体外沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶基因对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的 通过构建异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(ICMT)小分子干扰RNA(siRNA)沉默ICMT,研究沉默ICMT基因对舌鳞状细胞癌(TSCC)迁移和侵袭的影响.方法 通过脂质体转染的方法将siRNA转染至人TSCC CAL-27和SCC-4细胞(ICMT-siRNA组),并设阴性对照组(转染NC-siRNA)和空...     

沉默Icmt基因对舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprenylcysteine carboxyl methyltransferase,Icmt)对舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其相关机制.方法:针对人Icmt基因序列设计并构建3条小干扰RNA(small interfering RNA,...     

shRNA沉默LASP-1对舌鳞状细胞癌SCC9细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨LASP?1在人舌鳞状细胞癌细胞中的表达,并应用shRNA沉默人舌鳞状细胞癌细胞SCC9中LASP?1基因,研究LASP?1对SCC9细胞增殖和迁移能力的影响。方法构建携带绿色荧光蛋白的LASP?1 shRNA质粒及阴性对照组质粒LASP?1 shNC,通过脂质体转染SCC9细胞,采用MTT法检测细胞增殖;RT?PCR法检测细胞LASP?1 mRNA表达;Western blot检测细胞LASP?1蛋白的表达;运用Transwell小室实验检测细胞迁移能力。结果 LASP?1在舌鳞状细胞癌细胞中高表达;实验组和阴性对照组分别转染相应质粒48 h后细胞均有绿色荧光蛋白表达,表明质粒转染成功;实验组SCC9细胞LASP?1 mRNA和LASP?1蛋白表达明显降低;与空白对照组相比,实验组细胞培养48 h和72 h细胞存活率分别降低了（51.23±1.47）%和（50.07±2.11）%;Transwell实验结果显示, LASP?1基因被沉默后细胞迁移能力明显下降,比对照组降低约43%。结论 LASP?1在舌鳞状细胞癌细胞中高表达,下调LASP?1基因表达可抑制SCC9细胞的增殖和迁移。     

β-catenin表达下调对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞周期、细胞凋亡和细胞迁移的影响

目的：探讨β-catenin表达下调对Tca8113细胞增殖、周期、凋亡和迁移的影响。方法：用脂质体2000将β-catenin siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,Western blotting技术检测转染后Tca8113细胞中β-catenin蛋白的表达,CCK-8试剂分析转染后对细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测下调β-catenin表达对Tca8113细胞周期及细胞凋亡的影响;Boyden chamber实验分析β-catenin表达下调对Tca8113细胞迁移能力的影响。结果：β-catenin siRNA能明显下调Tca8113细胞中β-catenin蛋白的表达,显著抑制Tca8113细胞的增殖。β-catenin siRNA组中的G0/G1期的细胞百分比明显高于未处理组和对照siRNA组。此外,β-catenin siRNA组中细胞凋亡的比率明显高于未处理组和对照siRNA组,其凋亡变化与caspase-3和bax蛋白表达的上调和bcl-2表达的下降密切相关。与未处理组和对照siRNA组相比,β-catenin siRNA组中Tca8113细胞的迁移能力显著下降,组间具有统计学意义。结论：β-catenin在舌鳞状细胞癌的发生发展中可能具有重要的作用。     

体外沉默异戊二烯化酶二牛龙牛儿基转移酶Ⅰ对舌鳞状细胞癌增殖的影响

目的 研究异戊二烯化酶二牛龙牛儿基转移酶Ⅰ（GGTase-Ⅰ）在舌鳞状细胞癌增殖中的作用。方法 登录Genebank确定人GGTase-Ⅰ基因序列,设计3条小干扰RNA（siRNA）,并将siRNA转染至舌癌细胞Cal-27（GGTase-ⅠsiRNA组）。设立空白对照组（只加入转染试剂,不加入siRNA）和阴性对照组（NC-siRNA）。采用实时定量聚合酶链反应和蛋白质免疫检测转染后各组细胞GGTase-Ⅰ、RhoA的mRNA和蛋白表达;蛋白质免疫检测转染48 h后Cyclin D1、p21的表达变化;细胞增殖活性检测试剂盒和流式细胞术检测细胞的增殖活性和细胞周期变化。结果 与阴性对照组和空白对照组相比,GGTase-Ⅰ siRNA 组细胞的GGTase-Ⅰ的mRNA和蛋白表达下降（P<0.05）,RhoA的mRNA和蛋白表达无明显改变（P>0.05）;Cyclin D1的表达下降,p21表达升高,细胞的增殖活性下降,细胞周期发生改变（P<0.05）。结论 GGTase-Ⅰ siRNA能抑制舌鳞状细胞癌细胞中GGTase-Ⅰ的表达,抑制细胞增殖,提示GGTase-Ⅰ在舌鳞状细胞癌增殖中可能发挥重要作用。     

