多参数流式细胞术对急性髓系白血病微小残留病变与疾病复发的监测

本研究探讨微小残留病变（MRD）检测对急性髓系白血病（AML）治疗后疾病复发的预测作用。采用多参数流式细胞术（multiparameter flow cytometry,MPFC）分析AML治疗前白血病相关免疫表型（1eukemiaassociatedimmunphenotypes,LAIP）,检测诱导和巩固治疗后MRD（Post—IndMRD,Post—ConsMRD）的水平。结果表明：122例初发AML患者中（AML—M3除外）,有115例（94．3％）存在明确的LAIP,其中存在单一LAIP类型的患者15例（13．0％）,存在2个或2个以上LAIP类型的患者100例（87．0％）。抗原跨系列表达者占40．9％,抗原跨阶段表达者、抗原过度表达者和抗原表达减弱或缺失者分别占20．9％、27．0％和34．8％。对41例诱导化疗后达完全缓解并进行2个疗程以上巩固治疗的AML患者MRD监测显示,Post—IndMRD＋的24例中,巩固治疗后18例复发;Post—IndMRD-者17例中,巩固治疗后5例复发;Post—IndMRD-患者和Post—IndMRD＋患者的平均无病生存时间（RFS）分别为43．05±6．25个月和12．48±1．69月（P〈0．0001）。Post—ConsMRD＋者18例均复发;Post—ConsMRD一者23例中仅5例复发。Post—ConsMRD-患者和Post—ConsMRD＋患者的平均RFS分别为39．32±5．44月,9．72±1．51个月（P〈0．0001）。结论：Post—IndMRD水平和Post—ConsMRD水平均与AML患者的RFS密切相关,可作为AML治疗依赖的预后因素。     

多参数流式细胞术对急性白血病微小残留病变的研究

目的探讨多参数流式细胞术检测外周血造血前体细胞的方法及其在急性白血病微小残留病变中的应用价值.方法单克隆抗体直接免疫荧光标记法和流式细胞仪多参数分析技术.结果淋巴细胞设门内各种造血前体细胞的参考值(1)CD34+总干祖细胞占0.16%±0.14 %,(2)髓系前体细胞CD34+/CD33+0.08%±0.06%、CD33+1.32%±1.28%、MPO+0 67%±0.88%,(3)淋巴系前体细胞CD45dim/CD19+0.75%±0.62%,CD45dim/CD10+0.45%±0.11%;CD45dim/CD7+0.24%±0.14%,CD45dim-/CD2+0.22%±0.13%.鉴别异常细胞的敏感度可达10-3,发现1例完全缓解期髓细胞性白血病患者外周血中髓系前体细胞有异常,3个月后临床证实复发.结论流式细胞术对正常人外周血中各系造血前体细胞的定性定量检测有可能用于急性白血病微小残留病变的检出和早期诊断复发.     

急性髓系白血病微小残留病的多色流式细胞术检测

目的:建立本实验室急性髓系白血病微小残留病检测的十色抗体组合方案,探讨其临床应用价值.方法:根据初发急性髓系白血病患者白血病细胞的抗原表达特征,采用多参数流式细胞术检测骨髓微小残留病,并将检测结果与骨髓细胞形态学和PCR结果进行比较,确定本实验室微小残留病检测的十色抗体组合方案.结果:分析郑州大学第一附属医院392例初...     

流式细胞术在急性髓系白血病微小残留病中的应用

目的研究多参数流式细胞术(FCM)监测微小残留(MRD)水平对急性髓系白血病(AML)的复发预测及治疗指导方面的临床意义。方法选取37例诱导化疗后形态学完全缓解的AML患者,在诱导化疗后和巩固治疗后,用FCM监测MRD水平。结果 17例MRD阳性的患者最终发生复发,其MRD阳性检测时间比形态学诊断时间平均提前5个月。诱导化疗后、巩固治疗后的MRD阳性组和阴性组的临床复发率均有显著性差异(P0.05),诱导化疗后MRD阳性组的临床复发率低于巩固治疗后MRD阳性组,二者之间没有显著性差异(P0.05)。结论 FCM连续监测MRD水平能够有效预测AML患者的复发,并指导临床治疗。     

