pBDNF过表达对转基因阿尔茨海默病鼠学习记忆功能的影响

目的 探讨海马注射携带脑源性神经营养因子前肽(pBDNF)基因的腺相关病毒基因整合载体(AAV-pBDNF)对阿尔茨海默病鼠(AD鼠)学习记忆功能的影响及可能机制.方法 选用18只6月龄APP/PS1转基因AD小鼠,采用抛硬币法随机分为空载体对照组、AAV-pBDNF组、AAV-pBDNF+p75NTR抗体组,每组6只...     

人源性BACE2对阿尔茨海默病小鼠海马区淀粉样斑块形成及空间学习记忆能力的影响

目的:探讨引入人源性β位点APP剪切酶2(BACE2)基因对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠脑组织海马区淀粉样斑块及空间学习记忆功能的影响.方法 20只3月龄雄性SPF级APP/PS1 dE9转基因小鼠分为AAV-BACE2组和阴性对照组,每组10只.采用侧脑室立体定位注射法感染小鼠,AAV-BACE2组和阴性对照组小鼠双...     

阿尔茨海默病有望用免疫法有效干预

阿尔茨海默病(AD)的部分特征是脑中β-amyloid(淀粉样蛋白,Aβ)斑块的异常沉积。最近用Aβ沉积转基因小鼠所作的研究表明,抗体有显著的预防或清除沉积斑块的能力,从而展示了应用抗体治疗本病乐观的前景。     

PS1/APP双转基因AD模型小鼠与Aβ1-40海马注射AD模型大鼠的组织病理学比较

目的 对PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(alzheimer disease, AD)模型小鼠进行基因鉴定和组织学分析,探讨其与老化态Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠之间的组织病理学差异.方法 对Tg小鼠和AD大鼠模型应用改进刚果红染色法、Nissl's染色结合免疫组织化学方法观察脑内Aβ沉积和星形胶质细胞的活化情况.结果 ①PS1/APP双转基因AD小鼠刚果红染色显示皮质和海马内广泛圆形Aβ沉积,周围绕以胶质细胞带,免疫组化显示GFAP阳性细胞活化呈团块聚集.②AD大鼠刚果红染色显示单侧海马齿回区有Aβ斑块状沉积,Nissl's染色显示注射针道附近海马锥体层细胞丢失,注射侧海马GFAP阳性细胞增多.结论 Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠尽管可以模拟人类AD疾病的部分特征病理改变,但是不能模拟疾病渐进性的病理学改变.PS1/APP双转基因小鼠能够模拟AD病人脑内的主要病理改变与渐进性过程,是较为理想的实验动物模型,但该模型未发现细胞丢失.     

重组腺相关病毒Ⅰ型/大鼠肿瘤坏死因子受体:Fc(rAAVⅠ/ratTNFR:Fc)的构建和在大鼠体内表达的初步研究

目的构建携带大鼠肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区和大鼠免疫球蛋白IgG1 Fc段融合基因的重组Ⅰ型腺相关病毒(rAAVⅠ/ratTNFR:Fc),并对该病毒在Lewis大鼠体内的表达和生物学活性进行初步研究,探讨以该重组腺相关病毒载体应用于类风湿关节炎基因治疗的可行性.方法首先以RT-PCR分别从大鼠脾细胞和大鼠淋巴细胞总RNA中扩增出大鼠肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区和大鼠免疫球蛋白IgG1 Fc段基因,并以重叠延伸PCR的方法将二者融合后克隆入pSNAVⅠ载体质粒进行重组病毒生产.在获得重组病毒后于Lewis大鼠肌肉注射,于不同时间ELISA测定血清ratTNFR:Fc表达,并以TNF-α细胞毒中和实验测定重组病毒表达产物的生物学活性.结果所构建的重组病毒rAAVⅠ/ratTNFR:Fc基因结构与预期一致;病毒于Lewis大鼠肌肉注射后可表达ratTNFR:Fc蛋白,含有ratTNFR:Fc蛋白的血清可以有效中和大鼠TNF-α对L929细胞的杀伤作用.结论本研究所构建的携带大鼠肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区和大鼠免疫球蛋白IgG1 Fc段融合基因的重组Ⅰ型腺相关病毒(rAAVⅠ/ratTNFR:Fc)可以用来作为阻断TNF-α的手段于大鼠类风湿关节炎模型上进行基因治疗研究.     

