内毒素耐受对人中性粒细胞抗炎反应的影响

目的：探讨脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的耐受对人中性粒细胞分泌抗炎因子白介素（interleukin,IL）-10及细胞凋亡水平的影响。方法：采用1 μg/mL牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis,P.gingivalis）LPS或者1 μg/mL大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）LPS刺激人中性粒细胞12 h,诱导细胞耐受。洗脱后,分别采用2种LPS再次刺激20 h,采用ELISA技术检测细胞分泌IL-10水平。同法诱导细胞耐受,洗脱后,再次刺激3 h,采用AV-PI法检测细胞凋亡水平。结果：P.gingivalis LPS或E.coli LPS单次刺激人中性粒细胞后,IL-10分泌水平均较刺激前明显增加（P<0.05）,凋亡水平则无明显改变（P>0.05）。2种LPS分别重复刺激之后,IL-10分泌水平均较单次刺激后显著增加（P<0.05）。P.gingivalis LPS重复刺激3 h后,中性粒细胞短期内凋亡水平与单次刺激后无明显改变（P>0.05）,而E.coli LPS重复刺激3 h后,细胞短期内凋亡水平较单次刺激后明显下降（P<0.05）。结论：内毒素耐受能促进人中性粒细胞分泌IL-10,但不同LPS诱导的耐受对细胞凋亡水平的影响可能存在差异。     

内毒素耐受对THP-1细胞分泌TNF-α和IL-10的影响

目的:观察细菌脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)反复刺激人单核细胞株THP-1细胞,诱导产生的内毒素耐受对该细胞分泌炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和抗炎因子白细胞介素(interleukin,IL)-10的影响?方法:采用1 μg/ml牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)LPS或1 μg/ml大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)LPS刺激THP-1细胞24 h,洗脱后,分别采用相同LPS再刺激24 h,构建内毒素耐受模型?采用ELISA技术检测细胞条件培养液中TNF-α和IL-10分泌水平的变化?结果:P.gingivalis LPS或E.coli LPS刺激THP-1细胞24 h后,TNF-α和IL-10分泌水平均较刺激前明显增高(P < 0.05)?2种LPS重复刺激后,TNF-α分泌水平较第1次刺激后明显降低(P < 0.05),IL-10分泌水平则较第1次刺激后明显增高(P < 0.05)?结论:内毒素耐受能抑制THP-1细胞分泌TNF-α,促进该细胞分泌IL-10,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应?     

IL⁃17诱导的p300调控NSCLC细胞迁移、侵袭和MMP2表达的作用

目的：探讨IL?17刺激非小细胞肺癌（non?small cell lung cancer,NSCLC）细胞上调腺病毒E1A相关300 kDa蛋白（adenoviral E1A binding protein of 300 kDa,p300）调控其细胞迁移、侵袭及生成基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）的作用。方法：用IL?17刺激 NSCLC细胞（H1299）后行划痕和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭的变化。然后用Western blot检查p300和MMP2蛋白的表达。同时,将p300过表达质粒（pcDNA3.1/p300）或shp300干扰质粒分别转染H1299细胞（后者再行IL?17刺激）,用前述方法测定细胞迁移、侵袭和MMP2的表达。结果：用IL?17刺激H1299细胞后能显著诱导其迁移和侵袭,并上调p300和MMP2的表达。过表达p300可增强细胞的迁移与侵袭,并提高MMP2的生成,但沉默p300基因后由IL?17诱导的细胞迁移和侵袭能力及MMP2的表达均显著降低。结论：IL?17上调的p300能促进H1299细胞的迁移与侵袭以及MMP2基因的表达。     

