恒河猴中TTV感染的回顾性实验研究

目的：了解接种患者血清的恒河猴能否复制ＴＴ病毒（ＴＴ ｖｉｒｕｓ,ＴＴＶ）,正常恒河猴中是否有ＴＴＶ感染,分析猴中ＴＴＶ基因结构特点。方法：用ＰＣＲ方法检测血清标本中ＴＴＶ ＤＮＡ,对ＴＴＶ ＤＮＡ阳性的标本进行序列测定。结果：健康猴中无ＴＴＶ感染;１０只接种患者血清的恒河猴中,经验检测有４只为ＴＴＶ阳性,将其中一株ＴＴＶ进行序列测定,该序列与日本ＴＴＶ部分基因相对应位置的核苷酸同源性为９６％,将     

输血相关病毒母婴传播的分子病毒学鉴定

为了解输血相关病毒在我国绩婴传播 可能及分子病毒学依据,应用半巢式ＰＣＲ调查我院１９９８年１－１２月间住院的８７例产妇及其新生儿的ＴＴＶ感染情况,用克隆后序列分析测定两对母婴同时阳性者ＴＴＶ基因序列。结果发现,在８７例产妇中有１２例用半套式ＰＣＲ可检测出ＴＴＶ,检出率为１３．８％,其中４例产妇与新生儿同时阳性;     

输血传播病毒(TTV)感染的肝病患者36例分析

目的：观察ＴＴＶ（Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ,ＴＴＶ）阳性肝病患者的临床特征。方法：用巢式ＰＣＲ法检测血清ＴＴＶ ＤＮＡ,同时观察血清生化指标和肝组织学的变化。结果：ＴＴＶ感染者的血清学模式以ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＡＶ、ＨＥＶ混合感染为主,占６１．１％（２２／３６）,临床表现以乏力、纳关为特征,ＴＢＬ、ＡＬＴ变化不明显;而ＴＴＶ单独感染者为３８．９％（１４／３６）,临床特     

中国大陆庚型肝炎病毒结构区与非结构区部分cDNA基因的序列分析

作者在建立检测庚型肝炎病毒酶免疫和ＰＣＲ技术的基础上，将抗－ＨＣＶ上阳性病人血清经逆转录－巢式ＰＣＲ分离部分ＨＧＶｃＤＮＡ片段，用与ＨＧＶ基因互补的特异寡核苷酸引物进行双脱氧核苷酸链末端终止法－ＰＣＲ直接测序。结果表明，中国大陆ＨＧ－３０２Ⅰ株部分ｃＤＮＡ序列与Ｌｉｎｎｅｎ等报道的ＨＧＢ美国株ｃＤＮＡ序列有极高的同源性。     

兰州地区供血员、静脉毒瘾者和肝炎患者血清输血传播病毒检测及致病性研究

目的：研究兰州地区供血员、静脉毒瘾者和肝病患者中输血传播绵感染状况及致病性。方法：采用套式ＰＣＲ技术检测１２０例供血员、５６例静脉毒瘾者和７４例肝病患者血清中ＴＴＶ－ＤＮＡ。结果：ＴＴＶ－ＤＮＡ检出率供血员为７．５％（９／１２０）,静脉毒瘾者为２６．８％（１５／５６）,肝病患者为１３．４％（１０／７４）。１０例ＴＴＶ－ＤＮＡ阳性的肝病患者中,６例为单一ＴＴＶ感染,１例与甲型肝炎病毒重叠感染,２例与     

输血传播病毒-DNA聚合酶链方法的建立及应用

目的：建立输血传播病毒（ＴＴＶ）－ＤＮＡ聚合酶链反应方法并应用于新疆地区不同人群ＴＴＶ感染的检测。方法：根据已报道的ＴＴＶ基因痛列（ＤＤＢＪ序列号：ＡＢ００８３９４）,通过引物设计软件ＳＱＮＣＥ和ＯＬＩＧＯ在其ＯＲＦ１区设计一对ＰＣＲ引物,扩增产生一个３１５ｂｐ的扩增片段,产物经ＢｇⅠⅡ酶切分别产生一个２１９ｂｐ和９６ｂｐ的酶切片段。结果：用建立的ＰＣＲ方法在１５例维存尔族转氨酶升高的非甲－非庚型     

改进的锚定反转录PCR法克隆中国人庚型肝炎病毒3′末端基因

应用改进的锚定反转录ＰＣＲ（ａｎｃｈｏｒｅｄＲＴ－ＰＣＲ）法，在总ＲＮＡ的３′端“加尾”，Ｏｌｉｇｏｔｅｘ提纯ｐｏｌｙ（Ａ）＋ｍＲＮＡ，Ｏｌｉｇｏｄ（Ｔ）－ａｎｃｈｏｒ引物合成第１链ｃＤＮＡ，ａｎｃｈｏｒ引物及特异引物进行“半巢式”ＰＣＲ，从献血员血清中扩增出ＨＧＶ３′末端基因片段。序列分析结果表明：此中国株ＨＧＶ３′末端基因序列与美国株存在较大差异，但阅读框架相似。用此方法克隆单链ＲＮＡ病毒基因组的３′末端。由于许多动物病毒和９０％以上的植物病毒均为单链ＲＮＡ基因组，故该技术也可应用于其它病毒基因组未知末端的基因克隆。     

