淫羊藿女贞子合布地奈德对哮喘大鼠肺组织JAKs/STAT4-5的影响

目的 研究中药淫羊藿女贞子煎剂及提取物配伍对布地奈德气道雾化的哮喘大鼠肺组织JAKs/STAT4-5蛋白磷酸化表达的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠,采用数字表法随机分为7组,分别是正常组、模型组、布地奈德组、煎剂组、布地奈德合煎剂组、提取物组、布地奈德合提取物组。卵蛋白致敏、激发建立大鼠哮喘模型,雾化吸入布地奈德和（或）灌胃淫羊藿女贞子煎剂或提取物,免疫荧光法检测肺组织JAKs （包括JAK1、JAK2、JAK3、TYK2）及STAT4、STAT5蛋白的磷酸化表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠肺组织pJAK1、pJAK3、pTYK2和pSTAT5蛋白表达均显著上调（P均<0.01）,pJAK2和pSTAT4显著下调（P均<0.01）。与模型组比较,5个给药组均能显著影响pJAKs各蛋白的表达（P<0.01或P<0.05）,上调pSTAT4蛋白表达的阳性面积,下调pSTAT5蛋白的阳性面积及积分光密度（IOD）（P<0.01或P<0.05）。与单用布地奈德比较,布地奈德合煎剂组或合提取物组对pJAKs蛋白表达和pSTAT4、pSTAT5蛋白表达的Area作用更优（P均<0.01）。结论 在布地奈德治疗哮喘的同时合用中药淫羊藿女贞子,可通过调节JAK/STAT4-5蛋白的磷酸化表达产生协同增效作用。     

淫羊藿苷对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转分化的作用及机制

[目的] 观察淫羊藿苷对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮-间质转化的作用以及对Smad信号通路的影响。[方法] 将肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组。采用CCK-8法检测10、20、40 μmol/L的淫羊藿苷干预10 μg/L TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞的增殖影响; 使用实时定量聚合酶链式反应法检测检测上皮间质转化分管关键因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)mRNA的表达量; 采用Western blot检测α-SMA、E-cadherin、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量; 划痕实验和侵袭迁移小室法(Transwell小室)分别检测HK-2细胞的迁移和侵袭能力。[结果] 与空白对照组比较, TGF-β1组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增高(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著增加(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.05)。与TGF-β1组比较, TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著降低(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著增加(P<0.05)。淫羊藿苷对TGF-β1诱导HK-2细胞抑制增殖、迁移和侵袭能力以及上皮间质转化无剂量依赖性。[结论] 淫羊藿苷可以抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞的上皮-间质转化的分化, 可能与抑制Smad信号通路有关。     

淫羊藿苷和淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷及淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响,探讨雌激素受体（ER）与其作用机制的关系。方法 用不同浓度的淫羊藿苷和淫羊藿素处理雌激素受体呈阳性的乳腺癌T47D细胞系后,MTT法检测T47D细胞增殖,流式细胞术检测T47D细胞周期的变化,Western blotting法检测T47D细胞ERα和ERβ蛋白表达。结果 淫羊藿苷和淫羊藿素浓度为1×10^?9～1×10^?6 mol/L,能显著促进T47D细胞增殖,且该作用可被雌激素受体拮抗剂ICI 182.780（1×10^?6 mol/L）所拮抗。与对照组相比,淫羊藿苷和淫羊藿素1×10^?7 mol/L使S期T47D细胞比例明显增加,增殖指数显著升高,但该作用可被ICI 182.780抑制。淫羊藿苷和淫羊藿素1×10^?7 mol/L还可显著增加ERα、ERβ蛋白表达（P＜0.01）。结论 淫羊藿苷和淫羊藿素均可显著促进T47D细胞增殖,该作用可能是通过上调胞内ERα、ERβ蛋白表达介导的。     