IL-12在牙龈卟啉单胞菌脂多糖促泡沫细胞形成过程中的作用

目的观察白细胞介素-12（IL-12）预刺激在牙龈卟啉单胞菌脂多糖（P．gingivalis LPS）促泡沫细胞形成过程中对细胞因子的影响。方法用氧化低密度脂蛋白（oxLDL）将人THP-1单核细胞来源的巨噬细胞诱导48h形成泡沫细胞。在巨噬细胞和泡沫细胞培养液中分别加入IL-12作用2h后,巨噬细胞培养液中加入oxLDL和P．gingivalisLPS,泡沫细胞培养液中加入P．gingivalis LPS。使用ELISA法检测培养液上清中IL-1β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平,实时定量PCR检测细胞内IL-1β、IL-10、IL-12和IL-18mRNA的转录水平。结果在泡沫细胞形成过程中,IL-12预刺激可以降低培养液上清内TNF-α水平。降低细胞内IL-10和IL-12mRNA转录水平;泡沫细胞受P．gingivalisLPS刺激过程中,IL-12预刺激可以增加培养液上清IL—1β水平。减少细胞内IL-18mRNA的转录水平,增加IL-10mRNA的转录水平。结论IL-12预刺激影响P．gingivalisLPS促泡沫细胞形成过程中炎症细胞因子的转录和分泌。     

hCG对HTR8 SVneo滋养层细胞系MMP 2表达的影响与调控机制

目的探讨绒毛膜促性腺激素（hCG）对滋养层细胞系HTR8 SVneo侵袭活性的影响及其可能的调控机制。方法将培养的HTR8 SVneo细胞根据处理因素分为对照组、低浓度hCG（10?IU/mL）刺激组、高浓度hCG（100?IU/mL）刺激组,再将HTR8 SVneo细胞分为对照组、hCG（100?IU/mL）刺激组、DPCPX(A1R特异性阻断剂）+hCG（100IU/mL）联合刺激组。采用RT PCR检测各组HTR8 SVneo细胞基质金属蛋白酶 2（MMP 2）的表达变化,明胶酶谱检测各组HTR8 SVneo细胞MMP 2蛋白水平的分泌变化。 结果高浓度hCG（100?IU/mL）较低浓度hCG（10?IU/mL）刺激后的HTR8 SVneo细胞MMP 2的表达与分泌均上升（P<均0.05）;腺苷受体A1R的表达同时升高（P<0.05）。阻断A1R的作用通路后,MMP 2的表达与分泌均下降（P均<0.05）。 结论随着hCG浓度的升高, HTR8 SVneo细胞的侵袭性逐步增强,其调控机制为通过促进A1R的表达而使MMP 2的分泌升高。     

二氧化硅对人肺泡巨噬细胞基质金属蛋白-9表达的影响

①目的　探讨二氧化矽 (SiO2 )对人肺泡巨噬细胞基质金属蛋白 (MMP - 9)表达的影响。②方法　收集矽肺患者肺泡巨噬细胞 (AM) ,在体外以 50 μg/mlSiO2 刺激、LPS或无血清培养基培养 2、6、1 2、1 8、2 4、36h ,用免疫细胞化学的方法检测AM中MMP - 9的表达。③结果　经SiO2 刺激的AM中MMP - 9表达明显上调 ,且随刺激时间不同表达量也不同 ,于 1 8h达高峰。不同时间的表达量与同期对照组AM相比差异显著 (P <0 .0 1 )。④结论　SiO2 可诱导AM高表达MMP - 9,提示AM在损伤早期通过产生MMP - 9而降解基底膜 ,可能与包括成纤维细胞在内的各种细胞的迁移有关。     

