芪苈强心胶囊对心肌梗死大鼠心脏IP3Rs/GRP75/VDAC1基因调控的机制研究

目的：探讨芪苈强心胶囊对心肌梗死大鼠线粒体Ca²⁺转运相关基因的调控作用。方法：采用冠状动脉左前降支结扎术建立心肌梗死大鼠模型。术后随机将动物分到模型组、芪苈强心组和卡托普利组；同时设有假手术组作为对照。治疗四周后，通过心脏大体结构观察大鼠心脏梗死范围，HE染色观察大鼠心肌组织病理形态变化；实时荧光(Real-Time)PCR检测大鼠心脏梗死边缘区线粒体Ca²⁺转运相关基因三磷酸肌醇受体2(IP3R2)，葡萄糖调节蛋白75(GRP75)，电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)，线粒体融合蛋白2(Mfn2)，以及线粒体凋亡相关基因B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA表达变化；Western blot检测心肌组织Bcl-2,Bax蛋白表达变化；TUNEL染色检测心肌组织细胞凋亡率。结果：与假手术组相比，模型组大鼠心脏左室前壁呈现大面积梗死区域，心肌组织结构紊乱；线粒体Ca2+转运相关基因IP3R2,GRP75,VDAC1,Mfn2mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01)；线粒体凋亡相关分子...     

凋亡相关基因及蛋白的表达与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的探讨COC1/DDP和COC1中凋亡相关基因及凋亡相关蛋白的表达与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法采用流式细胞仪检测不同浓度顺铂作用于COC1及COC1/DDP细胞48h后细胞凋亡率;RT-PCR及Western blot法检测凋亡相关基因及蛋白Bcl-2、Caspase-3、Smac和Survivin在COC1和COC1/DDP中的表达。结果DDP作用于COC1和COC1/DDP细胞48h后细胞随着DDP浓度的升高,凋亡率也相应增高。COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bcl-2、Survivin的表达明显高于COC1。COC1/DDP中促进凋亡的基因及蛋白Smac、Caspase-3的表达明显低于COC1。结论在COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bcl-2、Survivin的高表达以及促进凋亡的基因及蛋白Smac和Caspase-3的低表达可能参与COC1/DDP对DDP耐药的发生机制。     

肺癌中bcl—2蛋白表达的研究

细胞凋亡与肿瘤发生的关系是目前肿瘤研究的"热点"之一.Bcl-2基因作为抑制细胞凋亡的基因受到了广泛的关注.Bcl-2基因定位于人染色体18q21,编码一相对分子量为25kD的线粒体内膜蛋白,该种蛋白表达时,可抑制细胞凋亡,从而导致癌变[1、2、3].本文通过对115例肺癌石蜡切片做免疫组化检测,探讨Bcl-2蛋白表达状况及意义.     

线粒体/细胞色素C介导的凋亡通路的研究进展

线粒体凋亡途径在细胞凋亡信号转导途径中是近年来研究的热门。细胞内外各种刺激信号引起Bcl-2同源结构域3(Bcl-2 homology domain3,BH3)-only蛋白激活,通过Bcl-2家族(B celllymphoma 2)调控线粒体,使线粒体外膜渗透而导致细胞色素C及(second mitochondrial-derived activa-tor of caspase,Smac)流入胞质与凋亡活化因子-1(apoptosis activated factor-1,Apaf-1)及胱天蛋白酶-9(caspase-9)结合形成复合体。caspase-9的激活将引起其下游胱天蛋白酶的级联反应,导致该细胞凋亡。这一过程中有一系列反馈调节如Smac对凋亡抑制蛋白(IAP)的抑制等。     

