间歇性高糖对NRK-52E细胞抗氧化能力作用研究

目的探讨间歇性高糖抑制大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E抗氧化能力。方法实验开始72 h后,Western blot检测空白组、正常葡萄糖组(5 mmol/L葡萄糖)、高糖干预组(25 nmol/L葡萄糖)、间歇性高糖干预组(5 mmol/L葡萄糖与25 mmol/L葡萄糖交替)中氧化物歧化酶-1(SOD-1)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)在NRK-52E细胞表达。一氧化氮合酶(eNOS)试剂盒应用液闪仪测定3[H]的放射强度,活性氧(ROS)含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果高浓度葡萄糖及间歇性高糖均下调SOD-1及NADPH表达,而提高ROS含量,间歇性高糖作用更显著。间歇性高糖eNOS含量低于持续性高糖组。结论间歇性高糖抑制肾小管导管上皮细胞抗氧化能力显著。     

大鼠肢体缺血再灌注后肝细胞损伤及牛磺酸的保护效应

目的观察大鼠肢体缺血再灌注后肝脏的损伤性变化,以及牛磺酸(taurine)对肝脏损伤性变化的影响,探讨牛磺酸对大鼠肢体缺血再灌注后肝脏功能保护作用及可能机制。方法实验用W istar大鼠30只,随机分为对照(control)组,缺血再灌注(ischem ia reperfusion,IR)组和牛磺酸 缺血再灌注(taurine Ischem ia reperfusion,TR)组(n=10)。分别测定各组动物肝组织黄嘌呤氧化酶(XOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、髓过氧化物酶(MPO)、Ca2 含量和肝细胞线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH),Na -K -ATPase,Ca2 -Mg2 -ATPase,Ca2 含量的变化。结果发现大鼠肢体缺血再灌注后肝脏功能明显受损,牛磺酸减轻了由于肢体缺血再灌注引起的肝细胞和线粒体的钙超载及过氧化等损伤。结论牛磺酸可以避免或减轻大鼠肢体缺血再灌注继发的肝脏损伤。     

大鼠肢体缺血再灌注后肝细胞损伤及牛磺酸的保护效应

目的观察大鼠肢体缺血再灌注后肝脏的损伤性变化,以及牛磺酸(taurine)对肝脏损伤性变化的影响,探讨牛磺酸对大鼠肢体缺血再灌注后肝脏功能保护作用及可能机制。方法实验用W istar大鼠30只,随机分为对照(control)组,缺血再灌注(ischem ia reperfusion,IR)组和牛磺酸+缺血再灌注(taurine+Ischem ia reperfusion,TR)组(n=10)。分别测定各组动物肝组织黄嘌呤氧化酶(XOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、髓过氧化物酶(MPO)、Ca²⁺含量和肝细胞线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH),Na⁺-K⁺-ATPase,Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase,Ca²⁺含量的变化。结果发现大鼠肢体缺血再灌注后肝脏功能明显受损,牛磺酸减轻了由于肢体缺血再灌注引起的肝细胞和线粒体的钙超载及过氧化等损伤。结论牛磺酸可以避免或减轻大鼠肢体缺血再灌注继发的肝脏损伤。     

山药对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 研究山药灌胃预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用和促进肾脏再生修复的作用.方法 3～4周龄雄性大鼠60只随机分正常对照(A)组(n=6)、假手术对照(B)组(n=6)、缺血再灌注损伤山药灌胃预处理(C)组(n=24)及缺血再灌注损伤无菌生理盐水灌胃对照(D)组(n=24).C、D组在缺血再灌注损伤前灌胃5 d,在损伤后2、12、24、48 h分别采集6只鼠的血并收获肾脏标本.4组标本进行尿素氮、肌酐、丙二醛测定,常规病理切片、细胞凋亡、免疫组化检测增殖细胞抗核抗体(PCNA)、激光共聚焦免疫荧光检测5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、同源盒基因2(Pax-2).结果 C组尿素氮、肌酐、丙二醛明显低于D组;缺血再灌注损伤2h可测到肾小管细胞凋亡,12 h达高峰;C组凋亡指数明显低于D组;C组PCNA阳性肾小管细胞明显高于D组;C组检测到BrdU、Pax-2双标记阳性细胞;常规病理形态4组有其特有表现.结论 山药灌胃预处理能减轻肾脏缺血再灌注损伤大鼠的多项检测指标,促进受损肾小管的再生修复和重建,有效保护了肾功能.肾脏缺血再灌注损伤后测到的BrdU、Pax-2双标记阳性细胞提示肾组织内的祖细胞参与了肾脏的修复再生.     