基于“通肾络、益脾肾”治法研究足细胞凋亡及自噬

[目的] 基于中医"通肾络、益脾肾"治法，探讨通络益肾方对体外高糖培养的小鼠肾小球足细胞自噬和凋亡蛋白SIRT1、BNIP3、P62、Bax表达的调控影响。[方法] 成熟无特定病原体（SPF）级SD雄性大鼠40只，随机分为正常组、中药高、中、低剂量组各10只。按照人与大鼠体表面积折算方法计算出大鼠所需中药灌胃浓度：高剂量浓度4.76 g/mL、中剂量浓度2.38 g/mL、低剂量浓度1.19 g/mL，灌胃10 d取含药血清备用。足细胞分6组，正常组5.6 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、高糖组30mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、通络益肾方含药血清高、中、低干预组30 mmol/L葡萄糖+10%高、中、低剂量大鼠血清、高渗组甘露醇24.5 mmol/L+10%正常大鼠血清。细胞培养48 h后收集，Hoechst33342荧光染色，观察各组足细胞凋亡状况及形态变化；流式细胞仪检测足细胞凋亡率；Western Blot检测细胞内自噬标志蛋白SIRT1、P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax表达水平。[结果] 流式细胞仪检测结果显示通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率（P<0.01或P<0.05），高剂量组不能改善凋亡情况（P>0.05）；Hoechst33342荧光染色观察结果也证实通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率；蛋白印迹结果显示，与高糖组相比，通络益肾方中、低剂量组自噬标志蛋白SIRT1表达升高，自噬标志蛋白P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax蛋白表达下降（P<0.05或P<0.01），高剂量组SIRT1、BNIP3、P62、Bax蛋白表达未见明显改变（P>0.05）。[结论] 中剂量、低剂量通络益肾方能够启动细胞自噬减少高糖刺激下体外培养足细胞凋亡，降低细胞凋亡率及凋亡蛋白的表达。     

淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

【摘要】 目的 探讨淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法体外培养人肝癌Hep-G2细胞;采用MTT比色法检测淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖的影响;将Hep-G2细胞分为：空白对照（Control)组、低剂量（2.5 μM/L)组、中剂量（5 μM/L)组和高剂量（10 μM/L)组;蛋白质印记检测增殖、凋亡相关蛋白Ki-67、Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达情况;克隆形成实验检测各组肝癌细胞增殖情况;流式细胞仪检测Hep-G2细胞凋亡情况。结果MTT结果显示淫羊藿素对肝癌Hep-G2细胞的IC50为5.38 μM/L;与空白对照组相比,低剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高（均P<0.05）;与低剂量组相比,中剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高（均P<0.05）;与中剂量组相比,高剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高（均P<0.05）。结论淫羊藿素可以抑制肝癌Hep-G2细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达以及增强caspase-3的活性相关。     

姜黄素诱导人肝癌细胞系Huh7自噬和凋亡

目的 探讨姜黄素诱导人肝癌细胞Huh7自噬和凋亡的作用,以及抑制自噬对姜黄素诱导凋亡的影响。方法 将姜黄素（5、10、20、40 μmol/L）加入人肝癌细胞系Huh7的培养液中,用CCK-8检测细胞增殖水平变化。Huh7细胞用5~40 μmol/L姜黄素培养48 h,通过蛋白质印迹法检测自噬微管相关蛋白1轻链3（LC3）-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值,免疫荧光法检测自噬小体的形成,评估Huh7细胞自噬水平的变化。通过流式细胞术检测Huh7细胞凋亡情况。加入5 mmol/L自噬抑制剂3-甲基嘌呤（3-MA）和20 μmol/L姜黄素培养Huh7细胞,检测Huh7细胞凋亡水平和自噬水平的变化。结果 CCK-8检测显示姜黄素能抑制Huh7细胞的增殖（P<0.05,P<0.01）,且细胞凋亡率随着姜黄素浓度的升高而上升;蛋白质印迹检测显示加入姜黄素后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值上升（P<0.05,P<0.01）,免疫荧光检测显示加入20 μmol/L姜黄素后自噬小体增多。与单独使用20 μmol/L姜黄素培养的Huh7细胞相比,姜黄素联用3-MA培养的Huh7细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值下降（P<0.01）,自噬小体减少。流式细胞术检测发现5~40 μmol/L姜黄素促进了Huh7细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）,而联用3-MA后与单独使用20 μmol/L姜黄素培养相比引起的Huh7细胞凋亡减少（P<0.05）。结论 姜黄素能诱导Huh7细胞凋亡、抑制细胞增殖并促进细胞自噬,抑制自噬能减弱姜黄素对Huh7细胞的诱导凋亡效应。     

