益骨汤对去势大鼠的骨密度、骨生物力学的影响及相关分析

目的:探讨益骨汤治疗去势大鼠的骨密度和骨生物力学变化及相关性.方法:取12周龄Wistar雌性大鼠40只,随机分为A组(模型组)、B组(中药治疗组)、C组(阳性对照组)、D组(正常对照组)四组,每组10只,D组行假手术,其余3组行完整双侧卵巢摘除术.灌胃12周后,活杀各组动物,以双能X线密度测定仪测骨密度;通过三点弯曲试验,记录载荷一变形曲线,测定骨生物力学指标.结果:B组骨矿含量、骨密度明显高于A组(P＜0.01),骨生物力学性能较A组得到明显改善.A、B、C三组的骨密度与最大应力成正相关(P＜0.05).结论:①益骨汤能刺激骨形成,使骨量明显增加,从而保持了原有骨结构的相对完整性,提高了骨的生物力学性能.②骨密度是影响骨生物力学性能的重要因素.     

Noggin基因沉默对BMP和Wnt信号通路表达的影响

目的 检测分析Noggin基因沉默对毛囊发育中BMP和Wnt信号通路的影响。方法 采用实时荧光定量PCR和Western Blot技术对Noggin基因沉默的MC3T3-E1稳转细胞系中BMP-2、BMP-4、BMPR-ⅠA、BMP-6、BMP-7、LEF-1、β-catenin的表达情况进行检测分析。 结果 实时荧光定量PCR结果显示,BMP信号通路中的五个基因的表达都受到Noggin基因沉默的显著的影响,其中BMP-2（P<0.001）、BMP-4（P<0.01）、BMP-6（P<0.001）、BMP-7（P<0.001）表达量均升高;BMPR-ⅠA（P<0.01）表达量降低。同时Wnt信号通路中的两个基因LEF-1（P<0.001）、β-catenin（P<0.001）的表达也都显著降低。Western Blot结果显示,两条信号通路中这几种蛋白的表达也都受到影响,其中显著升高的有BMP-2（P<0.05）、BMP-4（P<0.05）、BMP-6（P<0.05）和BMP-7（P<0.05）;显著降低的是β-catenin（P<0.05）、BMPR-ⅠA（P<0.01）和LEF-1（P<0.001）。结论 在体外Noggin基因对BMP信号通路可能存在反馈性抑制机制,而对Wnt信号通路存在反馈性激活机制,为下一步探究在体内Noggin基因对BMP和Wnt信号通路表达的作用提供一定的依据。     

益骨口服液对去势大鼠骨密度与骨生物力学的影响

[目的]探讨益骨口服液对实验去势大鼠骨密度和骨生物力学变化的影响。[方法]将大鼠随机分为A、B、C、D、E五组,A组(10只)为正常对照组(假手术);B组(10只)为模型组(造模后给予蒸馏水亦即空白组);C组(10只)为阳性对照组(切除双侧卵巢并予以倍美力治疗);D组(10只)为高浓度组(造模后给予含生药1.5g/ml益骨口服液治疗);E组(10只)为低浓度组(造模后给予含生药0.5g/ml益骨口服液治疗)。灌胃12周后,活杀各组动物,以双能X线测定骨密度及三点弯曲试验测生物力学指标。[结果]治疗组骨密度明显高于模型组(P0.05),骨生物力学性能较模型组得到明显改善(P0.05)。结论:益骨汤能促进骨形成,能提高骨强度及生物力学性能。     

