MiR-185-5p靶向调控REG1A表达对膀胱肿瘤发生和侵袭的影响

目的　探讨REG1A基因和微小RNA miRNA-185-5p对膀胱癌细胞增殖、侵袭、血管形成和上皮间充质转化的影响,并探讨其可能存在的分子调控机制。方法　应用荧光实时定量PCR（qRT-PCR)分别检测膀胱癌细胞系中REG1A和miR-185-5p的mRNA表达水平,应用免疫组化技术检测24对膀胱癌临床样本中REG1A的蛋白表达水平。应用荧光素酶报告基因验证miR-185-5p和REG1A的特异性结合,进一步应用细胞转染技术和qRT-PCR明确miR-185-5p和REG1A的调控关系。应用细胞转染技术分别研究miR-185-5p抑制物(inhibitor)和模拟物(mimic)对膀胱癌T24细胞功能的影响。利用小RNA干扰技术敲低REG1A后进行T24细胞功能回复实验。结果　与正常尿路上皮细胞系SV-HUC-1相比,T24、J82和UM-UC-3细胞系中REG1A显著高表达（P<005）,miR-185-5p显著低表达(P<005);与癌旁组织相比,膀胱癌组织中REG1A蛋白显著高表达（P<005）。荧光素酶报告基因验证miR-185-5p和REG1A存在特异性结合,qRT-PCR结果表明,细胞转染后miR-185-5p靶向调控REG1A在T24细胞的表达。miR-185-5p mimic和inhibitor能分别抑制和增强T24细胞的增殖、侵袭、血管形成和上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）,差异有统计学意义（P<005）。REG1A-siRNA能减弱miR-185-5p inhibitor对T24细胞的增殖、侵袭、血管形成能力和EMT的促进作用。结论　miR-185-5p靶向调控REG1A表达影响膀胱癌的增殖、侵袭、血管形成和EMT发生,miR-185-5p/REG1A调控通路是潜在的膀胱癌治疗靶点。     

miR-34a调控Survivin表达对膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-34a调控生存素(Survivin)表达对人膀胱移行细胞癌T24细胞生物学行为的影响。方法:以实时定量逆转录PCR技术(qRT-PCR)和Western Blot免疫印迹技术分别检测人膀胱移行细胞癌T24细胞在转染miR-34a模拟物前后miR-34a和Survivin蛋白的相对表达量。同时以四甲基偶氮唑盐比色法(methyl-thiazol-tetrazolium,MTT)实验、划痕实验和Transwell实验分析转染后T24细胞生长、迁移及侵袭能力的改变。结果:与正常人膀胱上皮细胞SV-HUC-1细胞相比,T24细胞miR-34a丰度明显降低而Survivin蛋白表达明显上调(P<0.05)。在稳定转染miR-34a模拟物后,随着T24细胞中miR-34a表达丰度上升,Survivin蛋白的表达明显受抑(P<0.05)。而转染miR-34a模拟物后的T24细胞与转染前相比,其细胞增殖率、迁移和侵袭能力也显著降低(P<0.05)。结论:miRNA-34a可以通过抑制其靶基因Survivin影响人膀胱移行细胞癌T24细胞的多种生物学,是膀胱癌潜在的治疗靶点。     

MicroRNA-205抑制黑素瘤细胞迁移和侵袭的作用及其机制

目的 探讨microRNA-205 (miR-205)表达对人类黑素瘤细胞株(A375和A2058)迁移和侵袭的作用及其分子机制.方法 转染miR-205过表达慢病毒(Lenti-miR-205)构建miR-205过表达的黑素瘤细胞A375和A2058细胞系(miR-205组),转染空白对照慢病毒作为对照细胞系(NC组).通过划痕实验和Transwell实验分别检测两组细胞迁移和侵袭能力,激光共聚焦扫描显微镜观察细胞形态和表达钙黏蛋白E(E-cadherin)的细胞数量与荧光强度,蛋白质印迹法检测E-cadherin、Twist、整合素(intergrin)、波形蛋白(vimentin)、Zeb1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达.结果 培养8h和24 h时miR-205组A375与A2058细胞的迁移能力均大于NC组(P＜0.01);miR-205组两种细胞的侵袭能力均低于NC组(P＜0.01).MiR-205过表达后A375和A2058细胞均由梭形、基质型向圆形、表皮型转化.与NC组相比,miR-205组细胞E-cadherin蛋白表达增加(P＜0.01),且表达E-cadherin的细胞数量和荧光强度均增加;Twist、intergrin、vimentin、Zeb1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低(P＜0.01).结论 MiR-205通过诱导E-cadherin的表达逆转上皮间质转化,从而抑制黑素瘤细胞的迁移和侵袭.     

