肿瘤特异性凋亡基因对人淋巴瘤细胞诱导作用

目的观察肿瘤特异性凋亡基因(Apoptin gene)对人淋巴瘤细胞U937的凋亡诱导作用。方法用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937；采用台盼蓝染色法、RT—PCR及DNA凝胶电泳等方法研究其在不同时间条件下对人淋巴瘤细胞U937诱导凋亡的作用。结果Apopin基因瞬间转染的人淋巴瘤细胞U937可出现明显的细胞凋亡：而且凋亡细胞的数量与Apoptin的转染时间有关。结论Apoptin基因具有诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡的作用。     

苦参碱诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的实验研究

目的 研究苦参碱对人喉癌细胞Hep-2的生长抑制作用及凋亡机制.结果 四甲基噻唑蓝(MTT)法测定苦参碱对细胞的抑制作用,荧光显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪技术(FCM)观察细胞周期及凋亡.结果 不同浓度苦参碱对Hep-2细胞有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性;FCM检测结果 显示:S期细胞比例及凋亡率增高,G2/M期细胞比例下降,且呈剂量依赖性;形态学发现Hep-2细胞染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体形成;DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯形条带.结论 苦参碱可能是通过将人喉癌细胞周期阻滞在S期,诱导喉癌细胞凋亡,抑制其增殖,发挥其抗癌功能.     

番茄红素对人前列腺癌细胞生长的影响

目的：观察番茄红素对体外培养的人前列腺癌DU－145和LNCaP细胞存活率、细胞周期和凋亡的影响。方法：用MTT检测番茄红素对DU－145和LNCaP细胞作用的时间效应和剂量效应;流式细胞仪观察番茄红素处理人前列腺癌细胞后细胞周期以及细胞凋亡的改变。结果：番茄红素对DU－145细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率可达78％,并有剂量-效应关系。流式细胞仪分析显示,番茄红素可影响该细胞周期并引起细胞凋亡,凋亡率最高达42．42％。而对LNCaP细胞作用不明显。结论：番茄红素对人前列腺癌细胞DU－145具有直接抑制作用,其抑制机理是通过影响人前列腺癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现。本研究同时也显示番茄红对激素不依赖型细胞DU－145作用较激素依赖型细胞LNCaP敏感。     

染料木质素对人乳腺癌细胞BCaP-37凋亡的诱导作用

采用荧光显微镜观察了染料木质素诱导体外培养的人体乳腺髓样癌细胞株BCaP 37凋亡的形态学特征 ,并用流式细胞仪检测了染料木质素对乳腺癌细胞株细胞周期、凋亡率和bcl 2基因表达的影响。结果显示经丫啶橙染色后 ,荧光显微镜下可见到乳腺癌细胞出现细胞凋亡的特征性形态学改变 ;染料木质素能阻断细胞由G1 期向S期移行 ,使G0 -G1 期细胞数目明显增多 ,并能诱导细胞发生凋亡 ,呈现剂量 效应关系 ;bcl 2基因表达量与染料木质素浓度呈负相关。故染料木质素可通过抑制bcl 2蛋白表达诱导细胞凋亡     

神经酰胺诱导人结肠癌细胞凋亡的作用

目的 探讨外源性神经酰胺诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的作用。方法 采用噻唑兰(MTT)显色法、荧光显微镜、电镜观察以及通过免疫组化方法检测Fas、P53的表达情况。结果 神经酰胺对HT-29细胞的生长有明显抑制作用，并可诱导HT-29细胞产生凋亡，并随着神经酰胺浓度的增加，细胞凋亡率逐渐增加；Fas蛋白的表达随着神经酰胺浓度的增加呈现逐渐升高的趋势，p53蛋白的表达随着神经酰胺浓度的增加呈现降低的趋势。结论 神经酰胺能诱导HT-29细胞产生凋亡。     

细胞凋亡与肿瘤的发生

细胞凋亡是一种凋亡相关基因调控的自身程序化死亡,是细胞有序而协调激活凋亡刺激基因和凋亡抑制基因双向共同调控的过程.随着细胞凋亡研究的深入,人类逐渐认识到细胞凋亡与肿瘤的发生密切相关,并成为当今研究热点之一.     

