体外联合培养条件下小鼠睾丸足细胞诱导成熟T淋巴？…

目的：探讨体外联合培养条件下睾丸足细胞能否诱导Ｔ淋巴细胞凋亡。方法：用ＴＵＮＥＬ标记、核酸电泳、电镜、流式细胞术检测对照组（Ｔ淋巴细胞）、Ａ组（Ｔ淋巴细胞＋培养睾丸足细胞２４ｈ培养基上清）、Ｂ组（Ｔ淋巴细胞＋睾丸足细胞）等３组中小鼠成熟Ｔ淋巴细胞的凋亡及其数量的变化。结果：３组Ｔ淋巴细胞在电镜下均可见细胞染色质浓集,核固缩裂解,凋亡小体形成;ＴＵＮＥＬ标记见部分细胞核染色呈深蓝色;核酸电泳出现展开     

诱导小鼠同种异体反应性T细胞凋亡

通过FasL-Fas途径诱导小鼠同种异体反应性T细胞(alloreactive T cells,ARTC)凋亡,为减轻异基因骨髓移植(allo-BMT)后的移植物抗宿主病(GVHD)探索新的手段.采用磁性细胞分离系统(MACS)分离BALB/c小鼠(H-2d)干细胞抗原(Sca)-1+早期造血细胞(early hematopoietic cells,EHC),然后与经丝裂霉素C去增殖的能产生高滴度表达mFasL假病毒的逆转录病毒包装细胞(PA31 7)共培养,进行mFasL cDNA基因转移;用含干细胞因子(SCF)、白细胞介素-3(IL-3)和白细胞介素-6(IL-6)的完全培养基培养1周后,借助PCR、RT-PCR、FCM技术检测外源mFasLcDNA在扩增的造血细胞(HC)中的整合与表达效率;或与异基因BAC小鼠(H-2dxb)脾细胞进行单向混合淋巴细胞培养(OWMLC),6 d后用Annexin V/PI标记和FCM检测BAC脾细胞凋亡.结果显示用MACS法成功分离出BALE/c小鼠Sca-l+EHC(1×105个/只),纯度为(89.0±6.1)%;经逆转录病毒法对它进行外源mFasLcD-NA转染并扩增1周后,细胞总数达2×106个/只;基因组DNA PCR和RT-PCR证实HC整合有mFasL cDNA和Neor基因,并表达外源基因mRNA;FCM发现mFasL+HC占(43.9±5.6)%,而用表达NeOr的假病毒转染HC,其FasL阳性率仅为(2.7±1.3)%(P＜0.01);高表达mFasL的HC与异基因BAC小鼠脾细胞进行OWMLC 6 d后,(51.9±4.7)%细胞发生凋亡,而低表达mFasL HC与BAC脾细胞共培养,其凋亡率为(19.6±4.3)%(P＜0.01).提示体外反应中,转染外源mFasL cDNA并高表达mFasL的HC可诱导小鼠同种异体反应性T细胞凋亡.     

Sertoli细胞诱导异基因T淋巴细胞凋亡的研究

目的 探讨大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)在体外与同种异体来源T淋巴细胞共同培养能否诱导T淋巴细胞凋亡.方法 用SABC法检测T淋巴细胞Fas和Sertoli细胞FasL的表达率.Sertoli细胞和异基因T淋巴细胞共同培养实验分为,A组(对照组)只有T淋巴细胞培养,B组为T淋巴细胞与经过FasL单克隆抗体处理过的等量Sertoli细胞共同培养;C组T淋巴细胞与培养Sertoli细胞24 h的培养液上清共同培养;D组为T淋巴细胞与等量Sertoli细胞共同培养;用TUNEL法检测各组淋巴细胞的凋亡指数.结果 T淋巴细胞Fas的表达率为(91.67±2.08)%;Sertoli细胞FasL的表达率为(90.43±3.52.)%.C组和D组淋巴细胞的凋亡指数显著大于A组和B组(P＜0.01);D组T淋巴细胞的凋亡指数显著大于C组(P＜0.01).结论 T淋巴细胞高表达Fas,Sertoli细胞高表达FasL;在体外共同培养的条件下,Sertoli细胞能够诱导异基因T淋巴细胞的凋亡,T淋巴细胞凋亡原因可能与Sertoli细胞产生FasL有关.     