乙酰半胱氨酸抑制巨噬细胞诱导的泡沫细胞基质金属蛋白酶MMP2和MMP9的表达

目的：探讨乙酰半胱氨酸(NAC)对巨噬细胞诱导的泡沫细胞基质金属蛋白酶MMP2和MMP9的抑制作用。方法：10只大白兔用球囊损伤主动脉进行球囊损伤,用高胆固醇食物（0.5%高胆固酶,4.5%椰子油）饲养8周,然后从主动脉粥样斑块中分离出巨噬细胞诱导的泡沫细胞,在无牛血清DMEM细胞培养液中加入 10 mmol•L^-1NAC为实验组,对照组(未经球损伤的组织细胞)不加NAC。两组均在37℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养24 h、48 h和4 d后收集培养液,应用酶谱和免疫组化方法分别检测培养液和斑块主动脉粥样局部组织中的MMP2和MMP9的表达。结果：实验组24 h、48 h和4 d Pro-MMP9［分别为(654±33.5)、(780±65.0)和(799±48.9)INT•mm^-2］低于对照组 ［分别为(1 455±50.9)、(15 615±52.0)^-2和(1 467±48.8)INT•mm^-2］(P<0.01);实验组24 h、48 h和4 d　MMP2分别为［(221±25.3)、(224±25.0)和(202±33.9)INT•mm^-2］低于对照组［分别为(467±34.3)、(561±42.0)和(671±34.8)INT•mm^-2］(P<0.01)(P<0.01)。兔疸组化方法显示了巨噬细胞MMP２、MMP9均为阳性染色(+)。结论：NAC减少巨噬细胞诱导的泡沫细胞基质金属蛋白酶（MMPs）的表达,提示NAC可作为冠心病治疗的一个新靶点。      

白藜芦醇通过调节miR⁃21⁃5p/PDCD4通路抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移

目的：探讨白藜芦醇治疗高血压的作用靶点及相关作用机制。方法：利用血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胸大动脉平滑肌细胞A7r5模拟高血压时平滑肌细胞增殖细胞模型,并使用白藜芦醇与miR?21?5p mimic进行干预。利用CCK?8实验检测A7r5细胞活力;利用细胞划痕实验检测A7r5细胞的迁移能力;利用real?time PCR技术检测miR?21?5p的表达;利用Western blot技术检测细胞增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4与细胞迁移相关蛋白MMP2、MMP9、PDCD4的表达。此外,选取对数生长期293T细胞,利用双荧光素酶报告基因检测技术验证miR?21?5p与PDCD4的靶向关系。结果：与正常对照组相比,模型组细胞活力、迁移能力及增殖和迁移相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4、MMP2、MMP9与miR?21?5p的表达水平显著上调,PDCD4蛋白的表达水平显著下降,且差异具有统计学意义（P < 0.01）;与模型组相比,白藜芦醇处理组的细胞活力、迁移能力及增殖和迁移相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4、MMP2、MMP9与miR?21?5p的表达水平显著下调,PDCD4蛋白的表达水平显著上调,且差异具有统计学意义（P＜0.001）;而miR?21?5p mimic转染后细胞活力、迁移能力及增殖和迁移相关蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4、MMP2、MMP9与miR?21?5p的表达水平显著上调,PDCD4蛋白的表达水平显著下降且差异具有统计学意义（P＜0.001）,双荧光素酶检测显示miR?21?5p可显著抑制野生型PDCD4 3''UTR报告基因载体的荧光素酶活性（P < 0.01）。结论：白藜芦醇通过调节miR?21?5p/PDCD4通路,抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移,进而对高血压起到一定的治疗作用。     

IL⁃18诱导的单核细胞THP⁃1对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨外源性白介素18（interleukin 18,IL?18）对单核细胞THP?1的活化作用以及IL?18激活诱导的THP?1对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：通过IL?18体外诱导THP?1模拟激活体内肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophage,TAM）的作用。Transwell法检测IL?18对单核细胞THP?1的趋化作用;外源性IL?18刺激THP?1细胞后流式细胞术检测M1、M2型TAM的比例;IL?18激活诱导的THP?1和肺癌细胞A549共培养,分别以克隆形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测共培养后A549细胞增殖、迁移和侵袭的变化;扫描电镜观察共培养后A549细胞形态的变化;qRT?PCR和Western blot检测共培养后A549细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）标志蛋白E?cadherin和N?cadherin、Snail以及Slug的表达。结果：IL?18对THP?1细胞具有显著的趋化作用;外源性IL?18刺激THP?1细胞表型向M2 TAM方向分化;IL?18诱导THP?1促进了A549细胞增殖、迁移和侵袭能力;扫描电镜结果显示IL?18诱导THP?1促进A549细胞伪足生长;qRT?PCR和Western blot检测结果显示经IL?18诱导的THP?1抑制A549细胞E?cadherin的表达,促进N?cadherin、Snail以及Slug的表达,说明IL?18诱导THP?1激活A549细胞发生EMT。结论：IL?18可以诱导THP?1并促进其活化,活化后的THP?1通过激活EMT机制促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