氯化镉诱导293细胞凋亡的实验研究

目的 采用体外细胞培养方法观察CdCl2在不同时间、剂量作用下，诱导293细胞凋亡关系。方法 实验中选择0，12．50，25．0，50．0μmol／L共4种浓度CdCl2在体外与293细胞共育不同时间后（12h24h，48h），采用台盼蓝拒染法测定细胞存活率，观察293细胞转化，用DNA凝胶电泳及ELISA方法检测细胞凋亡。结果 12．5，25．00，50．00μmol／LCdCl2可诱导细胞亡；不同浓度CdCl2可引起细胞存活率下降，与CdCl2时间、剂量有关。结论 CdCl2在体外可诱导293细胞凋亡，与CdCl2的作用时间、作用浓度有关。     

肿瘤特异性凋亡基因诱导人宫颈癌细胞凋亡作用

目的 研究肿瘤特异性凋亡蛋白基因(apoptin)在诱导人宫颈癌细胞凋亡过程中信号转导机制.方法 用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人宫颈癌细胞(hela);采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测hela细胞的凋亡;以比色法检测胱天蛋白酶-8(caspase-8)和胱天蛋白酶-3(caspase-3)的相对活性.结果 Apoptin基因瞬间转染的hela细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术检测发现,实验组细胞凋亡率[(40.45±0.76)%]明显高于正常对照组[(3.25±0.16)%]和载体对照组[(3.55±0.12)%](P＜0.01);caspase-3的活性升高,但caspase-8活性无明显变化.结论 Apoptin基因可通过激活caspase-3诱导hela细胞凋亡.     

肿瘤特异性基因对黑色素瘤细胞凋亡诱导作用

近年来的研究发现．鸡贫血病毒(Chicken anemia virus．CAV)VP3基因编码的一种蛋白质,可能通过独立于p53作用途径，不被Bcl-2抑制的方式，诱导人肿瘤细胞或转化细胞发生凋亡，而对人正常细胞没有毒性作用，故称之为肿瘤特异性凋亡因子（Apoptin）。其独特的诱导凋亡作用，有望成为一种新的有产的抗肿瘤药物。我们在克隆和构建VP3基因真核表达载体的条件下，     

神经酰胺诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的研究

目的探讨外源性神经酰胺诱导人结肠癌HT-29细胞的凋亡作用及对Bcl-2家族蛋白基因表达的影响。方法不同浓度C2-神经酰胺处理HT-29细胞,采用Hoechest荧光染色和琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad和Bid基因表达水平。结果C2-神经酰胺诱导HT-29细胞发生核染色质断裂、出现凋亡小体等典型凋亡改变,50μmol/L神经酰胺作用12和24小时凋亡细胞率分别达到64·7%和81·3%。同时神经酰胺使Bax、Bad和Bid基因表达水平增高,使Bcl-2和Bcl-xl基因表达水平减弱,Bcl-2与Bax比值下降,呈现剂量-效应关系。结论外源性神经酰胺能通过上调或下调Bcl-2家族基因表达水平诱导人结肠癌HT-29细胞发生凋亡。     

重组人乳铁蛋白对不同卵巢癌细胞株增殖影响的实验研究

目的:探讨重组人乳铁蛋白(rhLF)对体外培养的3株人卵巢癌细胞的影响。方法:体外培养SKOV3、HO-8910、HO-8910PM,用MTT法评价rhLF对三者的生长抑制作用。结果:重组人乳铁蛋白对3株细胞均有抑制作用并呈剂量依赖关系,对SKOV3的抑制较另两株显著,不同浓度的rhLF对SKOV3增殖的抑制率达40.95%、62.03%、72.63%,实验对照组细胞无明显的抑制效果。结论:重组人乳铁蛋白可以有效抑制卵巢癌细胞的体外增殖,为其作为新的肿瘤生物治疗剂奠定了理论基础。     

维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡的研究

采用体外细胞培养的方法,观察了维生素Ｅ琥珀酸酯（ＶＥＳ）对人胃癌细胞（ＳＧＣ－７９０１）生长的影响,并通过荧光染色和流式细胞仪技术研究其对ＳＧＣ－７９０１细胞凋亡的影响。结果表明ＶＥＳ（５、１０和２０μｇ／ｍｌ）对ＳＧＣ０７９０１细胞生长有明显抑制作用;同时可诱导ＳＧＣ－７９０１细胞调亡。提示ＶＥＳ可通过诱导细胞凋亡来抑制胃癌细胞生长。     