流式细胞术检测53例急性髓细胞性白血病微小残留病变

目的　探讨流式细胞术检测急性髓细胞性白血病 (AML)微小残留病变 (MRD)的临床意义。方法　以正常人和 5 3例AML完全缓解 (CR)的患者为对象 ,采用双色直接免疫荧光标记及多参数流式细胞术检测外周血中MRD ,并与传统的骨髓形态学结果进行比较。结果　预测各组患者发生复发的敏感性和特异性分别为 :CR≤ 1年组为 10 0 %(8/ 8)和 4 2 .9% (3/ 7) ,1年 3年组为 5 0 % (1/ 2 )和 95 .6 % (2 2 / 2 3) ,对所有第 1次受检MRD为阳性随后确认为复发的患者 ,比骨髓象诊断复发平均提前 7个月。结论　该方法快速、简单 ,对患者创伤小 ,可比传统骨髓形态学更早提示复发 ,尤其是采取连续性定期监测、动态观察的方式 ,会进一步增加检测结果的准确性 ,为临床防止复发、选用个体化治疗方案提供有效的实验依据。     

多参数流式细胞术动态监测急性髓系白血病微小残留病的临床研究

目的:探讨8色流式细胞术动态监测急性髓系白血病(AML)患者微小残留病(MRD)的预后意义。方法:使用8色流式细胞术对282例初治缓解的AML患者进行MRD动态监测,通过受试者工作特征曲线(ROC)确定预测复发的MRD阈值,分析患者从出现MRD⁺到临床复发的时间,比较不同MRD变化情况的患者总生存时间(OS)和无复发生存时间(RFS)的差异,对影响MRD^-患者复发的相关因素进行单因素和Logistic回归分析。结果:ROC曲线确定预测复发的MFC-MRD阈值为0.105%,MRD⁺患者复发率明显高于MRD^-患者[52.45%(75/143例) vs 35.97%(50/139例),P=0.005]。MRD持续阳性组和阴性转阳性组患者比阳性转阴性组和阴性阳性波动组患者在出现MRD⁺后更早出现复发(P<0.005)。生存分析结果表明,MRD持续阳性组患者的OS、RFS时间较持续阴性组、阳性转阴性组和阴性阳性波动组患者明显缩短(P<0.005)。MRD阴性转阳性组与持续阳...     

肾母细胞瘤1基因联合多参数流式细胞术检测微小残留病灶评估急性髓系白血病患儿预后的价值

目的 分析肾母细胞瘤1(WT1)基因联合多参数流式细胞术检测微小残留病灶(FCM-MRD)对急性髓系白血病(AML)患儿预后的预测价值。方法 回顾性分析76例AML患儿的临床资料及一般信息。患儿治疗前均采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测WT1基因表达,并经FCM检测MRD。所有患儿随访1年,根据预后情况的不同分为预后良好组(n=40)和预后不良组(n=36)。观察2组患儿治疗前及治疗后3、9、12个月的WT1基因及MRD变化情况;比较不同治疗方案患儿治疗前后WT1基因及MRD变化情况;分析AML患儿临床病理特征与WT1基因表达及FCM-MRD阳性率的关系。采用Spearman相关系数分析WT1基因表达、FCM-MRD阳性率与AML患儿预后的关系;绘制Kaplan-Meier生存曲线,分析WT1基因表达、FCM-MRD阳性率对AML患儿复发的影响及相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析WT1基因、FCM-MRD单一及联合检测对AML患儿预后的预测效能;分析WT1基因、MRD与AML患儿FLT3 ITD/TKD突变的关系。结果 预后良好组患儿治疗后9、12个月的WT...     

多参数流式细胞仪检测急性髓细胞白血病微小残留病:挑战与对策

多参数流式细胞仪(FCM)是急性白血病微小残留病(MRD)检测的重要手段之一,但在检测急性髓细胞 白血病(AML)MRD方面还存在诸多问题。本文讨论了FCM 检测AML MRD面临的挑战,并提出相应的对策。     

多参数流式细胞术检测急性髓系白血病微量残留病的预后意义

本研究探讨多参数流式细胞术检测急性髓系白血病（AML）微量残留病（MRD）的方法和预后意义。采用4色标记的5组抗体组合确定初治患者的白血病相关免疫表型（LAIP）,选取敏感的LAIP进行追踪MRD,共检测了随访95例AML患者的601份骨髓标本。以患者LAIP阳性细胞比例高于正常值＋2倍标准差的定为MRD（＋）,低于此值的为MRD（-）。结果发现：以开始诱导化疗后半年内每2个月分为3组,3组中MRD（4-）患者与MRD（-）患者之间的复发率和无复发生存率均具有显著性差异（P〈0．05）,1—2个月、3—4个月和5—6个月MRD（4-）组的中位无复发生存期分别是11、11．5和11个月,MRD（-）组均未达中位生存期（P〈0．05）。进一步比较诱导缓解后与巩固治疗1个疗程后患者MRD检测结果与临床的关系,发现这两个时间点MRD（＋）组和MRD（-）组的患者复发率分别为57．14％与0％和91．67％与2．27％（P=0．000和P=0．000）。结论：多参数FCM检测MRD能够有效预测复发,治疗后应连续进行MRD检测。     

