赤芍801对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞 NF-κB 表达的影响

【目的】探讨赤芍801作用后的类风湿关节炎（rheumatoid arthritis ,RA ）患者成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-like synoviocytes ,FLS）p65和p50蛋白在细胞内定位及表达变化。【方法】RA患者关节滑液经原代培养分离出FLS ,分别用浓度为64μg/mL、4μg/mL和0μg/mL的赤芍801作用24 h后,先采用细胞免疫化学方法对p65和p50在细胞内表达定位进行分析,再提取核蛋白,采用Western blotting检测p65和p50的表达。【结果】细胞免疫化学结果表明0μg/mL赤芍801刺激时p65和p50蛋白主要表达于RA患者FLS细胞浆中;与对照组相比,4μg/m L赤芍801浓度刺激24 h后,p65和p50表达无变化（ P ＞0．05）,而64μg/m L赤芍刺激24 h后,p65和p50在细胞核中的表达明显上升,与对照组相比差异有统计学意义（ P ＜0．05）。Western blotting结果表明,p65和p50均在RA患者 FLS核蛋白抽提物中被检出,与对照组相比,在4μg/m L赤芍801刺激24 h对p65和p50表达无影响（ P ＞0．05）;当赤芍801浓度增加到64μg/m L时,p65和p50表达显著增加（ P ＜0．05）。【结论】赤芍801可调节RA患者FLS p65和p50从细胞质向细胞核转移,并诱导其表达上调。     

丹参诱导类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞中Fas/FasL的表达

目的 观察丹参对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者成纤维样滑膜细胞中Fas/FasL mRNA表达的影响.方法 RA患者关节滑液经原代培养,获取成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs),分别用终浓度为0、0.2 mg/ml和0.4 mg/ml的丹参作用24 h后,提取总RNA并逆转录成cDNA保存.随机选取正常人外周血,通过分离单个核细胞提取总RNA并逆转录成cDNA保存作为阳性对照.分别采用RT-PCR和SYBR Green适时荧光定量PCR方法检测Fas/FasL mRNA的表达.结果 RT-PCR结果显示,FasL只在外周血标本上有表达,而在各浓度处理的RA FLSs没有检测到;Fas无论在外周血还是不同浓度处理的RA FLSs上均有表达.定量PCR结果显示,Fas的表达量随丹参浓度增加而增加,并且在丹参浓度为0.4 mg/ml时具有统计学差异(P<0.05).Fas mRNA的表达与相应浓度下RA FLSs的凋亡率存在相关性(r=0.998,P<0.05).结论 丹参可体外诱导RA患者成纤维样滑膜细胞Fas mRNA表达上调;未检测到FasL mRNA在RA患者FLSs中的表达.Fas mRNA的上调可能与丹参诱导RA FLSs凋亡有关.     

人肾脏近曲小管上皮细胞表达α1抗胰蛋白酶的研究

目的探讨肾小管上皮细胞是否合成α1 抗胰蛋白酶(AAT)以及脂多糖(LPS)对肾小管上皮细胞合成AAT的影响.方法分别用间接免疫荧光和逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测人肾小管上皮细胞系(HKC)AAT mRNA及蛋白表达,并对PCR产物进行DNA测序鉴定.用不同浓度LPS 刺激HKC,根据LPS浓度实验分为0、0.5、1、2 μg/ml 4组,用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测LPS刺激后HKC AAT mRNA及蛋白质表达的变化.结果间接免疫荧光显示HKC AAT阳性,分布于胞质中;RT-PCR检测发现HKC表达AAT mRNA;PCR产物经DNA测序与GeneBank中AAT mRNA序列完全一致.与未刺激组比较,实时荧光定量PCR显示2.0 μg/ml LPS刺激HKC 4 h,AAT mRNA表达明显上调(荧光强度比值为3.43±0.88 vs1.22±0.20;P《0.01),Western 印迹法显示2.0 μg/ml LPS刺激HKC 8 h,AAT蛋白质表达明显增高(条带密度比值为0.88± 0.12 vs 0.59 ±0.05;P《0.01).而0.5 μg/ml和1.0 μg/ml LPS对HKC的AAT mRNA和蛋白质表达均无显著刺激作用.结论 HKC能合成AAT, LPS可上调人肾近曲小管上皮细胞的AAT mRNA和蛋白质表达.     