α7nAchR基因713T>C突变对AD小鼠认知功能和Aβ表达的影响

目的 探讨α7nAchR基因713T>C突变对阿尔茨海默病(AD)小鼠认知功能和脑内β淀粉样蛋白(Aβ)表达的影响.方法 将6个月龄敲除α7nAchR基因的APPSwe转基因小鼠(APPa7KO小鼠)20只按随机数字表法分为两组(突变型组和野生型组),每组10只,分别在小鼠侧脑室注射突变型和野生型AVV-α7nAchR cDNA,1次/月,共6次.小鼠满12个月龄时采用Morris水迷宫检测小鼠认知功能的变化,ELISA法检测小鼠Aβ40、Aβ42表达水平,免疫组织化学染色检测小鼠Aβ斑沉积情况.结果 与野生型组小鼠相比,突变型组小鼠的逃避潜伏期和初次找到平台的时间延长,海马Aβ40、Aβ42表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 α7nAchR基因713T>C突变加重了AD小鼠的认知功能损害和海马神经元Aβ表达水平.     

β－淀粉样蛋白水平的降低可治疗阿尔茨海默病

一项新的研究结果表明,可改变阿尔茨海默病小鼠模型血管中的β-淀粉样蛋白水平的药物有望成为一种潜在的治疗人类阿尔茨海默病的方法;该疗法与疫苗治疗相比更为安全。β-淀粉样蛋白是在阿尔茨海默病患者大脑中沉积的淀粉样斑块的主要成分,许多研究人员和临床医生都认为,β-淀粉样蛋白是导致阿尔茨海默病所特有的神经退行性病变和痴呆的根本原因。阿尔茨海默病是一种进行性的大脑退化性疾病,也是最常见类型的痴呆症,迄今尚无治愈的方法。目前,     

两性霉素B治疗隐球菌性脑膜脑炎的不良反应及其处理

目的:获得表达小鼠ROG(repressor of GATA 3)基因的重组腺相关病毒载体,制备表达ROG的重组腺相关病毒。方法:设计、合成引物,通过RT PCR法从CTLL 2细胞总RNA中扩增ROG基因,测序确认后,连接于pAAV MCS载体,双酶切、PCR鉴定重组病毒载体;制备高滴度重组腺相关病毒。结果:成功扩增了小鼠ROG基因,构建可表达ROG基因的重组腺相关病毒载体,并获得表达ROG的重组腺相关病毒。结论:本实验获得的小鼠ROG重组腺相关病毒,将为支气管哮喘的基因治疗研究奠定基础。     

结肠灌注重组腺相关病毒2/人凝血因子Ⅸ基因载体治疗血友病B的安全性研究

目的 分析结肠灌注重组腺相关病毒2/人凝血因子Ⅸ(rAAV2/CMV-hFIX)基因载体治疗血友病B小鼠的安全性.方法 将rAAV2/CMV-hFⅨ(剂量为1×1013v.g/kg)结肠灌注血友病B模型小鼠,分别检测抗重组腺相关病毒2(rAAV2)抗体和抗人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)抗体,并通过组织病理学、免疫组化和PCR技术分析病毒和hFⅨ的组织分布.结果 灌注后,在小鼠体内能够检测到抗rAAV2抗体和抗hFⅨ抗体;组织病理学、免疫组化和PCR技术分析结果显示灌注部位肠组织无明显病理改变,rAAV2以及hFⅨ基因仅仅在灌注的肠上皮.结论 结肠灌注重组腺相关病毒基因治疗血友病B小鼠,在所观测时间内是安全的.     

隔离应激加速SAMP8小鼠记忆功能减退

目的采川非转基斟的早老小鼠（senescence—accelerated prone mice,SAMP8）模型以观察隔离应激是否影响该模型小鼠蚰内AmyMd—p（Ap）水平及记忆功能。方法将SAMP8小鼠从断奶开始单独隔离饲养至6个月,空白对照组每3只一笼小给予隔离处理。于实验第3个月和6个月,采用条件恐惧实验、空间逆向学习法测定小鼠的学习记忆能力。行为学检测结束后,检测血浆皮质酮水平、测定海马体积、脑组织Ap含量、观察AB斑块及蛋白羰基水平。结果3个月时,应激小鼠天联和暗示记忆能力严重受损;6个月时,应激小鼠空间逆向学习能力下降明显。与空白对照组小鼠相比,血浆皮质州水平在应激小鼠组明显升高,海马体积显著缩小。然而,隔离应激6个月后并不能明显增加脑组织内可溶性AB水平,也尢Ap斑块沉积,但脑组织蛋白羰基水平显著提高。结论隔离应激可加速SAMP8小鼠记忆功能减退,可能与脑内氧化应激损伤相关、     