miR-181b-5p负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-181b-5p通过下调CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-181b-5p在膀胱癌细胞系(T24、UM-UC-3、5637)和人膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)中的表达水平。在T24和UM-UC-3细胞中转染miR-181b-5p模拟物 (miR-181b-5p组)和miR-NC(对照组),CCK-8实验和克隆形成实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞迁移和侵袭的影响。采用生物信息学预测miR-181b-5p潜在下游靶基因CYLD,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p是否与CYLD的3′-UTR结合,qRT-PCR检测过表达miR-181b-5p对CYLD mRNA的影响,Western blot法检测过表达miR-181b-5p对CYLD蛋白的影响。在T24和UM-UC-3细胞中沉默CYLD的表达,采用CCK8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测沉默CYLD对T24和UM-UC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 与SV-HUC-1比较,膀胱癌细胞系中miR-181b-5p的表达水平升高(P<0.05)。与对照比较,过表达miR-181b-5p和沉默CYLD均促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,过表达miR-181b-5p 明显降低野生型CYLD 的荧光素酶活性(P<0.05)。qRT-PCR和Western blot法结果显示过表达miR-181b-5p显著下调CYLD mRNA和蛋白的水平(P<0.05)。结论 miR-181b-5p通过负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

过表达人RI抑制人膀胱癌T24细胞的侵袭、转移及EMT发生

目的 检测过表达人核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因的质粒pIRES2-EGFP-RI对人膀胱癌T24细胞侵袭转移及上皮细胞间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)现象的影响.方法 将连有RI的质粒pIRES2-EGFP-RI稳定转染T24细胞后利用G418筛选出阳性克隆.根据转染的质粒不同分为3组:T24组(未转染组)、T24-0(转染pIRES2-EGFP质粒)和T24-RI组(转染pIRES2-EGFP-RI质粒).RT-PCR检测T24细胞中RI的mRNA 水平变化,细胞免疫荧光及Western blot检测RI蛋白的表达,利用HE染色观察其细胞形态的变化,Transwell方法检测细胞侵袭及转移能力的变化,Western blot检测侵袭转移及EMT相关蛋白Twist、MMP-9和Snail及E-cadherin的表达,构建移植瘤模型,利用HE染色观测肺组织切片癌细胞转移情况,组织免疫化学方法检测移植瘤中RI、Twist、Snail及E-cadherin 的表达.结果 T24-RI组人RI的mRNA水平及蛋白表达显著升高(P＜0.05);HE染色结果表明细胞铺展良好,核质比明显减小,细胞由间质形态向上皮形态转变;Transwell方法显示T24-RI组细胞的侵袭及转移能力较T24组、T24-0组明显下降;Western blot结果表明T24-RI组Twist、MMP-9和Snail较T24组、T24-0组显著降低(P＜0.01),E-cadherin较T24组、T24-0组显著升高(P ＜0.01);HE染色肺组织切片显示T24-RI组较其他两组癌细胞转移降低,组织免疫化学结果表明T24-RI组RI、E-cadherin蛋白明显升高,而Twist、Snail显著降低.结论 过表达人RI载体提高了RI蛋白的表达水平,并抑制了人膀胱癌T24细胞EMT的发生,从而抑制了膀胱癌T24细胞的侵袭、转移.     

