高效凝胶色谱一步法制备级纯化单克隆抗体

作者采用Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－３００凝胶色谱柱，建立了ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的一步法制备级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水直接上样，用ｐＨ７．４１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ洗脱（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ），即得到纯化的ＭｃＡｂ。一次上样量４０￣５０ｍｌ腹水，回收率为８５％￣９０％。整个纯化周期４ｈ。纯化的ＭｃＡｂ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定，纯度〉９０％，免疫组化ＡＢＣ法测定活性为１：８００００     

链球菌蛋白G应用于ELISA的实验研究

对酶标记链球菌蛋白Ｇ（ＳＰＧ）在ＥＬＩＳＡ的应用条件进行了研究并与ＳＰＡ作了系统比较。ＳＰＧ与ＩｇＧ结合受温度影响，３７℃结合活性高于室温和４℃；反应时间定为２ｈ反应溶液ｐＨ值升高，ＳＰＧ的结合力亦增强。在同等条件下与酶标记ＳＰＡ进行比较，结果表明ＳＰＧ对小鼠单克隆抗体、羊抗人、兔抗ＩＦＮ－γ和驴抗兔Ｉｇｇ以及牛、大鼠和人ＩｇＧ的结合力均明显高于ＳＰＡ。ＳＰＧ用于大鼠血清抗ＩＦＮ－γ抗体的检测，其阳性率和抗体滴度均大大高于ＳＰＡ。因此，ＳＰＧ作为一种广谱的、高亲和力的ＩｇＧ结合物，是应用于ＥＬＩＳＡ的理想的替代二抗。     

TNF-α促进鼠模型中免疫复合物的清除

近来研究证明ＬＰＳ能显著增强ＢＡＬＢ/Ｃ小鼠单核吞噬细胞系统 (ＭＰＳ)清除免疫复合物 (ＩＣ)的功能。该实验作者以同源ＩｇＧ致敏红细胞 (ＥＡ)作为ＩＣ ,给小鼠静脉注射 ,建立鼠模型 ,用以研究小鼠注射ＬＰＳ后最早诱导释放的细胞因子之一—ＴＮＦ α在清除ＩＣ中的作用。方法 :给ＢＡＬＢ/Ｃ小鼠静脉注射 5 0 μｇ/ｍｌＬＰＳ 1 0 0 μｌ,1小时后血清ＴＮＦ α达最高峰 ,取此时血清为ＴＮＦ α( )血清 ,血清ＴＮＦ α浓度用Ｌ92 9细胞测定 ,注射后 4小时和 2 4小时ＴＮＦ α活性与注射前及盐水处理组无差别。取注射后 4小时血清为ＴＮ…     

人酸性成纤维细胞生长因子单克隆抗体的制备

以纯化的重组人酸性成纤维细胞生长因子（ｈａＦＧＦ）为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合，获得一株稳定分泌抗ｈａＦＧＦ的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，基ＤＮＡ含量为脾细胞与ＳＰ２／０细胞ＤＮＡ含量之和，所分泌抗体为小鼠ＩｇＧ１亚类，免疫印迹显示：此单抗只与大肠杆菌中的ｈａＦＧＦ有结合，与牛ａＦＧＦ则没有结合反应。     

系统性红斑狼疮病人外周血单个核细胞NF-κB活性的研究

目的;研究体外培养的系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＮＦ－κＢ的活化表达情况及其与ＰＢＭＣ分泌免疫球蛋白,自身抗体的关系。方法：ＮＦ－κＢ活性检测采用电泳迁移率改变法（ＥＭＳＡ）,细胞培养上清免疫球蛋白和抗ｄＳＤＮＡ抗体采用微量ＥＬＩＳＡ测定。结果;发现ＳＬＥ病人外周血ＰＢＭＣ ＮＦ－κＢ活性显著高于正常对照组,与其ＰＢＭＣ培养上清及血清ＩｇＧ和抗ｄｓＤＮＡ抗体含量成正相关     