阿尔茨海默病大鼠模型复制的实验研究

目的:探讨阿尔茨海默病大鼠模型的复制方法.方法:大鼠腹腔注射D-半乳糖(D-Gal)造成急性衰老,同时大鼠双侧海马内缓慢一次性注射β淀粉样蛋白1-42片段(Aβ1-42)和Ibo的混合液来制作阿尔茨海默病大鼠的模型.结果:光镜观察可见模型组大鼠海马神经细胞之间有大量的老年斑(SP)沉积和神经纤维缠结(NFT)形成,大鼠行为学检测结果提示:模型组大鼠与正常组大鼠相比平均逃避潜伏期明显延长.结论:腹腔注射D-Gal,双侧海马内注射Aβ1-42和Ibo混合液,能引起大鼠学习记忆能力下降,并使神经组织中出现SP及NFT,是现在较为理想的阿尔茨海默病动物模型的复制方法.     

侧脑室注射rAAV-HIF-1a基因治疗AD模型大鼠的研究

目的 在体观察侧脑室注射缺氧诱导因子-1a(hypoxia-inducible factor-1a,HIF-1a)腺相关病毒rAAV-HIF-1a对阿尔茨海默病(Alzheime s disease,AD)模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响.方法 健康雄性SD大鼠32只随机分为4组,每组8只:①正常组(normal组):未作任何特殊处理;② AD模型组(AD组):右侧脑室注射2μ1β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ) 25-35 (10mg/m1);③假手术组(sham组):右侧脑室注射2μ1生理盐水;④AD模型+rAAV-HIF-1a 组(AD+rAAV-HIF-1a组):右侧脑室注射2μ1Aβ25-35后1周右侧脑室注射10μ1rAAV-HIF-1a(1x1012v.g./ml).以上各组动物于注射Aβ25-35或生理盐水后5周取材检测海马神经细胞HIF-1a蛋白表达及凋亡百分率.结果 Western blot 检测表明rAAV-HIF-1a组海马神经细胞HIF-1a蛋白表达明显增强(P<0.05),同时可显著降低Aβ25-35诱导海马神经细胞凋亡百分率.结论 侧脑室注射rAAV-HM-1a能够在AD模型大鼠海马高效表达HIF-1a蛋白并抑制海马神经细胞凋亡.     

基因治疗可降低阿尔茨海默病相关的蛋白水平

来自于美国Salk研究所与美国加利福尼亚大学圣迭戈分校(UCSD)的研究人员在与美国肯塔基大学的研究人员共同合作时发现,基因治疗导入一种可降解与阿尔茨海默病相关蛋白的天然分子有可能使该蛋白水平降低近50％。研究结果发表在近期出版的《神经科学》杂志上。研究证实基因治疗可提供一种有效治疗阿尔茨海默病的方法,通过体内产生的一种分子自然降低β-淀粉样蛋白的沉积;在死于阿尔茨海默病的患者脑内,可见到由β-淀粉样蛋白形成的斑块。     

APP/PS1双转基因老年性痴呆小鼠早期病理和认知行为变化

【目的】探讨APP/PS1双转基因老年性痴呆(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠早期病理和行为学变化。【方法】选取5、7月龄的APP/PS1双转基因小鼠和非转基因小鼠,采用刚果红染色法和定量方法,并结合Morris水迷宫行为学测试,对其脑内淀粉样斑块积聚与学习记忆能力的月龄变化关系进行研究。【结果】(1)7月龄的双转基因组小鼠的空间辨别学习记忆能力与非转基因组小鼠比较差异有统计学意义(P<0.05);(2)APP/PS1双转基因组小鼠在5、7月龄时海马与脑皮质均观察到明显的橘红色斑块沉积,但非转基因组小鼠海马及脑皮质均未观察到淀粉样斑块沉积。【结论】7月龄APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力下降,APP/PS1双转基因小鼠大脑皮层和海马部位淀粉样斑块的早期出现随年龄依赖性增加。     

腺相关病毒介导的高迁移率族蛋白1抗体基因转导治疗小鼠脓毒症的效果

目的 探讨腺相关病毒(AAV)介导的高迁移率族蛋白1(HMGB1)抗体基因转导对脓毒症的治疗效果.方法 60只雌性C57小鼠随机平均分为2批,每批再分为AAV-HMGB1抗体组、AAV-对照-IgG组、生理盐水组,每组10只.AAV-HMGB1抗体组小鼠左侧股直肌肌内注射60μL AAV-HMGB1抗体病毒,AAV-对...     

