“益气养阴通络法”通过调控SIRT1延缓糖尿病肾病进展的研究

目的:观察SIRT1在益气养阴通络法治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的作用。方法:将179例确诊为Ⅲ期和Ⅳ期DN患者随机分为基础治疗对照组(76例)和益气养阴通络法综合治疗组(103例),评价两组患者临床症状疗效、尿微量白蛋白(Alb)及肌酐清除率(Ccr);并通过免疫组化和免疫荧光法分析SIRT1在人肾组织中的表达情况及在DN患者中的变化情况;进一步通过逆转录病毒沉默原代大鼠肾小管上皮细胞(TEC)SIRT1后,观察TEC在AGE-BAS刺激后的凋亡情况。结果:经过6个月治疗,益气养阴通络法综合治疗组中医症状积分改善、微量白蛋白排泄率降低及肌酐清除率升高的患者比率明显高于基础治疗对照组(P<0.01);停药6个月后进行随访,益气养阴通络法综合治疗组的远期疗效也优于基础治疗对照组(P<0.01)。免疫组化和免疫荧光显示,SIRT1在人肾组织的足细胞、内皮细胞及小管上皮细胞等均有表达,并且上述表达在DN患者中明显降低;而经益气养阴通络法治疗后SIRT1表达明显增强。进一步通过体外实验证实,沉默SIRT1后,cleaved caspase3蛋白表达在AGE-BSA刺激的TEC中明显升高。结论:益气养阴通络法在治疗DN过程中有着显著作用,而上述疗效可能是通过上调肾脏固有细胞中SIRT1实现的。     

α-klotho蛋白拮抗瘦素损伤小鼠足细胞的实验研究

目的:探讨瘦素对小鼠足细胞的损伤效应及α-klotho蛋白拮抗这一效应的可能。方法:小鼠足细胞分为三组,分别为空白对照组,瘦素刺激组(瘦素15 ng/ml),α-klotho干预组(α-klotho 0.1μg/ml及瘦素15 ng/ml)。mRNA检测采用实时定量PCR方法,蛋白质检测采用免疫印迹法。结果:瘦素能显著抑制足细胞标志蛋白podocin,nephrin,podocalyxin,podoplanin表达,与对照组比较,蛋白质表达的抑制率分别为24%、25%、25%和23%;mRNA表达的抑制率分别为42%、27%、39%、24%,P均0.05。α-klotho干预后,上述足细胞标志蛋白均被上调,与瘦素组比较,蛋白质表达分别上调1.36、1.25、1.29和1.22倍;mRNA表达分别上调1.77、1.48、1.66、1.26倍,P均0.05。此外,瘦素能显著活化Wnt/β-catenin信号通路,与对照组比较,Wnt2b、Wnt5a、Wnt6、Wnt7a的mRNA表达分别上调2.06、1.72、2.14、1.59倍,P0.05;β-catenin的蛋白磷酸化水平抑制率为26%,P0.05。α-klotho干预后,上述信号通路分子均被抑制,与瘦素组比较,Wnt2b、Wnt5a、Wnt6、Wnt7a的mRNA表达抑制率分别为42%、28%、43%、30%,P均0.05,磷酸化的β-catenin上调1.27倍,P0.05。结论:瘦素可能通过Wnt/β-catenin信号通路损伤足细胞,而α-klotho可逆转足细胞损伤,其机制可能与抑制瘦素的作用有关。     

白藜芦醇联合二苯乙烯苷通过抗衰老延缓糖尿病肾病进展的研究

目的:探讨白藜芦醇及二苯乙烯苷联合干预对糖尿病肾病进展的影响及其可能机制。方法:本实验通过腹腔注射链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,白藜芦醇联合二苯乙烯苷灌胃干预24周,收集血、尿、肾组织标本行肾功能、α-Klotho蛋白、氧化应激等检测。结果:白藜芦醇联合二苯乙烯苷治疗可显著降低糖尿病肾病大鼠尿白蛋白、尿蛋白、血尿素氮及肌酐水平,并且明显降低尿液NGAL、KIM-1水平。通过检测与衰老相关的α-Klotho及氧化应激相关指标发现,上述治疗作用与下调肾脏ROS、MDA含量、抑制尿液8-OHdG及维持血液α-Klotho含量密切相关。结论:白藜芦醇联合二苯乙烯苷可能通过对抗肾脏衰老延缓糖尿病肾病进展。     

