Periostin表达对鼻咽癌细胞体外侵袭行为的影响

探讨Periostin表达对体外鼻咽癌（NPC）细胞侵袭行为的影响及其机制。 方法 采用Western blotting检测激光捕获显微切割纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽黏膜间质、鼻咽癌低转移潜能细胞系6-10B和高转移潜能细胞系5-8F及NIH 3T3成纤维细胞中Periostin的表达水平。应用阳性脂质体法将pCMV-neo-Periostin质粒瞬时转染到NIH 3T3细胞,运用Western blotting检测转染前后NIH 3T3细胞中Periostin的表达水平,利用Boyden小室穿膜侵袭实验检测Periostin蛋白对肿瘤细胞的体外侵袭能力的影响,明胶酶谱法检测其对基质金属蛋白酶（MMPs）活性的影响。 结果 Periostin在纯化的鼻咽癌间质中高表达,在纯化的正常鼻咽黏膜间质中及高转移细胞系5-8F中弱表达,在低转移细胞系6-10B及NIH 3T3细胞中不表达。瞬时转染过表达Periostin的NIH 3T3细胞中Periostin的表达明显增强。Boyden小室实验提示,分泌蛋白Periostin可明显增强鼻咽癌细胞6-10B的体外侵袭能力,转染组穿膜的细胞数与空白对照组及未转染对照组比较,明显增多(P<0.01);转染组与6-10B细胞共培养后,培养上清中MMPs的活性较对照组明显增强。 结论 Periostin 蛋白能增强鼻咽癌细胞的侵袭能力,其机制可能与上调MMPs的活性有关。     

食管鳞状细胞癌组织中Periostin、VEGF的表达及意义

目的：探讨Periostin、VEGF蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测130例食管鳞状细胞癌组织及癌旁正常食管黏膜组织中Periostin、VEGF蛋白的表达。结果食管鳞状细胞癌组织中Periostin和VEGF的阳性率明显高于正常食管黏膜组织(P<0．05)。 Periostin表达与食管鳞状细胞癌浸润深度、淋巴结转移有显著相关性(P<0．05)。 VEGF表达与食管鳞状细胞癌分化程度、浸润深度和淋巴结转移有显著相关性(P<0．05)。 Periostin与VEGF表达呈正相关(P<0．05),66例食管鳞状细胞癌患者获得临床随访资料,随访时间1~48个月,Kaplan-Meier生存曲线分析显示,Peri-ostin阳性组患者的生存率明显低于 Periostin阴性组( P<0．05), VEGF阳性组患者的生存率明显低于 VEGF 阴性组( P <0．05)。结论 Periostin与VEGF表达密切相关,联合检测Periostin、VEGF可作为判定食管鳞状细胞癌侵袭、转移能力的客观指标,对食管鳞状细胞癌的预后判断具有重要意义。     

胡桃醌对人宫颈癌HeLa细胞侵袭与迁移的影响

目的观察胡桃醌对HeLa细胞侵袭及迁移的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法常规体外培养人HeLa细胞,加入10、20、50、100μmol/L浓度的胡桃醌,继续培养24 h。通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用MTT法检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测胡桃醌对细胞迁移能力的影响,用Transwell小室法检测细胞侵袭能力的影响。Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达。结果细胞形态学观察显示,不同浓度胡桃醌均可导致细胞形态学发生改变;MTT检测表明,胡桃醌对HeLa细胞的生长有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度的增加而增强(P0.05或P0.01);划痕实验结果显示,随胡桃醌药物浓度的增加,细胞的平面运动能力明显下降;Transwell侵袭小室实验结果显示,胡桃醌对HeLa细胞体外的侵袭力具有很强的抑制作用;Western blotting结果表明,胡桃醌给药能够抑制HeLa细胞MMP-2、MMP-9蛋白的表达。结论胡桃醌能够抑制HeLa细胞的增殖并抑制细胞侵袭,其机制可能与抑制MMP-2、MMP-9的表达有关。     

siRNA抑制nm23-H1基因表达对鼻咽癌6-10B细胞生物学行为的影响

目的：采用RNA干扰技术下调nm23-H1基因在鼻咽癌6-10B细胞中的表达,探讨nm23-H1表达下调对6-10B细胞生物学行为的影响。方法：采用脂质体法将nm23-H1基因siRNA(nm23-H1 siRNA)瞬间转染6-10B细胞,Western 印迹检测转染细胞中nm23-H1蛋白的表达水平,然后利用MTT法、流式细胞术和Transwell小室实验分别检测转染6-10B细胞的增殖、细胞周期和体外迁移侵袭等生物学行为的变化;测序检测6-10B细胞nm23-H1基因有无S120G 点突变。结果： nm23-H1 siRNA有效地下调nm23-H1基因的表达, nm23-H1 siRNA转染6-10B细胞的增殖能力增强,S期细胞增多,体外迁移和侵袭能力增强（P<0.05）。6-10B细胞nm23-H1 基因无S120G 点突变。结论：nm23-H1基因具有抑制人鼻咽癌细胞6-10B增殖和体外迁移侵袭的作用。     