益骨汤对肾虚兼气血不足型骨质疏松症患者骨密度血清OPG及RNKL的影响

目的：探讨益骨汤对肾虚兼气血不足型骨质疏松症患者骨密度（BMD）、血清护骨素（OPG）及破骨细胞生成因子（RNKL）的影响。方法将我院收治的肾虚兼气血不足型骨质疏松患者随机分为2组,各35例。对照组口服维生素D和维D钙咀嚼片,观察组口服益骨汤,对比分析2组治疗效果。结果治疗后观察组患者血清OPG、RNKL及BMD比对照组明显改善,差异显著（P<0.05）;对照组治疗总有效率为77.1%,明显低于观察组的97.1%,差异显著（P<0.05）。结论益骨汤治疗肾虚兼气血不足型骨质疏松症患者有较好的疗效,可改善患者BMD、血清OPG及RNKL等指标,提高患者的生活质量。     

辛伐他汀对大鼠成骨细胞经典Wnt信号通路相关因子表达的影响

目的观察不同浓度、不同时间辛伐他汀对体外培养的大鼠成骨细胞经典Wnt通路Wnt3a、LRP5和β-catenin的m RNA表达的影响,探讨辛伐他汀抗骨质疏松的可能机制。方法用酶消化法培养大鼠颅骨成骨细胞,采用倒置相差显微镜及碱性磷酸酶染色和茜素红染色观察和鉴定成骨细胞。用浓度分别为10^-8mol/L、10-7mol/L、10^-6mol/L和10^-5mol/L的辛伐他汀干预大鼠成骨细胞24 h、48 h和72 h,并设无辛伐他汀为对照组,采用RT-PCR检测经典Wnt信号通路Wnt3a、LRP5和β-catenin的m RNA表达情况。结果镜下观察及染色结果均显示具有成骨细胞典型特征。RT-PCR结果显示：10^-5mol/L辛伐他汀组干预24 h后较对照组Wnt3a[（2.09±0.12）vs（1.82±0.09）]、LRP5[（1.42±0.07）vs（1.29±0.07）]和β-catenin[（1.10±0.06）vs（0.95±0.06）]的m RNA表达显著增加;干预48 h和72 h后各组Wnt3a（F=37.78和96.52,P=0.000）、LRP5（F=10.32,P=0.001和F=22.02,P=0.000）的m RNA表达随着辛伐他汀浓度的增大而显著增加,β-catenin的m RNA表达较对照组显著增加（F=6.67和21.90,P〈0.05）;10^-8-10^-5mol/L辛伐他汀各组中分别干预24 h、48 h和72 h,随着干预时间延长Wnt3a和LRP5的m RNA表达均增加;干预48 h与24 h比较,β-catenin的m RNA表达差异无统计学意义[（1.08±0.09）vs（1.02±0.06）,P〉0.05],而干预72 h较24 h显著增加[（1.23±0.10）vs（1.02±0.06）,P〈0.05],且辛伐他汀浓度为10^-6mol/L和10^-5mol/L干预72 h较48 h显著增加[（1.32±0.07）vs（1.11±0.05）和（1.47±0.08）vs（1.19±0.04）,P〈0.05]。结论辛伐他汀可促进体外培养大鼠成骨细胞经典Wnt信号通路Wnt3a、LRP5和β-catenin的m RNA表达。     

益骨汤对老年骨质疏松症患者髋部骨密度及骨代谢生化指标的影响

目的探讨益骨汤对骨质疏松症老年患者骨代谢生化指标及髋部骨密度的影响。方法选取2014年7月至2016年4月民权县中医院收治的骨质疏松症老年患者50例,随机分为对照组及观察组,各25例。对照组给予钙尔奇D3、骨化三醇及福善美治疗,观察组在对照组基础上加用益骨汤治疗。观察两组治疗后髋部骨密度、骨代谢指标水平情况及临床效果。结果治疗后,观察组髋部骨密度及骨代谢生化指标均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对骨质疏松症老年患者给予益骨汤治疗,患者髋部骨密度及骨代谢生化指标改善情况好,治疗总有效率高,具有一定的临床应用价值。     