淫羊藿素通过抗氧化损伤延缓CCl4诱导的大鼠肝硬化进程

目的探讨淫羊藿素延缓大鼠肝硬化进程的作用及可能机制。方法用不同浓度淫羊藿素处理经CCl4损伤的体外培养大鼠原代肝细胞,测定细胞培养液中ALT、AST和MDA浓度、细胞内SOD含量及凋亡细胞数量。建立CCl4诱导的大鼠肝硬化模型,用淫羊藿素处理后检测各组大鼠血清ALT、AST、ALB、GLB浓度,并观察大鼠肝组织病理学变化和胶原蛋白Ⅰ表达情况。结果 CCl4损伤可使原代大鼠肝细胞培养上清中ALT、AST活性和MDA含量以及细胞凋亡率升高,细胞内SOD活性降低。用淫羊藿素预处理后,其培养上清中ALT、AST活性和MDA含量以及细胞凋亡率均明显低于凋亡模型组和药物载体组,细胞内SOD活性则明显高于模型组和药物载体组,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。体内研究结果显示,与模型组比较,淫羊藿素处理可降低肝硬化模型大鼠血清ALT、AST水平,改善肝功能指标(P<0.05)并减少胶原蛋白Ⅰ沉积,减轻肝硬化程度。结论淫羊藿素可能通过抗氧化损伤延缓CCl4诱导的肝纤维化向肝硬化发展的进程。     

NEDD4-1调控JAK2/STAT3通路参与胰腺癌发生、发展的研究

目的 探讨神经前体细胞表达发育下调蛋白4-1(neural precursor cell expressed, developmentally down-regulated 4-1, NEDD4-1)在胰腺癌组织及细胞发生、发展过程中的作用及相关机制。方法 采用免疫组织化学法分析NEDD4-1在胰腺导管腺癌及癌旁组织中的表达差异;Western blot法检测NEDD4-1在胰腺癌细胞与正常胰腺导管上皮细胞内的表达改变;利用siRNA沉默人胰腺癌PANC-1细胞中的NEDD4-1表达,检测细胞的生长增殖活力、凋亡率及迁移活性的改变,并探讨沉默前后细胞内NEDD4-1、p-JAK2及p-STAT3蛋白的表达变化。结果 胰腺导管腺癌组织中的NEDD4-1表达水平较癌旁组织显著上调(P <0.01);胰腺癌细胞株内的NEDD4-1蛋白表达水平较正常胰腺导管上皮细胞明显升高(P<0.01);转染36h后,siNEDD4-1组NEDD4-1蛋白表达水平仅为siNC组的41.71%±4.58%,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);与siNC组比较,siNEDD4-1组PANC-1细胞生长增殖活性下降、凋亡率上升、迁移活力降低,且细胞内NEDD4-1、p-JAK2及p-STAT3蛋白表达水平明显下调(P <0.05)。结论 NEDD4-1在胰腺癌组织中及细胞中表达升高。沉默NEDD4-1可能通过调控JAK2/STAT3通路抑制胰腺癌细胞的增殖活性及迁移能力并诱导细胞凋亡。NEDD4-1可能成为治疗胰腺癌的一个新靶点。     

