体外联合培养条件下小鼠睾丸足细胞诱导成熟T淋巴？…

目的：探讨体外联合培养条件下睾丸足细胞能否诱导Ｔ淋巴细胞凋亡。方法：用ＴＵＮＥＬ标记、核酸电泳、电镜、流式细胞术检测对照组（Ｔ淋巴细胞）、Ａ组（Ｔ淋巴细胞＋培养睾丸足细胞２４ｈ培养基上清）、Ｂ组（Ｔ淋巴细胞＋睾丸足细胞）等３组中小鼠成熟Ｔ淋巴细胞的凋亡及其数量的变化。结果：３组Ｔ淋巴细胞在电镜下均可见细胞染色质浓集,核固缩裂解,凋亡小体形成;ＴＵＮＥＬ标记见部分细胞核染色呈深蓝色;核酸电泳出现展开     

Sertoli细胞诱导异基因T淋巴细胞凋亡的研究

目的 探讨大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)在体外与同种异体来源T淋巴细胞共同培养能否诱导T淋巴细胞凋亡.方法 用SABC法检测T淋巴细胞Fas和Sertoli细胞FasL的表达率.Sertoli细胞和异基因T淋巴细胞共同培养实验分为,A组(对照组)只有T淋巴细胞培养,B组为T淋巴细胞与经过FasL单克隆抗体处理过的等量Sertoli细胞共同培养;C组T淋巴细胞与培养Sertoli细胞24 h的培养液上清共同培养;D组为T淋巴细胞与等量Sertoli细胞共同培养;用TUNEL法检测各组淋巴细胞的凋亡指数.结果 T淋巴细胞Fas的表达率为(91.67±2.08)%;Sertoli细胞FasL的表达率为(90.43±3.52.)%.C组和D组淋巴细胞的凋亡指数显著大于A组和B组(P＜0.01);D组T淋巴细胞的凋亡指数显著大于C组(P＜0.01).结论 T淋巴细胞高表达Fas,Sertoli细胞高表达FasL;在体外共同培养的条件下,Sertoli细胞能够诱导异基因T淋巴细胞的凋亡,T淋巴细胞凋亡原因可能与Sertoli细胞产生FasL有关.     

雷公藤红素对体外培养变应性接触性皮炎小鼠淋巴细胞凋亡及Caspase-8表达的影响

目的:为了探讨雷公藤红素对变应性接触性皮炎(ACD)小鼠体外培养淋巴细胞凋亡及Caspase-8表达的影响。方法:以二硝基氯苯制作ACD小鼠模型,体外培养淋巴细胞,雷公藤红素作用48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡及Caspase-8浓度。结果:不同浓度红素对体外培养ACD淋巴细胞凋亡细胞比率均高于对照组;其中中、高浓度组凋亡细胞比率高于低浓度组且具有统计学意义(P分别<0.05和0.01),对ACD淋巴细胞Caspase-8表达与对照组比较差异均具有统计学意义(P分别<0.05和0.01)。结论:雷公藤红素可以通过升高ACD小鼠淋巴细胞内Caspase-8浓度,从而诱导淋巴细胞的凋亡。     

光动力疗法对人肺腺癌细胞系A549凋亡的影响

目的:探讨光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对体外培养的人肺腺癌细胞系A549凋亡的影响.方法:以人肺腺癌细胞系A549为研究对象,用MTT法筛选最佳PDT参数.实验分为对照组(不进行PDT)和PDT组,在PDT 24 h后,采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的梯形条带、流式细胞术检测细胞周期及凋亡率、TUNEL标记法测定细胞凋亡指数(AI).结果:血卟啉衍生物(HPD)浓度10 mg/L、激光剂量10 J/cm2是PDT对A549细胞杀伤作用的最佳条件.当激光剂量均为10 J/cm2时,采取6组不同的功率时间组合测得的D492值无统计学差异.在最佳PDT条件下,琼脂糖电泳结果可见PDT组产生了特征性的DNA梯形条带;流式细胞术检测显示PDT组发生了G0/G1期生长停顿,凋亡率为(18.443±7.122)%,显著高于对照组的(0.301±0.361)%(P<0.01);TUNEL标记法也证实该组可见明显的棕黄色凋亡细胞,AI为(18.480±9.555)%,明显高于对照组的(0.880±0.944)%(P<0.01).结论:PDT通过诱导凋亡对体外培养的A549细胞产生杀伤作用.     