miR-143 调控PAN3 蛋白的表达对B 细胞淋巴瘤细胞侵袭和迁移的影响

目的:探讨miR-143 调控PAN3 蛋白的表达对B 细胞淋巴瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法:运用qPCR 实验检测miR-143 在正常骨髓组织和淋巴瘤血液组织中的表达情况;检测在不同种类的细胞株中miR-143 的表达水平;qPCR 检测miR-143 对PAN3 的表达水平的影响;双荧光素酶实验检测miR-143 和PAN3 之间的相互关系;划痕实验和Transwell 侵袭实验检测miR-143 表达对B 细胞淋巴瘤E6-1 细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:和正常骨髓组织相比,miR-143 在B 细胞淋巴瘤中表达明显下调;选取miR-143 表达水平较低的E6-1 细胞株;双荧光素酶实验表明miR-143 可以下调PAN3 的表达水平,直接影响PAN3 的表达活性;过表达miR-143 后,E6-1 细胞的侵袭和迁移能力明显受到抑制,抑制E6-1 细胞的侵袭转移能力。结论:miR-143 可以通过调控PAN3 的表达,从而调节B 细胞淋巴瘤细胞的迁移和侵袭行为。     

锌转运体ZIP10过表达对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的:将ZIP10基因真核表达载体转染乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7细胞,研究ZIP10过表达对乳腺癌细胞侵袭能力的影响.方法:经双酶切后凝胶电泳鉴定ZIP10基因表达载体pEGFP-N1-ZIP10,利用脂质体转染法将pEGFP-N1-ZIP10及其相应空载体分别转染乳腺癌细胞MDA-MB-231(ER-)及MCF-7(ER+).RT-PCR检测乳腺癌细胞中MMP-2、MMP-9的mRNA水平,Western blot技术检测细胞中ZIP10蛋白质的表达水平,MTT法观察转染pEGFP-N1-ZIP10前后乳腺癌细胞增殖活性,Transwell实验观察转染pEGFP-N1-ZIP10前后乳腺癌细胞侵袭能力的改变.结果:乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞瞬时转染成功后,MMP-2、MMP-9的mRNA 水平没有显著差异,MTT检测结果显示,pEGFP-N1-ZIP10转染乳腺癌细胞后对其增殖活性没有明显影响;Transwell肿瘤细胞侵袭实验显示,ZIP10过表达可显著增加乳腺癌细胞的侵袭能力.结论:ZIP10真核表达载体转染乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231使ZIP10过表达,对细胞增殖活性没有明显影响,但可明显增加肿瘤细胞的侵袭能力.     

子宫颈鳞状细胞癌中DIAPH3表达对细胞迁移和侵袭的作用及分子机制

目的 探讨Diaphanous相关成蛋白3(diaphanous-related formin 3, DIAPH3)对子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma, CSCC)细胞迁移和侵袭的作用及其分子机制。方法 收集30例CSCC石蜡包埋组织及配对癌旁组织,应用生物信息学与免疫组化分析CSCC组织中DIAPH3的表达,并进行临床病理相关性分析。采用分子生物学与肿瘤迁移相关实验分析DIAPH3对CSCC细胞迁移和侵袭的作用及机制。结果 仙桃学术数据库分析显示：DIAPH3 mRNA在CSCC组织(2.37)中表达比癌旁组织(0.25)明显升高(P<0.05);DIAPH3高表达患者的无复发生存率明显降低(P=0.031)。免疫表型：CSCC组织中DIAPH3的阳性率为70.00%(21/30),高于癌旁组织(30%,9/30);DIAPH3的阳性率在不同肿瘤分化程度(P=0.032)和有无淋巴结转移(P=0.018)组间差异有统计学意义。siRNA干扰DIAPH3组：CSCC细胞的迁移率(28.33%,P=0.002)、穿过小室的细胞数(2...     