淫羊藿苷通过PERK/CHOP信号通路抑制视锥细胞内质网应激诱导的线粒体损伤的研究

目的 探讨在细胞内质网应激状态下，淫羊藿苷保护光感受器细胞的作用机制。方法 以毒胡萝卜素(0.2μmol/L)诱导小鼠视锥细胞(661W细胞)内质网应激模型，采用阿尔玛蓝染色法检测细胞活性，蛋白免疫印迹法检测未折叠蛋白效应相关蛋白——磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(p-PERK)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达水平，荧光成像和钙比例法检测Ca²⁺含量，荧光染色法评价线粒体功能(线粒体通透性转换孔和膜电位)。以体外分子对接技术分析淫羊藿苷与内质网钙-ATP酶的结合及相互作用。结果 毒胡萝卜素可诱导661W细胞死亡；淫羊藿苷(2.22～20.00 nmol/L)能够抑制毒胡萝卜素引起的661W细胞死亡(P<0.01)。毒胡萝卜素促进661W细胞PERK磷酸化(P<0.01)、上调转录因子CHOP的蛋白表达(P<0.01);淫羊藿苷(2.0μmol/L)能够抑制模型组细胞CHOP蛋白表达(P<0.01),有抑制PERK(Thr980)磷酸化的趋势。毒胡萝卜素作用于661W细胞的10 min内，引起胞...     

花旗松素通过PI3K/AKT/mTOR通路对宫颈癌SiHa细胞自噬、凋亡和衰老的影响

[目的] 观察花旗松素（Taxifolin）对宫颈癌SiHa细胞自噬,凋亡和衰老的影响。[方法] 采用0、5、10、20μmol/LTaxifolin处理宫颈癌SiHa细胞。CCK-8法检测细胞细胞增殖倍数;蛋白免疫印迹检测Beclin1、p62、LC3II/LC3I蛋白表达水平;免疫荧光检测LC3+含量;流式细胞仪检测细胞凋亡;流式分选检测线粒体膜电位;蛋白免疫印迹检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、cleavedCaspase-3、Caspase-9、cleavedCaspase-9、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、pPI3K、蛋白激酶B（AKT）、p-AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、p-mTOR蛋白表达水平,加入AKT激活剂SC79进行验证。[结果] 与Taxifolin0μmol/L组相比较,Taxifolin10、20μmol/L组细胞增殖倍数显著降低（P<0.05）,p62蛋白水平显著降低（P<0.05）,Beclin1、LC3II/LC3I蛋白水平显著升高（P<0.05）,LC3+含量显著升高（P<0.05）,凋亡率显著升高（P<0.05）,线粒体膜电位显著升高（P<0.05）,Bcl-2/Bax比值显著降低（P<0.05）,cleavedCaspase-3/Caspase-3、cleavedCaspase-9/Caspase-9比值升高（P<0.05）,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低（P<0.05）。加入PI3K/AKT信号通路激活剂SC79可逆转花旗松素对SiHa细胞凋亡、自噬及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达的影响。[结论] Taxifolin通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路的活化诱导宫颈癌SiHa细胞自噬,凋亡和衰老。     

淫羊藿对兔腰椎间盘退变模型软骨组织中BMP-2、BMP-4表达水平的影响

目的探讨淫羊藿对兔腰椎间盘退变模型软骨组织骨形态发生蛋白（BMP）-2、BMP-4表达的影响。方法取30只新西兰大白兔,分为假手术组、模型组、淫羊藿组各10只,除假手术组外均建立腰椎间盘退变模型,淫羊藿组给予10 mg·kg-1·d-1淫羊藿药液灌胃,模型组给予同等剂量0.9%氯化钠溶液灌胃,90 d收集各组腰椎软骨终板标本,观察组织形态改变情况,采用免疫组织化学法测定凋亡因子fas受体表达,采用Western blotting检测软骨终板组织中BMP-2、BMP-4蛋白表达情况。结果模型组、淫羊藿组fas受体阳性率均高于假手术组（P < 0.01）,淫羊藿组fas受体阳性率低于模型组（P < 0.01）;模型组、淫羊藿组BMP-2蛋白表达水平低于假手术组（P < 0.01）,淫羊藿组BMP-2蛋白表达水平高于模型组（P < 0.01）,各组BMP-4蛋白表达水平差异均无统计学意义（P>0.05）。结论淫羊藿可上调兔腰椎间盘退变模型软骨组织BMP-2表达,促进成骨细胞增殖、分化,但对BMP-4的调控仍无实验依据。     