miR-584对人胶质母细胞瘤侵袭和迁移能力的影响

目的探讨miR-584对人胶质母细胞瘤U251细胞侵袭和迁移能力的影响。方法将化学合成的miR-584-3p在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,瞬时转染人胶质母细胞瘤U251,细胞分为空白对照组(无转染,其他条件相同)、mimics NC组(转染miR-584-3p mimics阴性对照序列)、miR-584-3p mimics组(转染miR-584-3p mimics)、inhibitor NC组(转染miR-584-3p inhibitor阴性对照序列)和miR-584-3p inhibitor组(转染miR-584-3p inhibitor)。Real-time PCR法检测细胞中miR-584-3p的表达水平;CCK-8法检测细胞增殖能力;划痕实验和Transw ell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果与空白对照组和mimics NC组相比,miR-584-3p mimics组的miR-584-3p表达上调约100倍(P<0.05),细胞增殖能力无明显差异(P>0.05),细胞侵袭和迁移能力明显下降(P<0.05);与空白对照组和inhibitor NC组相比,miR-584-3p inhibitor组的miR-584-3p表达下调至空白对照组的5%(P<0.05),细胞增殖能力无明显差异(P>0.05),细胞侵袭和迁移能力显著增强(P<0.05)。结论 miR-584-3p mimics转染抑制了U251细胞的侵袭和迁移能力;miR-584-3p inhibitor转染能增强U251细胞的侵袭和迁移能力。     

Twist对胃癌细胞系MKN28迁移和侵袭能力的影响

目的:研究Twist基因对人胃癌细胞株MKN28迁移和侵袭能力的影响.方法:利用脂质体介导转染技术和遗传霉素筛选得到稳定高表达的Twist蛋白的细胞克隆Twist -MKN28;采用Western免疫印迹检测细胞中Twist,上皮细胞钙黏蛋白(ecadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达;用基质胶侵袭小室检测细胞迁移和侵袭能力的影响.结果:阳性质粒组Twist -MKN28细胞的Twist蛋白表达强于空白质粒组PcDNA3.1-MKN28和未转染组MKN28;Twist -MKN28组细胞中ecadherin蛋白减少,而vimentin蛋白表达上调;Twist -MKN28组细胞迁移、侵袭能力明显增强.结论:Twist基因可能通过上皮-间质转型促进胃癌细胞的迁移和侵袭.     

DARS2调控EGFR促进膀胱癌的EMT、迁移及侵袭

目的 探讨线粒体天冬氨酰-tRNA合成酶2(DARS2)对膀胱癌细胞上皮间质转化(EMT)、迁移及侵袭的作用及其机制。方法 利用TIMER和GEPIA数据库分析DARS2在膀胱尿路上皮癌(BLCA)中的表达及其与临床病理分期的关系。RT-qPCR检测人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1,膀胱癌细胞5637、T24和TCCSUP中DARS2 mRNA水平。TCCSUP细胞分为：control组(未转染)、si-NC组(转染阴性对照siRNA)、si-DARS2-1组(胞转染DARS2 siRNA-1)、si-DARS2组(转染DARS2 siRNA-2)、si-DARS2+Vector组(转染DARS2 siRNA-2+空载质粒)和si-DARS2+OE-EGFR组(转染DARS2 siRNA-2+EGFR过表达质粒)。Western blot检测DARS2,EMT标志蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及EGFR的表达水平。Transwell侵袭和细胞划痕实验分别检测细胞侵袭能力和迁移能力。结果 DARS2 mRNA水平在BLCA中显著上调,并与病理分期正相关...     

miR-181靶向TIMP3调控胆囊癌细胞迁移及侵袭的实验研究

目的 研究miR-181靶向金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)调控胆囊癌细胞迁移及侵袭的作用.方法 培养胆囊癌GBC-SD细胞,转染miR-181 mimic、阴性对照(NC)mimic、TIMP3 siRNA、NC siRNA、表达 TIMP3的重组质粒、空白质粒,荧光定量PCR检测miR-181的表达量,Western blot检测TIMP3的表达量,Transwell检测细胞迁移和侵袭活力,生物信息学分析及荧光素酶报告基因实验验证miR-181靶向TIMP3;皮下注射转染miR-181 mimic或NC mimic的GBC-SD细胞后建立荷瘤鼠模型,检测移植瘤质量及miR-181、TIMP3表达量.结果 细胞实验显示:转染miR-181 mimic促进细胞迁移及侵袭、抑制细胞中TIMP3的表达及双荧光素酶报告基因的荧光素酶活力;转染TIMP3 siRNA促进细胞迁移及侵袭;转染表达TIMP3的重组质粒后,miR-181 mimic促进细胞迁移、侵袭的作用减弱.动物实验显示:转染miR-181 mimic使移植瘤的质量减轻、移植瘤中TIMP3的表达增加.结论 miR-181具有促进胆囊癌细胞迁移和侵袭的作用,靶向抑制TIMP3是介导该作用的分子机制之一.     