PRDX6过表达增强肺癌细胞系A549的迁移和侵袭

目的探讨PRDX6过表达对肺癌细胞系A549迁移性及侵袭性的影响。方法 1)体外培养人肺癌细胞系A549,分为空白组、转染PRDX6组、转染空质粒组。2)Western blot检测细胞PRDX6蛋白表达;3)Transwell小室法检测细胞的迁移性及侵袭性。结果 1)转染PRDX6组PRDX6蛋白表达较空白组及转染空的质粒组明显增高(均P0.05);2)转染PRDX6组迁移性及侵袭性较空白组及转染空质粒组显著增高(P0.05)。结论 PRDX6的高表达增强肺癌细胞系A549的迁移性及侵袭性。     

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨膜联蛋白A5(ANXA5)低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响。方法将细胞分为干扰组、阴性对照组、转染试剂对照组和空白对照组,采用脂质体转染法将siRNA转染干扰组HeLa细胞,在转染72h后采用RT-PCR和Western blotting检测各组ANXA5的表达以鉴定抑制效率;细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组HeLa细胞的侵袭能力;RT-PCR和Western blotting分别检测ANXA5低表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA及蛋白表达的影响。结果干扰组ANXA5蛋白及mRNA的表达均明显低于阴性对照组(P0.05);其表达均被显著抑制,干扰组细胞的迁移及侵袭能力比阴性对照组明显增强(P0.05),E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P0.05);干扰组MMP-9mRNA及蛋白的表达均显著高于阴性对照组(P0.05)。结论靶向ANXA5的siRNA可有效抑制ANXA5的表达,且ANXA5低表达可能通过影响E-cadherin和MMP-9的表达来促进HeLa细胞的迁移和侵袭能力。     

胃癌中E-cadherin、MMP-2的表达及侵袭转移机制

目的 通过检测E-cadherin和MMP-2蛋白在胃癌中的表达,探讨它们在肿瘤转移和侵袭过程中的作用.方法 取胃癌组织50例,正常胃黏膜10例;应用SP法免疫组化检测E-cadherin、MMP-2蛋白的表达.结果 (1)胃癌组织中E-cadherin蛋白的阳性表达率为46%(23/50),明显低于正常黏膜100%(10/10,P<0.001).转移组阳性表达率为35.29%(12/34)明显低于非转移组68.75%(11/16),差异有显著性(P<0.05).与临床分期、浸润分级的关系显示,Ⅲ-Ⅳ期和T3-T4级癌组织中E-cadherin蛋白表达分别明显低于Ⅰ-Ⅱ期和T1-T2级(P<0.05).E-cadherin表达还与组织学分级相关:胃癌分化程度低则阳性表达率也低;分化程度高则阳性表达率也高,差异有显著性(P<0.05).(2)MMP-2在胃癌组织中阳性表达率为74%(37/50),而正常胃黏膜上皮细胞中几乎无棕染颗粒,其差异有显著性(P<0.05).转移组MMP-2阳性表达率(82.35%)明显高于非转移组(56.25%,P<0.05).MMP-2的表达与组织学分级明显相关:随着胃癌分化程度降低,MMP-2阳性表达率升高(P<0.05);Ⅲ-Ⅳ期胃癌表达明显高于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05);T3-T4级MMP-2阳性表达率高于T1-T2级(P<0.001).(3)MMP-2与E-cadherin表达之间呈高度负相关(相关系数r=-0.368,P<0.009).结论 MMP-2在胃癌中均呈高表达,而E-cadherin则反之.E-cadherin蛋白表达减弱与胃癌侵袭转移潜能相关,可作为胃癌侵袭转移的生物学标志之一.     

Calreticulin通过诱导细胞EMT促进鼻咽癌迁移和侵袭

目的:观察钙网蛋白(calreticulin,CRT)在鼻咽癌组织中的表达并分析其临床病理学意义,揭示其对鼻咽癌CNE2细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:S-P免疫组化法检测CRT在52例鼻咽癌组织和57例鼻咽部良性病变组织中的表达情况,并分析其临床病理学意义;构建特异性干扰CRT基因的小干扰RNA干扰载体,瞬时转染鼻咽癌CNE2细胞,观察CRT低表达对CNE2细胞形态的影响;Transwell迁移和侵袭实验检测CRT低表达对CNE2细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测CRT低表达对上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转化生长因子-β(TGF-β)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)等EMT相关蛋白表达的影响。结果:CRT在鼻咽癌组织中的阳性表达率为82.69%(43/52),在鼻咽部良性病变组织的阳性表达率为19.29%(11/57),CRT在鼻咽癌组织中表达显著增高(P0.05);CRT的阳性表达率与鼻咽癌分期及淋巴结转移呈正相关(P0.05)。敲降CRT呈低表达后,CNE2细胞由梭形演变为扁平和鹅卵石样,且细胞排列紧密,细胞的迁移侵袭能力减弱(P0.05)。敲降CRT呈低表达后,E-cadherin表达显著增高,vimentin、TGF-β以及MMP-9蛋白的表达降低(P0.05)。结论:Calreticulin在鼻咽癌组织中表达显著增高,且与鼻咽癌临床分期及淋巴结转移呈正相关。Calreticulin可诱导鼻咽癌CNE2细胞发生EMT,进而促进鼻咽癌的迁移和侵袭。     