体外沉默法尼基转移酶对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的 通过RNA干扰沉默法尼基转移酶（FTase）,探讨沉默FTase对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响及其相关机制。方法 针对FTase设计并构建3条小干扰RNA（siRNA）,转染人舌鳞状细胞癌CAL27和SCC-4细胞（实验组）,同时设置阴性对照组（转染NC-siRNA）和空白对照组（不转染siRNA）。应用实时荧光定量PCR检测各组细胞FTase、HRAS的mRNA表达,根据FTase mRNA的表达量,选取沉默效率最高的FTase-siRNA转染组作为进一步研究的实验组。蛋白质免疫印迹法检测各组细胞FTase、HRAS、p65、p-p65(S536)、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测各组细胞的侵袭和迁移能力。结果 与阴性对照组和空白对照组相比,实验组FTase的mRNA和蛋白表达下降（P<0.05）,HRAS的mRNA和蛋白表达无明显变化（P>0.05）,p-p65(S536)、MMP-9、HIF-1α、VEGF蛋白表达下降（P<0.05）,p65蛋白表达无明显变化（P>0.05）;实验组的细胞侵袭和迁移能力降低（P<0.05）。结论 体外沉默舌鳞状细胞癌细胞FTase,可以抑制细胞体外迁移和侵袭能力,为FTase可能作为舌癌治疗的分子靶点提供了一定的理论和实验依据。     

沉默RohA基因对舌鳞状细胞癌细胞增殖的影响

目的 通过RNA干扰技术沉默RhoA基因从而探讨RhoA对舌癌细胞增殖和生长的影响及其作用机制。方法体外培养舌鳞状细胞癌SCC-4细胞,以小分子干扰RNA转染沉默RhoA基因的表达。实验分为3组：实验组（又分为实验1组和实验2组,脂质体分别转染对应序列1的RhoA-siRNA和序列2的RhoA-siRNA）、阴性对照组（脂质体转染NC-siRNA）和空白对照组（不转染siRNA）。采用实时定量聚合酶链反应技术检测SCC-4细胞转染后RhoA mRNA的表达,Western blot检测RhoA、Cyclin D1、p21和p27蛋白的表达,四唑盐比色法检测舌癌细胞生长水平和倍增时间。结果 与阴性对照组和空白对照组相比,实验组舌癌细胞的RhoA基因及蛋白表达降低,p21、p27蛋白表达升高,Cyclin D1蛋白表达降低,细胞倍增时间延长,增殖能力降低（P<0.05）。结论 沉默RhoA基因可以抑制舌癌细胞的增殖和生长,RhoA基因通过调控细胞周期信号转导途径影响舌癌细胞的增殖,RhoA基因可以成为舌癌基因治疗的靶点。     

三氧化二砷诱导舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的实验研究

目的：观察三氧化二砷对舌癌细胞系Tca8113的诱导凋亡作用。方法：以人舌鳞癌细胞Tca8113为研究对象，使用荧光染色光镜、透射电镜观察三氧化二砷不同浓度、不同时间作用后的肿瘤细胞的形态学变化，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：一定浓度的三氧化二砷作用Tca8113细胞24h、48h后，细胞形态学观察可见有明显的细胞凋亡发生；流工细胞仪检测Tca8113细胞的基础凋亡率为0．5％－1．2％，三氧化二砷作用后肿瘤细胞的凋亡率可提高到15％－20％。结论：三氧化二砷可诱导人舌鳞癌细胞系细胞凋亡。     