益气养阴活血通络方对糖尿病肾病大鼠肾脏的作用研究

目的：观察益气养阴活血通络方对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用。方法：将50只SD雄性大鼠随机分为正常组和造模组,造模组采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导成模,成模后随机分为模型组、科素亚组、川芎嗪组及益气养阴活血通络方组,给药12周;监测24h尿蛋白定量;12周末处死大鼠,检测血糖、肾功能及肝功能,进行疗效判定。结果：益气养阴活血通络方能够降低DKD模型大鼠24h尿蛋白、血肌酐、血尿素氮及血尿酸,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论：益气养阴活血通络方能减少尿蛋白、保护肾功能,对糖尿病肾病大鼠有治疗作用。     

酸浆苦味A通过抗炎和抗凋亡途径延缓骨关节炎的进展

目的 探究酸浆苦味A（Physalin A,PA）对骨关节炎的保护作用及作用机制。方法 取5日龄的C57BL/6乳鼠膝关节原代软骨细胞进行传代培养,使用5 ng/mL的白细胞介素-1β（IL-1β）刺激原代软骨细胞以模拟骨关节炎的软骨细胞炎性模型,并使用不同浓度的PA（2.5 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L）进行干预,具体分组为对照组、IL-1β组、IL-1β+PA（2.5 μmol/L）组、IL-1β+PA（5 μmol/L）组、IL-1β+PA（10 μmol/L）组。Western blot法检测不同组间蛋白聚糖（ACAN）、二型胶原（COL2A1）、基质金属蛋白酶13（MMP13）、Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS5）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、环氧合酶2（COX-2）、白细胞介素6（IL-6）和B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达水平。结果 与对照组比较,IL-1β组ACAN、COL2A1蛋白表达水平明显下调（P＜0.05）,而MMP13、ADAMTS5和iNOS、COX-2、IL-6蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;相比于IL-1β组,IL-1β+PA（2.5 μmol/L）组、IL-1β+PA（5 μmol/L）组、IL-1β+PA（10 μmol/L）组中ACAN、COL2A1蛋白表达水平逐渐升高（P＜0.05）,MMP13、ADAMTS5蛋白和iNOS、COX-2、IL-6蛋白表达水平逐渐下降（P＜0.05）。此外,相比于对照组,IL-1β组Bcl-2/Bax比值下降（P＜0.05）;相比于IL-1β组,IL-1β+PA（2.5 μmol/L）组、IL-1β+PA（5 μmol/L）组、IL-1β+PA（10 μmol/L）组中,Bcl-2/Bax比值升高（P＜0.05）。结论 PA能通过抗炎和抗凋亡途径发挥保护关节软骨的作用。     

复方α-酮酸联合低蛋白饮食延缓糖尿病肾病进展的短期疗效

目前对糖尿病肾病(DN)患者最佳蛋白质摄入量及α-酮酸的最佳补充量仍有争议.我们探讨复方α-酮酸片(开同)联合低蛋白或极低蛋白饮食在延缓2型DN进展中的短期疗效与安全性.     

肾衰康延缓慢性肾衰竭进展的实验研究

目的：探讨肾衰康延缓慢性肾衰竭（CRF）进展的疗效及机理。方法：采用5／6肾切除大鼠CRF模型,随机分为模型组、洛汀新组及肾衰康组治疗,观察各组Scr、BUN及尿中细胞外基质成分（ECM）排泄量。结果：洛汀新组及肾衰康组Scr及BUN均显低于模型组（P＜0．01及P＜0．05）,而肾衰康组Scr又低于洛汀新组（P＜0．05）,肾衰康组尿中Ⅳ型胶原（Col-Ⅳ）、纤维连接蛋白（FN）及层粘连蛋白（LN）含量均明显比模型组高（P＜0．01）。结论：肾衰康有延缓CRF进展的作用,其机理可能与促进ECM成分从尿中排泄,从而减轻肾小球内ECM的聚集有关。但肾衰康对ECM是抑制合成还是促进降解尚需进一步探讨。     

从“解毒活血通络法”论中医抗衰老

衰老是指生命随着时间的推移而产生的一种自发性的组织结构、形态器官、生理功能等方面出现的一系列、多方面的全身退行性变化。中医学认为衰老的机理很复杂,除了与遗传体质有关外,五脏虚损是衰老的主要机理,此外与机体气血精津液的消耗,有害物质的蓄积有关[1]。早在《素问.上古天真论》中明确指出人体衰老的具体表现:"女子…五七,阳     