人源性抗HBsAg单克隆抗体Fab片段的表达与纯化

对已筛选到的人源性抗ＨＢｓＡｇ特异性噬菌体抗体基因文库进行表达研究，将特异性噬粒转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ，反复冻溶法制备可溶性Ｆａｂ片段。免疫印迹实验表明大肠杆菌质周腔内有可溶性Ｆａｂ片段的表达。制备羊抗人ＩｇＧ Ｆａｂ抗血清，建立抗人ＩｇＧ Ｆａｂ抗体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析柱，纯化Ｆａｂ片段。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示纯化的Ｆａｂ达免疫纯，点印迹法表达纯化后的Ｆａｂ片段具有中和ＨＢｓＡ     

STUDY ON MECHANISM OF THE BIOEFFECTS OF TRANSIENT ELECTROMAGNETIC PULSE

ＳＴＵＤＹＯＮＭＥＣＨＡＮＩＳＭＯＦＴＨＥＢＩＯＥＦＦＥＣＴＳＯＦＴＲＡＮＳＩＥＮＴＥＬＥＣＴＲＯＭＡＧＮＥＴＩＣＰＵＬＳＥＳＴＵＤＹＯＮＭＥＣＨＡＮＩＳＭＯＦＴＨＥＢＩＯＥＦＦＥＣＴＳＯＦＴＲＡＮＳＩＥＮＴＥＬＥＣＴＲＯＭＡＧＮＥＴＩＣＰＵＬＳＥＷ...     

IgG-RF ELISA定量检测法的建立和应用

本工作以 Ｉｇ Ｇ Ｆｃ 片断为靶抗原, 用自制抗人 Ｉｇ Ｇ Ｆａｂ Ｈ Ｒ Ｐ 标记物为第二抗体, 建立了定量测定血中 Ｉｇ Ｇ Ｒ Ｆ 的 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ。经验证, 本法可测范围为１０ ～２５６０ Ｉ Ｕ／ｍｌ, 批内 Ｃ Ｖ４８ ％ , 批间 Ｃ Ｖ１１７ ％ 。１００ 例健康人血清 Ｉｇ Ｇ Ｒ Ｆ 值为（４１０ ±３４３ ） Ｉ Ｕ／ｍｌ, 以高于珋ｘ ±ｓ 值的上限１１０ Ｉ Ｕ／ｍｌ 为阳性。９９ 例类风湿关节炎（ Ｒ Ａ） 患者血清 Ｉｇ Ｇ Ｒ Ｆ 值为（４３０ ±６０４） Ｉ Ｕ／ｍｌ,阳性率为６１５ ％ 。临床应用提示 Ｉｇ Ｇ Ｒ Ｆ 是判断 Ｒ Ａ 活动性的良好指标之一。     

狼疮性BXSB小鼠B细胞增殖反应异常的初步探讨

系统性红斑狼疮 (ＳＬＥ )小鼠模型是研究人ＳＬＥ发病机制的主要工具。本室曾发现狼疮性ＢＸＳＢ小鼠Ｂ细胞增生异常升高 ,更新速度明显加快[1] 。另一方面 ,ＢＸＳＢ小鼠血清ＩｇＧ2ａ和ＩｇＧ3水平及相应亚类的自身抗体显著升高[2 ,3 ] ,而一般认为ＩｇＧ类型抗体负反馈性抑制Ｂ细胞的功能是机体免疫调节的重要机制之一。本实验初步探讨了正常的 2月龄ＢＡＬＢ/ｃ小鼠和发病的 4月龄雌雄ＢＸＳＢ小鼠Ｂ细胞体外增殖反应状态以及ＩｇＧ类型的兔抗小鼠Ｉｇ (ＲａＭＩｇ )对此的调节作用。1　材料和方法1 1　动物　ＢＸＳＢ小鼠由北医大三院…     

高效凝胶色谱一步法制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＰｈａｒｍａｃｉａＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ—３００凝胶色谱柱，建立了ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的一步法制各级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水直接上样，用ｐＨ７．４１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢＳ洗脱（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ），即得到纯化的ＭｃＡｂ。一次上样量４０～５０ｍｌ腹水，回收率为８５％－９０％．整个纯化周期４ｈ。纯化的ＭｃＡｂ经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ测定，纯度＞９０％，免疫组化ＡＢＣ法测定活性为１：８００００（７．８×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ）。该法操作简单、快速，只要有一台核酸／蛋白检测仪，便可进行制备级水平的纯化。     