脂联素在人肾小球微血管内皮细胞中的表达与调节

目的 探讨人肾小球微血管内皮细胞(HRGEC)是否合成脂联素,及肿瘤坏死因子α(TNF-α)对HRGEC合成脂联素的影响.方法 用免疫组织化学染色检测脂联素在人肾组织表达;分别用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测体外培养的原代HRGEC对脂联素mRNA及蛋白的表达,并对PCR产物进行DNA测序鉴定.用TNF-α刺激HRGEC,分别用实时荧光定量PCR和时间分辨荧光法检测HRGEC脂联素mRNA及蛋白表达变化.结果 (1)免疫组织化学染色显示人肾小球毛细血管壁脂联素染色强阳性.(2)RT-PCR检测发现原代培养的HRGEC表达脂联素mRNA;PCR产物经DNA测序与基因库中的脂联素DNA序列完全一致;蛋白质印迹检测证实HRGEC培养上清中含有脂联素蛋白.(3)不同浓度TNF-α刺激HRGEC 24 h,与未刺激组比较,实时荧光定量PCR显示.250 IU/ml和500 IU/ml组的脂联素mRNA表达量显著上调(P<0.05和P<0.01);时间分辨荧光检测显示,250 IU/ml和500 IU/ml组的脂联素蛋白含量显著增加(P<0.05和P<0.01).(4)500 U/ml浓度TNF-α刺激HRGEC 6、12、24和48 h,与未刺激组比较,6、12和24 h组的脂联索mRNA表达均显著上调(P<0.05,P<0.05和P<0.01);24 h和48 h组的脂联素蛋白含量显著增加(P<0.01).结论 HRGEC能合成脂联素,TNF-α可上调HRGEC的脂联素mRNA和蛋白表达.     

实时荧光定量PCR法研究葛根素对成骨细胞TGF-β1及Smad2/3mRNA表达的影响

目的：检测葛根素对成骨细胞TGF-β1及Smad 2/3mRNA表达的影响,从分子生物学层面探讨葛根素治疗骨质疏松症的机理。方法：取小鼠胎鼠成骨细胞进行体外培养,以三种浓度1、0.1、0.01μg/mL的葛根素液进行干预,同时设置空白对照组,分别采用碱性磷酸酶（ALP）法检测成骨细胞活性,实时荧光定量PCR法检测葛根素干预液对成骨细胞TGF-β1及Smad 2/3mRNA表达变化的影响。结果：不同浓度葛根素干预液均能够增加成骨细胞内碱性磷酸酶的活性,并且呈浓度依赖性,实时荧光定量PCR结果显示成骨细胞内TGF-β1及Smad 2/3mRNA的表达明显高于阴性对照组（具有统计学差异P〈0.05）。结论：表明葛根素可刺激成骨细胞信号转导蛋白Smad2/3mRNA的表达和刺激TGF-β1的分泌和合成,从而促进骨形成,抑制骨吸收。可能是其有效防治骨质疏松症的疗效机理。     

沙利度胺对类风湿关节炎滑膜细胞及外周血单个核细胞分泌肿瘤坏死因子-α和血管内皮生长因子的影响及机制研究

目的:观察沙利度胺(THD)对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的抑制作用及其对FLS和外周血单个核细胞(PBMCs)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响,初步探讨THD治疗RA的可能机制。方法:分离RA患者FLS进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测分别加入10、50、100、200μg/ml的THD对FLS增殖的影响,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测50、100、200μg/ml的THD分别对FLS及PBMCs进行干预24、48 h后分泌VEGF和TNF-α的变化。结果:THD在50～500μg/ml浓度范围内对FLS增殖有抑制作用。与对照组比较,不同浓度(50、100、200μg/ml)不同作用时间(分别干预24、48 h)的THD对FLS和PBMCs分泌TNF-α及VEGF均有抑制作用(均P<0.05)。结论:THD可能通过抑制RA患者FLS的增殖,抑制FLS及PBMCs分泌VEGF、TNF-α,从而抑制新生血管的形成,减轻炎症反应,起到治疗RA的作用。     

