家兔木瓜凝乳蛋白酶抗体的制备及鉴定

木瓜凝乳蛋白酶是木瓜乳汁中的四种半胱氨酸酶之一,具有凝乳和蛋白水解特性,其最主要的用途是治疗腰椎间盘突出症。本文以部分纯化的木瓜凝乳蛋白酶为抗原,免疫家兔制备了抗体,并对抗体作了特异性鉴定,为木瓜凝乳蛋白酶的进一步研究与应用奠定了基础。     

木瓜凝乳蛋白酶的分离纯化及体外溶核作用

目的:建立简单有效的木瓜凝乳蛋白酶分离纯化方法,并研究其体外溶核作用.方法:采用离子交换层析直接将木瓜凝乳蛋白酶分离纯化,体外试管法测定该酶的溶核作用.结果:建立了简单有效的木瓜凝乳蛋白酶分离纯化方法,其纯化产品能溶解人体椎间盘的髓核.结论:直接用离子交换层析柱来分离纯化木瓜凝乳蛋白酶是可行的,其体内溶核作用尚值得研究.     

木瓜乳汁中酶的分离纯化

木瓜乳汁中主要含有木瓜蛋白酶(简称PAP)、木瓜蛋白酶Ω(简称CAR)、木瓜凝乳蛋白酶(简称CHP)和木瓜凝乳蛋白酶M(简称GEP)四种内肽酶,同时还含有其他的一些酶.本文综述了用离子交换层析、疏水介质、共价和亲和层析来分离纯化这些酶的研究进展.     

胶原酶注射治疗腰椎间盘突出症研究概况

在腰椎间盘突出的非手术治疗中,１９６４年Ｓｍｉｔｈ［１］开始报道木瓜凝乳蛋白酶（Ｃｈｙｍｏｐａｐａｉｎ）注入椎间盘内,称为化学髓核溶解术（Ｃｈｅｍｏｎｕｃｌｅ－ｏｌｙｓｉｓ）。由于木瓜凝乳蛋白酶对椎间盘胶原的特异性较低,容易使其周围组织产生化学作用,...     

木瓜凝乳蛋白酶与平阳霉素联合使用对鼠肝癌细胞hepa-6的杀伤作用

目的:测定木瓜凝乳蛋白酶与平阳霉素(PYM)联合使用对鼠肝癌细胞hepa-6的细胞毒性.方法:MTT法.结果:木瓜凝乳蛋白酶对hepa-6细胞的IC50约为1200μg/ml,随浓度增加对细胞的抑制率增加.三种不同浓度的酶与PYM联合使用时细胞培养至48 h前,对鼠肝癌细胞hepa-6具有协同杀伤作用;这个现象与酶在生理盐水中的活力变化是一致的;在培养至48 h时第二次加入酶,又可以恢复PYM对鼠肝癌细胞杀伤的促进作用.结论:木瓜凝乳蛋白酶对鼠肝癌细胞hepa-6具有细胞毒作用,对平阳霉素杀伤鼠肝癌细胞hepa-6具有促进作用.     

木瓜凝乳蛋白酶的结构性质及药理研究评析

从四个方面，即：木瓜凝乳蛋白酶的结构、木瓜凝乳蛋白的性质研究、木瓜凝蛋白酶的药物作用研究及木瓜凝乳蛋白酶的开发前景。对木瓜凝乳蛋白酶的结构性质及药理进行研究。认为，可用于化学溶核术治疗腰椎间盘突出症，用于输血的血型鉴定及交叉配血、纯化骨髓瘤细胞及加速儿科烧伤愈合。     

盘内注射胶原蛋白水解酶治疗腰椎间盘突出症

自Ｓｍｉｔｈ采用化学溶核术将木瓜凝乳蛋白酶首次用于治疗椎间盘突出症以来〔１〕，众多学者相继进行大量实验与临床应用观察，认为真正有效的化学溶核术是最受欢迎的治疗方法〔２〕。我院康复中心自１９９５年３月～１９９７年１２月采用胶原蛋白水解酶（以下简称胶原酶...     

硬膜外注射胶原酶治疗腰椎间盘突出症24例

硬膜外注射胶原酶治疗腰椎间盘突出症２４例闫建明彭敬生温泉盛郭铭辉福建省南平市人民医院（３５３０００南平）关键词胶原酶化学溶核术椎间盘突出症自Ｓｍｉｔｈ采用化学溶核术将木瓜凝乳蛋白酶（ｃｈｙｍｏｐａｐａｉｎＣＰ）首次用于治疗椎间盘突出症以来，众多学者相...     