SH2B1对肝癌细胞增殖、凋亡及Akt/mTOR通路的影响

目的观察Src同源性2b衔接蛋白1(SH2B1)在肝癌细胞中表达情况,以及对肝癌细胞增殖、凋亡及蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/m TOR)信号通路的影响。方法通过荧光实时定量聚合酶链反应法检测人正常肝细胞株QSG-7701及肝癌细胞株Hep G2中SH2B1 mRNA的表达情况,采用免疫印迹法(Western blot法)检测SH2B1蛋白表达,采用短发夹RNA(shRNA)慢病毒干扰技术构建沉默SH2B1基因的人肝癌细胞Hep G2稳定转染细胞株,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测Hep G2细胞增殖能力,采用磷脂酰丝氨酸蛋白抗体/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染流式细胞术检测Hep G2细胞凋亡,采用Western blot法测定凋亡细胞相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3以及Akt/m TOR通路蛋白表达变化。结果与正常细胞相比,肝癌细胞中SH2B1 mRNA、SH2B1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05);与空白组、NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组SH2B1 mRNA、SH2B1蛋白表达显著降低(P <0. 05); CCK-8试验显示,与NC shRNA组和空白组相比,SH2B1 shRNA组转染48 h后OD值显著降低(P <0. 05);与空白组、NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组细胞凋亡率显著升高(P <0. 05);与空白组、NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组细胞中Bax、caspase-3蛋白水平显著上升(P <0. 05),Bcl-2蛋白水平下降(P <0. 05);与空白组和NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组p-AKT、m TOR蛋白水平明显降低(P <0. 05)。结论 SH2B1在肝癌细胞株Hep G2中高表达,沉默SH2B1表达可能通过抑制Akt/m TOR信号通路活化,抑制肝癌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

耐辐射奇球菌pprⅠ基因对MMC诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用

目的 探讨耐辐射奇球菌(DR)pprⅠ基因对丝裂霉素C(MMC)诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法 细胞分为空白对照组(不干预)、未转染组(MMC处理)、空质粒转染组(pCMV-C-Flag+MMC)与pprⅠ基因转染组(pCMV-C-Flag-pprⅠ+MMC)。CCK-8、抗氧化酶相关试剂盒、TUNEL、JC-1荧光探针和qRT-PCR测定细胞存活率、氧化应激、细胞凋亡率、线粒体损伤、凋亡途径相关基因mRNA的表达。结果 与空白对照组比较,未转染组细胞存活率、线粒体膜电位、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA表达下降;氧化应激反应、细胞凋亡率及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、Caspase-3、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)mRNA表达增加(P<0.05)。与未转染组比较,pprⅠ基因转染组细胞存活率、线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA表达增加;氧化应激反应、细胞凋亡率及Bax、Caspase-9、Caspase-3、PARP mRNA表达下降(P<0.05)。结论 耐辐射奇球菌pprI基因对丝裂霉素C诱导的H...     

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目的探讨耐辐射奇球菌(DR)pprI基因对丝裂霉素C(MMC)诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制。 方法细胞分为空白对照组(不干预)、未转染组(MMC处理)、空质粒转染组(pCMV-C-Flag+MMC)与pprI基因转染组(pCMV-C-Flag-pprI+MMC)。CCK-8、抗氧化酶相关试剂盒、TUNEL、JC-1荧光探针和qRT-PCR测定细胞存活率、氧化应激、细胞凋亡率、线粒体损伤、凋亡途径相关基因mRNA的表达。 结果与空白对照组比较,未转染组细胞存活率、线粒体膜电位、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA表达下降;氧化应激反应、细胞凋亡率及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、Caspase-3、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)mRNA表达增加(P＜0.05)。与未转染组比较,pprI基因转染组细胞存活率、线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA表达增加;氧化应激反应、细胞凋亡率及Bax、Caspase-9、Caspase-3、PARP mRNA表达下降(P＜0.05)。 结论耐辐射奇球菌pprI基因对丝裂霉素C诱导的H9C2心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与激活线粒体凋亡途径有关。     

自发性高血压大鼠细胞凋亡相关基因蛋白的研究

目的：研究自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞Bax和Bcl-2基因蛋白表达的变化及其与心肌细胞凋亡的关系。方法：采用免疫组化和末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测Bax和Bcl-2基因蛋白及凋亡细胞。结果：(1)心肌细胞凋亡和Bax基因蛋白表达在1月龄SHR组(NLVH组)和18～20月龄SHR组(CHF组)显著增高且Bax基因蛋白表达与心肌细胞凋亡呈显著正相关(P均＜0.01)。(2)在10月龄SHR组(LVH组),心肌细胞凋亡显著降低但Bcl-2基因蛋白表达显著增高且Bcl-2基因蛋白表达与心肌细胞凋亡呈显著负相关(P均＜0.01)。(3)NLVH组和CHF组Bcl-2/Bax比例显著降低,但LVH组Bcl-2/Bax比例显著增高且Bcl-2/Bax比例与心肌细胞凋亡呈显著负相关(P均＜0.01)。结论：SHR心肌细胞Bax和Bcl-2基因蛋白表达及心肌细胞凋亡存在动态变化,且Bax基因蛋白表达上调可能与SHR心肌细胞凋亡增加和CHF相关而Bcl-2基因蛋白表达上调则可能与SHR心肌细胞凋亡减少和LVH有关。因此,Bax和Bcl-2基因蛋白表达的动态变化可能在SHR心肌细胞凋亡和心脏重构中起重要作用。     