益气养阴、活血通络法对糖尿病肾病(Ⅲ期)中医证候及尿蛋白影响的研究

目的:该研究以中医理论为基础,运用理论研究与临床研究相结合的方法,为客观评价中药临床疗效,我们对120例糖尿病肾病(DN)患者进行了随机对照研究,以观察其对DN的保护作用。方法:采用随机对照研究方法。结果:本研究收集120例患者,治疗组60例,对照组60例,治疗组可明显改善DN患者神疲乏力、口干舌燥、腰膝酸软、盗汗症状,且治疗组疗效优于对照组。中药治疗可明显减少早期DN患者尿微量白蛋白的排泄率,阻止早期DN进展的作用,且对肾功能无明显影响。DN患者处于血液高凝状态,中药汤剂能够改善早期DN患者血液流变学异常。治疗过程中,两组血糖、糖化血红蛋白均控制在规定范围内,同时也排除血糖过高对UAE的影响。两组试验过程中未发现任何不良反应,两组治疗前后均做了血、尿、大便常规及肝功能检查,治疗后未出现异常,未发现中药汤剂有不良反应。结论:中药汤剂具有改善DN患者临床症状,减少尿白蛋白,改善血流变的作用。     

蛭参合剂延缓肾小球硬化进展的实验研究

目的:探讨蛭参合剂延缓5/6肾切除大鼠肾小球硬化的作用.方法:随机将动物分为空白对照组,5/6肾切除大鼠模型对照组和蛭参合剂组.分别于手术后4周、8周检测各组大鼠血红蛋白、血肌酐、血尿素氮和24 h尿蛋白含量;Masson和免疫组化染色结合图像分析系统半定量观察肾小球内胶原纤维和转化生长因子β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)及Ⅲ型胶原(Coll Ⅲ)的积分光密度(IOD).结果:与模型组比较,蛭参合剂组可减少血肌酐上升程度(P<0.05),降低尿素氮(P＜0.05)和24 h尿蛋白量(P<0.05).并随着时间延长而显示出延缓了血肌酐上升速度的趋势(P＞0.05).肾小球内TGF-β1、FN、Coll Ⅲ和胶原纤维的病理性聚集的减少具有明显差异(P<0.01).结论:蛭参合剂能延缓大鼠肾小球硬化和慢性肾衰竭进展速度.     

虫草制剂对延缓慢性肾衰竭进展的实验研究

目的：为观察中药治疗慢性肾衰竭(CRF)的疗效。方法：采用5／6肾切除大鼠CRF模型，对肾衰大鼠用中药治疗后的肾功能等血液生化指标及残余肾组织病理情况进行了检查。结果：发现中药可降低CRF大鼠的死亡率，降低血Scr和BUN水平，具有明显的延缓CRF进展的作用。在肾组织病理学改变上，中药能延缓肾小球硬化的进展。结论：中药能有效控制慢性肾衰竭的进展。     

肾灵Ⅱ号延缓慢性肾衰竭进展的研究

慢性肾衰竭(CRF)系各种肾实质损害所引起的不可逆转的一种临床综合征。其发病率及死亡率均较高。在目前血液透析和肾移植还不能作为常规疗法的情况下,深入探讨高效、价廉、便于推广的治疗方法势在必行。控制高血压、低蛋白饮食已证明可延缓CRF的发展速度。但其效果仍然很有限,为此,我们采用自制中成药肾灵Ⅱ号治疗30例CRF患,获得比对照组满意的效果,现报道如下。     

采用低蛋白饮食并α酮酸治疗在延缓慢性肾功能不全进展的作用

目的 观察低蛋白饮食加α酮酸制剂是否具有延缓慢性肾功能不全患者肾功能减退、改善酸中毒的疗效。方法 观察未行透析的慢性肾功能不全患者26例，采用低蛋白饮食加α酮酸制剂平均28个月后，患者肾功能、血常规、电解质、肝功能以及内生肌酐清除率(Ccr)的改变。结果 治疗后患者血常规、电解质、肝功能无明显改变，血肌酐值虽然较治疗前上升但无统计学意义，而血碳酸氢盐水平较治疗前显著升高(P＜0．05)。结论 慢性肾功能不全患者长期采用低蛋白饮食加α酮酸制剂具有保护残余肾功能的作用，可减慢肾功能恶化速度，部分纠正酸中毒。     