晚期糖基化终产物与其受体相互作用对人结肠癌细胞SW-480增殖的影响

目的 糖尿病患者结肠癌的发病率显著高于非糖尿病人群,晚期糖基化终产物(advanced glycation end products, AGEs)在糖尿病患者体内生成明显增多.文中观察AGEs对人结肠癌细胞SW-480增殖的影响及其机制.方法 体外培养人结肠癌细胞SW-480,以终浓度分别为100μg/ml、200μg/ml、500μg/ml的AGE-BSA处理细胞24h,并设正常对照组和BSA对照组进行比较.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SW-480细胞活力,利用流式细胞术检测细胞周期的改变,实时荧光定量PCR测定晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products, RAGE)mRNA、细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA的表达.结果 ①MTT结果示100μg/ml、200μg/ml、500μg/mlAGE-BSA作用SW-480细胞24h后可以显著促进细胞增殖(P<0.05),并呈浓度依赖性.②流式细胞术结果示200μg/mlAGE-BSA干预组24h后可以减少SW-480细胞G1期百分率,同时增加S期百分率,与正常对照组比较具有统计学差异(P<0.05).③实时荧光定量PCR结果示与正常对照组相比,200μg/mlAGE-BSA干预后可以上调RAGEmRNA和cyclin D1mRNA的表达(P<0.05).结论 AGEs能促进SW-480细胞的增殖,其机制可能与上调RAGEmRNA和cyclin D1mRNA的表达,加速细胞G1期向S期转换相关.     

茶多酚对脂多糖介导下人牙周膜成纤维细胞COX －2表达的影响

目的：探讨不同浓度茶多酚对脂多糖（LPS）介导下体外培养的人牙周膜成纤维细胞（HPDLCs）环氧化酶－2（COX－2）表达的影响。方法改良组织块法培养HPDLCs,取第5代细胞随机分4组：LPS组LPS 100μg／mL＋茶多酚0μg／mL,茶多酚100组LPS 100μg／mL＋茶多酚100μg／mL,茶多酚200组LPS 100μg／mL＋茶多酚200μg／mL,对照组10％FBS的DMEM。 ELISA法检测HPDLCs分泌COX－2的量,荧光实时定量PCR检测COX－2 mRNA的表达。结果在LPS干预下,不同浓度的茶多酚在不同时间点均可抑制COX－2分泌的量,与LPS组比较差异有统计学意义（ P＜0.05）。荧光实时定量PCR结果表明茶多酚显著抑制LPS干预下COX－2的mRNA表达水平,与LPS组比较差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论茶多酚可抑制LPS干预下HPDLCs分泌COX－2的量及其mRNA表达水平,提示茶多酚的抗炎机制可能与COX－2存在密切联系。     

薯蓣皂苷对TNF-α诱导的CIA大鼠成纤维样滑膜细胞COX表达的影响

目的通过研究薯蓣皂苷（Dio）对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的CIA大鼠成纤维样滑膜（FLS）细胞环氧合酶1（COX1）、环氧合酶2（COX2）表达的影响,探索Dio对TNF-α诱导的CIA大鼠FLS细胞的治疗作用。方法应用TNF-α刺激CIA大鼠FLS细胞,采用MTT法检测FLS细胞活性。对TNF-α刺激的CIA大鼠FLS细胞给予不同浓度(1、2、3、4μg·mL-1)的Dio处理24 h,采用Q-PCR检测FLS细胞COX1和COX2 mRNA的表达,Western blot检测细胞COX2蛋白的表达。结果浓度为3μg·mL-1的Dio作用于FLS细胞,存活率接近50%,因此用药组浓度确定为1、2、3、4μg·mL-1。TNF-α诱导后,COX1 mRNA、COX2 mRNA和COX2蛋白表达均显著升高（P<0.01）。与TNF-α组相比,Dio≤3μg·mL-1时,均能不同程度地降低细胞中COX2 mRNA和蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）,Dio≥3μg·mL-1能显著抑制COX1 mRNA的表达（P<0.05或P<0.01）。结论 Dio通过抑制COX2 mRNA和蛋白的表达,达到治疗TNF-α诱导的CIA大鼠FLS细胞的作用。     