转化生长因子-β1诱导小鼠足细胞凋亡实验研究

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）是否能诱导小鼠足细胞株凋亡以及诱导凋亡的途径。方法（1）体外培养小鼠足细胞株;（2）应用不同浓度（10^-1～104ng／L）TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡;（3）10^3ng／LTGF-β1诱导不同时间（12、24、48h）后观察足细胞凋亡情况;（4）采用流式细胞仪检测AnnexinV、Caspase3;（5）实时定量PCR及Western印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、Smad2、Smad3、Smad7mRNA及蛋白质的表达情况。结果（1）小鼠足细胞在不同浓度（10^-1～10^4ng／L）TGF-β1刺激下,细胞凋亡率明显高于正常对照组（均P〈0.05）;（2）随着TGF-β1浓度增加、凋亡时间增加,足细胞凋亡率增高（P〈0．05）;p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7mRNA表达增加;TGF-β1 103ng／L为最佳诱导小鼠足细胞凋亡浓度,24h为最佳诱导凋亡时间;（3）与正常对照组比较,10^3ng／LTGF-β1诱导后Caspase3阳性细胞比率显著增加（P〈001）．p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7蛋白质表达亦显著增加（P〈0．01）。结论TGF-β1能诱导小鼠足细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性。TGF-β1通过Smad通路、p38MAPK通路以及线粒体通路诱导小鼠足细胞凋亡。     

抗Fas核酶抑制小鼠T细胞凋亡

目的 研究抗Fas核酶对小鼠原代T细胞凋亡的抑制作用，探索增强T细胞抗凋亡能力的新途径。方法 设计并合成针对小鼠Fas基因的锤头状核酶，通过电穿孔转染法将其导入小鼠脾脏T细胞，通过RT-PCR、Westernblot检测细胞上Fas的表达，细胞经抗Fas的抗体(JO2)作用后。通过Caspase-3活性检测试剂盒测转染前后细胞Cagpase-3活性的变化。MTT法测细胞的增殖，Annexm-V凋亡检测试剂盒测细胞凋亡。结果 ①与对照组、空载体和突变核酶转染组相比，细胞表面的Fas水平明显降低；②与抗Fas的抗体9呼育后，与转染空载体和突变核酶的细胞相比，转染核酶的细胞Caspase-3活性明显降低；③经抗Fas抗体处理后，细胞的增殖活性明显增高；④与空载体和突变核酶转染组相比，转染核酶的细胞凋亡率明显降低。结论 小鼠活化T细胞上高表达Fas，抗Fas核酶能显著降低其Fas水平，使细胞免于Fas途径的凋亡，从而增强其抗凋亡能力。     

去甲斑蝥素诱导人T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的实验研究

目的：探讨去甲斑蝥素诱导人T淋巴细胞白血病细胞株6T－CEM的凋亡作用。方法：利用DNA断裂点标记法（TUNEL）、DNA凝胶电泳、活细胞拒染以及光镜方法研究有关细胞的凋亡。结果：UNEL标记及DNA凝胶电泳显示：10－40μg/ml剂量的去甲斑蝥素作用6T－CEM细胞24h及10μg/ml剂量的去甲斑蝥素作用6T－CEM细胞超过18h后即出现典型的细胞凋亡特征。结论：一定剂量范围内的去甲斑蝥素可在直接杀伤作用较小的情况下明显诱导6T－CEM细胞凋亡,不会因细胞坏死而引起炎症反应,这对于去甲斑蝥素应用于临床将有十分重要意义。     