MiR-491-5p过表达对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨微小RNA-491-5p (miR-491-5p)过表达对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响,为研究鼻咽癌的发病机制和靶向治疗提供依据。方法：将人鼻咽癌HONE-1细胞分为对照组（转染对照质粒）和miR-491-5p组（转染miR-491-5p质粒）。采用荧光显微镜观察2组鼻咽癌HONE-1细胞转染效率,CCK-8法检测2组鼻咽癌HONE-1细胞增殖活性,Transwell小室实验检测2组鼻咽癌HONE-1细胞的迁移细胞数,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组鼻咽癌HONE-1细胞中波形蛋白和上皮钙黏素mRNA表达水平,Western blotting法检测2组鼻咽癌HONE-1细胞中波形蛋白和上皮钙黏素蛋白表达水平。结果：与对照组比较,作用24、48和72 h时miR-491-5p组鼻咽癌HONE-1细胞增殖活性（t=2.832,P=0.047 3;t=4.522,P=0.001 4;t=9.308,P<0.01）和迁移细胞数（t=9.639, P<0.01）明显降低;与对照组比较,miR-491-5p组鼻咽癌HONE-1细胞中波形蛋白mRNA...     

miR-30c-2过表达联合阿霉素对甲状腺乳头状癌细胞增殖及迁移能力的影响

目的 探究微小RNA-30c-2(microRNA-30c-2,miR-30c-2)联合阿霉素对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和迁移能力的影响。方法 体外培养TPC-1细胞,将细胞分为空白对照组(未做任何处理的细胞,即Control组)、过表达对照组(瞬时转染NC mimic质粒,即NC mimic组)、过表达组(瞬时转染miR-30c-2过表达质粒,即miR-30c-2组),采用qRT-PCR技术检测细胞中miR-30c-2的表达水平;将TPC-1细胞分为4组,分别为空白对照组(未做任何处理的细胞,Control组)、阿霉素处理组(使用阿霉素混合液培养TPC-1细胞24 h、48 h)、过表达组(瞬时转染miR-30c-2过表达质粒,即miR-30c-2 mimic组)、共处理组(阿霉素混合液与转染miR-30c-2过表达质粒共同培养TPC-1细胞24 h、48 h),CCK-8试验及细胞划痕实验分别检测4组细胞的增殖和迁移能力。结果 经qRT-PCR检测,与NC mimic组相比,过表达组的miR-30c-2表达水平明显升高(P<0.001);CCK-8实验表明,阿霉素+m...     

肿瘤坏死因子受体相关因子6高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的:探究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将Ishikawa细胞随机分为三组：对照组(子宫内膜癌细胞Ishikawa未转染)、NC组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染空载质粒)和TRAF6高表达组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染TRAF6过表达质粒);实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测TRAF6 mRNA以及蛋白表达情况;Transwell实验、划痕实验以及裸鼠移植瘤实验检测细胞侵袭、迁移能力;WB检测上皮间质转化标志蛋白E型钙黏蛋白(E-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)、N型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平。结果:相较于人子宫内膜上皮细胞,子宫内膜癌细胞Ishikawa中TRAF6 mRNA和蛋白表达显著降低(均P<0.05)。相较于对照组和NC组,TRAF6高表达组的TRAF6 mRNA水平和蛋白表达显著升高,细胞侵袭、迁移能力和Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著降低,Occludin、E-cadherin...     