人C-反应蛋白的分离纯化及初步应用

目的：从临床血清样本分离纯化获得人C-反应蛋白（CRP）。方法：运用盐析法、DEAE离子交换层析和亲和层析等方法从临床血清样本中分离纯化出CRP,用于免疫山羊制备多克隆抗体,初步建立免疫透射比浊法测定CRP并进行评价。结果：SDS-PAGE结果显示纯化产物出现相对分子质量约为23000的主带,Western Blotting结果显示纯化产物能与CRP单克隆抗体发生特异性结合,证实纯化产物为CRP,与商品CRP有很好的可比性性。以自提CRP制备出效价高、特异性强的多克隆抗体,运用该抗体建立的CRP免疫透射比浊法具有比较好的性能。结论：成功分离纯化出人CRP,可用于进行生产研究。     

木瓜凝乳蛋白酶的结构性质及药理研究评析

从四个方面,即:木瓜凝乳蛋白酶的结构、木瓜凝乳蛋白的性质研究、木瓜凝蛋白酶的药物作用研究及木瓜凝乳蛋白酶的开发前景。对木瓜凝乳蛋白酶的结构性质及药理进行研究。认为,可用于化学溶核术治疗腰椎间盘突出症,用于输血的血型鉴定及交叉配血、纯化骨髓瘤细胞及加速儿科烧伤愈合。     

双黄连注射剂中黄芩苷致敏原性的研究

目的:研究双黄连注射剂中黄芩苷的致敏原性.方法:通过运用酶联免疫双抗夹心和免疫指纹图谱2种方法结合对双黄连注射剂中黄芩苷的致敏原性进行研究.结果:运用酶联免疫双抗夹心法检测黄芩苷的致敏性,结果呈阳性反应;运用免疫指纹图谱法检测黄芩苷的致敏性,致敏率为86.28％.结论:通过运用以上方法结合确定了双黄连注射剂中黄芩苷为致敏原,建立了快速筛查中药注射剂中致敏原的分析方法.     

三种不同免疫检验方法检测HIV抗体的价值比较

目的:对比3种不同免疫检验方法检测HIV抗体结果的可靠性。方法:选取本院住院及门诊患者136例,其中HIV初筛阴性68例,HIV初筛阳性68例,用CLIA法、ELISA法及胶体金法检测HIV抗体,对其中一种方法检测出HIV抗体阳性的标本用其它两种方法同时复查,并送检HIV确证实验室用WB法(金标准)进行确证试验。结果:136例患者中,初筛阳性患者68例,以免疫印迹法检测作为金标准,确证阳性患者32例,其中ELISA初筛出36例,灵敏度100%,特异度96.2%,误诊率3.8%,漏诊率0,可用度0.94,可靠度0.96,kappa值为0.922,与WB法比较具有诊断一致性(P>0.05);胶体金法初筛出36例,胶体金法灵敏度100%,特异度96.2%,误诊率3.8%,漏诊率0,可用度0.94,可靠度0.96,kappa值为0.922,与WB法比较具有诊断一致性(P>0.05);CLIA初筛出64例,CLIA灵敏度100%,特异度69.2%,误诊率30.8%,漏诊率0,可用度0.58,可靠度0.69,kappa值为0.514,与WB法比较不具有诊断一致性(P<0.05)。以CLIA法血清HIV抗体S/CO≥1作为HIV初筛阳性的临界判断,对64例CLIA初筛阳性的患者分别用ELISA、胶体法及WB法进行复查,发现S/CO为1~10组,WB法、ELISA阳性符合率为0,胶体金法阳性符合率为13.3%;S/CO为11~50组,WB法、ELISA及胶体金法阳性符合率均为66.7%,S/CO>50组,WB法、ELISA及胶体金法阳性符合率均为100%;以WB法为诊断基准,三组随着S/CO越大,真阳性率越高,三组比较具有统计学意义(P<0.05),ELISA、胶体金法复查初筛阳性的患者随着S/CO值越大,其阳性符合率越高,三组比较均具有统计学意义(P<0.05)。结论:三种免疫检测方法检测HIV抗体各有优势,医院可结合自身情况选择检测方法,对初筛阳性的标本可采取另一种方法复检,相互结合,及时对患者做出诊断,采取措施保护职业暴露人员。     