小鼠CCL20 mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的:建立检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20(CC chemokine ligand 20)mRNA的实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)的方法。方法:分离小鼠脂肪组织细胞,经PMA和离子霉素刺激4 h后收集细胞提取总RNA并逆转录为cDNA。采用qRT-PCR方法检测趋化因子CCL20 mRNA的表达水平。评价该方法的特异性,同时应用该方法检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20mRNA相对表达水平。结果:建立了小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法,结果显示该方法的熔解曲线为单峰,同时核酸电泳显示一条特异性条带。检测结果表明高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的相对表达水平明显高于正常饮食对照组(t=3.02,P<0.05)。结论:建立了检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20 mRNA的实时荧光定量PCR方法,特异性好、灵敏性强,为进一步研究小鼠CCL20的生物学功能提供了实验基础。     

增强表达PTEN蛋白对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的作用

目的研究增强表达PTEN蛋白对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA FLS)增殖的影响。方法慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN转染RA FLS并表达PTEN蛋白,应用RT-PCR、Western blot检测PTEN表达,MTT法检测RA FLS增殖能力的变化。结果转染pLenti6/V5-PTEN后,RA FLS中PTEN mRNA表达提高60%以上,PTEN蛋白表达在48 h后提高了107.85%(P<0.05),RA FLS增殖在487、29、6 h分别下降了25.14%、41.84%和52.46%(P<0.05)。结论慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN能够提高PTEN蛋白表达水平,并显著抑制RA FLS增殖。     

二氢杨梅素对绒癌JAR细胞MicroRNA373表达的影响

目的:探讨二氢杨梅素(DMY)对绒癌JAR细胞MicroRNA373表达的影响.方法:对数生长期绒癌JAR细胞随机分组,DMY终浓度分别为0μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、100 μ g/ml作用24h,采用实时荧光定量PCR法检测JAR细胞MicroRNA373 mRNA的表达水平.结果:DMY组JAR细胞MicroRNA373的表达均明显高于空白对照组;并且,随着DMY浓度的增加,JAR细胞MicroRNA373的表达逐渐升高(P＜0.05).结论:DMY可升高绒癌JAR细胞MicroRNA373的表达,且呈一定的浓度依赖性.     

从丹皮酚对TLR-NF-κB信号通路的影响探讨高血压病血瘀证的形成机制

【目的】通过观察活血化瘀中药牡丹皮的提取物丹皮酚(paeonol,Pae)对高血压病血瘀证患者血清损伤的血管内皮细胞TLR-NF-κB信号通路的影响,探讨高血压病血瘀证的形成机制。【方法】以体积分数10%的高血压病血瘀证、非血瘀证患者及健康人(正常组)血清干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)24 h,采用实时荧光定量(PCR)法检测Toll样受体4(TLR4)mRNA表达。以不同浓度的丹皮酚(大、中、小剂量分别为400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL)干预脂多糖(LPS)诱导的HUVEC-C TLR4表达(24 h)及核转录因子(NF-κB)活化(2 h)。采用PCR法检测TLR4 mRNA及NF-κB mRNA的表达,免疫印迹(Western blot)技术检测TLR4蛋白及NF-κB蛋白(以I-κBα蛋白的降解反映)的表达。【结果】血清作用24 h后,TLR4 mRNA的表达按正常组、非血瘀证组、血瘀证组的顺序逐渐增高,组间差异有统计学意义(P0.01)。丹皮酚可呈剂量依赖性减少LPS诱导的TLR4 mRNA高表达(P0.001),抑制LPS诱导的TLR4蛋白高表达和I-κBα蛋白的降解。【结论】TLR-NF-κB信号途径介导的炎症反应和免疫紊乱是高血压病血瘀证形成的机制之一。     

