类胰蛋白酶抑制剂对人大肠肥大细胞组胺释放的影响

目的 :研究类胰蛋白酶抑制剂 (TPI)对人大肠肥大细胞释放组胺的影响。方法 :大肠组织经胶原酶和透明质酸酶消化后 ,将细胞成分用全HBSS重新悬浮。肥大细胞在LP4试管中于37℃条件下与各种刺激剂反应 15min而完成激发过程。激发液中的组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定。结果 :4种TPI中 ,高浓度的亮抑酶肽素和鱼精蛋白可刺激人大肠肥大细胞释放组胺 ;而TLCK和乳铁蛋白则无明显的刺激作用。 4种TPI均可以剂量依赖的方式抑制抗IgE抗体诱导的大肠肥大细胞释放组胺。最大浓度的亮抑酶肽素(2 0 0mmol/L)、TLCK(10 0mmol/L)、乳铁蛋白 (30mmol/L)和鱼精蛋白 (10 0mg/L) ,可分别抑制 4 8.7%、36 .7%、4 0 .2 %和 34.1%的组胺释放。在 37℃条件下 ,将 4种TPI同大肠肥大细胞预培养 2 0min ,与未进行预培养相比较 ,它们对抗IgE抗体诱导的组胺释放无明显改变。 4种TPI还可抑制CI诱导的组胺释放 ,抑制范围在 2 5 %～ 32 %之间。与抗IgE抗体诱导的组胺释放则不同 ,与大肠肥大细胞预培养 2 0min ,与未进行预培养相比较 ,亮抑酶肽素和TLCK对CI诱导的组胺释放的抑制作用明显增强 ;而鱼精蛋白则无此作用。结论 :我们首次发现TPI可抑制人大肠肥大细胞IgE抗体依赖和非IgE抗体依赖的组胺释放 ,提示TPI可望成为炎症性肠     

蛋白酶抑制剂对肥大细胞类胰蛋白酶分泌的影响

目的 探讨蛋白酶抑制剂和组胺对肥大细胞类胰蛋白酶分泌的影响。方法 扁桃体组织经酶消化后，细胞成份用全HBSS重新悬浮，肥大细胞激发和抑制剂作用的试验在37℃条件下完成。类胰蛋白酶水平用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定。结果 鱼精蛋白具有刺激人类扁桃体肥大细胞释放类胰蛋白酶的作用，其分泌量可高达基础分泌量的5倍。高浓度TLCK和TPGK可抑制抗-IgE诱导的类胰蛋白酶释放，TLCK在有否预培养的情况下均能抑制钙离子导入剂（cal-cium ionophore,CI)诱导的类胰蛋白酶释放，而TPCK则只有在20min预培养后才能显示此作用。结论 TLCK和TPCK抑制IgE依赖性和非依赖性类胰蛋白酶释放提示具有胰蛋白酶和糜蛋白酶活性的酶参与肥大细胞的激活-分泌偶联过程。     

肥大细胞类糜蛋白酶与哮喘

类糜蛋白酶是肥大细胞分泌的主要中性蛋白酶之一。近年来研究显示,类糜蛋白酶参与了支气管哮喘的诸多 病理生理过程,在气道黏液高分泌、黏膜炎症、支气管平滑肌收缩、气道重建以及对肥大细胞激活的调节中起着重要的作用。     

组胺对人结肠肥大细胞类胰蛋白酶释放的调节作用

探讨组胺对人结肠肥大细胞类胰蛋白酶释放的调节作用。经酶消化后获取人结肠组织肥大细胞,激发后行多种干预实验。用酶联免疫吸附试验法测定类胰蛋白酶。结果发现组胺可诱导人结肠肥大细胞释放类胰蛋白酶,浓度为100μg/L时组胺释放量最大,为基础值的3．5倍。浓度为10μg/L时对人肥大细胞的刺激强度与10mg/L的抗IgE抗体相似。组胺的作用从加样后10s开始,5min后完成。百日咳毒素和抗霉素A联合2．脱氧-D-葡萄糖可显著抑制组胺诱导人结肠肥大细胞释放类胰蛋白酶。100及1000μg/L的组胺与抗IgE抗体或离子载体钙同时加入细胞中,诱导类胰蛋白酶释放的能力低于组胺单独作用组。结论为组胺可激活人结肠肥大细胞,还以自身放大机制调节肥大细胞的脱颗粒过程。     