基于3xTg-拟AD小鼠模型的药理学研究进展

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是老年人最常见的痴呆类型,其主要的病理变化包括胞外β淀粉样蛋白（β-amyloid protein, Aβ）沉积,老年斑（SP）形成;神经元丢失、神经元细胞内出现神经元纤维丝缠结（NFT）。3xTg-AD小鼠作为首个能同时产生淀粉样斑块和神经元纤维缠结的动物模型被广泛用于AD的研究,本文旨在针对3xTg-AD小鼠相关药理学研究进展作一综述,包括3xTg-AD小鼠基本描述和以3xTg-AD小鼠为研究对象的多种药物研究的简要介绍。     

基于3xTg-拟阿尔茨海默病小鼠模型的药理学研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是老年人最常见的痴呆类型,其主要的病理变化包括胞外β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)沉积,老年斑(SP)形成;神经元丢失、神经元细胞内出现神经元纤维丝缠结(NFT)。3x Tg-AD小鼠作为首个能同时产生淀粉样斑块和神经元纤维缠结的动物模型被广泛用于AD的研究,本文旨在针对3x Tg-AD小鼠相关药理学研究进展作一综述,包括3x Tg-AD小鼠基本描述和以3x Tg-AD小鼠为研究对象的多种药物研究的简要介绍。     

融合蛋白CAC免疫对大鼠海马内注射β-淀粉样肽的作用

摘要：目的观察融合蛋白CAC（HBcAg与β-淀粉样肽基因重组的原核表达产物）免疫对大鼠海马内注射聚集态β-淀粉样
肽（Aβ）的作用。方法用融合蛋白CAC免疫SD大鼠,通过ELISA方法检测其血清中的Aβ抗体的滴度。当滴度大于1:
3000时,给大鼠海马CA1区注射聚集态Aβ1-40。2周后进行行为学测试,病理学检测。结果融合蛋白免疫5次后,大鼠血
清中Aβ抗体的滴度达到了1:3000。未经CAC免疫的大鼠,在海马内注射Aβ后,学习记忆能力显著减低,注射区可见细胞
损伤和刚果红染色的淀粉样沉积,伴有大量的胶质细胞浸润。CAC免疫大鼠的学习记忆能力有明显改善,淀粉样沉积面
积减少或几乎消失。结论融合蛋白CAC免疫可抑制海马内注射Aβ的毒性作用,促进其降解和排出。     

结肠癌基因治疗新技术

Glaxo Wellcome公司应用一种实验型基因治疗技术使植入小鼠体内的结肠癌自己毁灭,他们希望在未来18个月内开始人体试验。该公司研究人员首先将病毒注射入小鼠体内,此病毒将一个特殊基因偷带入小鼠细胞内。这个基因产生硝基还原酶。第二步给小鼠注射一种“前期药物”(prodrug)—CB 1954。这种化合物是无害的,只有当它遇到硝基还原酶时才     

姜黄素对APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠海马神经元SR-BⅠ和ABCA1表达的影响

目的：观察姜黄素对β-淀粉样前体蛋白swe基因/早老蛋白1dE9基因（APPswe/PSEN1dE9）双转基因小鼠海马神经元B类Ⅰ型清道夫受体（scavenger receptor class B typeⅠ, SR-BⅠ）和三磷酸腺苷结合盒A1（ATP-binding cassette transporter,AB－CA1）表达的影响,探讨姜黄素在阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）防治中的机制。方法：将10只6月龄的APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠随机分为对照组和姜黄素饲喂组,每组5只。姜黄素饲喂组每天饲喂500 ppm姜黄素,6个月后采用免疫组化法检测小鼠海马神经元SR-BⅠ和ABCA1表达的变化。结果：与对照组相比,姜黄素饲喂组小鼠海马神经元ABCA1表达明显增加（t=-10.805,P=0.000）,但2组小鼠海马神经元中均未见SR-BⅠ表达。结论：姜黄素能提高APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠海马神经元ABCA1的表达,而SR-BⅠ在神经元中未见表达。