流式细胞术检测急性白血病微小残留病的研究进展

近年来,随着新的化疗药物的出现,急性白血病在治疗上取得很大进展,患者的完全缓解率达50％-80％。尽管如此,从诊断开始的3—5年内仍有部分患者复发,目前认为其主要原因与微小残留病（MRD）的存在相关。多参数流式细胞术（FCM）是目前检测MRD的有效方法之一。它通过多参数分析白血病细胞与正常细胞表面不同的免疫表型,将两种细胞区分,具有快速、灵敏度高、定量准确的优点。通过FCM对急性白血病MRD的监测．不仅有助于判断疗效、指导个体化治疗,对预测疾病复发也具有重大意义。本文将对FCM检测急性白血病MRD的优势、面临的挑战、临床意义及应用前景进行综述。     

急性髓系白血病M_2微小残留病与细胞遗传学关系探讨

目的 了解急性髓系白血病(AML)M2微小残留病(MRD)水平与细胞遗传学分组的关系.方法 采用多参数流式细胞仪(MFC)进行白血病免疫分型,然后再根据白血病相关免疫表型(LAIP)选择抗体组合,完成对117例M2病人的MRD监测.结果 将初次缓解AML-M2病人的微小残留病灶水平以5×10-4为界,在细胞遗传学预后较好组、预后中等组、预后较差组之间进行比较,发现三组MRD水平差异无显著性.动态监测中比较了45例患者1年内不同遗传学分组MRD从10-3水平后上升到10-2水平的发生率:预后较好组33%,预后中等组32%,预后较差组50%.结论 MFC检测AML-M2病人MRD水平可用于评估治疗反应及预测复发.     

115例急性髓细胞白血病多参数流式细胞术免疫表型分析

免疫表型检测已成为白血病诊断和分类的重要手段。为了解急性髓细胞白血病(AML)免疫表型特征，利用三色流式细胞术CIM5／SSC参数散点图设门方法，对115例AML患者幼稚细胞表面及胞浆内分化抗原进行分析：结合FAB分类，比较AML不同亚型中抗原表达的差异，并对其诊断价值加以探讨。结果显示：在AML患者中，CD33、CD38和CDl3的表达最常见，分别达94．8％、91．3％、89．6％。在淋系抗原中，CD7的表达最为常见(20．2％)，其次是CD19(16．5％)和CD2(15％)，某些免疫表型特征与FAB分类具有相关性，包括M3中缺乏表达HLA—DR、CD34和CD56，但CD2的表达增加；M2中CD19，M5中CD14和CD56的表达增加，而M0中未见MPO的表达，结论：多参数流式细胞术是诊断AML的一项可靠技术，AML某些免疫表型特征与FAB分类具有明显相关性．     

定量PCR方法监测急性髓系白血病微小残留病的临床意义

随着实时定量PCR方法学的发展,越来越多的医院已将其应用于白血病微小残留病的监测,并且显示出较好的临床价值,但同时也存在许多问题.本文就实时定量PCR监测急性髓系白血病微小残留病的方法以及临床意义等方面的进展进行综述.     

急性髓性白血病完全缓解患者残留白血病细胞检测研究

本研究的目的是观察急性髓性白血病患者完全缓解后血液和骨髓中微小残留病变变化情况 ,并探讨微小残留病变在监测急性髓性白血病复发中的应用价值。用流式细胞术检测 3 3例化疗达完全缓解的急性髓性白血病患者血液和骨髓中残留白血病细胞 (residualleukemiccells,RLC)。结果显示 :急性髓性白血病完全缓解组和正常对照组外周血RLC分别为 ( 4 .75 18± 4 .15 3 7) %和 ( 0 .4 83 5± 0 .2 0 0 5 ) % ,二者比较有统计学差异 (P <0 .0 0 1) ;完全缓解组骨髓和正常对照组骨髓RLC分别为 ( 17.90 82± 2 0 .4 819) %和 ( 0 .72 85± 0 .2 2 0 9) % ,二者比较有统计学差异 ( P <0 .0 0 1) ;持续缓解组与复发组外周血RLC分别为 ( 2 .2 3 3± 1.5 92 3 ) %和 ( 10 .2 3 69± 9.4 714 ) % ;持续缓解组与复发组骨髓RLC分别为 ( 4 .779± 3 .0 3 3 6) %和 ( 3 8.0 685± 19.4 2 95 ) %。二组比较有统计学差异 (P <0 0 0 1)。结论 :应用流式细胞术检测残留白血病细胞对及时预测复发有重要意义 ,有利于在复发早期进行治疗。     