绵羊肥大细胞中类胰蛋白酶的证实

用甲苯胺蓝和阿尔辛蓝常规组织化学方法及特异性酶底物鉴定人肥大细胞类胰蛋白酶的酶组织化学技术，采用小鼠抗人肥大细胞类胰蛋白酶单克隆抗体，（ＡＡ１、ＡＡ３和ＡＡ５）通过间接免疫过的经物酶技术对绵羊肥大细胞的组织化学特性进行研究，酶组织化学技术及免疫组织化学技术均首次证实了绵羊肥大细胞颗粒中含有类胰蛋白酶，且该酶可作为绵羊肥大细胞的特异性标志，对于绵羊肥大细胞的常规组织化学染色，Ｃａｒｎｏｙ液及中性缓门     

人肥大细胞的IgE依赖性组胺和类胰蛋白酶分泌

目的　利用人结肠组织的肥大细胞和肥大细胞激活的体外研究系统评价人肥大细胞释放类胰蛋白酶和组胺的能力及其机制。方法　经酶悬浮的人结肠肥大细胞与抗IgE抗体共同培养后记录浓度相关曲线和时间关系曲线。类胰蛋白酶用酶联免疫吸附试验的方法测量 ,而组胺则由一种以玻璃纤维为基础的荧光比色法测量。结果　抗IgE抗体可引起浓度相关性的组胺和类胰蛋白酶释放 ,最大组胺和类胰蛋白酶分泌量分别比基础分泌量超出 2 .7和 2 .5倍以上。抗IgE抗体的作用从加样后 10s开始 ,6min后达高峰并至少持续 15min。百日咳毒素和代谢抑制剂能够分别抑制抗IgE抗体引起的组胺和类胰蛋白酶释放。百日咳毒素还能够减少自发性类胰蛋白酶释放。结论　人结肠肥大细胞在受到抗IgE抗体刺激时具有平行释放类胰蛋白酶和组胺的能力 ,这个过程与肥大细胞膜G蛋白偶联受体的激活有关 ,并消耗能量。肥大细胞自发性释放组胺和类胰蛋白酶的功能可能是通过不同的机制实现的。     

肥大细胞类胰蛋白酶与支气管哮喘

支气管哮喘 (以下简称哮喘 )一直被认为与I型变态反应密切相关 ,而肥大细胞是介导I型变态反应的重要成分之一。肥大细胞的活化信号主要来自变应原与IgE的桥联 ,但神经肽及其它因素也能使肥大细胞活化。活化肥大细胞脱颗粒 ,释放出颗粒中预先合成和新合成的各种介质 ,如类胰蛋白酶、类糜蛋白酶、组胺、肝素等。这些介质作用于靶分子、靶细胞和靶组织 ,引起哮喘在病理、病理生理等方面的变化。目前普遍认为哮喘是一种复杂的慢性呼吸道炎症 ,其主要特征为对特异性和非特异性刺激物诱发的气道高反应性、炎症细胞浸润及气道重塑[1,2 ,2 1] 。虽…     

