多组学技术在非小细胞肺癌脾虚湿滞证中的应用研究

[目的]探讨非小细胞肺癌脾虚湿滞证肠道菌群、代谢组学和蛋白质组学的基本特征.[方法]选择非小细胞肺癌脾虚湿滞证患者13例作为患者组,健康志愿者15例作为对照组.收集两组粪便标本,运用16S核糖体DNA(16S ribosomal DNA,16S rDNA)鉴定技术检测肠道微生态,分析两组肠道菌群的多样性及差异性.采集两...     

胃癌气阴两虚证患者舌苔菌群与血清炎症代谢的相关性分析

目的探讨胃癌气阴两虚证患者舌苔菌群变化的炎症代谢机制。方法基于医院开展病例-对照研究,纳入13例胃癌气阴两虚证患者,以23例健康人为对照组,高通量测序分析舌苔菌群,电化学发光技术检测血清20种炎症因子,气相色谱质谱联用检测血清代谢组学。结果与对照组相比,胃癌气阴两虚证患者舌苔细菌Shannon指数降低(P0.05),而舌苔真菌Alpha多样性差异无统计学意义(P0.05)。判别分析显示,舌苔的3个细菌属(柄细菌属、巨单胞菌属、木洞菌属)和1个真菌属(裂壳属)是胃癌气阴两虚证的标志菌群。胃癌气阴两虚证患者血清谷氨酸、L-组氨酸、肌酸等15种代谢分子水平升高(P0.05),IL-17α、TNF-α、IL-6等8种血清炎症因子水平升高(P0.05)。相关性分析发现,IL-17α、IL-6、TNF-α与梭杆菌属、卟啉单胞菌属显著负相关(r-0.4,P0.05),梭杆菌属、消化链球菌属与血清谷氨酸代谢水平显著负相关(r-0.4,P0.05)。结论胃癌气阴两虚证患者舌苔菌群与血清炎症因子、代谢分子相关,为阐明气阴两虚证的形成机制提供了新的切入点。     

溃疡性结肠炎虚实证候血清细胞因子表达的差异性研究

目的通过观察溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大肠湿热证、脾气虚弱证、脾虚湿热证三种虚实证候患者血清中细胞因子TNF-α、IFN-γ、TGF-β1、IL-17A表达的差异,分析细胞因子表达与UC证候的相关性。方法分组随机纳入UC患者31例,分为大肠湿热证组、脾气虚弱证组、脾虚湿热证组,纳入10例健康志愿者作为对照组,采用ELISA法检测各组血清中TNF-α、IFN-γ、TGF-β1、IL-17A含量。UC组和对照组之间比较采用t检验,组间比较采用方差分析。结果 UC患者血清IFN-γ、TGF-β1浓度显著高于对照组(P0.01);大肠湿热证、脾气虚弱证组患者血清IFN-γ浓度均显著高于对照组(P0.01);大肠湿热证、脾气虚弱证、脾虚湿热证组患者血清TGF-β1浓度均显著高于对照组(P0.01);三种虚实证候组间比较,脾气虚弱证组患者血清TNF-α浓度显著高于大肠湿热证组(P0.05)和脾虚湿热证组(P0.01),大肠湿热证组患者血清IFN-γ浓度显著高于脾虚湿热证组(P0.01),脾气虚弱证组患者血清IFN-γ浓度显著高于脾虚湿热证组(P0.05);各组间血清IL-17A浓度比较均未见显著性差异(P0.05)。结论 UC患者血清IFN-γ、TGF-β1浓度升高可能与UC发病相关,UC患者血清TNF-α、IFN-γ的含量差异可为虚实证候的辨识提供客观实验依据。     

不同中医证型溃疡性结肠炎患者血清干扰素-γ和白细胞介素-4水平的变化

目的：观察活动期不同中医证型溃疡性结肠炎患者IFN-γ和IL-4水平的变化。方法：采用ELISA法对77例活动期不同中医证型的溃疡性结肠炎患者血IFN-γ和IL-4水平进行检测。结果：活动期各组IFN-γ水平均显著高于对照组；IL-4水平显著低于对照组；活动期湿热内蓄型和气滞血瘀型IFN-γ水平显著高于脾胃虚弱型、脾肾阴虚型、肝瘀脾虚型、阴血亏虚型。IL-4水平呈反相改变。结论：UC患者无论是虚证还是实证均存在细胞免疫功能紊乱，细胞免疫功能紊乱是导致IFN-γ和IL-4水平发生变化的内在原因。     