Caco-2细胞单层研究淫羊藿黄酮类成分的吸收转运

目的 研究淫羊藿黄酮类成分在Caco-2细胞模型中的吸收转运。方法 采用超高压液相法测定药物浓度,计算表观渗透系数(Papp),研究淫羊藿黄酮5个主要成分淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷Ⅰ在Caco-2细胞模型中的双向转运。结果 淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的吸收渗透系数(P _AB)较小,分别为5.91×10^-7、3.22×10^-7、2.76×10^-7、4.23×10^-7 cm/s,宝藿苷Ⅰ相对较大,为1.46×10^-6 cm/s;5个化合物的分泌渗透系数(P _AB)都比其相应的吸收渗透系数要大,其中宝藿苷Ⅰ的分泌渗透系数是其吸收渗透系数的9.8倍。结论 淫羊藿黄酮类成分的肠道吸收较差,可能存在肠道转运蛋白的外排机制,其中三糖苷(朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C)的吸收要小于二糖苷(淫羊藿苷),二糖苷的吸收要小于单糖苷(宝藿苷Ⅰ)。     

淫羊藿素对大鼠软骨细胞作用的实验研究

目的：研究淫羊藿素对大鼠软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法：将细胞随机分为6组,分别予以浓度为 0,4,8,16,32,64 μmol/L的淫羊藿素(纯度为99%)处理不同时间组。药物作用于细胞后,MTT比色法检测大鼠软 骨细胞的增殖,Annexin V/PI双染色流式细胞术检测细胞的凋亡。结果：MTT 实验结果显示,4和8 μmol/L的淫羊藿素 作用于大鼠软骨细胞72 h,大鼠软骨细胞的增殖能力高于对照组(P<0.05);16,32,64 μmol/L的淫羊藿素作用于大鼠 软骨细胞72 h,大鼠软骨细胞的增殖能力低于对照组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,在药物处理24 h和48 h后, 4 μmol/L的淫羊藿素所引起的细胞凋亡率较对照组明显降低(P<0.05);8,16,32 μmol/L的淫羊藿素则会增加细胞的凋 亡率(P<0.05)。结论：淫羊藿素在低浓度(4,8 μmol/L)时能促进大鼠软骨细胞的体外增殖和抑制凋亡,而过高浓度的 淫羊藿素反会抑制细胞增殖和促进凋亡。     

紫草素通过促进ROS的产生诱导人非小细胞性肺癌A549细胞凋亡的机制

目的 研究紫草素对人非小细胞性肺癌A549细胞的抗肿瘤作用,并探讨其可能的机制。方法 不同浓度紫草素处理A549细胞和人正常肺MRC-5细胞,四氮唑盐还原（MTT）法检测细胞的活性;流式细胞术结合PI-FITC双染色测定细胞凋亡;2''7''-二氯双乙酸盐（DCFH-DA）荧光探针测定活性氧（reactive oxygen species,ROS）;Western blot法测定caspase-8、caspase-9、caspase-3、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达。结果 紫草素对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈现出时间和剂量依赖性（P<0.05,P<0.01）;当剂量≤10μmol/L时,其对MRC-5细胞的增殖没有明显的影响（P>0.05）。不同浓度紫草素处理24h后,A549细胞的凋亡率（早期凋亡+晚期凋亡）显著增加（P<0.05或P<0.01）,caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白被诱导活化,caspase抑制剂（Z-VAD-FMK）预处理则明显降低A549细胞的凋亡率（P<0.01）,并抑制以上3种蛋白的活化。另外,紫草素处理可引起A549细胞ROS的产生,且呈现出一定的剂量依赖性。ROS抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）和L-谷胱甘肽（GSH）预处理可使A549细胞的凋亡率下降（P<0.01）。同时,紫草素处理可明显下调抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL的表达（P<0.01）,NAC和GSH预处理亦能上调Bcl-2和Bcl-xL的表达（P<0.01）。结论 紫草素可明显抑制肺癌A549细胞的增殖,其作用机制与诱导A549细胞产生大量的ROS,抑制抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL表达,进而激活caspase依赖的凋亡途径有关。     