特异性类胰蛋白酶抑制剂双苯甲脒对肥大细胞分泌的调控作用

目的：研究新型的特异性类胰蛋白酶抑制剂双苯甲脒，对肥大细胞稳定性的影响。方法：扁桃体组织经酶消化后，将细胞成分用全HEPES缓冲盐溶液（HBSS）重新悬浮。肥大细胞激发和抑制剂作用的试验在试管中37℃条件下完成，类胰蛋白酶水平用ELISA法测定。结果：同时加入扁桃体细胞悬液中的双苯甲脒，可以剂量依赖的方式抑制抗IgE诱导的类胰蛋白酶释放，仅1mg/L(1.54μmol/L）的双杠甲脒，即可抑制肥大细胞释放类胰蛋白酶达52%，10mg/L则能抑制76%的释放，将预培养时间延长30min，对双苯甲脒的抑制作用无明显影响，在培养到45min时，双苯甲脒可抑制高达47%的基础类胰蛋白酶释放，与细胞培养15min后，抗IgE抗体（1g/L)或钙离子导入剂（CI，1μmol/L）引起的类胰蛋白酶释放的量，分别为基础分泌量的3.2和2.6倍，但是，当细胞与全HBSS预培养超过10min后，肥大细胞对抗IgE抗体或CI的反应性明显降低。结论：双苯甲脒能够抑制人类扁桃体肥大细胞的IgE依赖性类胰蛋白酶释放。因素，有望开发成为一种新型的肥大细胞稳定剂。     

绝经前后子宫内膜息肉中肥大细胞类胰蛋白酶及类糜蛋白酶的表达及意义

目的探讨肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)及类糜蛋白酶(MCC)在绝经前、后子宫内膜息肉组织(EP)中的表达及临床意义。方法收集120例患者标本,其中绝经前EP组和绝经后EP组各35例,绝经前正常增生期子宫内膜组和绝经后正常萎缩性子宫内膜组各25例。采用Max VisionTM/HRP免疫组织化学染色法,检测各组中MCT及MCC阳性的肥大细胞(MCs)数量并分析临床意义。结果绝经前、后EP组和正常子宫内膜组中MCT和MCC阳性的MCs计数均值分别为高倍镜下(11.82±5.24)个和(2.94±2.20)个、(4.18±2.32)个和(2.18±1.52)个、(2.19±1.80)个和(0.49±0.60)个以及(0.35±0.32)个和(0.19±0.26)个。两两比较结果显示,绝经前、后EP组MCT和MCC阳性的MCs数量明显高于同期正常子宫内膜组(P0.05);在EP组中,MCT阳性的MCs数量在绝经前高于绝经后(P0.05),而MCC阳性的MCs数量没有明显差异(P0.05);在正常子宫内膜组中,MCT和MCC阳性的MCs数量在绝经前均高于绝经后(P0.05)。结论肥大细胞(MCs)的过度活化以及伴随的炎症性损害可能是绝经前、后子宫内膜息肉形成及发展的原因。     

LDTI抑制肥大细胞类胰蛋白酶活性并阻断其抑制胆固醇流出能力的研究

目的:肥大细胞(MCs)类胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,目前未发现其体内内生的抑制剂。本研究用水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂(LDTI)研究MCs颗粒释放液抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的机制。方法:用Compound 48/80刺激大鼠腹腔MCs活化,制备颗粒释放液。荧光分光光度仪检测MCs组胺释放率。采用丙酮抽提LDTI并用反相高效液相纯化。酶法检测MCs颗粒释放液中类胰蛋白酶的活性。用15%非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳检测HDL3的改变。用高效液相色谱检测细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)含量,液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出。结果:MCs颗粒释放液使泡沫细胞内胆固醇流出减少,总、游离胆固醇蓄积增加,HDL3的载脂蛋白A-Ⅰ降解;而用LDTI抑制MCs颗粒释放液中类胰蛋白酶的活性后,可取消MCs颗粒释放液的这些作用。结论:LDTI能抑制MCs颗粒释放液的作用,表明类胰蛋白酶可以抑制胆固醇外流,而且与HDL3的apoA-Ⅰ的降解有关。     