舌鳞状细胞癌浸润前沿细胞增殖的研究

目的　研究舌磷癌浸润前沿分级、检测增殖细胞核抗原 (PCNA)、Ki6 7、核仁组织区相关嗜银蛋白 (AgNOR)在浸润前沿中的表达。 方法　对 5 7例舌鳞癌行浸润前沿分级 ,采用免疫组化SP法及银染色法检测浸润前沿和中心PCNA、Ki6 7、NORs的表达。结果　浸润前沿PCNA、Ki6 7的表达和AgNOR均数均明显高于非前沿部分 ,差异有极显著性 (P <0 .0 0 1) ;浸润前沿PCNA标记指数 (P <0 .0 5 )、AgNOR均数 (P <0 .0 1)与浸润前沿分级 (IFG)总分呈正相关关系 ;单因素COX分析显示 ,IFG总分 (P <0 .0 1)、浸润前沿AgNOR均数 (P <0 .0 5 )对判断预后有意义 ;多因素COX分析显示 ,IFG总分 (P <0 .0 1)可作为预测总体生存率和累积生存率的有意义的因子。结论　舌鳞癌浸润前沿肿瘤细胞分化较差 ,增殖活性明显高于非前沿部分 ;IFG总分和浸润前沿AgNOR均数与舌癌预后有关     

十字孢碱对口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨十字孢碱(staurosporine,ST)对人口腔鳞状细胞癌细胞株CAL27增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度的ST对CAL27细胞增殖的抑制作用,DAPI荧光染色法观察不同浓度的ST对CAL27细胞凋亡的改变,流式细胞术检测不同浓度ST对CAL27细胞凋亡率和周期分布的影响;蛋白免疫印迹法检测不同浓度ST对CAL27细胞周期蛋白cyclin D1、Cdk4、Cdk6、p21表达的影响。结果 ST对CAL27细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),抑制作用具有药物浓度依赖性。通过DAPT染色,ST能明显诱导细胞凋亡及凋亡形态改变。CAL27细胞出现Annexin V-FITC/PI流式细胞术观察发现与对照组相比,ST可诱导CAL27细胞凋亡率明显增加(P<0.05),并引起细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05)。蛋白免疫印迹法检测结果显示,经ST处理细胞后,cyclin D1、Cdk4和Cdk6蛋白表达明显降低,p21蛋白表达升高(P<0.05)。结论 ST可显著抑制口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖并诱导其凋亡,其机制考虑是通过阻滞细胞周期于G2/M期,进而抑制肿瘤细胞生长并促进细胞凋亡。     

Effect of enhancer of zeste homolog 2 inhibitor GSK126 on the proliferation and apoptosis of tongue squamous cell carcinoma

目的 观察zeste基因增强子同源物2（EZH2）抑制剂GSK126对人舌鳞状细胞癌细胞体外增殖与凋亡的影响,并探讨其相关机制,为舌鳞状细胞癌的临床治疗提供新思路。方法 将不同浓度的GSK126作用于舌鳞状细胞癌CAL-27细胞,通过甲基噻唑基四唑（MTT）、克隆形成、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）荧光染色实验检测药物对细胞增殖能力的影响;采用Hoechst33342荧光染色、JC-1法观察细胞凋亡情况;采用Western blot法检测CAL-27细胞内相关蛋白细胞外调节蛋白激酶（ERK）、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-9的表达水平。结果 GSK126能抑制CAL-27细胞增殖并对细胞凋亡有促进作用。GSK126能下调细胞内p-ERK、Bcl-2的表达水平,同时可增加Bax、Cleaved caspase-9的表达（P<0.05）。结论 GSK126可抑制舌鳞状细胞癌CAL-27细胞的增殖,并且能促进其凋亡,其机制可能与抑制MEK/ERK信号通路以及激活Bax/Bcl-2通路有关。     

酸性培养对人舌鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响及其机制研究

目的 探究酸性培养条件对人舌鳞癌细胞SCC15和CAL27增殖、凋亡、迁移能力的影响及潜在的分子机制.方法 在pH6.2的酸性培养液中分别培养一定时间,噻唑兰(MTT)法检测舌鳞癌细胞SCC15和CAL27增殖能力;流式细胞分析法检测SCC15和CAL27细胞凋亡水平的改变;划痕愈合实验检测SCC15和CAL27迁移能...     