银杏叶提取物对肾缺血再灌注损伤的保护作用

肾缺血再灌注(Ischemic reperfusion,I/R)损伤是临床上常见的病理现象,在肾脏手术、肾移植和体外震波碎石等过程中,均可发生不同程度的再灌注损伤,它是急性肾衰最常见的原因.如何减轻和预防肾I/R损伤,是肾损伤保护的重要研究课题.本研究采用夹闭大鼠双侧肾蒂造成肾I/R损伤模型,观察银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,EGb)对肾I/R损伤的保护作用,并对其机制进行初步探讨.     

甘氨酰谷氨酰胺对缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用及机制研究

目的观察甘氨酰谷氨酰胺(Gly-Gln)对缺氧/复氧(H/R)损伤后心肌细胞凋亡、线粒体膜电位及心肌酶释放的影响,探讨Gly-Gln对心肌H/R损伤的防治作用及机制。方法利用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞建立体外心肌H/R模型,实验分为Control组,H/R组,H/R+Gly-Gln(1,4,16 mmol·L-1)组,Gly-Gln(1,4,16 mmol·L-1)组。采用MTT法测定各组心肌细胞存活率;并检测各组培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)含量;以Annexin V联合PI染色法检测各组心肌细胞凋亡率;以JC-1为荧光分子探针检测各组心肌细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化。结果 H/R组心肌细胞活力低于对照组(P<0.01),而培养液中心肌细胞释出的LDH、CK含量则高于对照组(P<0.01);H/R+Gly-Gln组心肌细胞活力高于H/R组(P<0.01),而培养液中LDH、CK含量则低于H/R组(P<0.05),其效应在一定浓度范围内呈剂量依赖关系。H/R组心肌细胞凋亡率升高,线粒体膜电位明显低于对照组(P<0.01);H/R+Gly-Gln组心肌细胞凋亡率较H/R组降低(P<0.05),且心肌细胞线粒体膜电位升高,与H/R组比较差异有显著性(P<0.01)。结论 Gly-Gln可对抗H/R损伤,发挥细胞保护作用,维持心肌细胞活力,减少心肌细胞H/R损伤所致心肌酶(LDH、CK)释放,并可抑制心肌细胞凋亡,具体机制可能与其稳定心肌细胞线粒体膜电位等有关。     

清肾颗粒对大鼠NRK-52E细胞转分化模型miR-23b和PINK1/Parkin通路的影响

目的 探讨TGF-β1诱导大鼠NRK-52E细胞转分化模型中miR-23b对PINK1/Parkin通路的靶向调节机制,并阐明清肾颗粒含药血清对NRK-52E细胞转分化的干预机理。方法 采用超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱法对清肾颗粒进行全指纹图谱分析。构建TGF-β1诱导大鼠NRK-52E细胞转分化模型,转染siRNA后分为模拟物空载对照组、miR-23b-5p模拟物组、抑制剂空载对照组、miR-23b-5p抑制剂组,观察miR-23b-5p对PINK1表达量的影响。再将NRK-52E细胞分组为正常组、TGF-β1组、清肾颗粒组、miR-23b-mimic-NC组、miR-23b-mimic组、miR-23b-mimic+清肾颗粒组,Western blot法检测NRK-52E细胞中Pink1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin-1、P62、α-SMA蛋白表达,RT-qPCR法检测NRK-52E细胞中miR-23b-5p、Pink1、Parkin、Beclin-1、α-SMA mRNA的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-23b-5p与PINK1的靶向关系。结果 UPLC指纹...     