微小残留白血病检测在急性髓系白血病治疗及预后判断中的意义及研究进展

急性髓系白血病(AML)是较为常见的造血系统恶性克隆性疾病.虽然目前临床应用大剂量化疗和干细胞移植等手段取得了一定的疗效,可延长部分患者无病生存期,但是恶性疾病易复发的特点使得其长期生存率依旧很低.微小残留白血病(MRL)是导致白血病复发的重要原因,若能及时发现残留病变并施加相应的临床干预,对于减少缓解后复发,改善白血病预后将提供极大的帮助.目前,尚无对MRL的统一标准定义,但现有的技术可以在一定程度上对MRL进行相关指标的检测,利用多参数流式细胞技术(MFC)以及实时荧光定量PCR(RQ-PCR)等手段可监测MRL,这对MRL明确诊断后治疗决策的选择以及治疗后预后判断均有重要意义.现就MRL相关指标的检测在AML治疗及预后判断中的研究及应用进展作一综述.     

异常免疫表型模式在急性髓系白血病微小残留检测中的应用

目的用多参数流式细胞术区分急性髓性白血病细胞与正常骨髓原始细胞免疫表型,建立急性髓系白血病细胞异常免疫表型模式和流式细胞术检测急性白血病微小残留病的方法。方法选择正常骨髓标本和急性髓性白血病患者骨髓标本,用流式细胞术分析髓系原始细胞免疫表型特征。并将标记抗原用于分析初发白血病细胞免疫表型,以寻找急性髓系白血病细胞异常免疫表型模式和确定用于微小残留病检测的抗体组合,更好地提示患者复发情况。并将流式细胞术结果、骨髓细胞形态学结果和PCR融合基因检测结果进行比较。结果分析20例非恶性血液系统恶性疾病患者的骨髓标本中髓系原始细胞的免疫表型,CD117阳性髓系原始细胞占2.51%±0.84%,CD34阳性髓系原始细胞占1.21%±0.83%,均有特定免疫表型特征。检测346例非早幼粒细胞白血病的急性髓性白血病患者免疫表型特征,异常免疫表型有314例,占90.80%,其中跨系表达抗原主要包括CD7(31.21%)、CD56(23.70%)、CD19(13.87%),跨阶段共表达的抗原包括CD34/CD64(2.89%)、CD14/CD117(1.16%),抗原表达强度变化或抗原缺失主要包括原始粒细胞不表达HLA-DR(4.62%)、CD13(7.51%)或CD33(12.14%),以及单核细胞不表达CD14(5.20%)。早幼粒细胞白血病患者31例,有异常免疫表型的仅占16.7%,低于非早幼粒细胞白血病的急性髓性白血病。根据白血病异常免疫表型模式,与PCR结果符合度高,能很好地提示白血病进展。结论急性髓性白血病细胞具有明显不同于正常来源原始细胞的异常免疫表型特征,适合采用流式细胞术进行微小残留病检测,并能反映体内白血病细胞负荷和病情变化。     