OPA1与细胞色素C释放的关系及其在细胞凋亡中的作用

细胞凋亡（apoptosis）是细胞内外各种因素触发细胞内预存的死亡程序而导致细胞死亡的过程。细胞表现出连续的不伴有炎症反应的变化，最终细胞自主有序的死亡。细胞凋亡被认为是精确的基因调控执行的结果，是生物体更新正常细胞和清除异常细胞的重要手段，对维持生物体正常发育和行使功能有重要意义。线粒体在细胞凋亡中的核心作用已经得到广泛认可，在凋亡信号的刺激下，线粒体膜结构发生变化，将膜间隙（Intermemberance Space，IMS）多种可溶性蛋白质释放入细胞浆，其中包括细胞色素C、凋亡诱导因子（Apoptosis—inducing Factor，AIF）和caspase酶原等，而细胞色素C的释放是凋亡发生的关键事件，也是线粒体参与凋亡的主要方式。参与细胞色素C释放调控的因素有很多种，目前认为Bcl-2家族蛋白与细胞色素C释放直接相关。该家族的BAX、BAK蛋白能与该家族另一类被称为“唯BH3域蛋白”的蛋白质形成跨线粒体外膜通道，释放细胞色素C。另一类与细胞色素C释放有重要关系的蛋白被称为“线粒体塑形蛋白”家族，该家族蛋白以调节线粒体的融合分裂的方式参与细胞色素C释放的调控。OPA1是该家族的重要成员，位于线粒体内膜及膜问隙，介导线粒体融合和内膜变化，是控制细胞色素C释放的重要环节，是目前凋亡研究中引起广泛关注的重要分子。     

脑缺血预处理后凋亡相关基因Bcl-2、Bax在海马CA1区的表达及意义

目的　探讨脑缺血预处理后凋亡相关基因Bcl-2、Bax在海马CA1区的表达及意义。方法　采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断缺血再灌注损伤模型。随机分为假手术组 (SH)、预处理对照组 (IC)、预处理缺血组 (IP)及脑缺血再灌注组 (IR) ;每组据再灌注时间点不同又分 1、3、5及 7d 4个亚组 ,每组 6只动物。在预定时间点行开阔法行为学检查、TUNEL法海马CA1区凋亡细胞检测 ,免疫组织化学ABC法测定Bcl -2、Bax蛋白在海马CA1区的动态变化。结果　IP可显著减少沙土鼠探索活动及海马CA1区凋亡锥体细胞数量 (与IR组相比 ,P <0 .0 1) ,诱导Bcl-2蛋白及抑制Bax蛋白表达 (与IR组相比 ,P <0 .0 1)。结论　脑缺血预处理有确切的脑保护作用 ,调控凋亡相关基因Bcl -2、Bax蛋白的表达可能是其作用机制之一     

昆明山海棠碱通过线粒体途径诱导Jurkat淋巴瘤细胞株细胞凋亡

目的 研究昆明山海棠碱通过线粒体途径诱导细胞凋亡的作用。方法 THH碱多剂量多时间点诱导Jurkat细胞后，采用Western blotting检测细胞内Bcl-2表达的含量、采用JC—1原位染色方法、细胞免疫化学和流式细胞术等手段在单细胞水平分析细胞线粒体膜Apo2．7分子以及线粒体膜电位(△Ψm)的变化。结果 THH碱诱导后Bcl-2蛋白表达下调，线粒体膜电位明显下降，线粒体膜Apo2．7蛋白分子表达显著增加。结论 THH碱可通过线粒体途径诱导Jurkat T淋巴瘤细胞株发生凋亡，并且Bcl—2蛋白参与了线粒体凋亡功能的启动。     

