革皮氏海参总皂苷的安全性评价研究

目的对革皮氏海参总皂苷的使用安全性进行评价,阐明其毒性及潜在的危险。方法将健康ICR小鼠随机分为正常组和革皮氏海参总皂苷不同剂量组,每组5只。根据预实验的结果灌胃剂量分别为0.464、1、2.15和4.64 g.kg-1bw,一次性灌胃后连续观察14 d,记录各组的死亡数;另取健康ICR小鼠50只,随机分为正常对照组、阳性对照组和革皮氏海参总皂苷低、中、高剂量组,每组10只,♀♂各半,取股骨骨髓细胞涂片观察骨髓嗜多染红细胞微核率的变化;大鼠30 d喂养实验中,将Wistar大鼠随机分为4组,每组♀♂各10只,给大鼠灌胃不同浓度(分别为20、50和100mg.kg-1)的革皮氏海参总皂苷30 d后,进行体重、外周血象、血糖、血脂、肝脏功能、心肌损伤、肾脏功能等指标检测,取肝、肾、睾丸、卵巢、胃、心、肺进行了组织病理学观察。结果革皮氏海参总皂苷对♂小鼠的LD50为1.08 g.kg-1,♀小鼠LD50为1.10 g.kg-1,属低毒级;骨髓细胞微核实验结果为阴性;30 d喂养实验中,不同剂量组大鼠各项检测指标与正常组相比较差异均无显著性(P>0.05),组织病理观察发现革皮氏海参总皂苷对大鼠睾丸有轻微毒性作用。结论革皮氏海参总皂苷的急性毒性级别为低毒,未发现遗传毒性,存在一定的亚急性毒性。     

革皮氏海参总皂苷致畸和致突变作用的研究

目的 对革皮氏海参（Pearsonothuria graeffei,P. graeffei）总皂苷的生殖毒性和遗传毒性进行评价。方法 采用Ames试验法,分别检测不同浓度海参皂苷对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100和TA102回复突变菌落数的影响;健康性成熟雌、雄大鼠2:1同笼过夜,将孕鼠随机分为正常组、不同浓度海参皂苷剂量组,剂量组大鼠给予灌胃海参皂苷的剂量分别为17.2、68.8、275 mg?(kg?bw)-1,正常组灌胃生理盐水。于妊娠第20 d处死孕鼠,记录总胎数、活胎数、死胎数和吸收胎数;称子宫重、胎盘重和胎鼠重;测量胎鼠体长和尾长;检查胎数的外观、内脏和骨骼。结果 不同剂量组海参皂苷都没有引起试验菌株回变菌落数的明显增加,结果为阴性;与正常组相比,各剂量组对胚胎形成、生长发育、外观、骨骼及内脏各指标均无显著性差异。结论 在该实验剂量与条件下,海参总皂苷无致突变作用,对孕鼠生长和胚胎发育亦无致畸作用。     

IFNγ在抗肿瘤新生血管形成中潜在的作用及机制研究

目的 :探讨干扰素 γ(IFNγ)在抗肿瘤新生血管形成中可能的作用及机制。方法 :建立人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalcordvascularendothelialcell,HUVEC)的体外培养体系 ,MTT法检测IFNγ(10、10 0、10 0 0U·ml-1)对HUVEC生长的直接影响 ;应用流式细胞术观察IFNγ对HUVEC凋亡和细胞周期的影响 ;半定量逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)检测IFNγ对HUVEC凋亡相关基因Bcl 2和BaxmRNA的表达的影响。酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测缺氧状态下IFNγ(30、30 0、30 0 0U·ml-1)对人肺癌PG细胞分泌到培养上清中VEGF的影响。结果 :IFNγ(10、10 0、10 0 0U·ml-1)可抑制体外培养的HUVEC的生长 (P <0 .0 1) ;流式细胞术检测IFNγ(10、10 0、10 0 0U·ml-1)作用的HUVEC ,无亚二倍体峰出现 ,但细胞周期分析显示 ,IFNγ各给药组均可减少G2 M期的细胞比例 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。IFNγ(10 0、10 0 0U·ml-1)对抑凋亡基因Bcl 2和促凋亡基因Bax的mRNA的表达与对照组相比无显著的统计学意义 (P >0 .0 5 )。缺氧状态下IFNγ 30 0 0U·ml-1可抑制人肺癌PG细胞培养上清中VEGF的含量 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :IFNγ可能通过直接抑制肿瘤血管内皮细胞的生长或间接下调肿瘤血管生成刺激因子释放的机制 ,     