孕妇血清和胚胎组织中微小病毒B19 DNA的检出

作者建立了检测人微小病毒Ｂ１９（ＨＰＶ－Ｂ１９）的ＰＣＲ方法。两对引物（Ｐ１Ｐ２和Ｐ３Ｐ４）的设计均位于编码ＨＰＶ－Ｂ１９衣壳蛋白ＶＰ１基因区内，扩增产物分别为７００ ｂｐ和１０４ ｂｐ。比较Ｐ１Ｐ２－ＰＣＲ和Ｐ３Ｐ４－ＰＣＲ，二者均具有高度特异性和第三性，ＨＰＶ－Ｂ１９ ＤＮＡ最小检同量分别为５ ｆｇ。应用Ｐ１Ｐ２－ＰＣＲ对３２份孕妇血清和２１份胚胎组织标本进行了ＨＰＶ－Ｂ１９ ＤＮＡ的检测，结     

戊型肝炎病毒F86株的某些生物学性状及分子生物学特征的 …

目的：对法国赠送的戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）Ｆ８６株进行生物学性状与基因特征的鉴定，并与我国分离的８７Ａ株病毒进行比较。方法：用常量法测定病毒的血凝滴度；微量滴定法测定在２ＢＳ、Ａ５４９、ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中的病毒滴度；腹腔注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，３周后取血清进行抗体检测；利用ＲＴ－ＰＣＲ方法从接触病毒的细胞培养液中直接检测病毒ＲＮＡ，ＰＣＲ阳性产物纯化回收后克隆并测序。结果：Ｆ８６株病毒血凝试验阴性；     

戊型肝炎病人及实验感染猴粪便中戊型肝炎病毒基因的检出

采用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）结合ＤＮＡ杂交技术，直接检测急性戊型肝炎病人和实验感染猴粪便标中的戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）基因，将从粪便标本中提取的ＲＮＡ反转录合成ｃＤＮＡ后，用ＨＥＶ特异引物进行套式ＰＣＲ扩增，并用长臂光敏生物素村记的ＨＥＶＥＴ１．１核酸探针进行杂交，结果显示，直接从６份病人１０％粪悬液标本中提取的ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ，在琼脂糖凝胶电泳上未见任何信号带，点杂交也未见阳性，但     

SEN病毒部分基因的克隆及序列测定

目的：了解我国人群中是否存在SEN病毒(SENV)感染,并分析SENV国内分离株的部分基因序列,方法：在SENV的保守区设计引物,建立巢式PCR方法检测血清中SENV DNA,并对PCR产物进行克隆,测序,结果,7例非甲－非瘐型肝炎,且输血传播病毒（TTV）阴性患者中,2例SENV阳性,其中一株的序列与意大利SENV－D株（AX－25730）相对应位置核苷酸序列同源性为90％,结论：本研究证初了我国存在SENV感染,建立了检测SENV的PCR方法,并对SENV部分基因进行了克隆及测序,对进一步开展SENV诊断和流行病学调查具有重要意义。     

不同肝炎患者及献血人员中SENV-D感染流行病学调查

目的：了解SEN病毒D亚型在我国不同肝炎患者和献血人员中的感染情况。方法：采用巢式聚合酶链反应对收集的健康献血者和各型肝炎患者（包括甲肝、乙肝、丙肝和非甲非戊型肝炎患者）进行SENV—D亚型DNA检测。结果：无偿献血者中SENV—D感染率为25．9％，急性甲肝患者中的感染率为14．5％，慢性乙肝患者中的感染率为46％，丙肝患者中的感染率为65％，在非甲-非戊型肝炎患者中的感染率为51．2％。结论：SENV可能与HCV和HBV具有一样的传播方式，但并不是肝病发生的原因。     

SEN病毒H亚型中国株流行病学及进化研究

目的：了解SEN病毒H亚型中国株的流行病学特点及其进化地位。方法：结合已知的基因序列设计引物，建立了半套式PCR检测方法，对58份献血者血清样本和25份non-A-E肝炎患者血清样本进行了SENV-H亚型的检测，并对部分阳性血清的PCR产物进行克隆测序。结果：检测结果显示无偿献血者中SE-V-H亚型感染率为34％，在non-A-E肝炎患者中SENV-H亚型感染率为24％，两者间无显著差异；但在无偿献血者中的阳性检出率大大高于国外报道。测序结果经BLASTP软件在GenBank中检索表明，各测序株均与已知的SENV-H株序列有较高的同源性，并在此基础上用MegAlign软件进行进化树分析。结论：建立的半套式PCR检测方法适用于SEN病毒H亚型检测；SENV-H亚型中国株之间以及与已发表的国外SENV-H株序列之间都有较大的变异。与无偿献血者相比，non-A-E肝炎患者血清SENV-H株无进化上的显著倾向性。     