miR-5701抑制胶质瘤细胞迁移和细胞周期的分子机制研究

目的 研究微小RNA(miRNA)-5701通过下调TXNDC5基因表达抑制胶质瘤细胞迁移和诱导其细胞周期停滞。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测胶质瘤细胞株(LN382、U251、SNB-19、U87MG)及正常脑胶质细胞HEB中miR-5701表达水平。培养SNB-19细胞分为两组,转染阴性对照序列(NC组)和miR-5701拟似物(miR-5701组)。RT-qPCR检测miR-5701的表达水平。划痕实验检测SNB-19细胞迁移能力,流式细胞术检测SNB-19细胞周期。RT-qPCR和Western blot法检测TXNDC5基因的表达水平。通过GEPIA数据库分析胶质瘤组织和癌旁组织中TXNDC5基因表达差异。双荧光素酶报告基因实验验证miR-5701靶向TXNDC5。结果 与HEB细胞比较,胶质瘤细胞株中miR-5701表达水平明显降低(P<0.05)。NC组和miR-5701组miR-5701表达分别为1.66±0.40和13.75±1.61,与NC组比较,miR-5701组miR-5701表达明显增加(P<0.01)。NC组和miR-5701组SNB-19细胞划痕愈合率分别为76.43%±4.38%和40.15%±7.46%,NC组显著高于miR-5701组(P<0.05)。NC组和miR-5701组G0~1期细胞比例分别为48.24%±2.22%和67.38%±2.95%,与NC组比较,miR-5701组G0～1期比例显著增加(P<0.01)。与NC组比较,miR-5701组TXNDC5基因表达水平显著下降(P<0.01)。胶质瘤组织中TXNDC5基因表达明显高于癌旁组织(P<0.01)。TXNDC5基因mRNA第215~235碱基是miR-5701的结合位点(P<0.01)。结论 miR-5701在胶质瘤细胞株中表达下调,过表达miR-5701能够抑制胶质瘤SNB-19细胞的迁移能力及诱导细胞周期停滞,靶向抑制TXNDC5基因表达是miR-5701作用的分子机制。     

Twist1基因对膀胱癌上皮间质转化的影响

目的：探讨Twist1基因对膀胱癌上皮间质转化（EMT）过程的影响。方法：上调Twist1基因的表达,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测膀胱癌细胞中EMT相关基因表达情况。结果：Twist1基因成功转染进膀胱癌T24细胞,转染Twist1的细胞中Twist1 mRNA表达量是转染空载细胞中的11920倍。转染Twist1组表达量为空载组snail11.2倍,snail21.2倍,E-cadherin 0.8倍,Fibronectin 3.2倍,N-caderin 1.5倍和Vimentin mRNA 1.2倍。结论：Twist1在膀胱癌细胞EMT过程中起到一个正性调控作用,能够促进膀胱癌细胞EMT过程。     

膀胱癌中Micro RNA-196a表达和功能的初步研究

目的 研究miRNA-196 a在膀胱癌中的表达与功能.方法 采用了实时定性的PCR方法,计算并比较了miRNA-196 a在膀胱癌细胞株(T24)和正常人膀胱细胞株(SV-HUC-1)中的表现.将miR-196 a模拟物、miR-196 a抑制剂以及阴性的对照物miRNA质粒经转染膀胱癌细胞系(T24)后,观察到癌基...     

调控miR-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响及机制研究

目的:探究调控微小RNA(miR)-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法:通过转染不同质粒将Hela细胞分为miR-642a-5p mimic组、miR-642a-5p mimic NC组,以未做任何处理的Hela细胞作为对照组。RT-qPCR法检测miR-642a-5p、NF-κB mRNA的表达水平,Western blot法检测NF-κB p65蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组、miR-642a-5p mimic NC组比较,miR-642a-5p mimic组miR-642a-5p的表达量及细胞凋亡率升高,NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h的细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率降低(均P<0.05);对照组与miR-642a-5p mimic NC组miR-642a-5p、NF-κB mRNA、NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率、细胞凋亡率比较,...     

