9L／Wistar大鼠脑胶质瘤动物模型的建立

目的建立稳定的9L/Wistar大鼠脑胶质瘤动物模型。方法24只近交系雄性Wistar大鼠，采用立体定向技术在大鼠右尾状核接种1×105个9L细胞，观察大鼠生存状态；接种后8天行MRI检查，观测颅内肿瘤生长情况．大鼠死亡后，取脑制作病理切片，行HE染色后观察肿瘤组织形态。结果大鼠接种肿瘤细胞30天内全部死亡，平均生存时间23．38±1．60天．脑内均见肿瘤形成，未见肿瘤颅外生长．肿瘤周边界线明显，未见包膜．瘤内新生血管丰富，可见出血坏死。结论该方法建立的大鼠脑胶质瘤动物模型稳定可靠，符合恶性胶质肉瘤生物学特性．该模型是理想的脑胶质瘤实验研究材料。     

C6大鼠脑胶质瘤动物模型建立及病理观察

目的建立简单易行、可靠稳定的大鼠C6脑胶质瘤模型,为研究脑胶质瘤的发病机制和防治方法提供操作平台。方法采用立体定向技术,将体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞浓缩悬置,2.5×10^6个.25μ^L-1接种于SD大鼠的右侧尾壳核区,种植后连续观察大鼠的生存状态,并分别于7、14、21 d处死大鼠,立刻取脑,制作病理切片,HE染色,光镜下观察。结果大鼠接种C6胶质瘤细胞后,7 d左右生存状态良好,14 d左右出现较为明显的颅内高压症状,21 d左右时多数处于濒危状态。大体标本检查,18只大鼠中除3只意外死亡外,其余成瘤率100%,瘤体随着鼠龄的延长,中线结构明显移位,占位效应愈来愈明显。HE染色可明显观察到大鼠脑组织胶质瘤的形成。结论建立的C6大鼠脑胶质瘤动物模型可靠、稳定,其肿瘤生长特性及病理特征与人脑胶质瘤相似,可作为临床胶质瘤基础研究的理想模型。     

大鼠C6脑胶质瘤动物实验模型的建立

目的 为脑胶质瘤的基础理论、临床治疗和药效学研究提供简便、经济、实用的大鼠C6脑胶质瘤动物实验模型。方法 采用自制大鼠脑固定架，固定后，于脑靶点接种C6胶质瘤细胞。观察动物行为状态和生存期，并对脑肿瘤进行形态学，细胞学和分子生物学相关指标的检测。结果 接种C6胶质瘤细胞后，动物进食量减少，体重下降，有的动物出现眶周出血，眼球突出，自身旋转，癫痫发作，偏瘫等症状，大约在2至3周内，动物大多死亡，病理解剖显示颅内肿瘤形成。结论 该方法建立的脑胶质瘤具有与人脑胶质瘤相似的特性，肿瘤形成时间短，存活期较稳定，可供脑胶质瘤基础理论、实验治疗和药效学研究的需要。     

SD大鼠与Wistar大鼠脑胶质瘤动物模型的建立及比较

目的比较利用SD大鼠、Wistar大鼠建立脑胶质瘤动物模型的不同,为研究脑胶质瘤的发病机制及治疗方法提供操作平台。方法利用立体定向仪建立SD大鼠、Wistar大鼠大脑皮层接种C6细胞(2.5×105个细胞/只),建立脑胶质瘤动物模型,利用组织病理学、免疫组织化学以及核磁共振成像等技术,比较两种动物模型在成瘤率、肿瘤生长状况、死亡率以及动物一般情况等方面的异同。结果SD大鼠组、Wistar大鼠组的成瘤率均为100%,两组均未见转移;但SD大鼠组肿瘤成瘤时间较长,且部分肿瘤有自愈倾向,而Wistar大鼠组则未出现类似情况。结论Wistar大鼠大脑皮层脑胶质瘤动物模型的肿瘤性状更接近于人的脑胶质瘤,因此更适合探索和研究脑胶质瘤的发病机制和治疗方法;而SD大鼠的肿瘤由于性状类似转移瘤,且有自愈倾向,不适合作为上述相关研究的动物模型。     