多参数流式细胞术动态监测儿童B系急性淋巴细胞白血病微量残留病的临床意义

摘要本研究旨在探讨儿童B系急性淋巴细胞白血病（B-ALL）化疗过程中监测不同时间点微量残留病（MRD）水平的临床意义。回顾性分析我院2008年8月至2011年9月以流式细胞术监测3个时间点（即诱导化疗第15天、第33天和治疗第12周）的206例B-ALL患儿骨髓的MRD。结果表明：①206例B-ALL患儿中196例诱导化疗后迭完全缓解（CR）（CR率95．1％）,其1年与3年无事件生存（EFS）率分别为（92．7±1．8）％和（78．7±3．7）％,其中标危、中危、高危组的3年EFS率分别为（85．6±4．9）％、（82．1±5．8）％和（58．1±9．2）％,3组比较有明显统计学差异（P〈0．001）;②各时间点上MRD分析显示：MRD水平越高,患儿的3年EFS率越低,其中第15天MRD≥10^-2组、第33天和第12周MRD≥10^-3组的患儿预后明显不佳;多因素分析显示,第12周MRD≥10^-3为独立的不良预后因素;第12周MRD〈10^-3的3年EFS率为（86．3±4．1）％,MRD≥10^-3的3年EFS率为（55．8±9．1）％,差异有统计学意义（P〈0．05）;③在化疗第33天MRD阴性（MRD〈10^-4）的98例患儿中有8例复发（复发率为8．2％）,在这98例惠儿中有39例在第12周时转为阳性（MRD≥10^-4）,其中5例复发;在第12周时MRD仍为阴性的59例中有3例复发;在第33天MRD阳性的108例患儿中有19例复发（复发率为17．6％）,复发率在MRD阳性和阴性两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：B-ALL患儿治疗过程中以流式细胞术动态监测MRD可有效地评估治疗反应、判断预后、预测复发及指导化疗方案的调整,其中第15天、第33天及第12周的MRD分别以10^-2、10^-3、10^-3为区分危险度最佳界值,第12周MRD≥10^-3为独立的不良预后因素。     

微小残留白血病细胞的流式细胞术监测研究

目的利用白血病细胞系Ｋ５６２建立微小残留白血病模型，进行流式细胞术的微小残留白血病监测研究。方法以ＣＤ７１抗原阳性的Ｋ５６２白血病细胞系作为靶细胞，与外周血细胞按１：１，１：１０，１：１００，１：１０００，１：１００００，１：１００　０００，８：１００００００，４：１０００　０００，２：１０００　０００和１：１０００　０００（比例混合），建立微小残留白血病模型。通过优化系统条件，利用多参数流式细胞术分析技术，从１：１开始检测不同混合细胞群中的ＣＤ７１＋细胞的含量。比较检测值与实际值的关系。结果经过优化系统条件后，每分钟仪器系统噪音信号发生率小于１，细胞样品假阳性背景噪音信号的发生率小于４×１０－６；对范围在１：１～４：１００００００频率的阳性靶细胞的检出值与实际值具有很好的相关性（ｒ＝０．７５，Ｐ＜０．０５）。结论　利用流式细胞术进行微小残留细胞检测， 可以达到 ４ × １０－６数量级。     

流式细胞术动态监测急性白血病完全缓解后微小残留病与预后的关系

本研究探讨多参数流式细胞术(FCM)动态监测急性白血病(AL)完全缓解(CR)后微小残留病(MRD)与预后的关系。选择2010年10月至2012年5月我院血液科收治的58例AL患者,其中45例为急性髓细胞白血病(AML)患者和13例为急性淋巴细胞白血病(ALL)患者,定期用FCM检测患者骨髓MRD,同时检测骨髓细胞形态学的变化,追踪至复发或随访截止日期。平均随访9个月(3-21个月)得出完全缓解患者MRD平均水平,并对CR后不同时间点MRD水平在评估AL患者预后中的价值进行分析和总结。定义MRD≥1%为阳性,否则为阴性。结果表明:45例AML患者,测得CR后MRD最大值9.57%,最小值0.01%,平均值0.67%;13例ALL患者,测得CR后MRD最大值7.9%,最小值0.0016%,平均值0.99%;共测得44份AL诱导缓解后的骨髓MRD水平,MRD(+)组复发率53.3%(8/15),MRD(-)组复发率10.3%(3/29),MRD(+)组复发率高于MRD(-)组(χ2=7.58,P=0.006);共测得58份AL巩固治疗1个疗程后的骨髓MRD水平,MRD(+)组复发率62.5%(5/8),MRD(-)组复发率16.0%(8/50),MRD(+)组复发率高于MRD(-)组(χ2=6.11,P=0.013)。结论:多参数流式细胞术检测急性白血病CR后MRD差异较大,10-6-10-2,不能作为评价完全缓解的单一指标。诱导缓解后及巩固治疗1个疗程后MRD≥1%时复发率高,MRD可以作为预后评价的敏感指标。     

急性髓系白血病微小残留病监测的研究进展

急性髓系白血病(AML)是常见的血液系统恶性肿瘤.近年来随着新的化疗药物的出现以及化疗方案的不断完善,急性髓系白血病的无病生存率及总体生存率不断提高,但是仍然要面对缓解后复发这一难题.目前认为复发的主要原因是微小残留病(MRD)的存在,AML的MRD监测对于AML疗效评价,预后预测和指导个体化治疗具有重要意义.近年来M...