miRNA-149靶向IGFBP5抑制膀胱癌细胞侵袭的分子机制研究

目的探讨miRNA-149靶向IGFBP5抑制膀胱癌细胞侵袭的分子机制。方法采用双萤光报告基因系统分别检测miRNA-149对目的基因IGFBP5和PDGFRA的3'UTR的影响。在T24膀胱癌细胞中瞬时转染miRNA-149模拟物(mimic)和阴性对照miRNA(mimic NC),并且在该细胞中分别转染IGFBP5过表达质粒(H10495)、阴性对照(H155)和PDGFRA过表达质粒(H10496),利用Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 miRNA-149显著抑制IGFBP5的3’UTR活性,差异具有统计学意义(P0.0001)。Transwell实验显示T24-H155-miRNA149-mimics组较T24-H155-mimic-NC对照组(control)侵袭能力降低,差异具有统计学意义(P0.0001),而在T24-H10495-miRNA-149-mimics组较T24-H155-miRNA-149-mimics组侵袭能力明显增强(P0.01)。另一方面,T24-H10496-miRNA-149-mimics组较T24-H155-miRNA-149-mimics组侵袭能力无明显变化(P0.05)。结论该研究表明miRNA-149通过抑制其下游基因IGFBP5从而抑制膀胱癌侵袭,为临床膀胱癌转移的分子治疗研究提供了新的靶点和理论依据。     

miR-200a对非小细胞肺癌迁移、侵袭的调控作用及机制研究

目的:研究miR-200a对非小细胞肺癌迁移、侵袭的调控作用及机制。方法:培养肺癌A549细胞并分组,阴性对照(NC)过表达组转染NC的模拟物,miR-200a过表达组转染miR-200a的模拟物,NC抑制组转染NC的抑制物,miR-200a抑制组转染miR-200a的抑制物。采用划痕实验检测细胞的迁移能力,采用transwell检测细胞的侵袭能力,采用Western blotting检测迁移基因N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)、侵袭基因基质金属蛋白酶(MMP)2及MMP9、β-catenin的表达量。结果:与NC过表达组比较,miR-200a过表达组的迁移和侵袭能力明显减弱,N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9、β-catenin的表达量明显减少;与NC抑制组比较,miR-200a抑制组的迁移和侵袭能力明显增强,N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9、β-catenin的表达量明显增加。结论:miR-200a能够抑制非小细胞肺癌的迁移、侵袭且这一抑制作用与靶向抑制β-catenin有关。     

miR-28调控非小细胞肺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用机制

目的 探讨微小RNA-28 (miR-28)对非小细胞肺癌细胞株细胞A549和H1299的影响及其作用机制。方法 通过转染miR-28 mimics过表达miR-28,转染miR-28 inhibitor抑制miR-28的表达,其中miR-28 NC作为对照组。通过CCK-8实验、克隆形成试验和细胞周期实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;通过划痕实验、Transwell迁移及Boyden小室侵袭实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响;通过生物信息学软件分析发现Ras相关蛋白1b (RAP1B)可能是miR-28的潜在靶基因并利用荧光素酶报告基因实验进行验证;通过RT-qPCR和Western blot方法检测过表达和抑制miR-28表达后A549和H1299细胞RAP1B的表达。结果 与miR-28 NC比较,miR-28 mimics组A549和H1299细胞的增殖速度明显减慢,迁移及侵袭能力明显减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-28 inhibitor组A549和H1...     

miR-93-5p靶向下调ROCK2表达对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-93-5p对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:选择类风湿性关节炎(RA)患者(RA组,n=37)和接受关节置换手术的关节创伤患者(对照组,n=30)作为研究对象,从RA患者滑膜组织分离出RA-FLSs,采用免疫荧光法和流式细胞术鉴定细胞。将RA-FLSs分为空白组、mimics NC组(转染miR-93-5p mimics NC)、mimics组(转染miR-93-5p mimics)、OE-NC组(转染ROCK2过表达空载质粒)、OE-Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK) 2组(转染ROCK2过表达质粒)、mimics+OE-NC组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达空载质粒)和mimics+OE-ROCK2组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达质粒)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组患者滑膜组织和各组细胞中miR-93-5p和ROCK2 mRNA表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,EdU染色检测各组细胞中EdU阳性细胞率,Tra...