亮肽素、TLCK和乳铁蛋白对人结肠肥大细胞类胰蛋白酶释放的影响

目的：探讨亮肽素、N-甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基化酮（TLCK）和乳铁蛋白对人结肠肥大细胞释放类胰蛋白酶的影响。 方法： 人结肠组织经酶消化后，细胞成份用全HBSS重新悬浮。激发过程在LP4试管中、37 ℃ 条件下完成。类胰蛋白酶水平用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定。 结果： 亮肽素、TLCK和乳铁蛋白无明显刺激人结肠肥大细胞释放类胰蛋白酶的作用。但可以剂量依赖性的方式抑制抗IgE抗体诱导的类胰蛋白酶释放，抑制范围在36.6%-47.6%。在37 ℃条件下同结肠细胞预培养20 min与无预培养相比，亮肽素和TLCK对抗IgE抗体诱导的类胰蛋白酶释放的抑制作用无明显改变。亮肽素、TLCK和乳铁蛋白均可以抑制CI诱导的类胰蛋白酶释放，抑制范围在27.1%-44.1%。在37 ℃条件下同结肠细胞预培养20 min与无预培养相比，亮肽素对CI诱导的类胰蛋白酶释放的抑制作用明显增强，TLCK则无此特点。 结论： 我们首次发现类胰蛋白酶抑制剂可抑制人结肠肥大细胞IgE依赖性和非依赖性类胰蛋白酶释放，提示类胰蛋白酶抑制剂可治疗炎症性肠病或其它肥大细胞相关疾病。     

Tryptase和TIM-1双阳性肥大细胞在不同程度人牙周炎组织中的量化研究*

 目的：T细胞免疫球蛋白黏蛋白1（T-cell immunoglobulin mucin 1,TIM-1）作为一种免疫调节分子,能影响肥大细胞的功能。TIM-1在牙周炎过程中是否在肥大细胞上表达未见报道。本研究旨在观察TIM-1在慢性牙周炎牙龈组织中肥大细胞上的表达,探讨类胰蛋白酶（tryptase）和TIM-1双阳性肥大细胞在牙周炎发病机制中的作用。方法：将92例接受研究的患者按慢性牙周炎的病变程度分成3组：（1）正常对照组27例;（2）轻度牙周炎组34例;（3）重度牙周炎组31例。牙龈组织标本经4%甲醛液固定48 h以上。牙龈标本经石蜡包埋、组织连续切片,HE染色,光学显微镜下观察牙龈的组织学改变;采用免疫荧光双染色,荧光显微镜下观察牙龈组织中tryptase和TIM-1双阳性肥大细胞的表达情况。结果：牙龈组织中的炎症反应程度与慢性牙周炎的病变程度趋势一致。与正常对照组相比较,轻度慢性牙周炎组（P<0.05）和重度慢性牙周炎组（P<0.01）牙龈组织中tryptase和TIM-1双阳性肥大细胞数量显著升高;重度牙周炎组牙龈组织中的tryptase和TIM-1双阳性肥大细胞数量高于轻度牙周炎组（P<0.05）。结论：慢性牙周炎牙龈组织中的tryptase和TIM-1双阳性肥大细胞数量与牙周炎程度的趋势相一致,提示tryptase和TIM-1双阳性肥大细胞可能参与对慢性牙周炎发病过程的免疫调节。     

Human mast cell tryptase in biology and medicine

The most abundant prestored enzyme of human mast cell secretory granules is the serine-protease tryptase. In humans, there are four tryptase isoforms, but only two of them, namely the alpha and beta tryptases, are known as medically important. Low levels of continuous tryptase production as an immature monomer makes up the major part of the baseline serum tryptase levels, while transient release of mature tetrameric tryptase upon mast cell degranulation accounts for the anaphylactic rise of serum tryptase levels. Serum tryptase determination contributes to the diagnosis or monitoring of mast cell disorders including mast cell activation – induced anaphylaxis, mastocytosis and a number of myeloproliferative conditions with mast cell lineage involvement. Baseline serum tryptase levels are predictive of the severity risk in some allergic conditions.     