人舌癌Tca8113核外体对树突状细胞诱导CTL杀伤活性的影响

目的:探讨人舌癌Tca8113细胞核外体(exosomes)体外诱导外周血来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)对CTL杀伤活性的影响。方法:抽取健康成人外周血,分离单核细胞,经贴壁获得树突状细胞前体细胞,在体外先后加入GM-CSF、rhIL-4、LPS和/或exosomes诱导培养9d,获得成熟DC;而未贴壁细胞经rhlL-2诱导培养,获得T淋巴细胞。设置舌癌Tca8113组和对照EC9706组,每组再根据效应细胞不同分为A组:Tca8113细胞核外体致敏的DC与T淋巴细胞共培养组;B组:未经致敏DC与T细胞共培养组;C组:单纯T细胞组。结果:A、B、C组效应细胞对Tca8113细胞株的杀伤活性分别为(78.56±2.26)%、(50.34±6.21)%、(26.47±3.52)%。A与B组、A与C组比较差异有统计学意义(P<0.05),A组效应细胞对EC9706杀伤活性为(51.18±5.31)%,与对Tca8113的杀伤活性相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:人舌癌Tca8113核外体能增强DC-CTL效应细胞对舌鳞癌Tca8113细胞株特异性的杀伤活性。     

抑制细胞周期素依赖性蛋白激酶5对小鼠足细胞凋亡的影响

目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)在高糖刺激体外培养小鼠足细胞中的表达及抑制Cdk5表达对高糖诱导足细胞凋亡的影响。方法 (1)体外培养条件性小鼠足细胞,分为正常糖组、甘露醇组、高糖组,高糖组按不同刺激时间分为0、6、12、24、48h5组,应用蛋白质印迹(Western blot)法检测足细胞中Cdk5蛋白表达水平。(2)应用Cdk5miRNA干扰质粒抑制足细胞中Cdk5基因的表达水平。分别设立:NG组(正常糖);HG组(高糖);HG+S组(高糖+Scrambled阴性质粒);HG+C组(高糖+Cdk5miRNA质粒)。以上各组细胞培养48h后,应用流式细胞术和末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL)法检测足细胞凋亡水平,Western blot法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和分裂型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)的蛋白表达水平。结果与正常糖组相比,高糖刺激后,足细胞中Cdk5的蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。Cdk5miRNA干扰质粒能显著抑制足细胞中Cdk5的表达水平。与HG组和HG+S组相比,HG+C组足细胞凋亡率显著降低(P<0.05),凋亡相关蛋白cleaved caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2蛋白表达比率也有明显降低(P<0.05)。结论高糖刺激可以增加足细胞中Cdk5蛋白的表达水平;抑制Cdk5表达可以降低高糖刺激诱导的足细胞凋亡。     

不同浓度过敏原对哮喘小鼠T淋巴细胞产生IL-5的影响

目的　探讨大剂量过敏原对哮喘小鼠T细胞产生IL 5的影响及其机制。方法　应用不同浓度过敏原体外处理哮喘模型小鼠T细胞 ,用单核细胞作抗原递呈细胞。ELISA法检测培养清中IL 5水平 ,并用TUNEL法检测T细胞的凋亡率。结果　①在 0～ 10 0 μg/ml卵蛋白 (OVA)处理浓度级之间 ,哮喘组小鼠淋巴细胞产生的IL 5的水平随着处理浓度的增高而增高 ,但经高浓度OVA( 10mg/ml)处理后 ,T淋巴细胞产生的IL 5水平却较哮喘低浓度组及对照组明显降低 (P <0 .0 1) ;对照组各浓度级之间则无显著差异 ;②不同浓度OVA处理后哮喘组T细胞的凋亡率均无明显差异。结论　大剂量过敏原可以诱导哮喘T细胞IL 5产生减少为表现的免疫耐受现象 ,其机制主要是诱导淋巴细胞无不反应性 ,而不是诱导T细胞凋亡。     