The effects of PTEN expression on reproduction of FLS in rheumatoid arthritis

目的 研究增强表达PTEN蛋白对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA FLS)增殖的影响.方法 慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN转染RA FLS并表达PTEN蛋白,应用RT-PCR、Western blot检测PTEN表达,MTT法检测RA FLS增殖能力的变化.结果 转染pLenti6/V5-PTEN后,RA FLS中PTEN mRNA表达提高60%以上,PTEN蛋白表达在48 h后提高了107.85%(P＜0.05),RA FLS增殖在48、72、96 h分别下降了25.14%、41.84%和52.46%(P＜0.05).结论 慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN能够提高PTEN蛋白表达水平,并显著抑制RA FLS增殖.     

小鼠腹腔巨噬细胞炎症模型的建立

目的：体外建立小鼠腹腔巨噬细胞炎症模型,为体外研究中药抗炎机制提供实验模型。方法分离、培养小鼠腹腔巨噬细胞;形态学观察巨噬细胞的生长;流式细胞术鉴定所分离细胞的纯度;以不同质量浓度(0、0.1、1、10μg/mL)的脂多糖(LPS)作用细胞24 h及1μg/mL的LPS作用细胞不同时间(0、4、8、16、24、48 h),荧光定量PCR法检测细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达。结果获得的贴壁细胞具备巨噬细胞的形态特征,纯度为84.55%;在一定范围内,LPS以浓度依赖和时间依赖的方式上调IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达。结论1μg/mL的LPS作用细胞24 h能建立较为合理的炎症模型。     

艾拉莫德对类风湿关节炎滑膜细胞体外干预实验研究

目的:观察艾拉莫德(T-614)对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞(FLS)体外培养时,增殖生长能力的影响,探讨艾拉莫德的对RA的治疗机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪观察抗风湿药物艾拉莫德T-614对RA-FLS增殖变化,T-614分为高剂量组(1000μg/ml)、中剂量组(250μg/ml)和低剂量组(5μg/ml),干预期间通过TNF-α(10ng/ml)刺激FLS并共孵育48h,并收上清液检测IL-8水平表达。结果:高浓度组T-614较低浓度组及正常对照组对RA的FLS体外增殖具有明显的抑制作用,检测上清IL-8明显减低。结论:T-614对TNF-α刺激下的RA-FLS有抑制增殖的作用,且趋化因子IL-8分泌水平减低,提示T-614对RA滑膜炎具有的免疫抑制调控作用。     

人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响

目的: 探究人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响。方法: Dil标记神经干细胞微囊泡,流式细胞仪和共聚焦显微镜观察THP-1巨噬细胞对微囊泡的内化;实时荧光定量PCR筛选微囊泡最适浓度;100 ng/mL 脂多糖刺激THP-1细胞6 h后,微囊泡处理12 h,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞炎性因子IL-1β,肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)以及IL-6的mRNA表达水平;微囊泡处理24 h, 蛋白免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶 (inducible nitric oxide synthase, iNOS)和精氨酸酶1 (Arginase-1, Arg-1)蛋白表达水平;流式细胞术检测THP-1巨噬细胞M1极化表面标志CD86表达。结果： THP-1巨噬细胞在12 h和24 h均能明显内化神经干细胞微囊泡;0.12 μg/mL微囊泡具有最适调控作用;与未处理细胞相比,脂多糖处理后明显增加THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白,Arg-1蛋白表达差异无统计学意义(P<0.05);经神经干细胞微囊泡处理后THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白表达明显降低(P<0.05);与未处理细胞相比,脂多糖和微囊泡处理后THP-1巨噬细胞CD86表达差异无统计学意义。结论： 人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡能够减少THP-1细胞炎性细胞因子和iNOS表达,抑制巨噬细胞M1极化。     