清脑和血方治疗大鼠脑胶质瘤的药效作用及其初步机制研究

目的观察清脑和血方对大鼠脑胶质瘤的药效作用,并初步探讨其作用机制。方法 Wistar大鼠45只,采用脑立体定位注射鼠源性C6胶质瘤细胞(C6细胞)建立大鼠胶质瘤模型;将成模大鼠随机分为模型组、顺铂组、清脑和血方组,每组10只;另设10只大鼠为空白对照组。连续给药25天,检测各组大鼠血清白细胞介素(IL)-2、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ水平;依次剥离脑组织与胶质瘤组织,称重,计算瘤重占脑组织重百分比;HE染色观察胶质瘤组织病理;免疫印迹法检测胶质瘤组织中环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)的表达情况。结果与模型组比较,清脑和血方组大鼠的瘤重[(0.0121±0.0050)g比(0.0779±0.0390)g]、瘤重占脑组织重百分比[(0.49±0.0075)%比(3.07±0.0176)%]、血清中IL-2[(91.14±10.33)pg/mL比(160.42±15.98)pg/mL]、IL-10[(49.58±6.79)pg/mL比(92.17±7.71)pg/mL]含量均明显降低(P0.01);血清IFN-γ[(198.54±11.83)pg/mL比(111.53±17.50)pg/mL]、TNF-α[(209.41±21.82)pg/mL比(119.00±20.21)pg/mL]含量明显升高(P0.01)。结论清脑和血方能够明显抑制大鼠C6胶质瘤细胞的颅内生长,其作用机制可能与调节机体免疫因子水平,抑制肿瘤相关蛋白CREB的表达有关。     

一种新的大鼠脑胶质瘤动物模型的建立

目的 以ＬａｃＺ基因为报告基因,建立新的大鼠脑胶质瘤动物模型。方法 用ＡＢＧ质粒转染Ｃ６胶质瘤细胞,体外观察并比较了野生型和转基因瘤细胞的生长周期、细胞增殖情况和恶性侵袭能力,利用立体定向技术建立了大鼠颅内外的肿瘤实验动物模型。结果 基因转染瘤细胞和野生型瘤细胞的生长特性和致瘤能力无明显差别。结论 以转基因瘤细胞建立的动物模型,能从细胞水平观察到胶质瘤的侵袭范围,为进一步进行脑胶质瘤的放疗人化疗实     

大鼠脑胶质瘤模型构建

SD大鼠脑胶质瘤模型应用越来越广泛，我们参照有关文献结合自己的实际条件构建SD大鼠脑胶质瘤模型，取得了较理想的结果，现总结如下。     

9L/Fischer344大鼠颅内胶质瘤模型的建立

目的 建立稳定的9L/Fischer 344大鼠颅内脑胶质瘤模型.方法 采用立体定向技术,在34只Fischer 344大鼠右侧额叶尾状核接种5×104个9L细胞.在接种9L细胞后第3、7、10和14天分别随机选取6只大鼠处死,1只的标本行冰冻切片处理,其余5只的标本行石蜡切片处理.余下10只大鼠自然死亡.观察大鼠的生存状态及生存时间,观测颅内肿瘤的生长情况及形态学特点;通过免疫荧光法检测神经胶质酸性蛋白(GFAP)和中间丝蛋白(Vimentin)在脑胶质瘤中的表达.结果 34只大鼠脑内均见肿瘤生长,成瘤率100％.大鼠平均生存时间为(16.5±1.6)d,在接种9L细胞初期无明显不良反应,随着肿瘤的生长而逐渐出现相应的表现,其过程符合临床脑胶质瘤的发展过程.HE结果显示Fischer 344大鼠颅内生长的9L胶质瘤具有该肿瘤的病理形态学特点,免疫荧光结果显示9L脑胶质瘤细胞高表达特异性的蛋白Vimentin,肿瘤周围有表达GFAP的胶质细胞.结论 9L/Fischer 344大鼠原位脑胶质瘤模型良好地模拟了人颅内脑胶质瘤的发展过程,具备该肿瘤的形态学及生物学特性,模型成功.     