汉坦病毒感染人胚肾细胞诱导凋亡的研究

目的探讨汉坦病毒在人胚肾细胞(HEK-293)内的增殖及诱导凋亡的机制。方法采用间接免疫荧光法检测HEK-293内汉坦病毒抗原,用westen blot方法测定汉坦病毒作用后bcl-2、bax、Cyt-c及caspase-3的表达。结果汉坦病毒感染细胞后用间接免疫荧光法可在感染的HEK-293胞浆内检测出汉坦病毒抗原;Western blot-ting结果显示,随着汉坦病毒浓度增加,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达上调,Cyt-c蛋白及caspase-3酶原活化片段表达升高。结论汉坦病毒可感染HEK-293细胞并在其体内增殖,可能通过线粒体途径诱导HEK-293细胞发生凋亡。     

内毒素、TNF-α及IL-6在诱导生长激素不敏感中的作用

目的：在受体和受体后水平探讨内毒素（LPS）、TNF－α及IL－6在诱导生长激素不敏感中的作用。方法：采用雄性SD大鼠，分别静注LPS、TNF－α及IL－6，不同时相处死大鼠。应用RT－PCR法测定肝组织IGF－1、GHR和SOCS－3mRNA的表达；应用放射免疫法测定血清GH水平；应用酶联免疫吸附法测定血清TNF－α和IL－6水平。结果：静注LPS后，各时间点血清GH水平与对照组无明显差异，血清TNF－α和IL－6迅速升高，但TNF－α很快即恢复至正常水平。肝组织IGF－1和GHR mRNA的表达分别在注射LPS后12h和8h下调最多。正常大鼠肝组织SOCS－3mRNA微弱表达，但在注射LPS后立即上调，在1h时即上升了7．84倍，线性回归分析显示IL－6水平与SOCS－3mRNA的表达呈高度正相关。静注TNF－α后，肝组织SOCS－3 mRNA的表达无明显变化，但可明显下调GHR mRNA的表达。静注IL－6后，肝组织GHR mRNA的表达无明显变化，但SOCS－3 mRNA的表达却明显上调。结论：静注LPS可以诱导生长激素的不敏感，在受体水平与GHR mRNA的表达下调有关，在受体后水平与SOCS－3mRNA的表达上调有关。体内LPS的生物活性主要是由TNF－α和IL－6介导的，TNF－α和IL－6分别在受体和受体后水平发挥作用，但TNF－α的作用具有滞后性。     

短发夹状RNA介导TNF-α基因沉默及抑制细胞凋亡的作用

目的探讨特异性的短发夹状RNA（shRNA）沉默肿瘤坏死因子-α（TNF-α）基因及抑制细胞凋亡的作用效果。方法构建针对大鼠TNF-α基因编码区的短发夹状RNA真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-TNF-αshRNA,采用电穿孔的方法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的表达TNF-αshRNA的细胞系。实验分为3组,⑴正常对照组：未转染的RK3E细胞;⑵阴性对照组：转染空载体pRNAT-U6.1的RK3E细胞系;⑶实验组：转染TNF-αshRNA的RK3E细胞系。经脂多糖（LPS）孵育12h后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测mRNA的表达。结果成功构建大鼠TNF-α基因的短发夹状RNA真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-TNF-αshRNA;经LPS刺激后,与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低（P〈0.01）,TNF-α的mRNA含量显著降低（P〈0.05）。结论针对TNF-α的特异性短发夹RNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制LPS诱导的RK3E细胞凋亡。     

甲基叔丁基醚对细胞周期及细胞凋亡的影响

目的：探讨汽油添加剂甲基叔丁基醚（ＭＴＢＥ）对细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 采用流式细胞仪检测ＭＴＢＥ对ＮＩＨ／３Ｔ３细胞周期（染毒浓度分别为１、２、４μｌ／ｍｌ,染毒时间为２４ｈ）的影响;应用结晶紫染色法,通过检测Ｈｅｌａ细胞的存活情况,了解ＭＴＢＥ对细胞凋亡的影响。结果 流式细胞仪结果显示,ＭＴＢＥ可使ＮＩＨ／３Ｔ３细胞周期发生改变。表现为Ｓ期细胞减少,而处于Ｇ２＋Ｍ期的细胞增多,提示ＭＴＢ     