岩藻糖基化海参硫酸软骨素抑制肿瘤血管新生作用的研究

目的从美国肉参(Isostichopus badionotus)中分离纯化岩藻糖基化海参硫酸软骨素(sea cucumber chondroitin sulfate,SC-CHS),体外研究其对肿瘤诱导血管生成的抑制作用。方法采用MTT法检测SC-CHS对95D细胞增殖活性的影响;小管形成实验研究SC-CHS对脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成能力的抑制作用;采用鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管模型,研究其对血管生成的影响;通过RT-PCR和WesternBlot法检测其对肿瘤诱导血管生成相关因子缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,Hif-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA和蛋白的表达。结果结果显示SC-CHS能显著抑制95D细胞的增殖,能抑制HUVEC的小管形成作用和CAM血管新生。RT-PCR和Western Blot检测结果表明,高剂量SC-CHS能显著降低95D细胞中Hif-1α和VEGF mRNA的表达,减少VEGF蛋白的合成。结论SC-CHS体外能显著抑制肿瘤血管生成,这可能是通过影响肿瘤细胞中VEGF的合成发挥作用。     

钩吻总碱抑制人结肠癌细胞增殖及血管新生的作用研究

目的:探讨钩吻总碱(TAG)抑制人结肠癌细胞增殖及血管新生的作用。方法:体外培养人结肠癌细胞HT-29和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),经低、中、高剂量TAG(40、80、120μg/m L)干预后,使用倒置荧光显微镜观察两种细胞的形态,采用CCK-8法检测两种细胞的存活率,采用流式细胞术检测HT-29细胞的周期变化情况,采用划痕试验、Transwell侵袭试验和管腔形成试验检测HUVEC的迁移率、侵袭率和管腔数量。结果:与空白组比较,TAG各剂量组HT-29细胞和HUVEC均有不同程度的减少,并可见死亡细胞,两者存活率均显著降低(P<0.05或P<0.01);TAG各剂量组G2/M期HT-29细胞比例以及中剂量组G0/G1期细胞比例均显著升高,而TAG各剂量组S期细胞比例以及高剂量组G0/G1期细胞比例均显著降低(P<0.05或P<0.01);TAG各剂量组HUVEC的存活率、迁移率、侵袭率均显著降低,4～24 h各时间点管腔数量均显著减少(P<0.01)。结论:TAG可抑制人结肠癌HT-29细胞和HUVEC的增殖,可改变HT-29细胞的周期,并抑制HU...     

七叶皂苷钠致静脉损伤作用细胞水平机制研究

目的了解七叶皂苷钠（Esc Na）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）活性及细胞周期分布的影响。方法在体外原代培养的HUVEC中加入不同浓度Esc Na及肿瘤坏死因子（TNF α）,孵育24 h后,采用MTT和中性红法对HUVEC活性进行定量分析,流式细胞技术对细胞周期进行分析。结果MTT法和中性红法显示Esc Na的半数抑制浓度（IC50）为（42.89±3.42）和（44.19±3.58） μg&#8226;mL 1。10～80 μg&#8226;mL 1浓度范围内的Esc Na可不同程度地抑制HUVEC生长,呈浓度依赖性。细胞周期分析结果也显示,Esc Na可阻抑G0/G1期细胞向S期的转变,抑制HUVEC增殖。结论七叶皂苷钠通过降低HUVEC活性,抑制细胞增殖,从而对HUVEC造成损伤。     