Inhibition of tryptase release from human colon mast cells by histamine receptor antagonists

The main objective of this study was to investigate the ability of histamine receptor antagonists to modulate tryptase release from human colon mast cells induced by histamine. Enzymatically dispersed cells from human colon were challenged with histamine in the absence or presence of the histamine receptor antagonists, and the tryptase release was determined. It was found that histamine induced tryptase release from colon mast cells was inhibited by up to approximately 61.5% and 24% by the H1 histamine receptor antagonist terfenadine and the H2 histamine receptor antagonist cimetidine, respectively, when histamine and its antagonists were added to cells at the same time. The H3 histamine receptor antagonist clobenpropit had no effect on histamine induced tryptase release from colon mast cells at all concentrations tested. Preincubation of terfenadine, cimetidine or clobenpropit with cells for 20 minutes before challenging with histamine did not enhance the ability of these antihistamines to inhibit histamine induced tryptase release. Apart from terfenadine at 100 microg/ml, the antagonists themselves did not stimulate tryptase release from colon mast cells following both 15 minutes and 35 minutes incubation periods. It was concluded that H1 and H2 histamine receptor antagonists were able to inhibit histamine induced tryptase release from colon mast cells. This not only added some new data to our hypothesis of self-amplification mechanisms of mast cell degranulation, but also suggested that combining these two types of antihistamine drugs could be useful for the treatment of inflammatory bowel disease (IBD).     

肥大细胞转化生长因子β在人慢性根尖周病组织中的表达

目的:本研究旨在观察不同类型慢性根尖周病组织中肥大细胞(mast cells,MCs)的分布,分析转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)在MCs上的表达情况,探讨类胰蛋白酶(tryptase)-TGF-β双阳性MCs在慢性根尖周病免疫病理中的作用。方法:共收集78例样本,分为3组:(1)根尖肉芽肿组25例;(2)根尖囊肿组25例;(3)正常对照组28例。组织标本经4%甲醛固定48 h以上。石蜡包埋、制备组织连续切片。HE染色,观察其组织学改变;采用甲苯胺蓝染色法观察各组标本组织中MCs的数量及MCs脱颗粒情况;采用免疫荧光双染色法,在荧光显微镜下观察各组标本组织中tryptase-TGF-β双阳性MCs的数量。结果:(1)与正常对照组相比,两组慢性根尖周病组织中tryptase-TGF-β双阳性MCs密度显著增多(P0.01);(2)根尖囊肿组tryptase-TGF-β双阳性MCs密度明显高于根尖肉芽肿组(P0.01);(3)与甲苯胺蓝染色法相比,tryptase-TGF-β免疫荧光双染色法结果中各组标本组织的MCs密度显著增多(P0.01)。结论:慢性根尖周病组织,尤其是根尖囊肿组织中tryptaseTGF-β双阳性细胞明显增多,提示tryptase-TGF-β双阳性MCs可能在慢性根尖周病中的致病过程,尤其在根尖周囊肿纤维组织形成中发挥作用。Tryptase免疫荧光染色法比传统鉴别肥大细胞的甲苯胺蓝染色法更灵敏。     

Influence of DPPE on histamine release from isolated rat mast cells

A second messenger function for histamine has been proposed based on the effects of the anti-estrogen drug DPPE (N,N-diethyl-2-(4-(phenylmethyl)phenoxy) ethanamine.HCl). The ability of DPPE to inhibit concanavalin A-induced histamine release led to the present investigation of its influence on the mast cell response to a wider selection of secretagogues. DPPE was an efficient inhibitor of antigen-induced release, while responses to compound 48/80 were virtually unaffected. Responses to the ionophore A23187 could be enhanced as well as inhibited, whereas the influence of DPPE on the combination of the ionophore and the phorbol ester TPA was variable and small. These results seem to exclude an involvement of a DPPE-sensitive histamine-mediated signal system of common importance in mast cell histamine release.