蒿甲醚对大鼠原位脑胶质瘤抑瘤及抗血管生成的实验研究

目的探讨蒿甲醚是否在选择性地杀伤SD大鼠原位脑胶质瘤的同时还具有抑制血管生成的作用.方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度蒿甲醚对大鼠C6脑胶质瘤细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC5)0;采用立体定位仪在48只SD大鼠大脑皮质层接种C6脑胶质瘤细胞(1×106个/μL),雌、雄各半;随机分为3组,每组8只.分别为空白对照组、阳性对照和实验组.在接种第3天后,实验组各组采用灌胃给药法连续给药10 d;于接种后的第20天解剖大鼠,经活体左心室灌注4%多聚甲醛,固定肿瘤的全脑标本.在大鼠脑部接种穿刺点做冠状切口,按垂直和水平方向测量肿瘤大小.肿瘤体积=a2bπ/6(a为肿瘤的短径,b为肿瘤的长径).采用免疫组化方法检测移植瘤组织微血管密度.结果实验组各组对SD大鼠原位脑胶质瘤的抑瘤率分别为:54.5%、61.0%、64.5%和69.8%,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);各实验组血管计数均明显少于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01).各实验组SD大鼠原位脑胶质瘤体积较空白对照组显著减小.结论在一定剂量范围内,口服蒿甲醚对SD大鼠脑部原位接种C6脑胶质瘤有明显的抑制作用;蒿甲醚抑制原位脑胶质瘤生长的机制之一可能是透过血脑屏障抑制脑胶质瘤血管生成.     

C6/SD大鼠胶质瘤模型的建立及C6胶质瘤细胞增殖动力学研究

目的建立C6/SD大鼠脑胶质瘤模型,并在其基础上研究C6胶质瘤细胞的增殖动力学.方法应用免疫组化、HE染色和流式细胞仪测定,观察C6胶质瘤细胞的增殖动力学指标,并进行相关性分析.结果肿瘤细胞接种2周后,肿瘤模型建立,HE染色见肿瘤细胞增殖活跃,各项指标显示该肿瘤增殖活性较强.     

C6脑胶质瘤模型大鼠MRI影像及形态学观察及其意义

目的:建立稳定可靠的大鼠C6胶质瘤模型,对模型动物脑瘤体进行磁共振成像（MRI）影像动态观察及病理形态学观察,为抗脑胶质瘤药效学研究提供实验基础。方法：选择10只健康成年雄性Wistar大鼠,用立体定向将20 μL含有1×106个C6胶质瘤细胞的悬液缓慢接种于大鼠左侧尾状核区;接种后对10只大鼠进行一般状况观察,并分别于接种后第2、3和4周进行MRI影像动态学观察,同时对自然死亡荷瘤大鼠脑组织进行大体和病理组织学检查,计算荷瘤大鼠生存期。结果：大鼠术后2周出现活动和进食量减少、皮毛污秽及结膜充血等表现;3周后,有的大鼠出现肢体抽搐、偏瘫、身体扭曲和自身旋转等神经系统症状,10只荷瘤大鼠分别于8~30 d自然死亡。本组荷瘤大鼠中位生存期为18 d,平均生存期为(18.3±7.3) d。荷瘤大鼠脑瘤体随着瘤龄的增加而增大,病理学检查显示肿瘤细胞排列混乱致密,核分裂相易见,肿瘤内可见有血管组织增生,肿瘤浸润性生长呈指状突入周边正常组织。肿瘤细胞胶质酸性纤维蛋白(GFAP)表达呈阳性。结论：采用立体定向技术成功建立大鼠C6胶质瘤动物模型,MRI动态及病理形态学观察结果为选择适当的时间窗进行抗胶质瘤药物药效学研究提供实验基础。     