Fas、Bcl-2在γ射线体外诱发的白血病小鼠骨髓细胞中的表达

目的 :观察 Fas、Bcl- 2在 γ射线体外诱发的急性淋巴细胞白血病小鼠骨髓细胞中表达情况 ,以探讨辐射致癌的机制。方法 :采用 4次 1.75 Gyγ射线全身照射 BAL B/ c小鼠诱发白血病模型 ,通过流式细胞仪对照射后白血病组、未癌变组及对照组小鼠骨髓细胞中 Fas、Bcl- 2的表达进行检测 ;应用抗 Fas抗体诱导细胞凋亡 ,进一步观察 Fas、Bcl- 2的表达对骨髓细胞凋亡的影响。 结果 :白血病小鼠骨髓细胞 Fas表达较未癌变组及对照组明显下降 (P<0 .0 1) ,而 Bcl- 2的表达明显增强 (P<0 .0 1) ;白血病小鼠骨髓细胞明显耐受抗 Fas抗体诱导的细胞凋亡。 结论 :Fas低表达、Bcl- 2高表达导致了细胞凋亡受到抑制 ,这可能是辐射引起小鼠急性淋巴细胞白血病的机制之一。     

胃液、稀盐酸、阿霉素对BIU-87细胞系细胞凋亡的影响

目的 :探讨胃代膀胱术抑制膀胱肿瘤复发的机制。方法 :采用HE染色、荧光染色、DNA电泳、流式细胞术等技术 ,观察了胃液、稀盐酸、阿霉素对膀胱癌细胞系BIU 87细胞凋亡的影响。结果 :发现胃液能诱导体外培养的膀胱癌细胞凋亡 ,细胞形态学观察凋亡细胞数增多 ,DNA电泳出现梯状电泳带 ,流式细胞术可见凋亡峰 ,胃液组细胞凋亡率为 8.0 9% ,与阿霉素组 (4 2 .74% )和无药培养液组 (6 .71% )比较差异有高度显著性 (P <0 .0 1) ,与稀盐酸组 (7.2 6 % )比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :胃液作为一种诱导膀胱癌细胞系细胞凋亡的因子 ,可能在胃代膀胱术中起到抑制膀胱肿瘤复发的作用。     

长春新碱对类风湿关节炎滑膜细胞作用的研究

目的 :评价长春新碱 (VCR)诱导滑膜细胞凋亡作用在治疗类风湿关节炎 (RA)中的意义。方法 :采用光镜、电镜、流式细胞仪及 DNA凝胶电泳等方法对不同浓度的 VCR诱导 9例体外培养的 RA病人及对照组 5例骨关节炎 (OA)与 4例正常人(NC)关节滑膜细胞凋亡情况进行了研究。结果 :加药前 RA、OA及 NC组凋亡细胞百分率分别为 3.8%± 0 .6 %、0 .8%± 0 .3%及0。加药后均显著升高 ,RA组可高达 6 7.5 %± 15 .1% (P<0 .0 1) ,OA组为 38.4%± 6 .8% (P<0 .0 1) ,NC组为 15 .7%± 1.5 % (P<0 .0 1)。 RA组凋亡细胞百分率显著高于 OA组 (P<0 .0 1)和 NC组 (P<0 .0 1)。结论 :诱导滑膜细胞凋亡可能是 VCR治疗 RA的机制之一 ,同时可为临床选择合理药物及药量提供依据     

3种方法检测HCMV先天性感染对老年小鼠大脑皮质细胞凋亡的比较

目的分析TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)、流式细胞术和透射电镜3种细胞凋亡检测方法的优缺点。方法在已建立的HCMV先天性感染小鼠中枢神经系统模型基础上,选用鼠龄为24个月模型鼠进行试验。试验分为3组(每组6只)HCMV先天性潜伏感染老年小鼠组(A组)、HCMV先天性潜伏再激活感染老年小鼠组(B组)和正常对照老年小鼠组(C组)。采用TUNEL法和流式细胞仪检测各组小鼠大脑皮质细胞凋亡情况,采用透射电镜观察凋亡细胞的超微结构变化。结果TUNEL法和流式细胞术检测发现C组凋亡细胞最少,A组凋亡细胞比率较C组有所升高,而B组凋亡细胞最多;检测结果经T检验分析发现A组、B组与C组各组间凋亡率差异均有显著性。透射电镜检测发现,同C组比较,A组和B组部分神经元细胞核染色体固缩,核物质碎片化,凋亡小体形成等特征性凋亡改变。结论HCMV先天性感染可致老年小鼠大脑皮质细胞凋亡。TUNEL法和流式细胞术可用于凋亡的定量检测,但TUNEL法易受主观因素的影响,而透射电镜是凋亡定性检测的可靠方法。     