血管钙化大鼠肾动脉BMP2/Smad1/Runx2信号通路的表达

目的 观察血管钙化大鼠模型肾动脉上骨形态蛋白2（BMP2）/Smad1/Runt相关转录因子2（Runx2）信号通路的表达及其变化规律,探讨BMP2/Smad1/Runx2信号通路激活在肾动脉钙化中的作用。方法 将24只雄性SD大鼠随机分为对照组和钙化组,钙化组建立维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化模型,对照组给予生理盐水和花生油。6周后采用Von Kossa染色检测肾动脉钙化程度,钙离子试剂盒测定大鼠肾动脉钙含量,实时荧光定量PCR检测肾动脉组织中BMP2、Smad1、Runx2 mRNA水平,免疫组化法观察BMP2、Smad1、Runx2及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果 Von Kossa染色见钙化组大鼠肾动脉有大量黑色颗粒沉淀。钙化组血管钙含量高于对照组（ P<0.05)。与对照组相比,钙化组大鼠肾动脉组织BMP2、Smad1、Runx2 mRNA的水平升高（P<0.05),BMP2/Smad1/Runx2信号通路蛋白在肾动脉的表达亦同步上调,而α-SMA的表达较对照组下降（P<0.05)。相关分析表明,大鼠肾血管钙含量与肾动脉组织BMP2 mRNA（r =0.655, P<0.05)、Smad1 mRNA (r =0.735, P<0.05)、Runx2 mRNA ( r=0.734, P<0.05)均呈正相关。结论 BMP2/Smad1/Runx2通路的表达变化与肾动脉钙化的严重程度相关,提示BMP2/Smad1/Runx2信号通路参与了肾动脉钙化的发生发展。     

电针对去势SD大鼠骨密度的影响

目的 从骨密度探讨针刺防治不同程度骨量丢失的绝经后骨质疏松症大鼠模型的作用机理.方法 选用10～ 12月龄清洁级雌性SD大鼠分组:假手术大鼠为对照组;去势大鼠按骨量丢失程度分层,按随机数字表法分为模型组、电针组、药物组、电针加药物组,每组10只.假手术组不摘除卵巢,其余4组均摘除双侧卵巢.术后8周,分别测定各组大鼠股骨、第4及第5腰椎的骨密度.结果 模型组骨密度值明显低于假手术组;电针组与药物组比较骨密度值相当;电针加药物组与模型组比较骨密度明显高于模型组.结论 电针在改善去势SD大鼠骨密度方面具有与药物(阿仑磷酸钠)相同的功效,在服用阿仑磷酸钠的同时,辅以电针,电针能够明显促进药物的功效.     

自拟柴郁寄生汤对高催乳素血症大鼠卵巢PRL/PRLR-JAK2-STAT5信号传导通路的影响

目的观察自拟柴郁寄生汤对高催乳素血症(HPRL)模型大鼠卵巢组织PRL/PRLR-JAK2-STAT5信号传导通路的影响及其改善卵巢功能的机制。方法 Wistar大鼠60只皮下注射多巴胺受体阻断剂灭吐灵造成高催乳素血症模型。造模成功后按拉丁方法随机分为模型组、溴隐亭组、大剂量组、中剂量组、小剂量组各10只,并设正常组10只。中药高剂量组柴郁寄生汤剂量为18 g·kg~(1)·d~(1),中剂量组为9 g·kg~(1)·d~(1),低剂量组为4.5 g·kg~(1)·d~(1)。各药物组每只大鼠每次灌胃量均为2 ml。溴隐亭组给溴隐亭2 mg·kg~(1)·d~(1);模型组及正常组依据体质量予等容量蒸馏水灌胃;各组每日给药1次,连续给药30 d。治疗结束后将大鼠处死,量取大鼠卵巢体积;检测血清雌二醇(E_2)、促黄体生成素(FSH);通过Western blot及PCR法检测卵巢STAT、PRLR表达水平,以观察高催乳素血症环境对PRL/PRLR-JAK2/STAT5信号传导通路及卵巢功能的影响,并探讨其可能机制。结果与正常组比较,模型组大鼠血清PRL水平明皿升高,E_2、FSH水平均明显下降(P<0.05);卵巢STAT、PRLR蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,各治疗组血清PRL水平均明显下降,血清E_2、FSH水平及卵巢STAT、PRLR表达水平均明显升高。不同治疗组间比较,中药中剂量组大鼠血清E_2、FSH水平改善最显明,卵巢STAT、PRLR蛋白表达明显最强(P<0.05),而PRL水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论柴郁寄生汤治疗高催乳素血症对改善卵巢功能有良好疗效,其作用机制可能是调节卵巢PRL/PRLR-JAK2/STAT5信号传导通路相关因子的表达,进而改善E_2、FSH等生殖激素水平。     