丹参酮ⅡA磺酸钠体内外促血管新生作用的研究

目的通过体外人脐静脉内皮细胞和海绵植入小鼠模型对丹参酮Ⅱ_A磺酸钠的促进血管新生作用进行研究。方法体外采用人脐静脉内皮细胞HUVEC-12诱导模型,利用细胞迁移及小管生成实验评价丹参酮Ⅱ_A磺酸钠促血管新生的作用影响;体内实验采用海绵植入小鼠模型,通过QPCR测定不同剂量丹参酮Ⅱ_A磺酸钠对VEGF-A mRNA表达的影响,采用免疫荧光染色法观察不同剂量丹参酮Ⅱ_A磺酸钠对微血管生成及VEGF蛋白释放的影响。结果丹参酮ⅡA磺酸钠40、80μg/m L剂量组的迁移率显著高于对照组(P0.05、0.01);丹参酮Ⅱ_A磺酸钠与形成的结节数目呈现一定剂量相关性,且丹参酮Ⅱ_A磺酸钠80μg/mL剂量组的小管生成节结数显著高于对照组(P0.05)。丹参酮ⅡA磺酸钠12、24mg剂量组VEGF-Am RNA相对表达值显著高于对照组(P0.01),而丹参酮Ⅱ_A磺酸钠12mg剂量组作用最强,优于阳性药丹参多酚酸盐。丹参酮ⅡA磺酸钠12、16、24mg剂量组的VEGF蛋白表达量明显优于对照组(P0.05、0.01),丹参酮Ⅱ_A磺酸钠12mg剂量组,VEGF蛋白表达量最高,荧光面积最大,优于阳性药丹参多酚酸盐。结论丹参酮Ⅱ_A磺酸钠具有促血管新生作用,其作用机制可能通过上调VEGF-A mRNA的表达来影响。     

栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的研究栀子苷对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(Hy-drogen peroxide,H2O2)建立体外培养的HUVEC细胞氧化应激损伤模型。将细胞分为正常对照组、H2O2氧化损伤组、H2O2加栀子苷低、中、高剂量组,其中后3组给予栀子苷预培养24h后加入400μmol.L-1H2O2,然后继续培养12h。MTT法检测细胞存活率;检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平和培养液中一氧化氮(NO)水平;检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变。结果栀子苷能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,提高细胞内SOD、GSH-Px、NOS活性,使培养液中NO含量增加,降低细胞内ROS水平,减少H2O2诱导的细胞凋亡率,恢复血管内皮细胞增殖。结论栀子苷具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻血管内皮细胞的氧化损伤。     

乙醇诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对ICAM-1蛋白表达影响的研究

目的:研究乙醇体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡,及对细胞间黏附分子(ICAM-1)蛋白表达的影响。方法:以不同浓度乙醇(50、100和200mmol/L)作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞24h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法检测ICAM-1蛋白表达。结果:乙醇能抑制内皮细胞活力,促进细胞凋亡,增加ICAM-1表达,并呈浓度依赖性。结论:乙醇能诱导内皮细胞损伤,其机制可能与促进细胞凋亡、影响ICAM-1蛋白表达有关。     

人参皂甙Rg1对抗多巴胺诱导的PC12细胞凋亡

目的:探讨外源性多巴胺诱导PC12细胞凋亡以及人参皂甙Rg1保护作用的分子机制。方法:流式细胞仪定量测定PC12细胞的凋亡和Bcl-2、Bax蛋白的表达;电子显微镜观察PC12细胞的形态;凝胶电泳评价DNA的断裂;荧光分光光度计法测定caspase-3的活力;半定量RT-PCR分析bcl-2和bax mRNA的表达。结果:多巴胺(浓度为0.15、0.30、0.45和0.60mmol/L)诱导PC12细胞凋亡,各剂量组细胞凋亡率分别从对照组1.1％±0.4％增加到41％±3％,46.4％±2.7％,53％±3％和64.5％±2.7％;人参皂甙Rg1 10μmol/L预处理24h后,较多巴胺0.45mmol/L单独处理时,PC12细胞的凋亡率和caspase-3的活力分别从53％±3％和683±8(平均荧光强度)下降到1.9％±0.6％和325±5,Bcl-2蛋白阳性率从14.3％±1.1％增加到25.9％±1.6％,Bax蛋白阳性率从48％±3％下降到35％±3％。结论:人参皂甙Rg1通过抑制cas-pase-3的激活并调节Bcl-2和Bax两者间蛋白的比值对抗多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用。     