蜂毒素诱导人T淋巴细胞白血病细胞株6T-CEM的凋亡作用

目的：探讨蜂毒素诱导人T淋巴细胞白血病细胞株6T－CEM的凋亡作用。方法：利用DNA断裂点标记法（TUNEL）、DNA凝胶电泳、活细胞拒染以及光镜方法研究6T－CEM细胞的凋亡。结果：5μg/ml蜂毒素作用4h及4μg/ml蜂毒素作用24h诱导6T－CEM出现明显的凋亡特征。结论：蜂毒素在杀伤6T－CEM的同时能明显诱导细胞凋亡。     

小鼠骨髓干细胞体外诱导成熟的树突状细胞对T细胞增殖的影响

目的：研究小鼠骨髓干细胞体外诱导分化的树突状细胞对T细胞增殖的影响,为进一步研究树突状细胞的功能及临床肿瘤的治疗提供有效的实验方法。 方法：应用IL-4和GM-CSF培养小鼠骨髓细胞5~7 d,光镜下观察细胞形态学变化;培养至第5~6天,加入黑色素瘤（B16）冻融抗原继续培养1~2 d,流式细胞仪检测细胞表面分子CD83、CD86,并与同种异体T细胞混合培养72 h,终止培养前16 h加入³H-TdR（18.5 kBq/孔）,γ-液体闪烁仪测定cpm值。 结果：用IL-4和GM-CSF培养3 d可见细胞形态发生改变,细胞形状不规则,培养5~6 d时,有刺状突起、拉长,为典型树突状细胞形态学特征;抗原装载后流式细胞仪检测CD83、CD86表达,IL-4+GM-CSF+TNF-α组（61.68%、71.25%）及IL-4+GM-CSF+冻融抗原组（63.11%、76.88%）明显高于对照组（2.41%、3.88%）及单纯IL-4+GM-CSF培养组（21.86%、28.69%）（P<0.001）,IL-4+GM-CSF+TNF-α组与IL-4+GM-CSF+冻融抗原组比较,CD83和CD86表达差异无显著性;液闪仪检测结果显示,IL-4+GM-CSF+冻融抗原组刺激T细胞增殖的能力明显强于其他组,且差异具有显著性（P<0.001, P<0.05）。 结论：小鼠骨髓细胞体外培养成功地诱导扩增出足量树突状细胞,经肿瘤抗原刺激后绝大部分成熟,并能够刺激同种异体T细胞大量增殖,参与免疫应答。     

小鼠胎儿胸腺T细胞体外培养的分化和成熟

目的 观察BALB／c小鼠胎儿胸腺T细胞体外培养的分化和成熟。方法：采用小鼠胎儿胸腺器官体外培养体系及流式细胞术测其T细胞CD4、CD8和TCR的表达。结果：受孕15d胎鼠胸腺T细胞主要为CD4^－CD8^-细胞（96．0％）;体外培养3d后,大部分分化为CD4^ CD8^ 细胞（65．4％）,小部分成熟为CD4^ CD8^-(14.3%)和CD4^-CD8^ (11.2%)细胞;培养5d后,CD4^ CD8^ 细胞（59．7％）减少,而CD4^ CD8^-(14.3%)和CD4^-CD8^ (15.8%)增多;培养后10d,CD4^ CD8^ 细胞降低到47．2％,CD4^ CD8^-和CD4^-CD8^ 细胞分别增加到20．0％和24．9％,同时TCR明显表达。结论：应用小鼠胎儿胸腺器官培养体系进一步通过胸腺细胞的阳性和阴性选择证实其T细胞的分化和成熟过程。     

Apoptosis of matured T lymphocytes induced by mouse sertoli cells in cocultures in vitro