核转运蛋白α2通过ERK信号通路调控乳腺癌细胞生物学行为的研究

背景与目的 核转运蛋白α2（KPNA2）异常表达能增强乳腺癌细胞迁移和侵袭能力,导致肺转移风险,并与乳腺癌患者不良预后相关。本研究进一步分析KPNA2在乳腺癌细胞中的表达情况,并探讨其对乳腺癌细胞生物学行为影响的相关机制。方法 用免疫组化检测62例乳腺癌患者癌组织与癌旁组织标本中KPNA2的表达。将两种人乳腺癌细胞株（MDA-MB-453、MCF-7）分为阴性对照组（转染空白质粒）、KPNA2敲低组（转染KPNA2 siRNA）、ERK抑制剂组（ERK抑制剂U0126处理）、联合组（转染KPNA2 siRNA联合U0126处理）。各组细胞处理48 h后,分别用qRT-PCR与Western blot检测KPNA2 mRNA与蛋白表达,并分别用MTT法、流式细胞术、Transwell实验、Western blot检测细胞增殖、凋亡、侵袭能力,以及ERK1/2通路与凋亡相关蛋白表达的变化。结果 免疫组化结果显示,KPNA2蛋白在乳腺癌组织中表达水平高于癌旁组织（2.48±0.39 vs. 1.28±0.22,P<0.05）。qRT-PCR与Western blot结果显示,两种乳腺癌细胞株的阴性对照组和ERK抑制剂组的KPNA2 mRNA及蛋白表达水平均无明显差异（均P>0.05）,而KPNA2敲低组和联合组KPNA2 mRNA和蛋白表达下调（均P<0.05）。功能实验结果显示,与各自的阴性对照组比较,ERK抑制剂组、KPNA2敲低组和联合组的细胞增殖率降低、凋亡率升高、细胞侵袭能力减弱,其中联合组各项变化最为明显（均P<0.05）。Western blot结果显示,与各自的阴性对照组比较,ERK抑制剂组、KPNA2敲低组和联合组磷酸化ERK1/2、裂解的胱天蛋白酶3蛋白表达均下调,且联合组两者的下调程度最为明显（均P<0.05）。结论 乳腺癌组织中KPNA2表达水平升高,其增强乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的作用可能与活化ERK信号通路有关,KPNA2有望作为乳腺癌药物开发的新靶点。     

SRY调控性腺分化研究的进展

人类性腺的分化是由基因所决定的。在胚胎的未分化性腺分化为睾丸或卵巢时 ,性别就决定了。这个过程是一个复杂而精细的过程。位于Y染色体上SRY基因表达 ,引发了一个复杂的遗传过程 ,导致了睾丸的分化。然而 ,仅有少数 4 6 ,XY性反转的患者检出SRY基因的突变。其他参与性腺分化的基因有待发现。最近的研究工作表明 ,睾丸的分化受到胰岛素受体家族基因的调控 ,正常情况下SRY需通过两个不同的核运输途径使足够剂量的SRY蛋白进入细胞核调控性腺分化过程。     

全反式维甲酸延缓糖尿病肾脏纤维化进展的实验研究

目的：探讨全反式维甲酸对延缓糖尿病大鼠肾脏纤维化的保护作用。方法：随机选择雄性SD大鼠分为空白对照组（NC）与造模组,制作糖尿病模型分为模型组（DM）与维甲酸治疗组（DM＋atRA）。于模型成型后分别于第8、12周观察各组大鼠24h尿蛋白（Ualb）,内生肌酐清除率（Ccr）,肾重／体重。肾脏病理及电镜观察肾小球基底膜厚度,免疫组织化学方法观察肾组织Ⅳ、Ⅲ型胶原表达。结果：维甲酸组肾重／体重、Ualb、Ccr较同时期模型组下降（P＜0．05）,且12周大鼠肾组织细胞外基质（ECM）重要成分ColⅣ表达（5．75±0．41）、ColⅢ表达（4．98±1．37）与模型组比较显著减少（P＜0．01）。病理观察维甲酸组与模型组比较肾小球系膜细胞和内皮细胞增生减轻,足突融合改善,系膜基质增生缓解,基底膜厚度变薄,减轻了肾脏病理损害。结论：全反式维甲酸能减轻糖尿病大鼠早期肾脏病理损伤,减少细胞外胶原基质积聚,延缓肾脏纤维化。     

5α还原酶对前列腺调控的分子生物学研究

５α还原酶对前列腺调控的分子生物学研究杨晓峰申鹏飞作者单位：４１００７８长沙，湖南医科大学湘雅医院泌尿外科５α还原酶的特性被初步认识以来，有关５α还原酶的基因序列、转录、翻译、分子结构，不同亚型的生物学特性已基本清楚，其中５α还原酶与前列腺的生长发育...