ω⁃3多不饱和脂肪酸对心肌肥厚大鼠心肌细胞外基质重塑的影响

目的：探讨ω?3多不饱和脂肪酸（ω?3 polyunsaturated fatty acids,n?3PUFAs）对腹主动脉缩窄（abdominal aorta coarctation,AAC）术后心肌肥厚大鼠心肌细胞外基质重塑的影响。方法：雄性SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型组。模型组大鼠行AAC术。术后1周,再随机将模型组分成AAC组、AAC+ n?3PUFAs低剂量组、AAC+ n?3PUFAs高剂量组,每组8只,后两组分别予以400 mg/（kg·d）及1 000 mg/（kg·d）的n?3PUFAs灌胃,假手术组和AAC组给予等体积生理盐水灌胃。8周后处死大鼠,留取心肌组织测定左心室质量指数（LVW/BW）和心脏质量指数（HW/BW）,取心肌组织行HE染色及Masson染色,取血清用碱水解法测定羟脯氨酸含量,用免疫蛋白印迹（Western blot）法分析心肌组织基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP?9）、基质金属蛋白酶抑制剂?1（tissue inhibitor of metalloproteinase?1,TIMP?1）及纤连蛋白（fibronectin,FN）的表达。结果：与假手术组相比,模型组LVW/BW、HW/BW、羟脯氨酸含量明显升高（P < 0.05）,病理染色示心肌细胞肥大,胶原纤维增加,MMP?9表达增加,TIMP?1含量减少,FN表达增加,差异有统计学意义（P < 0.05）。与AAC组相比,AAC+ n?3PUFAs低剂量组、AAC+ n?3PUFAs高剂量组LVW/BW、HW/BW、羟脯氨酸含量降低,病理染色示心肌细胞肥大减轻、胶原含量减少,MMP?9、FN表达减少,TIMP?1表达增加（P < 0.05）。且AAC+ n?3PUFAs高剂量组较AAC+ n?3PUFAs低剂量组各项指标变化更为明显,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论：n?3PUFAs对心肌肥厚有保护作用,其机制可能与抑制MMP?9、FN的过度表达,上调TIMP?1的表达,影响心肌细胞外基质重塑相关。     

结直肠癌患者血清中MMP-2、MMP-9和MMP-14检测的临床意义

目的探讨MMP-2、MMP-9及MMP-14在结直肠癌患者血清中的表达水平,并分析其与结直肠癌分化程度、Dukes分期及淋巴结转移等病理参数的关系,以更好的指导临床工作。方法应用ELISA(酶联免疫吸附实验)分别检测200例结直肠癌患者(观察组)、60例健康成人(对照组)血清中MMP-2、MMP-9和MMP-14的含量。结果观察组血清中MMP-2、MMP-9及MMP-14表达量显著高于对照组(P<0.01),观察组中不同临床特征患者血清MMP-2、MMP-9和MMP-14的表达与肿瘤分化程度、Dukes分期以及淋巴结转移有关(P<0.01),经相关性分析,MMP-2和MMP-9、MMP-9和MMP-14的表达呈正相关(P均<0.05)。结论MMP-2、MMP-9和MMP-14在结直肠癌患者血清中高表达,三者可能在结直肠癌发生发展中起重要作用;早期联合检测MMP-2、MMP-9和MMP-14可能对判断患者的预后及指导临床治疗有重要价值。     