补肾复方下调老年大鼠激活诱导的T细胞凋亡

目的　研究补肾复方延缓衰老的免疫学机制。方法　采用电镜、ＤＮＡ凝胶电泳及ＴＵＮＥＬ标记的流式细胞仪分析技术,对激活诱导的Ｔ细胞凋亡进行定性、定量分析。结果　老年大鼠对照组细胞凋亡的百分率为４７．０％,年龄大鼠组为２２．２％（Ｐ＜０．０１）;补肾组为３７．２％,与老年大鼠对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论　老年大鼠激活诱导Ｔ细胞凋亡的敏感性增高;补肾复方能降低激活诱导的老年大鼠Ｔ细胞凋亡,提示下调激活诱导Ｔ细胞凋亡可能是补肾延缓衰老的免疫学机制之一。     

还原型谷胱甘肽对大鼠隐睾生精上皮保护作用的实验研究

目的:探讨单侧隐睾鼠双侧睾丸生殖细胞和Sertoli细胞变化和还原型谷胱甘肽(GSH)对睾丸的保护作用。方法:30只SD雄性大鼠分为对照组(A组),隐睾组(B组),隐睾加GSH组(C组),每组各10只。采用化学比色法测定双侧睾丸GSH、丙二醛(MDA)含量;生物素-dUTP/酶标亲和素法检测睾丸生殖细胞的凋亡;透射电镜观察Sertoli细胞的超微结构。结果:术后2周,与A组比较,B组双侧睾丸GSH明显降低,MDA和细胞凋亡明显增加(P<0.01),Sertoli细胞线粒体和滑面内质网扩张。C组这种变化则明显减轻(P<0.01),与A组比较无差别(P>0.05)。结论:外源性GSH对单侧隐睾鼠双侧睾丸生殖细胞和Sertoli细胞有保护作用。     

糖皮质激素诱导特发性血小板减少性紫癜患儿外周血淋巴细胞凋亡的体外研究

为探讨糖皮质激素对儿童急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)外周血淋巴细胞凋亡的诱导作用,对6例初诊儿童AITP外周血淋巴细胞进行糖皮质激素、糖皮质激素受体拮抗剂(RU486)等体外干预培养,用流式细胞术检测细胞凋亡,以凋亡率为定量指标,用DNA电泳对细胞凋亡进行定性分析.结果显示糖皮质激素组的淋巴细胞凋亡率明显高于对照组和经RU486预处理组,具有显著性差异;糖皮质激素组细胞的DNA电泳呈现清晰的"梯状"(1adder)条带,而对照组和RU486预处理组均未出现,提示糖皮质激素可诱导淋巴细胞凋亡,这一作用可被其受体拮抗剂阻断,说明糖皮质激素诱导AITP外周血淋巴细胞凋亡可能是通过糖皮质激素受体途径来实现的.     

雷公藤多甙诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的研究

目的:评估抗风湿中药雷公藤多甙(TripterygiumGlycosides,TG)诱导滑膜细胞凋亡(Apo)在类风湿关节炎(RA)治疗中的作用,探讨其药理机制。方法:用光镜、电镜、共聚焦显微镜、流式细胞仪(FCM)及DNA凝胶电泳检测不同浓度TG诱导RA滑膜细胞凋亡情况。结果:TG组凋亡细胞百分率显著高于骨性关节炎(OA)组(P<0.01)和正常人组(P<0.01),TG组凋亡细胞百分率为(55±11.2)%。结论:TG可以诱导滑膜细胞凋亡,并且这可能是其治疗RA的机制之一。     

神经生长因子对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的:研究神经生长因子(NGF)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导鼠肾上腺嗜咯瘤细胞(PC12)凋亡的作用,从而探讨NGF对阿尔茨海默病的治疗作用。方法:以PC12细胞为神经元的细胞模型,将Aβ和NGF+Aβ分别加入培养的PC12细胞中,采用MTT法观察细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态改变,hochest33258观察细胞核变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较两组间差异。结果:Aβ组细胞存活率随作用时间延长而下降(P<0.01),胞体变小,轴突退化变形,可见特征性的凋亡细胞核,并检测到典型的凋亡峰;而NGF+Aβ组细胞存活率明显增高,凋亡率明显减少(P<0.01)。结论:一定浓度的Aβ2535能诱导PC12细胞凋亡,NGF对Aβ诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。     