干扰素诱导蛋白10对舌鳞癌细胞增殖、凋亡的影响

目的: 探讨干扰素诱导蛋白10（IP-10）对舌鳞癌细胞CAL-27增殖、凋亡的影响以及与CXCR3A、CXCR3B基因表达的关系。方法: 将CAL-27 细胞分为 3 个实验组和 1 个对照组,3 个实验组分别采用10、20、40 ng/mL 的IP-10刺激,对照组不予刺激。刺激12、24、48、72 h时,利用CCK-8法检测 4 组细胞的增殖活性;24 h 时,利用流式细胞仪检测细胞凋亡。采用Q-PCR检测10 ng/mL IP-10作用下,CAL-27细胞在12、24、48、72 h时CXCR3A、CXCR3B mRNA的表达情况。采用SPSS16.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果: 12 h和24 h 时,3种浓度的IP-10 均能促进 CAL-27 细胞增殖（P<0.05）;在 48 h 时,只有40 ng/mL的 IP-10 能够促进 CAL-27 细胞增殖（P<0.01）; 而在72 h时,3种浓度的 IP-10对 CAL-27 细胞的增殖均无促进作用（P>0.05）。24 h后,3个实验组与对照组相比,CAL-27细胞的增殖率降低。24 h 时,3种实验组细胞凋亡率分别为（3.377±0.575）%、（6.867±2.848）%和（5.317±2.794）%,与对照组相比具有显著差异（P<0.05）,但各实验组间无显著差异（P>0.05)。12、24、48、72 h时,CXCR3A mRNA的表达量分别为0.0130±0.0007、0.0274±0.0005 、0.0204±0.0011和0.0174±0.0006,组间差异显著（P<0.05）;CXCR3B mRNA的表达量分别为0.0124±0.0015、0.0209±0.0016、0.0297±0.0013和0.0386±0.0010,组间差异显著（P<0.05）。结论: IP-10既能促进舌鳞癌细胞CAL-27增殖又能够诱导其凋亡,随着作用时间的推移,细胞增殖率降低;CXCR3A mRNA的表达先升高后降低,而CXCR3B mRNA的表达逐渐升高。CXCR3A、CXCR3B可能参与调控IP-10诱导下的舌鳞癌细胞的增殖和凋亡。     

白藜芦醇对人舌癌细胞Tca增殖及凋亡影响的研究

目的探讨白藜芦醇对人舌癌细胞Tca的增殖及凋亡影响。方法应用MTT比色法检测白藜芦醇对Tca细胞体外生长的抑制作用;平板克隆检测白藜芦醇处理前后Tca细胞的克隆形成能力;流式细胞仪测定细胞的周期和凋亡;Hoechst33258荧光染料染色,显示凋亡细胞形态。结果MTT实验观察,白藜芦醇对Tca细胞生长有抑制作用,随浓度升高和时间延长,作用增强,呈剂量-时间效应关系;白藜芦醇作用Tca细胞48 h和72 h后,半数细胞抑制作用所需浓度约为(IC50)100μmol/L和75μmol/L。白藜芦醇(75μmol/L)处理后,细胞的克隆形成能力明显下降。白藜芦醇(100μmol/L)作用48 h后使G1期细胞的比例增加;Hoechst33258染色,可见细胞呈明显的凋亡特征。结论白藜芦醇可抑制人舌癌细胞Tca增殖,使细胞周期呈G1阻滞并可诱导细胞发生凋亡。     

过表达大肿瘤抑制因子2对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨过表达大肿瘤抑制因子2（LATS2）基因对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞增殖和凋亡的影响。方法 应用慢病毒介导的基因过表达技术,使用LATS2过表达慢病毒感染SCC-25细胞株。通过CCK-8检测过表达LATS2对细胞增殖的影响;流式细胞术检测LATS2基因过表达后细胞凋亡情况;Western blot检测LATS2过表达后对凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的变化。结果 转染pEGFP-LATS2细胞的LATS2基因表达明显上调;pEGFP-LATS2组细胞增殖明显受到抑制;流式细胞术检测pEGFP-LATS2组凋亡率明显高于空白对照组（control）和空载体组（pEGFP-control）（P<0.05）。与control和pEGFP-control组相比,pEGFP-LATS2组Bax蛋白上调,而Bcl-2蛋白下调。结论 过表达LATS2基因可明显抑制SCC-25细胞增殖并促进细胞凋亡。