MMP-1、MMP-2、MMP-9在脑胶质瘤中的联合检测及其意义

目的：探讨MMP-1、MMP-2、MMP-9在胶质瘤中的表达及其意义。方法：采用免疫组织化学法对78例石蜡包埋的胶质瘤组织和12例正常脑组织进行标记和分析。结果：MMP-1、MMP-2、MMP-9在正常脑组织中几乎不表达;而在胶质瘤中的阳性率分别为66%、64%、75%,联合检测率为62%,采用Spearm an进行相关性分析,它们与胶质瘤的恶性程度均呈正相关（rs=0.2671～0.5631,P〈0.05）。结论：联合检测这3个指标对判断胶质瘤的恶性程度和侵袭能力具有重要的意义。     

Nimesulide对乳腺癌细胞株MMP-2、MMP-9基因表达的影响

目的:探讨环氧化酶-2选择性抑制剂nimesulide对乳腺癌细胞株MMP-2、MMP-9 mRNA表达的影响.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测不同浓度nimesulide作用体外培养的MDA-MB-231、MCF-7人乳腺癌细胞株48 h,MMP-2、MMP-9 mRNA的变化.结果:50 μmol/L nimesulide明显抑制MDA-MB-231细胞MMP-2 mRNA的表达,100 μ mol/L时其几乎完全抑制;100 μ mol/L nimesulide显著抑制MCF-7细胞MMP-2 mRNA的表达,200 μ mol/L时完全抑制其基因的表达.50μmol/L nimesulide明显抑制MDA-MB-231、MCF-7细胞MMP-9 mRNA的表达,随着浓度的增加,MMP-9 mRNA逐渐被抑制.结论:nimesulide以剂量依赖性方式下调MDA-MB-231、MCF-7乳腺癌细胞株MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,而MDA-MB-231细胞对nimesulide更敏感,这种作用是COX-2非依赖性途径,为nimesulide用于转移乳腺癌的治疗与预防提供了实验依据.     

子宫内膜异位症中MMP-2、MMP-9表达的研究

目的研究MMP-2和MMP-9在子宫内膜异位症发生中的作用。方法采用免疫组化方法研究25例子宫内膜异位症患者的病理组织和22例正常子宫内膜组织中的MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况。结果子宫内膜异位症组中的MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显高于对照组(P分别小于0.01和O.05)。结论MMP-2和MMP-9在子宫内膜异位症的发生发展中起一定的作用。     

大鼠皮肤实验性枪弹伤后MMP-1和MMP-3的表达研究

目的 探讨枪弹伤后大鼠皮肤MMP-1和MMP-3随时间变化的表达情况,为枪弹伤后的损伤时间判断提供依据.方法 建立大鼠对照组和实验组模型.对照组断颈处死后直接取材;实验组分别于枪弹伤后0、1、3、6、12、18、24、48、72 h取材(n=3).取材后用Northern blot法对MMP-1和MMP-3的mRNA进行半定量检测.结果 MMP-1和MMP-3在枪弹伤后即刻其表达就有增加,以后表达继续升高,一直旱上升趋势(P<0.01,P<0.05);而阴性对照组几乎没有表达.结论 枪弹伤后大鼠皮肤MMP-1和MMP-3表达增加的规律性,对枪弹伤后损伤时间的推断有一定的价值.     