高氧对新生大鼠脑组织中NRP-cGMP信号通路的影响

目的：构建高氧诱导新生大鼠脑损伤模型,探讨高氧对新生大鼠脑组织中钠尿肽受体-环磷酸鸟苷（NRP-cGMP）信号通路的影响。方法：60只新生Wistar大鼠随机分为对照组和高氧模型组,每组30只。高氧模型组大鼠置于自制高氧箱内（氧浓度>85%）吸入氧气7 d;对照组大鼠置于同一室内常压空气环境下,持续吸入空气7 d。高氧暴露1、3和7d时,每组随机选取10只大鼠取脑组织,检测2组大鼠体质量;HE染色法观察2组大鼠脑组织形态表现;透射电镜下观察2组大鼠脑组织超微结构;Western blotting法检测2组大鼠脑组织中钠尿肽受体A（NPR-A）和钠尿肽受体B（NPR-B）表达水平;ELISA法测定2组大鼠脑组织中cGMP水平。结果：高氧暴露1、3和7d时,高氧模型组大鼠体质量明显低于对照组（P<0.05）。HE染色,高氧暴露3d时,光镜下可见高氧模型组大鼠海马锥体细胞体积缩小,排列稀疏;高氧暴露7d时,高氧模型组大鼠海马细胞出现深染皱缩,细胞与周围分界不清。电镜下形态表现,高氧暴露3d时,高氧模型组大鼠线粒体双层膜结构破坏,少许嵴消失,线粒体及突触数量减少;高氧暴露7d时破坏进一步加重。Western blotting检测,高氧暴露1、3和7d时,高氧模型组大鼠脑组织中NPR-A表达水平高于对照组（P<0.05）,但仅高氧暴露1 d时大鼠脑组织中NPR-B水平高于对照组（P<0.05）。ELISA法检测,高氧暴露1、3和7d,高氧模型组大鼠脑组织中cGMP水平均高于对照组（P<0.05）。结论：NRP-cGMP信号通路参与了高氧诱导脑损伤的发生。     

Effect of esculetin on bone metabolism in ovariectomized rats

OBJECTIVE

To determine the effect of an esculetin formulation (at 97.4% purity) on osteoporosis, and to investigate the potential underlying molecular mechanism(s).

槐甙对去卵巢大鼠骨量丢失的预防作用

目的　大鼠去卵巢建立绝经后骨质疏松症动物模型 ,观察槐甙对雌激素缺乏引起的骨量丢失的预防作用。方法5 0只SD雌性大鼠随机分为假手术 (SHAM )组、去卵巢 (OVX)组、槐甙低剂量组 ( 4mg·kg-1·d-1)、槐甙中剂量组 ( 8mg·kg-1·d-1)、槐甙高剂量组 ( 16mg·kg-1·d-1) ,造模 3d后进行药物干预 ,服药 1个月后处死 ,对胫骨近端及腰椎进行形态计量学分析。结果　OVX组大鼠与SHAM组比较 ,胫骨近端和腰椎骨量分别丢失了 32 .97%和 2 9.31% ;骨小梁宽度变窄 ,节点数明显减少 (P <0 .0 5 ) ;骨小梁间距增大 (P <0 .0 5 )。槐甙中、高剂量组对去卵巢引起的骨量丢失有较好的预防作用 ,与OVX组比较 ,胫骨骨小梁骨量分别上升 15 .2 8%和 2 2 .81% ,第三腰椎骨小梁骨量分别上升 14 .2 3%和 2 1.2 % ;两组骨小梁宽度变宽 ,节点数明显增加 (P <0 .0 5 ) ;骨小梁间距减小 (P <0 .0 5 )。低剂量则无明显治疗效果。结论　中高剂量槐甙可以有效恢复骨组织的形态 ,提高骨量 ,在骨质疏松症的治疗中发挥作用     