肿瘤血管生成及抗血管生成的临床应用

介绍了肿瘤血管生成的过程、特点、调控因素及其与肿瘤转移的关系，简要综述了抗血管生成的临床应用。     

人参皂苷Rg1对抗多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

通过测定细胞的凋亡率 ,内源性NO的水平和iNOSmRNA的表达及半胱天冬酶 3的活性 ,探讨人参皂苷Rg1对抗多巴胺对PC12细胞凋亡诱导作用的可能机理 .结果表明多巴胺 (0 .15～ 0 .60mmol·L- 1)可诱导PC12细胞凋亡 ,预先经过 10 μmol·L- 1Rg 1处理后 ,PC12细胞的凋亡率显著下降 (P <0 .0 0 1) ,同时NO2- 水平和iNOSmRNA表达水平及半胱天冬酶 3活力较单纯多巴胺处理组明显降低(P <0 .0 0 1) .结果提示 ,Rg1减少细胞内源性NO的生成及抑制半胱天冬酶 3的活化可能是Rg1对抗多巴胺诱导PC12细胞凋亡的重要机理 .     

Astragalus saponins induce apoptosis in human gastric adenocarcinoma cells via a caspase 3-dependent pathway

Objective Many Asian countries including China,Japan and Korea have very high incidence of gastric cancer,in which about 42% cases occur in mainland China.The precise targets and underlying mechanisms are not well understood.Our previous study revealed that Astragalus saponins(AST)showed promising effects on the suppression of the growth of HT-29 human colon cancer cells and tumor xenograft by inhibiting cell proliferation and promoting apoptosis.In the present study,we investigated the anti-carcinogenic effects of AST in AGS human gastric adenocarcinoma cells and attempted to elucidate the underlying mechanisms.Methods Growth inhibition of AGS cells was determined by using the MTT viability test.Involvement of different members of the apoptotic cascade and other growth-related factors was explored by assessment of their protein expression using Western blot analysis.Distribution of cells in different phases of the cell cycle was assessed by flow cytometry.Results Our data indicate that AST induced growth-inhibition and apoptosis in AGS cells by activating caspase 3 with subsequent poly(ADP-ribose)polymerase(PARP)cleavage.Cell cycle arrest at the G2/M phase had been observed in AST-treated AGS cells.The anti-proliferative effect of AST was associated with modulation of cyclin B1 and p21.We then demonstrate that AST could downregulate the expression of VEGF,of which interaction with its receptors is important for angiogenesis during tumor formation.Conclusions Our findings suggest that AST is an effective agent in gastric cancer treatment by inducing cell cycle arrest and apoptosis,of which anti-angiogenesis could be an alternative mode of action.     

王不留行不同提取部位抑制新生血管作用的研究

目的比较不同工艺路线得到的王不留行提取部位体外抑制新生血管作用。方法采用系统溶剂萃取法和按目标萃取将王不留行水提物及醇提物分别进行部位分离,得到有机萃取相,经旋蒸、冷冻干燥得冻干粉末。SRB法测定药物对人微血管内皮HMEC-1细胞增殖的影响及IC50大小;划线法测定细胞迁移率;通过测定细胞外液LDH的释放监测并比较不同提取部位的细胞毒性。结果 A4,A7,B4,B7 4个组分IC50分别为6.44±0.2,12.78±0.4,7.25±0.07及10.35±0.21;药效依次为A4〉B4〉B7〉A7;细胞迁移距离为B4〈A4〈A7〈B7;细胞培养液LDH活性（U.L-1）分别为758.1±19.73,1006.54±129.41,1111.11±36.97及617.45,4-75.93。结论王不留行醇提取物按系统溶剂萃取法得到的正丁醇部位是相对活性好毒性小的有效部位。     