THE USING OF LEATHER STRAP IN REHABILITATION OF PIP JOINT

ＴＨＥＵＳＩＮＧＯＦＬＥＡＴＨＥＲＳＴＲＡＰＩＮＲＥＨＡＢＩＬＩＴＡＴＩＯＮＯＦＰＩＰＪＯＩＮＴＴＨＥＵＳＩＮＧＯＦＬＥＡＴＨＥＲＳＴＲＡＰＩＮＲＥＨＡＢＩＬＩＴＡＴＩＯＮＯＦＰＩＰＪＯＩＮＴｓｈｉＪｉａｎ；ＬｉｕＬｉｎｇｔｕ；ＨｕａｎｇＭｉｎｑｉ；...     

AngⅡ、mm-LDL和TNFα对ECV304细胞 PDGF-B链基因转录调控的影响

目的 :从基因转录水平探讨ＡｎｇⅡ、ｍｍ -ＬＤＬ及ＴＮＦα对ＥＣＶ30 4细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因表达的影响。方法 :( 1 )以ＧＡＰＤＨ为内参照 ,用反转录 -多聚酶链反应 (ＲＴ -ＰＣＲ)方法检测 1 0 - 6 ｍｏｌ/ＬＡｎｇⅡ、1 0 0 μｇ/ｍＬｍｍ -ＬＤＬ及 2 0 0Ｕ/ｍＬＴＮＦα作用于ＥＣＶ30 4细胞 1 8ｈ后各实验组ＰＤＧＦ -Ｂ链基因ｍＲＮＡ水平 ,分别为对照组的 1 5倍、2 0倍和 1 3倍 ,提示ＡｎｇⅡ、ｍｍ -ＬＤＬ及ＴＮＦα在转录水平对ＥＣＶ30 4细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因的表达有促进作用。 ( 2 )构建一系列含人ＰＤＧＦ -Ｂ链基…     

LEAKAGE TESTING OF ENDOSCOPE

ＬＥＡＫＡＧＥＴＥＳＴＩＮＧＯＦＥＮＤＯＳＣＯＰＥＬＥＡＫＡＧＥＴＥＳＴＩＮＧＯＦＥＮＤＯＳＣＯＰＥＷａｎｇＲｏｎｇｃｈａｎｇ；ＹｕＭｉｎｇｔａｏ（ＣｈｉｎｅｓｅＰＬＡＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ１００８５３，Ｂｅｔｉｍ，Ｃｈｉｎａ）LEAKAGE TESTIN...     

牛膝多糖对小鼠体液免疫反应的增强作用

牛膝多糖（ＡＢＰ）是从传统中药牛膝根中分离得到的一有效成分。ＡＢＰｉｐ５０ｍｇ·ｋｇ－１×５ｄ能明显提高血清总ＩｇＧ及特异性抗体溶血素的含量，并增加脾脏ＰＦＣ数；还能对抗环孢霉素Ａ引起的ＰＦＣ及ＩｇＧ的下降。ＡＢＰ０．２～０．８ｇ·Ｌ－１体外能刺激小鼠脾细胞增殖，也能增强ＬＰＳ诱导的Ｂ淋巴细胞增殖。上述结果表明，ＡＢＰ能增强小鼠的体液免疫功能。     

抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响

目的 :探讨ＮＦκＢ以及抗氧化剂在大鼠肺微血管内皮细胞中对ＴＮＦ α加ＬＰＳ诱导的ｉＮＯＳ基因表达的作用及其机制。方法 :通过免疫组化染色ＡＢＣ法用抗内皮细胞抗体ＣＤ31对培养的大鼠肺微血管内皮细胞进行鉴定。Ｇｒｉｅｓｓ法测定细胞培养上清液中的亚硝酸盐浓度以反映ＮＯ的生成。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结合ＲＴ ＰＣＲ分析ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平。ＥＭＳＡ法测定细胞核内ＮＦκＢ的结合活性。结果 :ＴＮＦα(10 0Ｕ/ｍｌ)加ＬＰＳ(1ｕｇ/ｍｌ)处理内皮细胞 2ｈ后ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平明显上升 (Ｐ <0 .0 5 ) ,2 4ｈ后能明显增加…     