干扰苹果酸酶3对人脑胶质瘤细胞线粒体分裂与融合的影响

［摘要］目的: 研究苹果酸酶3(malic enzyme 3, ME3)对人脑胶质瘤细胞线粒体分裂与融合的影响。方法: 将干扰质粒sh-ME3或对照质粒sh-EGFP转染到人脑胶质瘤LN229细胞中,用实时定量PCR、蛋白质印迹法检测干扰效率。蛋白质印迹法检测线粒体的融合与分裂指标及细胞凋亡相关蛋白;用荧光探针检测线粒体膜电位。结果： 与对照组相比,实验组ME3的 mRNA表达水平下降了76%（t= 20.16,P<0.01）,蛋白表达也相应减少。转染干扰质粒sh-ME3后,线粒体分裂相关的线粒体分裂蛋白1(mitochondrial fission 1 protein,Fis-1)和动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1, DRP1)表达增高,而线粒体融合相关的线粒体融合蛋白1(mitofusin 1, Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 2, Mfn2)、视神经萎缩症蛋白1(optic atrophy 1, OPA1)表达降低;线粒体膜电位降低;细胞凋亡相关的水解型半胱氨酸蛋白酶(cleaved caspase-3)表达增加,而B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）表达降低。结论： 干扰ME3促进了胶质瘤细胞线粒体的分裂,抑制了其融合,降低了膜电位,从而引起细胞凋亡。
     

套细胞淋巴瘤C—myc基因、LSD1表达及临床意义

目的 探究套细胞淋巴瘤C-myc基因、LSD1表达及临床意义。方法 回顾性分析2010年1月～2015年12月就诊于我院的30例套细胞淋巴瘤(MCL)患者的临床资料,将其纳入研究组,并将同时期的30例增生性淋巴结炎患者临床资料纳入对照组。采用SP免疫组织化学方法检测两组病例病理组织中C-myc、LSD1蛋白表达情况,并应用小干扰RNA(siRNA)沉默套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞的C-myc基因,Western blot检测C-mycsiRNA作用后凋亡相关蛋白C-myc、Bcl-2、Procaspase3表达水平。分析C-myc、LSD1蛋白表达与套细胞淋巴瘤临床病理分期的相关性及C-mycsiRNA对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞凋亡相关蛋白C-myc、Bcl-2、Procaspase3的影响。结果经Spearman相关性分析显示,C-myc、LSD1蛋白表达与MCL临床病理分期无相关性(P0.05)。C-mycsiRNA处理Jeko-1细胞24 h后,Western blot检测显示凋亡相关蛋白C-myc、Bcl-2、Procaspase3表达呈浓度依赖性下降。结论 C-myc、LSD1蛋白表达与MCL临床病理分期无相关性,干扰Jeko-1细胞C-myc基因后可下调凋亡相关蛋白C-myc、Bcl-2、Procaspase3表达水平,C-myc基因可能成为靶向治疗的新靶点。     

LukS-PV通过C5aR诱导急性髓系白血病细胞THP-1凋亡的研究

目的 探讨金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素亚组分(LukS-PV)是否通过C5aR发挥其诱导急性髓系白血病细胞THP-1凋亡的作用.方法 将THP-1细胞株分为5组:未处理细胞为对照组,使用不同浓度的C5aR拮抗剂(0、50、100、150 nmol/L)预先作用于THP-1细胞后,再使用1μmol/L LukS-PV刺激细胞为处理组.24 h后通过Annexin V/PI染色法,线粒体膜电位法检测细胞凋亡,qRT-PCR法检测凋亡相关基因,Western blot法检测凋亡相关蛋白,酶标仪法检测Caspase-3活性.结果 经过不同浓度C5aR拮抗剂干预后,LukS-PV诱导THP-1细胞凋亡的比率逐渐下降,促凋亡基因Bax、Bak、Bim和促凋亡蛋白cleaved-Caspase-3、Bak、Bax的表达量也逐渐减低,抑凋亡基因Bcl-2、Bcl-w、Bcl-x和抑凋亡蛋白Bcl-2的表达量逐渐升高,Caspase-3活性逐渐降低.结论 LukS-PV可能通过结合C5aR从而激活下游线粒体通路,发挥其诱导人急性髓系白血病细胞THP-1凋亡的作用.     

促凋亡蛋白NIX的研究进展

细胞凋亡又称为程序性细胞死亡,是多细胞生物维持生长发育和组织形态所特有的,由多种基因参与表达、精密调控的细胞主动死亡过程.NIX是近年来发现的隶属于Bcl-2家族中的BH3-only促凋亡家族成员.虽然具有Bcl-2家族特征性的BH3域和羧基末端跨膜结构域(TM),也能与Bcl-2形成二聚体,但NIX的促凋亡活动明显不同于其他Bcl-2家族成员,本文通过对NIX的促凋亡功能机制以及其在细胞自噬、线粒体自噬、肿瘤及心肌疾病发病机制等方面的研究进展作一综述.     

