干细胞是一种具有自我复制能力的多潜能细胞，具备多向分化潜能、自我更新、高度增殖的特性，具备再生各类人体器官以及人体的潜在能力，被医学界戏称为“全能细胞”。目前逐渐发现它在许多疾病的发生和治疗中发挥重大作用。近年研究发现前列腺内一样地存在着前列腺干细胞，在特定的环境中可以分化发育为前列腺组织，并与前列腺某些疾病有关。本文就有关前列腺干细胞相关文献研究进行综述。     

Isolation and identification of cancer stem-like cells from side population of human prostate cancer cells

It has been widely verified by various sorting methods that cancer stem cells (CSCs) exist in different types of tumor cells or tissues.However,due to lack of specific stem cell surface markers,CSCs are very difficult to be separated from some cancer cells,which becomes the key barrier of functional studies of CSCs.The sorting method by side population cells (SP) lays a solid foundation for in-depth and comprehensive study of CSCs.To identify the existence of SP in prostate cancer cell lines,we applied flow cytometry sorting by SP to cultures of prostate cancer cell lines (TSU,LnCap,and PC-3),and the cancer stem-like characteristics of SP were verified through experiments in vitro and in vivo.The proportion of SP in TSU cells was calculated to be 1.60%±0.40% (±s),and that in PC-3 and LnCap cells was calculated to be 0.80%±0.05% and 0.60%±0.20%,respectively.The colony formation assay demonstrated that the colony formation rate of SP to non-SP sorted from TSU via flow cytometry was 0.495±0.038 to 0.177±0.029 in 500 cells,0.505±0.026 to 0.169±0.024 in 250 cells,and 0.088±0.016 to 0.043±0.012 in 125 cells respectively.In the in vivo experiments,tumors were observed in all the mice on the 10th day after injecting 50 000 cells subcutaneously in SP group,whereas when 5×106 cells were injected in non-SP group,tumors were developed in only 4 out of 8 mice until the 3rd week before the end of the experiment.Our results revealed that prostate cancer cells contain a small subset of cells,called SP,possessing much greater capacity of colony formation and tumorigenic potential than non-SP.These suggest that SP in prostate cancer cells may play a key role in the self-renewal and proliferation,and have the characteristics of cancer stem-like cells.Dissecting these features will provide a new understanding of the function of prostate CSCs in tumorigenicity and transformation.     

胚胎干细胞来源的饲养细胞支持自体胚胎干细胞生长

目的探讨小鼠胚胎干细胞(mESCs)来源的饲养细胞是否具备支持自体mESCs未分化生长的能力。方法先诱导mESCs形成类胚体(EB),进一步诱导其分化为成纤维细胞(mEB-dFE),以用作饲养细胞。采用形态学、集落形成率、细胞分化率、免疫细胞化学、碱性磷酸酶染色和RT-PCR对生长在mEB-dF上的mESCs的未分化特性进行鉴定。采用RT-PCR和诱导mESCs体内外分化方法鉴定mESCs多分化潜能特性。结果从EB三个发育阶段(EB贴壁10、15、20 d)分离出48个mEB-dF系,其中5个(来自15 d的EB)能维持mESCs未分化生长和多潜能性达10代以上。生长在这种饲养层上的mESCs与生长在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)上一样,其特性无明显差异,均表达碱性磷酸酶和特殊的mESCs标记,包括SSEA-1、OCT-4、NANOG,在体外形成EB和体内形成畸胎瘤;其他43个mEB-dF系则不具有这种能力。结论研究不仅为mESCs体外培养提供了一种新的饲养细胞,避免了MEF作饲养细胞的许多不足;而且还提示mESCs可诱导出不同功能的成纤维样细胞,其差异的分子机制值得进一步研究。     

骨髓间充质干细胞在1型糖尿病中的应用

骨髓间充质干细胞(BMMSCs)可以在体外诱导分化为类胰岛细胞,而这些类胰岛细胞可以起到和胰岛β细胞类似的作用,同时还有研究表明BMMSCs可以通过抑制T细胞参与的β细胞的自身免疫途径,阻止1型糖尿病的发展。其很有可能成为未来治疗1型糖尿病的新趋势。现对目前国际上关于骨髓间充干细胞在1型糖尿病中应用的最新进展进行综述。     

Retinal stem cells and potential cell transplantation treatments

The retina, histologically composed of ten delicate layers, is responsible for light perception and relaying electrochemical signals to the secondary neurons and visual cortex. Retinal disease is one of the leading clinical causes of severe vision loss, including age-related macular degeneration, Stargardt's disease, and retinitis pigmentosa. As a result of the discovery of various somatic stem cells, advances in exploring the identities of embryonic stem cells, and the development of induced pluripotent stem cells, cell transplantation treatment for retinal diseases is currently attracting much attention. The sources of stem cells for retinal regeneration include endogenous retinal stem cells (e.g., neuronal stem cells, Müller cells, and retinal stem cells from the ciliary marginal zone) and exogenous stem cells (e.g., bone mesenchymal stem cells, adipose-derived stem cells, embryonic stem cells, and induced pluripotent stem cells). The success of cell transplantation treatment depends mainly on the cell source, the timing of cell harvesting, the protocol of cell induction/transplantation, and the microenvironment of the recipient's retina. This review summarizes the different sources of stem cells for regeneration treatment in retinal diseases and surveys the more recent achievements in animal studies and clinical trials. Future directions and challenges in stem cell transplantation are also discussed.     

皮质酮对动物骨髓间充质干细胞迁移活性的影响及其修复学意义

目的研究下丘脑-垂体-肾上腺轴效应激素———糖皮质激素(GC)对不同动物骨髓间充质干细胞迁移活性影响。方法分离、培养并鉴定大鼠和小鼠骨髓间充质干细胞,通过不同方法观察两种来源的骨髓间充质干细胞趋化活性的变化,评价GC对不同来源的骨髓间充质干细胞迁移活性的影响。结果尽管不同种属来源的骨髓间充质干细胞在形态上存在一定差异,但一定浓度的GC能够显著增强其趋化活性(P<0.05)。结论急性应激条件下,骨髓间充质干细胞迁移活性增强对损伤组织修复具有潜在的临床意义。     

不同类型干细胞在缺血性心脏病治疗及转化中的应用进展

充血性心脏衰竭(CHF)继发于慢性冠状动脉疾病,是导致心血管疾病死亡率升高的主要原因之一,其患病率并没有随着医疗设备发展和医学技术进步而下降。目前干细胞疗法是一个有良好前景的治疗方法,该疗法能够改善心功化,进而阻止CHF形成。目前,从骨髓和心脏分离的祖细胞疗效在临床前大动物模型上已被评估。一些临床试验使用自体和同种异体干细胞和祖细胞已经证明他们运用于人体是安全的。本文将讨论三种再生能力强的成体干细胞：骨髓间充质干细胞,心脏肌球衍生细胞和心脏干细胞的最新研究进展。