牛磺酸对大鼠肢体缺血-再灌注后肝脏TNF-α、Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的 观察肢体缺血-再灌注(LI-R)后大鼠肝脏损伤中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3表达及细胞凋亡的发生和牛磺酸预处理后对其的影响.方法 Wistar 大鼠建立LI-R损伤模型后,随机分为对照组、LI-R组和牛磺酸+L1-R(TR)组.测定各组动物肝组织丙二醛(MDA)、髓过氧物酶(MPO)、肝组织钙含量、TNF-α水平;免疫组化法观察Caspase 3蛋白表达;利用琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯状条带;TUNEL法检测各组肝脏细胞的凋亡情况.结果 与对照组比较,LI-R组和TR组大鼠肝脏各损伤性指标、TNF-α水平及Caspase 3蛋白表达增高,肝脏细胞DNA琼脂糖凝胶电泳可见梯状条带,TUNEL染色结果显示凋亡百分率明显升高(P＜0.05).TR组上述各项指标较L1-R组显著降低(P＜0.05),肝脏细胞DNA琼脂糖凝胶电泳显示梯状条带不明显.结论 细胞凋亡参与了LI-R肝损伤的发生;牛磺酸预处理可降低TNF-α、Caspase-3表达,从而减少大鼠LI-R后肝脏细胞凋亡的发生.     

Omi/HtrA2在大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧模型凋亡中的作用

目的研究在大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡模型中Omi/HtrA2的表达,并观察抑制Omi/HtrA2表达后细胞凋亡的变化。方法用脂质体介导的基因转染方法将Omi/HtrA2的特异性shRNA表达载体251(Pgenesil-1/Omi/HtrA1 shRNA1)和252(Pgenesil-1/Omi/HtrA2 shRNA2)及阴性质粒HK(Pgenesil-1/HK)分别转入NRK-52E。应用Western印迹方法检测Omi/HtrA2及caspase3的表达,用DNA ladder检测各组细胞发生凋亡的情况。结果带有绿色荧光的NRK-52E即为成功转染细胞;在Western blot结果显示:对照组在缺氧复氧后Omi/HtrA2表达较正常组明显增强,而在转251和252组Omi/HtrA2表达较对照组减弱(P<0.05),但251和252两组间差异无统计学意义。对照组caspase3的表达明显较正常组增强(P<0.05)。且在Omi/HtrA2被抑制的两组caspase3的明显较对照组(P<0.05)。DNA ladder也显示:在对照组出现典型的DNA条带。251和252组条带减弱。结论通过RNA干扰技术成功抑制了Omi/HtrA2缺氧/复氧模型中Omi/HtrA2的表达,从而抑制了凋亡的发生。     

丹参对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用机制的研究

目的：探讨丹参对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法：雄性Wistar大鼠随机分为4组,假手术组,模型组（肾脏缺血再灌注损伤）,治疗1组（肾脏缺血再灌注损伤前24h给予药物）,治疗2组（肾脏缺血再灌注损伤后12h给予药物）。双侧肾动脉夹闭22min,制作动物模型;比色法测定血清肌酐和血清尿素氮;Westernblotting检测肾脏组织中,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（caspase-3）的蛋白表达;TUNEL法检测肾脏上皮细胞凋亡。结果：模型组与假手术组比较,大鼠肾脏功能明显减退（P〈0.05）;肾脏组织中,caspase-3蛋白质表达显著增加（P〈0.05）,大量肾小管上皮细胞凋亡（P〈0.05）。再灌注前24h给予药物,能够显著改善肾脏功能（P〈0.05）,并且显著下调caspase-3的蛋白表达（P〈0.05）,减轻肾脏上皮细胞凋亡（P〈0.05）,再灌注后12h给药,不能改善肾脏功能,也不能显著下调caspase-3的蛋白表达（P〉0.05）。结论：再灌注前给予丹参,能够抑制肾脏缺血再灌注损伤诱导的肾脏上皮细胞凋亡,对肾脏缺血再灌注损伤具有保护作用。     