Objective: To study whether mouse sertoli cells can induce the apoptosis of matured T lymphocytes in cocultures in vitro. Methods: With TUNEL, DNA electrophoresis, eleetro-mierography and flow cytometry, we examined the apoptosis and its rates of mouse matured T lymphocytes in control group (T lymphocytes only), group A (T lymphocytes culture medium of sertoli cells), group B (T lymphocytes sertoli cells). Results: Under electro-micrography, chromatin condensation, karyopyknosis, karyorhexis and apoptotic body were observed in some T lymphocytes in 3 groups; some nucleuses were stained dark blue with TUNEL; a typical DNA ladder was found with DNA electrophoresis. The apoptotic rates of T lymphocytes in group A and B were significantly higher than that in control group (P＜0.01). The apoptotic rate of T lymphocytes in group B was significantly higher than that in group A (P＜0.01). Conclusion: In coculture condition in vitro,mouse sertoli cells can induce the apoptosis of matured T lymphocytes.     

肝癌细胞通过Fas/FasL途径触发T淋巴细胞的凋亡

目的：研究肝癌细胞表面Fas/FasL系统的变化及对其逃避机体免疫监控的影响。方法：采用流式细胞术和RT-PCR检测肝癌细胞株HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5Fas和FasL的表达;观察化疗药物争光霉素诱导肝癌细胞FasL表达及FasL表达上调后的肝癌细胞触发淋巴细胞株Jurkat细胞凋亡的作用。结果：HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5肝癌细胞株Fas表达均阴性;HepG2 FasL mRNA的表达为阴性,而Hep3B 和PLC/PRF/5FasL mRNA的表达均阳性。经争光霉素（0.6mg/ml）诱导后,上述肝癌细胞Fas的表达无明显变化,而其FasL的表达却增加,与Jurkat细胞混合孵育则触发后发生显性调亡。结论：肝癌细胞可能一方面降低或不表达Fas而对Fas介导的凋亡耐受,另一方面又增强自身FasL的表达以诱发与之接触的T淋巴细胞凋亡,在完成免疫逃避的同时,可对周围的T细胞实施反攻击。     

An Effective Method for Depleting MatureT Lymphocytes from Bone Marrow Cells──Two－step Percoll Centrifugation

ＡｎＥｆｆｅｃｔｉｖｅＭｅｔｈｏｄｆｏｒＤｅｐｌｅｔｉｎｇＭａｔｕｒｅＴＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｆｒｏｍＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＣｅｌｌｓ──Ｔｗｏ－ｓｔｅｐＰｅｒｃｏｌｌＣｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎＴＡＮＧＪｉ－ｓｅｎ（唐继森）；ＷＡＮＧＢｉａｎ－ｍｉｎ...     

乳腺癌干细胞的树突状细胞疫苗对细胞毒性T淋巴细胞增殖的影响

目的探讨加载人类乳腺癌干细胞（BSC）的树突状细胞（DC）疫苗对细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活化效果的影响。方法从11例乳腺癌患者中分离并评价BSC,探讨BSC作为DC疫苗抗原的适用性,并在体外评估了杀伤BSC的能力。结果BSC表达高水平的干细胞相关分子CD44+、CD24-和CD133+,乳腺癌贴壁细胞表达CD44+、CD24＋和低CD133+。在体内,富集的乳腺癌细胞球表现出比贴壁细胞更强的致瘤能力。使用BSC裂解物的DC疫苗接种引发针对BSC的特异性T细胞应答。DC疫苗接种刺激Th1应答并诱导IFN-γ产生,与活化的CTL数量呈正相关。结论乳腺癌细胞球细胞具有干细胞特性和强致瘤功能,使用BSC抗原的DC接种可引发有效的抗原特异性Th1应答,进一步激活抗原特异性CTL并诱导IFN-γ产生。     

Ca2+在紫外线诱导成纤维细胞凋亡中的作用

目的了解细胞内外钙离子浓度对紫外线(UVB)辐射诱导成纤维细胞(NIH3T3)凋亡作用的影响.方法 UVB照射成纤维细胞10 min,培养12 h后,用流式细胞仪测定凋亡率. 结果 UVB照射组比UVB不照射组凋亡率有明显增加;UVB照射组内各组间凋亡率因细胞内外Ca2+浓度不同存在明显差异. 结论 UVB辐射诱导成纤维细胞发生凋亡与胞内外Ca2+浓度有关,Ca2+参与了凋亡的信号转导.UVB诱导成纤维细胞发生的凋亡,主要通过Ca2+转导凋亡信号这一途径,还反映出胞浆Ca2+升高既来源于胞内钙池,又来源于胞外游离Ca2+.     