蒿汤对酒精性肝纤维化大鼠肝功能和pERK/eIF2a信号通路的影响

目的:探究蒿汤对酒精性肝纤维化大鼠肝功能的改善及磷酸化细胞外调节蛋白激酶/真核翻译起始因子2α(pERK/eIF2a)信号通路的影响。方法:将40只健康的雄性SD大鼠随机分成4组:正常组、假手术组、模型组及蒿汤组,每组10只。采用"酒精-玉米油-吡唑"灌胃联合12周的高脂饮食构建酒精性肝纤维化模型,造模成功后,正常组不做处理,假手术组给予生理盐水灌胃,模型组和蒿汤组于相同时间给予等量蒿汤灌胃治疗。连续治疗12周后检测各组血清羟脯胺酸(HYP)、透明质酸酶(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、Ⅲ型前胶原(PⅢNP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-TG)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TB)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,苏木精-伊红染色法(HE)观察大鼠肝脏纤维化程度,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝脏组织中pERK/eIF2a信号通路的表达水平。结果:与正常组对比,假手术组血清HYP、HA、LN、CIV、PⅢNP、AST、ALT、γ-GT、ALP、TBL、TB水平无明显改变(P>0.05),模型组显著升高(P<0.01);给予蒿汤干预治疗后,与模型组相比,大鼠血清HYP、HA、LN、CIV、PⅢNP、AST、ALT、γ-GT、ALP、TBL、TB水平显著降低(P<0.01)。血清白蛋白、脂代谢及氧化损伤指标显示,与正常组对比,假手术组血清ALB、CHOL、TG、GSH、SOD、MDA水平无明显改变(P>0.01),模型组血清ALB、GSH、SOD水平显著降低(P<0.01),CHOL、TG、MDA水平显著升高(P<0.01);给予蒿汤干预治疗后,与模型组相比,大鼠血清ALB、GSH、SOD水平显著升高(P<0.01),CHOL、TG、MDA水平显著降低(P<0.01)。HE染色结果显示,与对照组比较显示假手术组肝脏切片形态学正常,而模型组肝脏切片可见明显空泡状改变,给予蒿汤干预治疗组肝脏切片明显好转。ELISA结果显示,与正常组对比,假手术组肝脏组织中pERK和eIF2a水平无明显改变(P>0.05),模型组肝脏组织中pERK和eIF2a水平显著升高(P<0.01);给予蒿汤干预治疗后,与模型组相比,大鼠肝脏组织中pERK和eIF2a水平显著降低(P<0.01)。结论:蒿汤可以有效阻碍酒精性肝纤维化大鼠的肝脏纤维化程度,降低肝纤维化指标,改善肝胆功能。发挥这一作用可能与抑制pERK/eIF2a信号通路有关。     