牛磺酸对乙醇性胃粘膜损伤的保护机制初探

目的为了探讨牛磺酸抗乙醇性胃粘膜损伤的作用机制。方法采用大鼠实验性乙醇胃粘膜损伤模型，测定胃粘膜局部一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）、内皮素（ＥＴ）和部分胃肠激素含量。结果牛磺酸可明显减轻胃粘膜损伤，抑制ＥＴ释放，增加ＮＯＳ活性及生长抑素（ＳＳ）和血管活性肠肽（ＶＩＰ）的含量。结论牛磺酸可明显减轻实验性乙醇胃粘膜损伤，其可能机制为调节胃粘膜局部ＥＴ、ＮＯＳ、ＳＳ、ＶＩＰ的活性和含量。     

多柔比星对兔心脏的损伤和牛磺酸的保护作用

为了研究多柔比星 (Dox)心脏损伤机理和牛磺酸 (Tau)的保护作用 ,将实验兔随机分成Dox组 ,对照组 (即生理盐水组 ,NS组 )和Dox +Tau组 .兔均于第12周 ,测量心输出量 (CO) ,颈动脉收缩压 (SP)和舒张压 (DP) ,颈动脉平均压 (MAP) ,左心室收缩压(LVSP)和左心室舒张末压 (LVEDP) .取左心室心肌细胞检测细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 +]i) ;用血清检测一氧化氮 (NO)的含量 .结果表明 ,Dox组CO ,SP ,DP ,MAP ,LVSP均明显低于NS组 ,LVEDP显著高于NS组 ,Dox +Tau组SP ,DP ,MAP ,LVSP均显著低于NS组 ,LVEDP明显低于Dox组 ,但明显高于NS组 .Dox组和Dox +Tau组血清NO含量均明显高于NS组 .Dox组左心室心肌细胞 [Ca2 +]i 明显高于NS组 ,Dox +Tau组心肌细胞 [Ca2 +]i 明显低于Dox组 .本文提示 ,Tau对Dox损伤心脏具有一定的保护作用     

油酰乙醇胺在小鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用及机制

目的研究油酰乙醇胺(OEA)在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血90 min后再灌注。应用HPLC-MS/MS方法测定脑组织内OEA的含量。给予OEA(5,10,40 mg/kg,ig)或OEA水解酶抑制剂URB597(1 mg/kg,ig),观察其对小鼠急性脑缺血再灌注损伤的影响。测定脑组织丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)的活性。观察MK886对OEA抗脂质过氧化损伤的影响。结果脑缺血再灌注后6 h,损伤侧脑内OEA含量开始升高,再灌注后24 h升高最明显。脑缺血再灌注后给予OEA(40 mg/kg)或URB597(1 mg/kg)可减少神经功能缺失评分,减小脑梗死体积,减轻脑水肿程度。OEA可减少脑内MDA含量,增加抗氧化酶SOD的活性。OEA这一抗氧化作用可被MK886所取消。结论脑缺血再灌注可增加脑内OEA的含量,OEA通过激动PPARα,减轻脂质过氧化损伤发挥抗脑缺血再灌注损伤作用。     

白藜芦醇预处理对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的:观察白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法:45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌组及白藜芦醇预处理组,结扎左冠状动脉制作心肌缺血再灌注模型,比较各组左室最大收缩压(LVSP)、左室等容收缩/舒张期压力上升最大速率(LVdP/dtmax),心肌一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量变化及心肌梗死范围.结果:白藜芦醇预处理组LVSP、LVdP/dtmax较缺血再灌组显著升高,心肌NO含量显著升高、MDA含量则显著降低,心肌梗死范围明显减小.结论:白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤有明显保护作用,其机制与白藜芦醇抗氧化、清除自由基及增加NO合成有关.     

Role of fumonisin B1 on DNA methylation changes in rat kidney and liver cells

Abstract

Context: Fumonisin B1 (FB1) is a mycotoxin produced by Fusarium verticillioides (Sacc.) Nirenberg (Nectriaceae) mold that contaminates maize and other agricultural products. Although the effects of FB1 on sphingolipid metabolism are clear, little is known about early molecular changes associated with FB1 carcinogenicity.