Wistar大鼠C6胶质瘤脑移植模型的应用

目的通过观察C6胶质瘤大鼠脑移植模型,了解该模型的生物学特点,以帮助实验中有效应用。方法 Wistar大鼠20只,将活性较好的C6胶质瘤细胞微量移植入大鼠大脑半球,观察肿瘤生长特点及行为学改变。结果肿瘤移植后第3天,TW2即可出现轻微高信号改变。15/18的大鼠在第5天至少能看到2个层面的信号改变。16/18的大鼠在第11天能看见实质性肿瘤。13/18的大鼠第14天生长至半侧大脑的1/2。14/18的大鼠第20天大部分肿瘤达到半侧大脑的2/3,部分生长至对侧半球。结论实验可能的最佳时间窗在14～18 d。同时,肿瘤移植的初始细胞浓度、细胞活性和移植部位可能也对实验时间窗会有较大影响。     

悬浮法培养C6胶质瘤细胞系和该细胞系中脑肿瘤干细胞的分离

目的研究应用无血清培养基悬浮法培养C6胶质瘤细胞系的方法;并分离该细胞系中的脑肿瘤干细胞,观察其生长方式和分化特征.方法应用培养大鼠神经干细胞的培养基和培养方法,在无血清培养基中采用悬浮法培养大鼠C6胶质瘤细胞系;再将分离获得的悬浮生长的脑肿瘤干细胞接种于含血清培养基,观察其分化;应用有限稀释和单克隆形成实验确定该细胞系中肿瘤干细胞的比例.结果C6胶质瘤细胞系中有约1.18%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由漂浮的细胞球;这种细胞球具有人脑肿瘤干细胞球的特征,并可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,贴壁分化后细胞形态与直接在含血清培养基中培养的C6胶质瘤细胞系无明显差别.结论C6大鼠胶质瘤细胞系中含有比例较低的、具有增殖和分化能力脑肿瘤干细胞(约1.18%),该细胞系可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系.     

Development of a rat C6 brain tumor model

Objective To establish rat C6 brain- tumor models and find a simple reliable index to judg e tumor volume. Methods C6 cell suspension (10 μl) containing 10 g/L agarose and 1×10［6］ cells was i njected into the right caudate nucleus of the rat brain by a stereotaxic method . After implantation, rats were observed and given MRI scans. Rats were perfus ed with paraformaldehyde trans- aorta at the 10th, 15th, 20th and 25th day and b efore natural death. All brains, lungs, spinal cords and tumors were sectioned and inspected. Tumor- containing samples were prepared histologically by hemato xylin and eosin (HE) stains. Results Fifty implanted rats had 100% yield of intracerebral growth, with distant metast asis of 0% to 4%. Conclusion A rat C6 brain- tumor model was successfully established. Rat survival time is correlated with tumor volume and may be useful as an index of tumor size .     

C6脑胶质细胞瘤的在体实验研究

目的　建立大鼠C6脑胶质瘤模型 ,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标。方法　应用立体定向法 ,将 1%琼脂糖含 1× 10 6C6瘤细胞悬液 10 μl注入大鼠右脑尾状核并行一般观察和MRI检查。在接种后第 10、15、2 0、2 5天和自然死亡前 ,对大鼠做主动脉多聚甲醛灌注固定 ,对脑组织和肿瘤标本进行大体观察和HE染色。结果　 5 0只接种大鼠均有颅内肿瘤生长 (10 0 % ) ,远处和颅外转移率为 0 % - 4 %。结论　成功建立大鼠C6脑胶质瘤模型 ,接种后大鼠的生存时间可作为判定颅内肿瘤生长大小的指标。     

C6脑胶质细胞瘤的在体实验研究

目的　建立大鼠C6脑胶质瘤模型,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标.方法　应用立体定向法,将1%琼脂糖含1×106 C6瘤细胞悬液10μl 注入大鼠右脑尾状核并行一般观察和MRI检查.在接种后第10、15、20、25天和自然死亡前,对大鼠做主动脉多聚甲醛灌注固定,对脑组织和肿瘤标本进行大体观察和HE染色.结果　50只接种大鼠均有颅内肿瘤生长（100%）,远处和颅外转移率为0%-4%.结论　成功建立大鼠C6脑胶质瘤模型,接种后大鼠的生存时间可作为判定颅内肿瘤生长大小的指标.     