肾上腺皮质肿瘤中E-cadherin、MMP-2及MMP-9的表达及意义

目的 探讨上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9在肾上腺皮质肿瘤中的表达及其临床意义.方法 免疫组织化学技术检测55例肾上腺皮质肿瘤(15例肾上腺皮质癌和40例肾上腺皮质腺瘤)及10例正常肾上腺组织中MMP-2、MMP-9及E-cadherin的表达.结果 MMP-2、MMP-9及E-cadherin在肾上腺皮质癌组织中的阳性表达率分别为80%(12/15)、66.7%(10/15)和20%(3/15),在肾上腺皮质腺瘤中为27.5%(11/40)、25%(10/40)和52.5%(21/40),而在正常肾上腺组织中则为0%(0/10)、10%(1/10)和100%(10/10).MMP-2和MMP-9在肾上腺皮质癌中的表达较腺瘤组织及正常肾上腺组织高,而E-cadherin的表达则相反,差异均有统计学意义(P<0.05).E-cadherin、MMP-2及MMP-9与肾上腺皮质肿瘤患者的年龄、性别、肿瘤大小无关(P>0.05),但与肾上腺皮质癌中TNM分期、是否有淋巴结转移有关(P<0.05).肾上腺皮质肿瘤中E-cadherin与MMP-2、MMP-9的表达呈负相关.结论 E-cadherin、MMP-2及MMP-9在良恶性肾上腺皮质肿瘤中呈差异性表达,E-cadherin表达的减弱与MMP-2及MMP-9表达的增强均与肿瘤的形成和转移有一定的联系.     

血清MMP-2,MMP-9水平对急性冠脉综合征的诊断及预后判断价值

近年来,人们认为基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是造成冠状动脉粥样硬化斑块不稳定的重要原因之一.MMPs可致斑块脂核及纤维帽的基质降解,从而导致斑块破裂[1,2].     

MMP-7与MMP-9在直肠癌中的表达及临床意义

目的:研究直肠癌中 MMP-7 和 MMP-9的表达情况,探讨它们与直肠癌侵袭和转移的关系及临床意义.方法:应用免疫组化S-P法检测60例直肠癌、20 例癌旁正常组织进行MMP-7和MMP-9免疫组化染色.结果:MMP-7 和 MMP-9 在癌组织中表达明显高于癌旁正常组织,二者之间差异显著(P<0.05),MMP-7和MMP-9表达均与肿瘤分化程度、Dukes 分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05).结论:直肠癌组织中MMP-7、MMP-9的表达与肿瘤进展有一定关系.可被视为反映直肠癌生物侵袭性的有价值的标志物.     

MMP-14、MMP-2、TIMP-2在胃癌组织中表达及意义

目的:探讨基质金属蛋白酶(Metalloproteinase,MMP)-14、-2、基质金属蛋白酶组织抑制因子(Tissue inhibitor ofmetalloproteinase.TIMP)-2在胃癌、癌旁组织及胃溃疡中的表达情况及相互关系.方法:用免疫组织化学方法(SP法)检测30例胃癌手术病人及20例胃镜活检胃溃疡病人中MMP-14、MMP-2、TIMP-2的表达.结果:(1)胃癌组织中,TIMP-2、MMP-2及MMP-14表达阳性率分别为43.3%、76.7%、53.3%,胃癌癌旁组织中分别为56.7%、46.7%和40%,胃溃疡组织中分别为70%、45%和30%.(2)在胃癌中,TIMP-2的阳性表达与癌旁组织及胃溃疡组织比较有统计学差异(P0.05),而TIMP-2阳性表达与前两者均呈显著负相关(γ8=-1.0,P<0.0l).结论:(1)MMP-1在胃癌中高表达.(2)MMP-14和MMP-2阳性表达呈正相关,是胃癌的侵袭转移性因素之一.(3)MMP-14表达上调的同时激活了更多的MMP-2,增加了胃癌向周围组织侵袭转移的能力.     

增生性糖尿病视网膜病变玻璃体切除物中MMP-2和MMP-9的表达

目的:检测增生性糖尿病视网膜病变(PDR)玻璃体切除物中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,探讨2者在PDR发生发展中的作用.方法:使用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和放射免疫方法分别检测20例PDR和10例正常对照玻璃体切除物中MMP-2、MMP-9 mRNA的表达与MMP-2、MMP-9的含量.结果:PDR玻璃体切除物中MMP-2、MMP-9 mRNA与MMP-2、MMP-9的含量均高于正常对照(P＜0.05).结论:MMP-2和MMP-9可能在PDR的发生、发展中起重要作用.