紫草素抑制PI3K/Akt/mTOR通路逆转人胃癌细胞奥沙利铂耐药

目的 探讨紫草素对人胃癌细胞奥沙利铂耐药的影响及机制。方法 以0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L 紫草素干预对数生长期人胃癌奥沙利铂耐药细胞(MGC803/L-OHP)24h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,参照半抑制浓度(IC₅₀)设定后续实验紫草素浓度。取对数生长期MGC803/L-OHP细胞,设空白对照组、奥沙利铂组、紫草素+奥沙利铂组、紫草素+奥沙利铂+IGF-1(PI₃K激活剂)组。药物干预24h后,检测细胞增殖抑制率和凋亡率,GFP-LC3质粒转染后观察自噬小体,Western blot法检测p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR、caspase-3、cleaved caspase-3、Beclin1、LC3表达。结果 紫草素对MGC803/L-OHP细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,IC₅₀值为9.58μmol/L,后续实验紫草素浓度设定为10μmol/L。与空白对照组比较,奥沙利铂组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(P<0.05),自噬小体增多。与奥沙利铂组比较,紫草素+奥沙利铂组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(P<0.05),自噬小体增多;p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR表达下调,cleaved caspase-3、Beclin1表达上调,cleaved caspase-3/caspase-3、LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ升高(P<0.05)。与紫草素+奥沙利铂组比较,紫草素+奥沙利铂+IGF-1组细胞增殖抑制率、凋亡率降低(P<0.05),自噬小体减少;p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR表达上调,cleaved caspase-3、Beclin1表达下调,cleaved caspase-3/caspase-3、LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ降低(P<0.05)。结论 紫草素可逆转人胃癌细胞奥沙利铂耐药,其机制可能与抑制PI₃K/Akt/mTOR通路而促进胃癌细胞凋亡和自噬有关。     

HIF-1α基因沉默后对SW480人结肠癌细胞生物学特性的影响

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α）基因沉默对SW480人结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法 利用脂质体法转染介导的siRNA干扰技术转染人结肠癌细胞SW480,设立干扰组：转染HIF-1α干扰序列;阴性对照组：转染无关序列;空载体组：为空白质粒;空白对照组：未转染。用Real-time PCR及Western blot、MTT比色法、流式细胞仪(FCM) 检测各组HIF-1α mRNA及蛋白的表达、SW480细胞增殖及凋亡。结果 干扰组在各时间点对HIF-1α mRNA表达的沉默效率均在80％以上,高于其他3组(P均＜0.05);与其余3组相比,干扰组HIF-1α蛋白相对表达量降低(P<0.05),增殖曲线表明其增殖受抑;凋亡率显著升高(P<0.01)。结论 HIF-1α基因沉默可促进人结肠癌细胞SW480凋亡,抑制肿瘤细胞生长。     

淫羊藿对小鼠成骨细胞增殖、功能及凋亡的影响

目的:观察淫羊藿提取液对体外培养的小鼠成骨细胞增殖、功能及凋亡的影响.方法:利用序列酶消化法从新生小鼠颅盖骨中分离和培养成骨细胞,用组织化学和免疫组化染色进行细胞鉴定.用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测淫羊藿对成骨细胞增殖的影响,通过检测成骨细胞碱性磷酸酶的活性反映淫羊藿对细胞功能的作用.建立地塞米松诱导的成骨细胞凋亡体系,并利用流式细胞仪观察淫羊藿对这一凋亡体系的影响.结果:分离和获得的大量单一多角形细胞,经碱性磷酸酶组织化学染色呈强阳性,经Ⅰ型胶原、骨桥蛋白、骨涎蛋白免疫组化染色呈阳性,证实获得的细胞为成骨细胞.淫羊藿提取液不影响成骨细胞的增殖,但可以显著提高成骨细胞碱性磷酸酶的活性,其中相当于生药1 g/L组的作用最明显.100 nmol/L和1 000 nmol/L地塞米松可以显著增加成骨细胞凋亡率,但同时加入相当于生药1 g/L的淫羊藿提取液,并不引起细胞凋亡率的明显变化.结论:淫羊藿对成骨细胞的增殖和凋亡没有明显作用,但却显著增加了成骨细胞碱性磷酸酶的活性.淫羊藿防治骨质疏松症的重要机制之一可能是促进成骨细胞的成骨功能.     

莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与Fas/FasL途径的相关性研究

目的 研究莱菔硫烷对人肝癌HepG2细胞Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响,探讨其诱导HepG2细胞凋亡过程中Fas/FasL途径的作用。方法 Caspase-8试剂盒检测莱菔硫烷对HepG2细胞Caspase-8活性的影响;流式细胞仪检测莱菔硫烷对HepG2细胞中Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响。结果 莱菔硫烷10、20、40 μmol/L作用于HepG2细胞48 h,可显著升高HepG2细胞Caspase-8活性（P＜0.01）;可使HepG2细胞 Fas、FasL蛋白的表达显著升高（P＜0.01）;莱菔硫烷20、40 μmol/L时,可显著提高Bid蛋白的表达（P＜0.01）,上述作用均呈剂量相关性。结论 激活Fas/FasL途径可能是莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的重要机制之一。     

微小RNA-382-5p靶向作用核因子蛋白90对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-382-5p （miR-382-5p）对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应（qPCR）的方法检测miR-382-5p在9例乳腺癌患者癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和平板克隆实验分别检测过表达miR-382-5p后乳腺癌细胞活力和增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。qPCR和Western blot法检测过表达miR-382-5p的乳腺癌细胞中核因子蛋白90（NF90）的表达。采用荧光素酶活性实验验证miR-382-5p对靶基因的靶向作用。结果 miR-382-5p在乳腺癌组织和细胞中低表达（P<0.05）,过表达miR-382-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞的凋亡（P<0.01）。转染miR-382-5p模拟物组NF90基因的相对表达量较miR-NC组明显降低（P<0.01）。荧光素酶活性实验显示miR-382-5p与NF90基因3''非翻译区存在靶向关系（P<0.01）。结论 miR-382-5p对乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用,对细胞的凋亡具有促进作用,其机制与靶向抑制NF90基因表达有关。     

淫羊藿女贞子配伍(4∶3)影响自然衰老大鼠脾脏及胸腺的研究

目的 探讨自然衰老大鼠胸腺及脾脏的病理和脾脏自由基损伤的增龄性改变,并研究淫羊藿女贞子单用及配伍作用的差异。方法 8月龄雄性SD大鼠,随机分为7组,饲养至相应月龄,包括9月龄组、12月龄组、15月龄组、17月龄组、淫羊藿组、女贞子组、淫羊藿女贞子组(配伍组),以3、6月龄雄性大鼠为青年对照组。各用药组饲养至15月龄后开始灌胃给予相应药物2个月后处死。剖取脾脏和胸腺。计算脏器指数,HE染色观察病理改变,检测脾脏总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、一氧化氮(nitric oxide,NO)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平。结果与青年大鼠比较,17月龄老年大鼠脾脏及胸腺出现退行性的病理改变,且脾脏出现自由基累积,抗氧化能力减弱。与17月龄大鼠比较,淫羊藿女贞子配伍组能显著改善脾脏及胸腺退行性病理改变,增加脾脏SOD水平(P<0.01)。基于多层感知(multi-layer perceptron,MLP)神经网络模型进行综合分析,证实配伍组对自然衰老大鼠脾脏及胸腺的综合作用,但该作用与淫羊藿、女贞子单用比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 淫羊藿女贞子合用能够延缓免疫器官的衰老相关的退行性的改变。