EXPERIMENTAL STUDIES OF MEDICAL EQUIPMENT SELECTION BY USING THE MULTI-STAGE WEIGHTING EVALUATION METHOD

ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＳＴＵＤＩＥＳＯＦＭＥＤＩＣＡＬＥＱＵＩＰＭＥＮＴＳＥＬＥＣＴＩＯＮＢＹＵＳＩＮＧＴＨＥＭＵＬＴＩ－ＳＴＡＧＥＷＥＩＧＨＴＩＮＧＥＶＡＬＵＡＴＩＯＮＭＥＴＨＯＤＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＳＴＵＤＩＥＳＯＦＭＥＤＩＣＡＬＥＱＵＩＰ...     

DEVELOPED AND CLINICAL APPLICATION OF LOCK-RING TYPE BIPOLAR HIP PROSTHESIS

ＤＥＶＥＬＯＰＥＤＡＮＤＣＬＩＮＩＣＡＬＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＯＦＬＯＣＫ－ＲＩＮＧＴＹＰＥＢＩＰＯＬＡＲＨＩＰＰＲＯＳＴＨＥＳＩＳＤＥＶＥＬＯＰＥＤＡＮＤＣＬＩＮＩＣＡＬＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＯＦＬＯＣＫ－ＲＩＮＧＴＹＰＥＢＩＰＯＬＡＲＨＩＰＰＲＯ...     

EXPERIMENTAL STUDIES OF THE EFFECTS OF PRESTRESS

ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＳＴＵＤＩＥＳＯＦＴＨＥＥＦＦＥＣＴＳＯＦＰＲＥＳＴＲＥＳＳｏｎｉｎｔａｃｔＣｈａｎｉｎｅＴｉｂｉａＢｏｎｅＳｔｒｕｃｔｕｒｅＬｉｕＢａｏｗｅｉ，ＬｕＳｈｉｂｉ，ＷａｎｇＪｉｆａｎｇＤｅｐｔ．ｏｆＯｒｔｈｏｐ．ｏｆＧｅｎｅｒａ...     

DIELECTRIC PROPERTIES OF HUMAN BREAST CARCINOMA AND SURROUNDING TISSUES

ＤＩＥＬＥＣＴＲＩＣＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳＯＦＨＵＭＡＮＢＲＥＡＳＴＣＡＲＣＩＮＯＭＡＡＮＤＳＵＲＲＯＵＮＤＩＮＧＴＩＳＳＵＥＳＤＩＥＬＥＣＴＲＩＣＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳＯＦＨＵＭＡＮＢＲＥＡＳＴＣＡＲＣＩＮＯＭＡＡＮＤＳＵＲＲＯＵＮＤＩＮＧＴＩＳＳＵＥ...     

从牛舌中提取寻常型天疱疮抗原的方法及其应用

在天疱疮免疫机制研究中,通常从人表皮中提取天疱疮抗原。由于人皮肤获取困难,本文探讨从牛舌粘膜上皮中提取天疱疮抗原的可行性。取新鲜牛舌用001ｍｏｌ/ＬＰＢＳ冲洗干净,剥离牛舌粘膜上皮及下方的结缔组织,并剪成1～2ｃｍ2大小组织块,置于1ｍｏｌ/ＬＮａＣｌ溶液中在4℃磁力搅拌28～30ｈ,分离牛舌粘膜上皮和结缔组织。牛舌粘膜上皮用ＰＢＳ反复冲洗3次后充分剪碎。剪碎的牛舌粘膜上皮置于天疱疮抗原提取液(625ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓＨＣ1,内含8ｍｏｌ/Ｌ尿素、1%ＳＤＳ、5%2巯基乙醇、2ｍｍｏｌ/ＬＥＤＴＡ和1ｍｍｏｌ/ＬＰＭＳＦ,ｐＨ6.8)…