Objective: Alteration on DNA methylation, as an early event in non-genotoxic carcinogenesis, may play an important role in the mechanism of FB1 toxiciy.

Materials and methods: Dose-related effects of FB1 (1–50?µM for 24?h) on global DNA methylation by using high-performance liquid chromatography with UV-diode array detection (HPLC-UV/DAD) and CpG promoter methylation by methylation-specific PCR (MSP) were performed in rat liver (Clone 9) and rat kidney (NRK-52E) epithelial cells.

Results: Cell viability reduction is 39% and 34% by the XTT test and LDH release in the growth medium is 32% and 26% at 200?µM of FB1 treatment in Clone 9 and NRK-52E cells, respectively. No significant dose-related effects of FB1 on global DNA methylation which ranged from 4 to 5% were observed in both cells compared with controls. Promoter regions of c-myc gene were methylated (>33%) at 10 and 50?µM of FB1 treatment in Clone 9 cells while it was unmethylated in NRK-52E cells. Promoter regions of p15 gene were unmethylated while VHL gene were found to be methylated (>33%) at 10, 25, and 50?µM and 10 and 50?µM of FB1 treatment in Clone 9 and NRK-52E cells, respectively.

Discussion and conclusion: Alteration in DNA methylation might play an important role in the toxicity of FB1 in risk assessment process.     

Adipose‐derived mesenchymal stem cells therapy for acute kidney injury induced by ischemia‐reperfusion in a rat model

Acute kidney injury (AKI) represents a group of complicated syndromes with a high mortality rate. The administration of adipose‐derived mesenchymal stem cells (ADMSCs) has been tested as a possible treatment method for AKI. The long‐term evaluation of AKI induced by ischemia/reperfusion (IR) and the probable renal protection of ADMSCs are limited. In this study we have established a rat AKI model induced by IR and investigated the possible protective effects of ADMSCs. Adult Sprague‐Dawley (SD) rats were divided into three groups (n = 6/each group). The MOCK group was as the normal control. Rats in the IR‐AKI and IR‐AKI+ADMSCs groups were subjected to IR injury by clamping both renal pedicles for 40 minutes. Rats in the MOCK and IR‐AKI groups were injected with PBS via the tail vein as negative treatment controls. Rats in the IR‐AKI+ADMSCs group received ADMSCs therapy (2 × 10⁶ cells were injected into the rats via the tail vein). We found that ADMSC transplantation restored the pathologic morphology induced by IR‐AKI to normal compared with the MOCK group, suggesting the reparative function of ADMSCs in kidney tissues. Compared with IR‐induced AKI alone, ADMSC treatment significantly decreased the number of apoptotic cells, the level of total urinary protein and serum creatinine, the expression of pro‐inflammatory cytokines (IL‐6, TNF‐α, IL‐1β, IFN‐γ, TNF‐α, IFN‐γ, and TGF‐β), and the inflammation‐associated proteins (HGF and SDF1), but increased the expression of the anti‐inflammatory cytokine, IL‐10, and the anti‐apoptotic regulator, Bcl‐2. Our data have indicated that ADMSC transplantation may protect against IR‐induced AKI by anti‐apoptotic and anti‐inflammatory effects.     

L-精氨酸对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的探讨左旋精氨酸(L-arginine,L-arg)对大鼠肾缺血再灌注损伤(RIRI)细胞凋亡的影响.方法采用夹闭双侧肾动、静脉45 min后松夹再灌的方法制作RIRI模型,测定血清肌酐(Scr)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)及尿NAG酶(UNAG)含量,观察肾组织形态学改变和肾皮质细胞凋亡率.结果缺血再灌注后6和24 h,大鼠肾功能和肾小管上皮细胞明显受损,Scr、MDA和UNAG含量均明显高于假手术组(P＜0.01),肾皮质细胞凋亡率明显增加.尾静脉注射L-arg可明显改善RIRI大鼠肾功能,减轻肾损伤,并明显降低肾皮质细胞凋亡率(P＜0.05).结论 L-arg可通过增加体内NO水平,抑制肾小管上皮细胞凋亡对大鼠RIRI起到一定的保护作用.