PCR法检测慢性乙肝患者外周血单个核细胞中HBV-DNA

目的：了解慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMCs）HBV的感染情况及其与血清HBV的关系。方法：采用聚合酶链反应（PCR）检测55例慢性乙型肝炎患者PBMCs和血清中HBV。结果：PBMCsHBV－DNA检出率为69％（38例／55例），血清HBV－DNA检出蓄为36％（20例／55例），PBMCsHBV－DNA与血清HBV－DNA无一致性，P＜0．05，PCR法检测慢性乙型肝炎患者HBV－DNA、PBMCs检出率优于血清检出率，P＜0．05。结论：在慢性乙型肝炎患者中，PBMCs存在HBV－DNA。     

DNA序列测定法与实时荧光PCR法检测YMDD突变结果的比较

目的比较DNA序列测定法与实时荧光法检测YMDD突变的结果,并对除YMDD突变之外的耐药相关基因突变及其意义进行讨论。方法收集89例慢性乙肝患者的92份血清样本,均用实时荧光PCR法做YMDD突变检测。采用巢式PCR法扩增HBV反转录酶(RT)基因,对PCR产物进行DNA双向测序,采用NTI软件比对结果,并对RT基因上其他11个已知耐药相关突变位点进行分析。结果在37份YMDD突变阴性的样本中,DNA测序法检测结果为33份M204M(未突变)、1份M204I、3份M204V;4份YMDD突变阳性样本均为突变/未突变序列共存;另检出7份样本存在ADV耐药相关突变,占18.9%(7/37)。在55份YMDD突变阳性样本中,DNA测序法检测到52份,阳性结果符合率为94.5%(52/55);另检出5例存在ADV或ETV耐药相关突变,占9.1%(5/55)。结论DNA序列测定法检测HBVRT基因耐药相关突变敏感性高,重复性好,与实时荧光PCR方法的检测结果有较高的符合率,可同时检出YMDD突变以外的各种耐药相关突变,有助于临床全面了解患者对核苷(酸)类似物的耐药情况,合理地制订抗HBV治疗方案。     

PCR结合地高辛标记探针杂交检验乙型肝炎病毒C基因启动子

应用聚合酶链式反应结合地高辛标记探针杂交方法检测乙型肝炎病毒C基因启动(HBV,CP)。对聚合酶链反应(PCR)法扩增的HBV DNA直接测序进行DNA同源性分析。并运用探针杂交对结果进行进一步鉴定;应用PCR法扩增20份患者血清,阳性率达95％(19/20),同时运用探针杂交进行进一步检验,与PCR结果符合率达90％以上,并选择中度、重度乙肝患者血清和pGEM,7Z—HBV质粒扩增的HBV.CP各一份分别进行测序,与报告基因的同源性分别为72％、66.5％、90％。建立了特异敏感的检测乙型肝炎病毒C基因启动子(HBV.CP)的PCR方法,可用于HBV基因变异规律的研究。同时初步的研究结果表明,肝炎病人的HBV.CP区存在较多的变异,可能与病情轻重有一定的相关性。     

慢性乙型肝炎血清学标志、HBV DNA定量分析及HBV前C/C变异的临床研究

目的 :探讨慢性乙型肝炎患者血清学标志、HBVDNA载量及HBV前C/C变异与临床病变的关系。方法 :随机选取慢性乙型肝炎患者 2 4 6例 ,其中轻度 10 2例、中度 88例、重度 5 6例 ,分别应用ELISA、实时PCR法检测其血清中的HBV免疫学标志及HBVDNA含量。同时对HBeAg阴性而HBVDNA含量高拷贝的 3例轻度、6例中度及 8例重度患者血清 ,应用巢式PCR方法分离前C/C区全长基因 ,纯化后克隆入T载体 ,鉴定后进行序列测定。结果 :10 2例轻度、88例中度及 5 6例重度患者中血清学标志HBsAg ,HBeAg,抗 -HBc阳性模式分别为 5 3例 (5 1.9% )、4 6例(5 2 .3% )、33例 (5 8.9% ) ;HBsAg ,抗 -HBe,抗 -HBc阳性模式分别为 37例 (36 .3% )、32例 (37.5 % )、2 1例 (37.5 % ) ;单独HBsAg阳性为 8例 (7.8% )、5例 (5 .6 % )、1例 (1.7% ) ;其他模式分别为 4例、5例、1例。HBVDNA含量平均值分别为 10E 5 .5 3拷贝 /ml、10E 6 .0 3拷贝 /ml、10E 6 .5 8拷贝 /ml。HBeAg阴性而HBVDNA含量 >10E 6拷贝 /ml的病例数分别为 3例、6例、8例。统计分析表明 ,轻、中、重慢性乙肝患者间血清学标志及HBVDNA含量差异均不具统计学意义 ,而HBeAg阴性HBVDNA含量高拷贝的患者出现频率差异具有统计学意义。序列测定结果显示 17例患者血清的HBV分离株的前C/C