气阴两虚证及脾虚痰湿证2型糖尿病动态血糖谱的特点

目的 探讨2型糖尿病气阴两虚证及脾虚痰湿证患者动态血糖谱的特点.方法 前瞻性分析18例2型糖尿病气阴两虚证患者与20例2型糖尿病脾虚痰湿证患者,比较两组患者的糖、脂代谢、腰围及CGMS检查等相关指标.结果 与气阴两虚证组相比较,脾虚痰湿证最低血糖值更低(P<0.05).两组患者的一日三餐的特征和黎明现象比较均有显著性差异(P<0.05).结论 气阴两虚证的动态血糖图谱具有一日三餐的特征,易出现黎明现象;而脾虚痰湿证则无典型特征,易出现低血糖.     

杭州地区77例普通型新型冠状病毒肺炎中医证候及病机特点初探

[目的]探讨脾虚型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者的肠道菌群特征。[方法]收集2019年1月1日至2019年3月31日于浙江中医药大学附属第二医院、浙江省中医院、浙江省人民医院以及浙江大学附属第二医院门诊及住院的14例脾虚型UC患者、16例其他证型UC患者的粪便样本,同时收集同时间段至浙江中医药大学附属第二医院体检的8例健康者的粪便样本,提取三组粪便样本中菌群DNA,根据16S V3～V4区设计引物进行扩增,通过Illumina Miseq平台进行测序,以生物信息分析软件对测序结果进行分析,比较三组样本菌群组成和结构,分析脾虚型UC患者的肠道菌群特征。[结果]门分类水平上其他证型UC组中变形杆菌门的相对丰度显著高于健康人群组(P0.01)。属分类水平上,脾虚型UC组和其他证型UC组中分枝杆菌属、包西氏菌属、丁酸单胞菌属的相对丰度显著低于健康人群组(P0.05),而埃希氏菌属/志贺氏菌属、假单胞菌属的相对丰度明显高于健康人群组(P0.05)。此外,代尔夫特菌属的相对丰度在脾虚型UC组中明显低于其他证型UC组和健康人群组(P0.05)。[结论]脾虚型UC患者的肠道菌群特征与其他证型UC患者及健康人群相比存在一定的差异,代尔夫特菌属明显减少可能是脾虚型UC患者肠道菌群的特征性变化。     

不同中医证型三阴性乳腺癌患者肠道菌群的多样性及差异性研究

目的 研究不同中医证型三阴性乳腺癌(Triple Negative Breast Cancer,TNBC)患者肠道菌群的多样性与差异性。方法 纳入符合标准的TNBC患者21例作为患者组,其中脾胃虚弱证组5例,肝肾阴虚证组8例,肝郁气滞证组8例,并纳入健康志愿者10例作为对照组,分别收集粪便标本,利用16S rDNA基因测序技术检测各组间肠道菌群的丰度和分布情况,并进行组间差异分析获得各组间的差异菌属(P＜0.05)。结果 TNBC患者组与正常组以及TNBC不同证型组之间的菌群多样性均无明显统计学差异(P＞0.05)。TNBC患者组较正常组显著减少（P＜0.05）的菌群包括毛螺菌属（Lachnospira）、光冈菌属 (Mitsuokella)、粪球菌属(Coprococcus)、臭气杆菌属(Odoribacter)、肠球菌属（Enterococcus）等。与健康对照组相比,脾胃虚弱证组显著富集（P＜0.05）的菌属包括普雷沃氏菌属（Prevotella）、乳杆菌属（Lactobacillus）、（Tyzzerella）、成对杆菌属（Dyadobacter）、奇异球菌属（Deinococcus）、放线杆菌属（Actinobacillus）等,肝肾阴虚证组显著富集（P＜0.05）的菌属包括（Tyzzerella）、戈登氏杆菌属（Gordonibacter）、亨盖特氏菌属（Hungatella）等。肝郁气滞证组显著富集（P＜0.05）的菌属包括解黄酮菌属（Flavonifractor）、变形菌属（Proteus）、水栖菌属（Enhydrobacter）、柠檬酸杆菌属（Citrobacter）、厌氧球形菌属（Anaeroglobus）、醋杆菌属 (Acetobacter)等。结论 TNBC患者与健康人群的肠道菌群存在显著差异,且不同证型TNBC患者的肠道菌群组成也显著不同。TNBC的发生与肠道内粪球菌属等有益菌的减少和Hungatella等有害菌的增加有关,不同中医证型的证候差异与其肠道内环境的菌群变化也存在一定的联系。     