EB病毒潜在膜蛋白对鼻咽癌细胞系CNE1生长及HLA表达的影响

目的研究ＥＢＶ－ＬＭＰ对高分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１生长及ＨＬＡ表达的影响。方法以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象，采用电穿孔基因转染技术，将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒ｐＣＭＶａ－ＬＭＰ转染ＣＮＥ１细胞。用细胞体外增殖试验、免疫组化和流式细胞术等方法，观察细胞生长及ＨＬＡ表达的变化。结果ＥＢＶ－ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞的增殖，增殖吸光度（Ａ）比值试验组与空白组及阴性对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）；实验组细胞软琼脂克隆形成率显著高于空白及阴性对照组（Ｐ＜０．０１）；细胞ＤＮＡ含量明显增高（Ｐ＜０．０１／０．０５）；ＦＣＭ法测定细胞角蛋白表达，实验组比空白及阴性对照组阳性率显著降低（Ｐ＜０．０５）；ＨＬＡ免疫组化检测结果表明，ＬＭＰ表达细胞系ＨＬＡⅠ类及Ⅱ类抗原的表达都明显下降（Ｐ＜０．０１）。结论ＥＢＶ－ＬＭＰ对ＣＮＥ１细胞生长有明显的促进作用且可明显抑制细胞分化，ＬＭＰ可致鼻咽癌细胞ＨＬＡ抗原的表达改变。     

EB病毒感染对鼻咽癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨EB病毒(EBV)感染对鼻咽癌细胞系生长和细胞凋亡的影响。方法:用EBV直接感染人鼻咽癌细胞系CNE1;用免疫组化(LSAB)法检测EBV-LMP1和bcl-2蛋白的表达;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的生长能力;用流式细胞术和TUNEL法检测癌细胞凋亡。结果:感染EBV的鼻咽癌细胞系(E-CNE1)的EBV-LMP1表达阳性,生长能力较未感染EBV的CNE1明显增强(P＜0.01),2种鼻咽癌细胞系均无凋亡发生,而均仅有2%~3%的细胞表达bcl-2蛋白。结论:EBV感染和LMP1表达可促进鼻咽癌细胞生长,但对鼻咽癌细胞的bcl-2表达和细胞凋亡无影响。     

EB病毒感染对鼻咽癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨EB病毒(EBV)感染对鼻咽癌细胞系生长和细胞凋亡的影响。方法:用EBV直接感染人鼻咽癌细胞系CNE1;用免疫组化(LSAB)法检测EBV-LMP1和bcl-2蛋白的表达;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的生长能力;用流式细胞术和TUNEL法检测癌细胞凋亡。结果:感染EBV的鼻咽癌细胞系(E-CNE1)的EBV-LMP1表达阳性,生长能力较未感染EBV的CNE1明显增强(P<0.01),2种鼻咽癌细胞系均无凋亡发生,而均仅有2%~3%的细胞表达bcl-2蛋白。结论:EBV感染和LMP1表达可促进鼻咽癌细胞生长,但对鼻咽癌细胞的bcl-2表达和细胞凋亡无影响。     

口虾蛄提取物对人鼻咽癌细胞迁移和体外血管生成拟态的抑制作用

 目的：研究口虾蛄提取物（extract of Oratosquilla,EOS）对人低分化鼻咽癌细胞株CNE-2的迁移及体外血管生成拟态的影响。方法：用不同浓度（0 mg/L 、125 mg/L、250 mg/L、500 mg/L）EOS处理CNE-2细胞24 h后,创伤修复实验检测细胞迁移能力;通过Matrigel三维细胞培养观察CNE-2细胞形成类血管网状结构的能力及其特点;体外管道形成抑制实验检测不同浓度EOS对CNE-2细胞管道形成能力的影响;Western blotting法检测不同浓度EOS对CNE-2细胞fascin 1和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的影响。结果：EOS可以显著降低CNE-2细胞的迁移能力,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;CNE-2细胞在Matrigel上培养能形成类似血管的网状样结构;EOS能以剂量依赖方式抑制CNE-2细胞体外管道形成的数量（P＜0.01）;EOS能抑制CNE-2细胞中fascin 1和VEGF蛋白的表达（P＜0.01）,且其管状结构数量与2种蛋白变化趋势呈正相关（P＜0.05）。结论：CNE-2细胞具有血管生成拟态的能力;EOS能够抑制CNE-2细胞的迁移和体外血管生成拟态的能力,其机制可能与下调fascin 1和VEGF蛋白的表达有关。     