MEIA在检测HBV标志物特殊表达模式中的意义

目的 :研究 MEIA在检测 HBV标志物特殊表达模式中的意义 ;MEIA与 EL ISA检测法在上述特殊表达模式中的符合率。方法 :ELISA法检测患者 H BV血清标志物 ,选择 10 0份有特殊表达模式的血清标本以 MEIA复检之 ,观察两者的异同。结果 :MEIA对 HBs Ag、抗 -H Be、抗 -HBc的检出率明显高于 EL ISA法 ,P分别 <0 .0 5 ,<0 .0 0 5 ,<0 .0 0 5 ;H Bs Ag和抗 -HBs同时阳性组两种方法检测的符合率最高 75 % (2 7/36 ) ;HBs Ag和 HBe Ag阳性抗 -HBc阴性组两种方法检测的符合率为 6 2 % (16 /2 6 ) ;HBV标志物与临床表现不符组两种方法检测的符合率为 11% (1/9) ;EL ISA检测单项阳性组两种方法检测符合率低。结论 :EL ISA与 MEIA两种检测方法存在差异 ,MEIA具有灵敏度高、特异性强和重复性好的特点 ,在某些情况下建议使用 MEIA检测法     

剑叶龙血素A间接竞争ELISA检测方法的建立

目的: 建立间接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)用于测定剑叶龙血素A(CA)含量。方法: 合成半抗原剑叶龙血素A-4'-羧甲基醚(CA-4'-CME),再用碳二亚胺法将其与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)分别偶联制备免疫原(CA-BSA)和包被原(CA-OVA),免疫小鼠制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA法并评估其分析性能。结果: 通过紫外扫描分析CA-BSA和CA-OVA的偶联比分别为18:1和24:1。抗血清效价最高达到12 000。用四参数logistic方程拟合CA标准曲线,在分析范围0~0.80 mg·L^-1内,相关系数(R²)≥0.99,IC₅₀ 0.66 mg·L^-1,最低检测限0.045 mg·L^-1,批内CV≤12.5%,批间CV≤14.7%,回收率92.7%~118.7%,对5种CA类似物的交叉反应率<5.38%。此方法检测龙血竭和龙血竭总黄酮中CA含量分别为1.27%,3.08%。结论: 剑叶龙血素A间接竞争ELISA法精密度、准确度和特异性均较好,可方便地用于药物检测和分析。     

镰形棘豆对SMMC-7721肝癌细胞增殖及MMP-2表达的影响

目的:观察镰形棘豆对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖及其基质金属蛋白酶-2(MMP-2)分泌量的影响.方法:以不同质量浓度(25,50,100,250,500 mg·L-1)的镰形棘豆挥发油、总多糖、总黄酮、总生物碱和总皂苷部位处理SMMC-7721细胞24 h后,采用MTT法检测各部位对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用;采用ELISA法测定挥发油部位和总黄酮部位处理SMMC-7721肝癌细胞24 h后细胞上清中MMP-2的分泌量;Real-time PCR法检测处理24 h后MMP-2 mRNA的转录情况.结果:MTT实验结果表明,挥发油和总黄酮部位抑制SMMC-7721细胞的增殖,并表现出一定的浓度依赖性.ELISA实验表明挥发油部位显著性地抑制MMP-2分泌量;Real-time PCR实验表明挥发油和总黄酮均显著抑制MMP-2 mRNA的表达.结论:镰形棘豆挥发油和总黄酮部位抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖活性,可能与其下调MMP-2的分泌量和转录水平有关.     

痹清胶囊对大鼠急性痛风性关节炎白细胞介素12及诱导型环氧化酶表达的影响

目的:采用尿酸钠(MUS)诱导的大鼠急性痛风性关节炎模型,研究痹清胶囊治疗急性痛风性关节炎作用机理。方法:采用ELISA方法测定踝关节液白细胞介素12(IL-12)的含量及采用免疫组化方法测定大鼠踝关节诱导型环氧化酶(COX-2)的表达。结果:痹清胶囊明显降低痛风性关节炎模型大鼠踝关节IL-12的含量、抑制大鼠踝关节COX-2的表达。结论:痹清胶囊治疗痛风性关节炎有确切疗效,可能与降低IL-12的含量、抑制COX-2的表达有关。     

华支睾吸虫分泌-排泄抗原在血清学诊断中的意义

目的评价华支睾吸虫分泌-排泄抗原在华支睾吸虫病血清学诊断中的价值,应用ELISA技术对华支睾吸虫的成虫粗抗原和分泌-排泄抗原的敏感性和特异性进行比较。方法制备华支睾吸虫的粗抗原和分泌-排泄抗原,以ELISA方法对华支睾吸虫感染患者509人、麝猫后睾吸虫感染者47人、卫氏并殖吸虫感染者20人、日本血吸虫感染者14人以及健康人血清163人,检测血清特异性IgG。结果比较华支睾吸虫分泌-排泄抗原的诊断的敏感性高于粗抗原,分泌-排泄抗原的特异性反应明显高于粗抗原。结论分泌-排泄抗原用于诊断感染华支睾吸虫病有较高的敏感性和特异性,是一种有效的诊断抗原。