基于系统生物学的非小细胞肺癌气阴两虚证多组学联合分析研究

[目的]探讨气阴两虚型非小细胞肺癌肠道菌群、代谢组学和蛋白组学的基本特征。[方法]选择气阴两虚型非小细胞肺癌患者13例作为患者组,选择健康志愿者15名作为健康对照组,收集两组粪便标本,用16S rDNA技术检测肠道微生态。采集两组血清标本,通过液相色谱-质谱联用技术比较两组代谢组学和蛋白质组学差异。最后通过WGCNA软件对多组学结果进行联合分析。[结果]两组间存在6种显著差异菌,20种差异蛋白(上调5个,下调15个),11种差异代谢物(负离子模式下2个,正离子模式下9个),差异菌群、差异蛋白与差异代谢物间存在相关性,联合分析发现差异物质与癌症通路相关。[结论]气阴两虚型非小细胞肺癌具有特异的肠道菌群、蛋白质和代谢物,与肿瘤的发生发展密切相关。     

肺癌患者中医证候分型与T淋巴细胞亚群及NK细胞的相关性研究

目的:探讨肺癌中医证型与细胞免疫功能的相关性。方法:选择肺癌患者219例,辨证分型为气滞血瘀、痰瘀蕴结、痰热蕴肺、阴虚毒热、气阴两虚、肺脾气虚、肺肾两虚型。并对肺癌患者的T淋巴细胞亚群及NK细胞标志物CD(16 56) 进行检测。结果:肺癌患者CD3 、CD4 、CD4 /CD8 、CD(16 56) 均显著低于正常组(P<0.01或P<0.05);实证患者的CD3 、CD4 均显著高于虚证组(P<0.01);阴虚毒热、气阴两虚、肺脾气虚、肺肾两虚的外周血CD3 、CD4 均明显低于气滞血瘀证、痰瘀蕴结证(P<0.01或P<0.05);KPS≥60肺癌患者CD3 、CD4 明显高于KPS<60患者(P<0.01);肺癌患者ZPS的评分越高,其CD3 、CD4 越低(P<0.01)。结论:肺癌患者的中医证型与细胞免疫功能具有相关性,可能为肺癌临床辨证治疗提供较为客观的免疫学指标。     

基于肠道菌群结构特征研究胰腺癌不同中医证型与预后的相关性

目的研究胰腺癌不同中医证型肠道菌群结构特征与其总生存期的相关性。方法收集2018年1月1日—2018年9月30日在浙江省肿瘤医院腹部肿瘤放疗科及腹部肿瘤内科收治的胰腺癌患者28例,根据中医证型的不同,分为气血瘀滞组9例,脾虚湿热组9例,湿热内蕴组10例。另设浙江中医药大学研究生正常健康人群8名作为健康对照组。采集研究对象的粪便标本,进行16S rDNA测序,检测各组间肠道菌群的多样性和丰度,通过组间差异分析明确差异菌属,用Log rank法比较胰腺癌三种中医证型的总生存期差异。结果显著性差异分析结果显示,胰腺癌不同中医证型间具有明显差异(P0.05)的菌属包括产碱杆菌属(Alcaligenes)、奇异菌属(Atopobium)和弯曲杆菌属(Campylobacter)等在内的16个菌属;组间差异菌属中,纤毛菌属(Leptotrichia)、奇异菌属(Atopobium)、颗粒链菌属(Granulicatella)、链球菌属(Streptococcus)及弯曲杆菌属(Campylobacter)在脾虚湿热组丰度均值最高,湿热内蕴组最低(除弯曲杆菌属外);生存分析显示,气血瘀滞组中位生存时间12个月,脾虚湿热组为8个月,湿热内蕴组为18个月,三组的总生存期差异有统计学意义(P=0.029)。结论脾虚湿热组中与胰腺癌发生发展可能正相关的菌属丰度最高,其预后最差;而湿热内蕴组与胰腺癌发生发展可能正相关的菌属丰度则最低,其预后最好。