染料木黄酮诱导膀胱癌T24细胞凋亡的实验研究

目的　研究染料木黄酮对人T2 4膀胱癌细胞的抑制作用和诱导凋亡作用 ,并探讨其作用机制。方法　将不同浓度的染料木黄酮作用于人T2 4膀胱癌细胞 ,用MTT法检测其有效作用浓度 ,分别采用透射电子显微镜、瑞氏染色、Hoechest332 5 8荧光染色、流式细胞仪观察和检测T2 4细胞凋亡情况。结果　MTT法测得染料木黄酮对T2 4细胞的IC50 值为32 80mg·L-1,浓度为 2～ 80mg·L-1的染料木黄酮具有诱导人T2 4膀胱癌细胞凋亡的作用 ,且随药物作用时间延长凋亡率逐渐增加。结论　染料木黄酮具有抗膀胱癌作用 ,其重要作用机制之一是诱导人T2 4膀胱癌细胞凋亡     

膀胱移行细胞癌内树突状细胞和T淋巴细胞的检测及其意义

目的：研究膀胱移行细胞癌内树突状细胞（DC）及T淋巴细胞的浸润程度与肿瘤的病理分级和预后的关系。方法：应用免疫组化ABC法，选用抗S－100蛋白多克隆抗体和CD45RO单克隆抗体对55例膀胱移行细胞癌内的DC和T淋巴细胞进行检测。结果：膀胱移行细胞癌内DC及T淋巴细胞的浸润程度与肿瘤的病理分级和预后关系十分密切，结论：作为抗原提呈细胞的DC和具有特异抗肿瘤免疫活性的T淋巴细胞能较全面客观地反映膀胱移行细胞癌宿主局部抗肿瘤免疫状态，两者是判断膀胱移行细胞癌预后的可靠性指标。     

慢性支气管炎急性发作期患者外周血T淋巴细胞凋亡的研究

目的 :实验观察慢性支气管炎急性发作期和稳定期患者外周静脉血 T淋巴细胞凋亡情况。方法 :选择急诊监护病房急性发作期住院患者 17例 (发作组 )和门诊随访稳定期患者 10例 (稳定组 ) ,分别抽取外周静脉血 ,用抗 CD3、CD95、CD2 5荧光单抗对 T淋巴细胞进行标记和记数。结果 :发作组 CD3T细胞总数 4 2 .6 3± 16 .37明显低于稳定组 6 2 .2 2± 2 3.90 ,t=- 4.2 83,P<0 .0 0 1;发作组 CD95 T细胞 14 .15± 11.0 6和稳定组 34.88± 9.82比较 ,t= - 8.796 ,P<0 .0 0 1,前者比后者显著降低 ;CD2 5 T细胞发作组 10 .89± 4 .1与稳定组 13.11± 3.0 2比较 ,t=-2 .10 5 ,P>0 .0 5无显著差异 ;CD3/ CD2 5活化 T细胞总数发作组 6 .2 6± 3.94与稳定组 10 .5 2± 3.4 1比较 ,显著降低 ,t=1.0 6 8,P<0 .0 5。结论 :慢性支气管炎急性发作期患者 T淋巴细胞凋亡率增加 ,总数减少和免疫功能紊乱 ,因此在治疗疾病过程中除对症处理外 ,另须配合使用减少凋亡和提高免疫功能的药物 ,有利于控制病情。