建立大鼠C6脑胶质瘤模型与观察颅内肿瘤生长

建立大鼠Ｃ６脑胶质瘤模型,行一般观察和ＭＲＩ检查以确定颅内肿瘤生长情况,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标。方法体外培养大鼠Ｃ６胶质瘤细胞,应用立体定向法将含１０ｇ．Ｌ＾－１琼脂糖和１＊１０＾６Ｃ６细胞悬液１０μＬ注入大鼠了尾状核。接种后行一般观察和ＭＲＬ检查,对５组接种大鼠分别在第１０,１５,２０,２５日和自然死亡前做主动脉多聚甲醛灌注固定,对脑组织和肿瘤标本进行切片观察和ＨＥ染色。结果５０只接     

改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型

目的建立一种简便可靠、创伤较小的大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型。方法对Zea Longa线栓法进行适当改进,制作SD大鼠右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)2 h后再灌注(R)模型(MCAO/R组,n=25)。于建模前后不同时间点,评估SD大鼠的神经功能;建模后14 d处死所有大鼠,取脑组织进行病理组织学检查。设立假手术组(n=5)作为对照,进行对比分析以观察模型的可靠性。结果MCAO/R组25只大鼠中,2例(8%)于拔栓线时突发死亡,迅速开颅取脑发现颅底脑池内有大量血块;2例于术后第2天死亡,1例于术后第7天死亡,总死亡率为20%。成功建立MCAO/R模型20例,并在为期14 d的观察过程中神经功能逐渐改善;术中栓线插入长度与大鼠体质量呈线性相关(P=3.86×10-9);组织病理学观察显示,MCAO/R组大鼠的右侧额顶叶和尾壳核区域脑组织缺血性损伤改变,神经元皱缩,呈不规则形态;胞浆嗜酸性,胞核深染或消失,细胞间质疏松。结论本实验采用改良线栓法制备的大鼠MCAO/R模型,简便易行、创伤小且稳定性好,是用于研究局灶性脑缺血/再灌注损伤较为理想的动物模型。     

吗啡对培养大鼠胶质细胞瘤C6细胞增殖的抑制作用

目的:探讨吗啡对神经系统细胞的影响及作用机理.方法:应用基因克隆技术克隆大鼠增殖细胞核抗原(PCNA)的cDNA基因片段,并应用逆转录PCR技术研究了吗啡对大鼠胶质细胞瘤C6细胞PCNA基因表达的影响.结果:0.1、1.0 mg.L-1 吗啡作用于大鼠C6细胞24 h后,PCNA mRNA相对含量明显下降,且剂量越高PCNA mRNA相对含量越低.结论:吗啡对正常生长的大鼠C6细胞的增殖具有一定的抑制作用,其机理可能是通过抑制大鼠C6细胞PCNA的转录过程,使PCNA转录水平降低,从而抑制细胞核酸合成代谢.     

小鼠endostatin基因的克隆与C6鼠脑胶质瘤的治疗

目的 克隆小鼠ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ基因,检测其表达蛋白的生物学活性,应用该蛋白治疗大鼠Ｃ６脑胶质瘤。方法 从小鼠胶原ＸⅧｃＤＮＡ用ＰＣＲ法克 ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ基因,重组入ＰＵＣ１９,测序后构建非融合表达载体ｐＤＨ－ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ,使其在ＤＨ５α内经温度诱导表达,纯化该表达蛋白并用鸡胚绒 囊膜 内皮细胞抑制实验检测其活性,经荷瘤大鼠皮下注射该蛋白治疗其脑胶质瘤,结果 成功获得５５１ｂｐ的ｅ