白藜芦醇抗肺癌作用及其机制的研究进展

白藜芦醇是天然化合物,属于非黄酮类的多酚化合物,存在于多种植物中,表现出良好的抗肺癌作用。白藜芦醇可以通过阻滞细胞周期、调控基因表达、抑制无氧糖酵解和干扰相关信号通路转导等方面抑制肿瘤细胞增殖;通过下调金属蛋白酶（ADAM）、基质金属蛋白酶（MMP）等抑制肿瘤细胞侵袭和迁移、通过下调血管内皮生成因子（VEGF）抗肿瘤血管生成、通过激活死亡受体途径和线粒体受体途径诱导肿瘤细胞凋亡和自噬、通过抑制耐药基因逆转靶向药物耐药和增强化疗药物敏感性而发挥抗肺癌活性。系统梳理了国内外有关白藜芦醇抗肺癌药理作用及其机制的研究进展,为抗肺癌新药研发提供参考。     

人参皂苷Rg1对小鼠1—甲基—4—苯基—1，2，3，6—四氢吡啶诱导的黑质神经元凋亡的保护作用

目的:探讨人参皂苷Rg1对抗1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的C57BL小鼠黑质神经元凋亡的可能机制.方法:MPTP(30 mg·kg~(-1)·d~(-1)×5 d)腹腔注射制备C57BL小鼠帕金森病模型,同时预防组分别以不同剂量人参皂苷Rg1(2.5、5.0、10.0 mg·kg~(-1)·d~(-1)×8 d)于MPTP注射前预先腹腔注射小鼠.用Nissl染色和TH组化染色观察黑质损害情况,TUNEL染色检测细胞凋亡,同时运用免疫组织化学方法检测caspase-3的活性片段以及Bcl-2、Bcl-xl、Bax、iNOS和 nNOS的表达情况.结果:人参皂苷Rg1(5.0和10.0 mg/kg)预处理能使黑质致密带Nissl阳性神经元和TH阳性神经元的脱失减少,同时降低了TUNEL阳性率,并伴有Bcl-2和Bcl-xl表达增加,Bax和iNOS表达减少以及抑制caspase-3的激活.结论:人参皂苷Rg1预处理对MPTP诱导的小鼠黑质神经元凋亡有明显的保护作用,其作用可能是通过降低iNOS和Bax蛋白表达,增加Bcl-2和Bcl-xl蛋白表达以及抑制caspase-3的激活来实现的.     

地非三唑抑制血管新生作用的研究

OBJECTIVE To investigate the effects of antiangiogenesis of DL111-IT in vivo and in vitro.METHODS To detect the inhibition ratio of DL111-IT on endothelial cells with the method of MTT.The different concentrations of DL111-IT were injected onto the 6th da     

A Novel Peptide from Polypedates megacephalus Promotes Wound Healing in Mice

Amphibian skin contains wound-healing peptides, antimicrobial peptides, and insulin-releasing peptides, which give their skin a strong regeneration ability to adapt to a complex and harsh living environment. In the current research, a novel wound-healing promoting peptide, PM-7, was identified from the skin secretions of Polypedates megacephalus, which has an amino acid sequence of FLNWRRILFLKVVR and shares no structural similarity with any peptides described before. It displays the activity of promoting wound healing in mice. Moreover, PM-7 exhibits the function of enhancing proliferation and migration in HUVEC and HSF cells by affecting the MAPK signaling pathway. Considering its favorable traits as a novel peptide that significantly promotes wound healing, PM-7 can be a potential candidate in the development of novel wound-repairing drugs.