马来酸罗格列酮对去势大鼠骨微结构的影响

目的:研究马来酸罗格列酮对去势大鼠骨微结构的影响。方法:21只24周龄Wistar大鼠双侧卵巢切除,随机分为对照组、罗格列酮A(RA)组、罗格列酮B(RB)组,每组7只。RA组、RB组每只大鼠分别给予马来酸罗格列酮0.35 mg/d、0.70 mg/d(以生理盐水溶解灌胃),对照组以相同体积生理盐水灌胃。给药4周后使用micro-CT分别测定股骨、胫骨、椎骨的骨量/组织量(BV/TV)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨表面积/骨量(BS/BV)。结果:与对照组相比,RA组及RB组各部位(股骨、胫骨、椎骨)Tb.N、Tb.Th和BS/BV(RA组胫骨除外)均减少(P<0.05或P<0.01);胫骨、椎骨Tb.Sp增加(P<0.05),股骨Tb.Sp无改变(P>0.05);各部位BV/TV差异无统计学意义(P>0.05)。上述检测指标在RA组与RB之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:使用罗格列酮后,骨微结构受到损伤,且主要集中于松质骨。     

杜仲对去势雌性骨质疏松大鼠骨代谢、骨生物力学的影响

目的：探讨杜仲对卵巢切除所致实验性骨质疏松大鼠血清碱性磷酸酶、骨钙素及骨生物力学的影响。方法：10月龄雌性Wistar大鼠61只随机分为4组,正常组19只,模型组11只,西药组17只,中药组14只。将模型组、西药组、中药组大鼠切除卵巢复制成骨质疏松模型。喂养3月后,比较体质量、血清碱性磷酸酶（AKP）和骨钙素（BGP）水平,并比较生物力学指标。结果：模型组、西药组、中药组大鼠的体质量明显大于正常组（P〈0．01）。与模型组比较,西药组、中药组大鼠血清AKP明显升高（P〈0．01）,西药组血清BGP升高（P〈0．05）。西药组、中药组胫骨抗弯曲力明显优于模型组（P〈0．01）。结论：杜仲具有明显的促进骨形成的作用,并且能较好地维持去势大鼠的骨生物力学。     

仙灵骨葆对卵巢大鼠骨密度和骨代谢的影响

目的通过制造骨质疏松动物模型,研究去势大鼠骨密度和骨代谢指标的变化,为仙灵骨葆治疗骨质疏松症提供理论依据。方法将40只雌性SD大鼠随机分为4组,分别为：对照组、假手术组、仙灵骨葆小剂量组、仙灵骨葆大剂量组。手术摘除卵巢制造骨质疏松病理模型,待其恢复一W后,仙灵骨葆组每天按剂量灌胃给药60d,之后测定骨密度,并取血检测雌二醇（E2）、血钙（Ca）、血磷（P）。结果仙灵骨葆各剂量组骨密度和E2水平均高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0．05）,而各组的Ca、P无明显差异,不具有统计学意义（P〉0．05）。结论仙灵骨葆可提高去势大鼠骨密度和E2水平,具有有效治疗骨质疏松症的作用。     

葛根素通过BMP-2调节去卵巢大鼠骨代谢

目的：研究葛根素对去卵巢雌鼠骨代谢的作用以及其对骨形态发生蛋白2（BMP-2）的影响。方法：将30只4月龄sD雌鼠随机分成空白组（Sham组）、模型组（OVX组）和葛根素组（Puerarin组）,每组10只。OVX组和Puerarin组行双侧卵巢切除术,4周后,Puerarin组给予葛根素标准品[20mg（kg·d）]灌胃12周,OVX组和Sham组给予等量的生理盐水。干预结束后用双能X线检测骨密度,EusA法检测血中雌二醇、骨钙素、骨保护素、碱性磷酸酶含量,Western blotting检测骨组织中BMP-2蛋白的表达。结果：给药结束后,OVX组和Puerarin组大鼠腰椎、左右股骨的骨密度较Sham组均显著下降（P〈0．05）,Puer—arin组高于OVX组;Puerarin组大鼠血清雌二醇、骨钙素、骨保护素、碱性磷酸酶水平均高于OVX组（P〈0．05）。Puerarin组和Sham组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。Puerarin组BMP-2的表达水平显著高于OVX组（P〈0．05）。结论：葛根素上调BMP-2的表达是其调控去卵巢雌鼠体内的骨代谢的途径之一。