神经细胞凋亡与缺氧缺血性脑损伤

为加强对神经细胞凋亡及凋亡相关因子在新生儿缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的认识,作者查阅了近年来27篇相关文献,对神经细胞凋亡与HIBD,凋亡相关因子（Caspase-3蛋白、Bcl-2蛋白家族、Caspase-3与Bcl-2、Bax的关系）、神经细胞凋亡的机制（钙超载、线粒体损伤、氧自由基和兴奋性氮基酸的毒性作用）作了介绍。     

球形脂联素对间歇低氧所致H9C2细胞损伤的保护作用及机制

目的：探讨Parkin介导的线粒体自噬在球形脂联素(globular adiponectin,gAPN)减轻间歇低氧(intermittent hypoxia, IH)所致H9C2心肌细胞损伤中的作用及相关机制。方法：建立H9C2细胞IH模型来模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征。 采用流式细胞术检测细胞凋亡。采用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)。采用免疫印迹法检测Parkin、Bax、Bcl-2蛋白表达。采用Parkin siRNA抑制Parkin基因表达。采用LC3与线粒体红色荧光探针进行荧光共定位检测线粒体自噬。结果：IH暴露后,H9C2细胞凋亡率、Bax及Parkin蛋白表达水平、线粒体自噬明显升高,MMP下降,Bcl-2 蛋白表达水平下降;给予gAPN保护后,IH+gAPN组细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平较IH组下降,MMP较IH组升高,Bcl-2及 Parkin蛋白表达水平、线粒体自噬也较IH组升高。抑制Parkin基因表达后,线粒体自噬明显下降,线粒体损伤、心肌细胞凋亡率明显增加。结论：gAPN通过上调Parkin介导的线粒体自噬减轻IH所致H9C2心肌细胞损伤。     

卡托普利对缺血再灌注心肌细胞凋亡Bcl-2和Bax基因蛋白表达的影响

有研究提示，卡托普利能改善心功能，早期应用能降低心肌梗死远期病死率，但作用机制尚不清楚。人类心肌细胞凋亡与Bcl-2抑制基因和Bax凋亡刺激基因有密切的关系，且受Bax蛋白上调与Bcl-2蛋白下调的影响，Bax与Bcl-2基因蛋白共同调节心肌细胞凋亡，卡托普利对缺血再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白有何影响，本研究对此进行了初步探讨。     

缺氧诱导神经干细胞凋亡作用机制研究

目的:探讨缺氧处理对神经干细胞(NSCs)凋亡的影响及其作用机制。方法:采用无血清培养法培养新生大鼠NSCs,采用流式细胞术检测NSCs的凋亡率和线粒体跨膜电位,采用免疫印记法检测凋亡执行蛋白Caspase-3和线粒体通路相关蛋白Bcl-2,Bax的表达。结果:缺氧组的早期凋亡率高于正常组,线粒体跨膜电位降低,差异有统计学意义(P<0.05);缺氧条件下Caspase-3、Bax表达升高,Bcl-2表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:缺氧可诱发NSCs凋亡,其作用机制可能是通过上调线粒体通路中促凋亡蛋白Bax的表达,下调Bcl-2的表达,最终激活凋亡蛋白Caspase-3,为缺血缺氧性脑损伤病理机制的阐明奠定基础。     

程序化细胞死亡分子5及其他凋亡调控蛋白在线粒体病患者骨骼肌中的表达

目的 检测程序化细胞死亡分子5(PDCD5)、半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)、Bax和Bcl-2蛋白在线粒体脑肌病伴随乳酸血症和卒中样发作(MELAS)、肢带型线粒体肌病(LGMM)及慢性进行性眼外肌瘫痪(CPEO)患者骨骼肌中的表达情况,探讨细胞凋亡与线粒体病发病机制之间的关系.方法 选择经临床、病理及基因检查诊断的3例MELAS、2例LGMM和6例CPEO患者,对骨骼肌进行PDCD5、Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白免疫组织化学染色,以11例非骨骼肌疾病患者的肌肉标本进行对照.结果 PDCD5和Caspase-3在个别破碎红纤维(RRF)膜下和少数毛细血管高表达,在对照无表达;Bcl-2在病例组和对照组的许多小血管中表达,在病例组的许多RRF和毛细血管表达增强;Bax在正常对照和患者组的肌纤维和毛细血管未见表达.结论 线粒体病患者的骨骼肌内存在细胞凋亡过程的异常调节,PDCD5、Caspase-3、Bcl-2和Bax参与其中.