Rab25基因siRNA对人卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:通过RNA干涉抑制Rab25在人卵巢上皮性癌的过表达,观察Rab25基因siRNA对卵巢癌细胞增殖及诱导凋亡的效果。方法:构建针对Rab25基因的siRNA重组质粒,稳定转染A2780细胞,通过RT-PCR检测Rab25的表达;MTT法观察细胞增殖,绘制细胞生长曲线;Hoechst33258荧光染色和透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果:成功构建Rab25的siRNA,稳定转染靶细胞后可显著降低Rab25的表达,细胞生长速度减慢、增殖能力下降;荧光显微镜和电镜观察到细胞胞质浓缩、核凝聚、核碎裂和凋亡小体形成。结论:Rab25基因的siRNA能抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,为卵巢癌基因治疗开辟新途径。     

三氧化二砷对C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对体外培养的C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 以浓度为1、3、5μmol/LAs2O3分别作用于体外培养的C6胶质瘤细胞,采用甲基噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,并用倒置显微镜及透射电子显微镜观察细胞形态学和超微结构的变化.结果 经1、3、5μmol/L As2O3作用后,MTT检测C6胶质瘤细胞活性受到抑制,且呈剂量时间依赖性;流式细胞仪检测凋亡细胞数目随着As2O3浓度的增加呈现逐渐递增的趋势;且上述药物干预者与未用药物干预者比较差异均有统计学意义(P＜0.05);透射电子显微镜检测药物干预者C6胶质瘤细胞较未用药物干预者体积明显缩小,可见少量空泡,细胞核不规则,核内染色质凝聚、边集,形成凋亡细胞的形态学改变等现象.结论 As2O3可抑制C6胶质瘤细胞增殖,诱导C6胶质瘤细胞凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the effects of arsenic trioxide(As2O3) on the cell proliferation and apoptosis of C6 glioma cells in vitro.Methods The C6 glioma cells were treated by 1,3,5 μ mol/L of As2O3 with different duration and observed under the microscope and electromicroscope.The viability of C6 glioma cells was examined by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay,and cell cycle and apoptosis were examined by flow cytometry.Results After treatment of 1,3,5 μ mol/L As2O3,C6 glioma cells were inhibited obviously with a dose- and time-dependent manner (P ＜0.05) by MTT.During flow cytometry,more increasing apoptotic cells were found in different concentration As2O3.Characteristic morphological changes were observed in As2O3 intervention by transmission election microscopy including cell shrinkage,physaliphore,nuclear condensation and apoptosis and so on.Conclusion As2O3 can inhibit the cell proliferation and induce the apoptosis of C6 glioma cells.     

薯蓣皂甙元诱导人卵巢癌细胞系HO-8910凋亡及对Survivin基因表达的影响

目的观察薯蓣皂甙元对人卵巢癌细胞系HO-8910凋亡的诱导作用,并探讨其凋亡机制与survivin基因的关系。方法通过MTT法,流式细胞仪等方法研究薯蓣皂甙元对人卵巢癌细胞系HO-8910的诱导凋亡作用,运用RT-PCR分析薯蓣皂甙元对HO-8910细胞survivin表达的影响。结果薯蓣皂甙元在浓度为12.5μg/m l至100μg/m l,作用HO-8910细胞24、48、72 h可以明显抑制HO-8910细胞增殖,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),且呈时间剂量依赖性。在浓度为25μg/m l及50μg/m l时,流式细胞仪可以检测到明显的凋亡峰,且HO-8910细胞表达Survivin基因较用药前明显下降。结论薯蓣皂甙元可以诱导HO-8910细胞凋亡,其机制可能与抑制survivin表达有关。     

大蒜油和白藜芦醇联合应用诱导胃癌细胞凋亡

目的探讨大蒜油和白黎户醇联合用约诱导胃癌MGC-803细胞凋亡作用。万法 噻唑蓝（MTT）法测药物对细胞增殖抑制；应用吉姆萨染色、流式细胞术、激光共聚焦扫描显微镜等方法观察药物作用后细胞凋亡情况。结果大蒜油和白藜芦醇联合用药6，12，24h明显抑制胃癌细胞增殖，抑制率分别为42.8％，59.8％和65．5％。用药后，吉姆萨和原位末端标记（TUNEL）染色可见明显的细胞凋亡；流式细胞术分析联合用药组早期细胞凋亡数为35．83％，大于两者单独用药之和；激光共聚焦扫描显微镜显示联合用药组含量明显低于对照组和单独用药组。结论大蒜油和白藜芦醇联合用药诱导胃癌，细胞凋亡效应比单独应用明显增强。