沉默TRIM27基因对鼻咽癌5-8F细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的:检测TRIM27蛋白在鼻咽癌组织和鼻咽部正常组织中的表达水平,观察沉默TRIM27对鼻咽癌5-8F细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:通过免疫组化技术检测鼻咽癌组织和鼻咽部正常组织中TRIM27的表达水平,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blot法分别检测5-8F细胞和NP69细胞中TRIM27的mRNA和蛋白表达水平;利用脂质体2000将TRIM27干扰序列转入5-8F细胞中;采用real-time PCR检测转染后细胞中TRIM27 mRNA表达水平的变化,Western blot法检测转染后细胞中TRIM27蛋白水平的变化;CCK-8法检测细胞活力的变化;细胞平板集落形成实验观察转染后细胞增殖能力的变化;Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化;划痕实验观察细胞迁移能力的变化。结果:免疫组化结果显示TRIM27在鼻咽癌组织中的表达率高于鼻咽部正常组织;TRIM27基因沉默后5-8F细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显受到抑制(P0.05)。结论:TRIM27在鼻咽癌5-8F细胞中可能充当癌基因的角色。沉默TRIM27基因可以明显抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

Silencing SATB1 influences cell invasion,migration, proliferation,and drug resistance in nasopharyngeal carcinoma

Special AT rich sequence binding protein 1 (SATB1) play an important role in many cancers, but the role of SATB1 in nasopharyngeal carcinoma (NPC) is still not full understand. Immunofluorescence staining showed that SATB1 was mainly localized in the nuclei in CNE-2 cell. After successful down-regulation of SABT1 in NPC cell line CNE-2 by shRNA, compared to parental CNE-2 and control shRNA group, the capacity of the proliferation, migration, invasion and drug resistance of CNE-2 cell was reduced, which indicated that SATB1 may be involved in NPC development and progression. SATB1 may be a promising therapeutic target for nasopharyngeal carcinoma.     

Hsa-miR-133a对人乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨Hsa-miR-133a(miR-133a)对人乳腺癌细胞侵袭、迁移和增殖的影响,并初步分析miR-133a影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能机制.方法 用脂质体介导的转染方法将miR-133a阻遏物(miR-133a inhibitors)转染人乳腺癌细胞株MCF-7,以inhibitor negative control (inhibitor NC)作为阴性对照.通过MTS试剂盒和Transwell侵袭实验检测细胞增殖能力和侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕试验检测细胞迁移能力;再利用生物信息学方法预测miR-133a的靶基因,并对其靶基因进行基因功能分析.结果 (1)miR-133a inhibitors组与inhibitor NC组间细胞增殖活性差异无显著性(P>0.05);(2)划痕后miR-133a inhibitors组细胞迁移能力比inhibitor NC组明显增强(P<0.05);(3)Transwell侵袭及迁移实验显示转染miR-133a inhibitors后,MCF-7细胞的侵袭及迁移能力均明显增强(P<0.01,P<0.05);④生物信息学方法预测miR-133a的靶基因中,部分发挥了促进细胞侵袭、迁移的生物学功能.结论 (1)MiR-133a对人乳腺癌细胞的侵袭及迁移能力可能存在负性调控作用,可能成为乳腺癌治疗的潜在候选靶点;(2)MiR-133a可能通过多种靶基因发挥其对肿瘤的调控作用.     

EB病毒潜伏膜蛋白对人鼻咽癌细胞系CNE1生长分化的影响

目的 研究ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＥＢＶ－ＬＭＰ）对人高分化鼻咽癌细胞生长分化的影响。方法 以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象,采用电穿孔基因转染技术,将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒转染ＣＮＥ１细胞。以载体质粒转染及ＣＮＥ１细胞为对照,用细胞体外增殖实验、流式细胞信（ＦＣＭ）和裸鼠体内丰瘤实验等,观察细胞生长分化的变化。结果 ＥＢＶ－ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞地增殖,实验组平均吸光度（Ａ）