Immune privilege induced by cotransplantation of islet and allogeneic testicular cells

Objective To induce islet allograft long- term survival through cotransplantation of islet cells with sertoli cells. Methods Testicular sertoli cells were prepared by digestion with collagenase, trypsin an d DNase, and were cultured for 48 hours. Collagenase digested and Ficoll purifi ed donor (Wistar rat) islets were cotransplanted with allogeneic sertoli cells i n the absence of systemic immunosuppression. Terminal deoxynucleotidyl transfer ase- mediated X- dUTP nick- end labeling (TUNEL) was used to label apoptosis of lymphocytes surrounding the islet graft. Results Cotransplantation of islets and 1×10(7) sertoli cells reversed the diabetic sta te for more than 60 days in 100% (6/6) of the chemically diabetic Sprague Dawley rats. Grafts consisting of islets alone or islets plus 1×10(5) sertoli cells survived only for 5-6 days. Apoptosis of lymphocytes surrounding the islets was quite clear. Conclusion Cotransplantation of islets with FasL［+］ sertoli cells induces local immune priv ilege and allows long- term graft survival without systemic immunosuppression.     

In vitro study on the morphology of human blood dendritic cells and LPAK cells inducing apoptosis of the hepatoma cell line

Objective To observe in vitro effects and morphological changes of human peripheral blood dendritic cells (DCs) on the ability of lymphokine and phytohaemagglutinin um (PHA) activated killer (LPAK) cells to induce apoptosis of the human hepa toma cell line (BEL-7402, B).Methods Experimental groups were divided into LD group （DCs+L+B）, L gro up （L+B）, D group （DCs+B） and B group. The methods of neutral red u ptake, ordinary light microscopy, electron microscopy, TDT mediated X-dUTP nick end labeling (TUNEL) were used.Results The difference between the D group and the B group was not distinct (P&gt;0.05 ). The difference between the LD group and the L group was distinct, with DCs+ LPAK &gt;LPAK (P&lt;0.01) in cytotoxity. Apoptotic cells were TUNEL positive in light microscopy, and apoptotic nuclei were stained yellow brown and dar k brown, with size and shape varying from cell to cell. Ultrastructural cha nge in apoptotic tumor cells comprised of compaction and condensation of nuclear chromatin, and condensation of cytoplasm and apoptotic bodies. At the sam e time, LPAK cells manifested the characteristics of autophagic apoptosis, and t here were some autophagic bodies in it. Conclusions The combination of human blood DCs and LPAK cells could induce apoptosis of BEL -7402 cells effectively, with some LPAK cells manifesting the characteristics o f autophagic apoptosis.     

大鼠臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩时肌细胞凋亡的研究

目的 研究大鼠臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩与细胞凋亡的关系以及肌细胞凋亡的基因调控机制。方法 应用臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩的大鼠模型,采用流式细胞仪ＰＩ法、ＰＩ和ＡｎｎｅｘｉｎＶ双标记法、原位末端标记、ＤＮＡ凝胶电泳和电镜等多种方法有骼肌萎缩与细胞凋亡的关系。并用免疫组织化学和Ｎｏｒｇｔｈｅｒｍ－Ｂｌｏｔ方法检测凋亡相关基因Ｆａｓ、ＦＡＤＤ、Ｃａｓｐａｓｅ－８、Ｂｃｌ－２、Ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ的表达。结     

氧化型胆固醇诱导兔血管平滑肌细胞凋亡

目的：研究氧化型胆固醇(Triol与25-OH)对兔主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)凋亡的诱导,并观察其时效与量效关系。方法：原代培养兔VSMC,利用光镜、电镜、DNA电泳及TUNEL法作为凋亡检测法。结果：光镜、电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变,电泳示“DNA ladder”,TUNEL法示正常兔VSMC凋亡率为3.62％,用Triol和25-OH不同质量浓度(5、10、15、20 mg*L－1)分别处理细胞24 h后,凋亡率明显升高;用Triol和25-OH（15 mg*L－1）分别处理细胞0、12、24、36 h后,凋亡率随时间延长而增加。结论：氧化型胆固醇(Triol与25-OH)可以诱导血管平滑肌细胞发生凋亡,且呈时间和剂量依赖性。