西红花苷对椎间盘退变的保护作用

目的 探讨西红花苷对椎间盘退变的治疗效果和作用机制。方法 将收集的人类髓核组织Pfirrmann II级样本分成两部分,一部分提取髓核细胞并培养,根据培养基的成分,将髓核细胞分为4组,包括空白对照组、肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激组、西红花苷低浓度治疗组(10μg/mL)以及西红花苷高浓度治疗组(40μg/mL)。培养24 h后,采用实时定量PCR检测4组髓核细胞中炎症因子和代谢标志物的mRNA表达水平。培养0、15、30 min和48 h后,采用Western blotting检测4组髓核细胞中炎症因子、代谢标志物、凋亡标志物以及核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)信号通路关键蛋白p-P65的蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因检测西红花苷对NF-κB信号通路的作用效果。另一部分髓核组织进行离体培养,根据培养基不同,分为空白对照组、TNF-α刺激组以及西红花苷治疗组(40μg/mL)。使用免疫组化检测各组髓核组织中炎症因子以及细胞代谢标物的蛋白表达水平。结果 实时定量PCR检测与Western blotting检测结果显示,与空白对照组相比,TNF-α刺激组髓核细胞的炎症反应...     

华支睾吸虫溶血磷脂酶对肝星状细胞体外作用的研究

目的探讨华支睾吸虫溶血磷脂酶(Cs LysoPLA)对肝星状细胞的作用。方法实验分为4组:PBS对照组为PBS孵育肝星状细胞系LX-2细胞24 h;Cs LysoPLA单独刺激组为Cs LysoPLA(10μg/mL)单独孵育LX-2细胞24 h;联合刺激组为不同浓度Cs LysoPLA(1、5、10μg/mL)孵育LX-2细胞2 h后,IL-13(20 ng/mL)孵育24 h;IL-13单独刺激组为IL-13(20 ng/mL)单独孵育LX-2细胞24 h;逆转录荧光定量PCR(qRT-PCR)检测星状细胞活化指标分子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及纤维化相关分子胶原蛋白Ⅰ型(Collagen-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ型(Collagen-Ⅲ)以及促纤维化分子转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)的mRNA水平。Western Blotting检测不同浓度Cs LysoPLA(1、5、10μg/mL)联合IL-13(20 ng/mL)刺激时LX-2细胞α-SMA蛋白表达量。结果 Cs LysoPLA(10μg/mL)可直接抑制LX-2细胞α-SMA、Collagen-Ⅲ的转录,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P=0.014 2、0.002 7);并且Cs LysoPLA(10μg/mL)可刺激LX-2细胞TGF-β1、PDGF基因转录升高,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P=0.009 1、0.003 4);Cs LysoPLA(10μg/mL)可以下调IL-13引起的α-SMA、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、TGF-β1的mRNA水平的升高,与单独IL-13刺激组相比差异有统计学意义(P=0.003 0、0.011 9、0.043 0、0.025 6);Western Bloting结果显示,不同浓度Cs LysoPLA(1、5、10μg/mL)均可以下调IL-13引起的星状细胞活化分子α-SMA的表达,与单独IL-13刺激组相比差异有统计学意义(P=0.008 0、0.000 5、0.000 2)。结论 Cs LysoPLA(10μg/mL)在高浓度下既可以直接抑制LX-2细胞纤维化,又可以抑制IL-13引起的LX-2细胞纤维化,可能在华支睾吸虫严重感染所致纤维化过程中发挥了抑制纤维化的作用。     

实时荧光定量PCR检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞CD_(58)基因的表达

目的:应用实时荧光定量PCR检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)CD58基因的表达。方法:提取PBMC总RNA并逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR法分别检测43例HBV感染者及11例正常对照的PBMCCD58基因的表达水平,同时检测血清ALT、AST水平。结果:乙型肝炎各组患者PBMCCD58mRNA表达水平较正常对照组明显增高,差异均有显著性。乙型肝炎患者PBMCCD58mRNA水平与血清ALT、AST呈显著正相关。结论:实时荧光定量PCR可以准确定量检测基因的表达;乙型肝炎患者PBMCCD58基因表达水平与疾病严重程度及肝细胞损伤严重程度有关。