退行性心脏瓣膜病患者血清中MHC、IRF4、HSP70、HSP22mRNA表达的变化及意义

目的 研究肌球蛋白重链（MHC）、干扰素调节因子-4（IRF-4）、热休克蛋白70（HSP70）、热休克蛋白22（HSP22）mRNA在老年退行性心脏瓣膜病（SDHVD）患者血清中的表达,探讨SDHVD的可能发病机制。方法根据彩色多普勒检查结果将所有入选者分为单纯主动脉瓣钙化组（AVC组,n=25）、单纯二尖瓣钙化组（MVC组,n=19）、主动脉瓣钙化合并二尖瓣钙化组（AVC＋MVC组,n=21）,24例心脏瓣膜无钙化的老年患者设为对照组（NVC）。应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测入选者血清MHC、IRF-4、HSP70、HSP22mRNA的表达。结呆SDHVD组与对照组相比MHC和IRF-4mRNA表达量明显降低（P〈0．01）,HSP70和HSP22mRNA表达量则明显增高（P〈0．01）,不同瓣膜钙化损伤间无明显差异（P〉0．05）。SDHVD患者血清MHCmRNA、IRF-4mR—NA表达与LVEF呈正相关（r分别为0．394、0．427,P〈0．05）,HSP70mRNA、HSP22mRNA表达量与LVEF呈负相关（r分别为-0．409、-0．422,P〈0．05）。结S-g-SDHVD患者血清MHC、IRF-4、HS1070、HSP22mRNA表达及心功能较心脏瓣膜无钙化者有明显变化,提示免疫炎性损伤参与SDHVD的发生发展。     

内皮素灌流可导致大鼠离体主动脉c-myc和hsp70基因表达增加

本实验用含内皮素的ｋＨ液灌流大鼠离体主动脉６０ｍｉｎ后，提取大鼠主动脉中ＲＮＡ，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交方法检测ｃ－ｍｙｃ和热休克蛋白７０基因的表达，放射自显影结果显示：内皮素可诱导大鼠主动脉细胞ｃ－ｍｙｃ和热休克蛋白７０基因表达增加，这在高血压和动脉粥样硬化发病过程中对血管平滑肌的增殖可能起重要作用。     

γ干扰素对培养的人甲状腺细胞HLA-DR抗原基因表达的影响

ＭＨＣⅡ类抗原ＨＬＡ ＤＲ在致自身免疫性甲状腺病(ＡＩＴＤ)中起着非常重要的作用 ,γ干扰素 (ＩＦＮγ)在调控自身免疫性甲状腺病中的作用日益受到重视 ,同时它对细胞的生长起一定的作用 ,其作用机制未明。本研究运用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交技术、3 Ｈ ＴｄＲ掺入法及ｃＡＭＰ测定法 ,从细胞学角度分别研究ＩＦＮγ对人甲状腺细胞ＨＬＡ ＤＲ的表达和细胞生长状态的影响 ,以及ＩＦＮγ对细胞ｃＡＭＰ的影响 ,为阐明ＩＦＮγ在Ｇｒａｖｅｓ病中的作用提供理论依据。一、材料与方法1.细胞培养 :(1)标本来源 :Ｇｒａｖｅｓ病甲状腺组…     

汉滩病毒体外诱导热休克蛋白70的表达

目的定量研究汉滩病毒（HTNV）体外诱导细胞热休克蛋白70（HSP70）及HSP70 mRNA的表达规律。方法以HTNV敏感细胞株Vero-E6为对象，体外实验性感染Hantaan 76—118。采用原位杂交、免疫细胞化学染色法及逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）观察感染后72h内HSP70的表达并加以定量分析。结果与模拟感染组相比，Hantaan 76—118感染Vero-E6细胞后0．5h，HSP70 mRNA开始升高，于感染后12h达高峰，并持续高表达至72h（P＜0．05）。Hantaan 76—118感染后2h可检测到HSP70蛋白表达增加，于感染后12h达高峰，并持续高表达至72h（P＜0．05）。结论体外感染HTNV可诱导Vero-E6细胞产生热休克反应并表达HSP70，这种快速、持久的应激反应，可能对HSP70持续发挥其细胞保护作用具有重要意义。     

干扰素—γ基因转导前后人肝癌细胞HepG1表型变化及基因表达图谱差异的研究

目的：比较人肝癌细胞经干扰素（IFN）-γ基因转导前后细胞表型及基因型图谱的差异。方法：①用扫描电镜、流式细胞仪等方法观察IFN－γ基因转导前后人肝癌细胞HepG1表型的变化;②应用微阵列膜片分别与未转导及转导了IFN－γ基因的HepG1mRNA进行杂交,同时设一团支书地空白载体LXSN的HepG1 mRNA与膜片杂交作为对照,比较杂交信号,获得表达差异的基因。结果：①IFN-γ基因转导的HepG1细胞生长速度减慢,表面绒毛结构数量增多,绒毛变细 ,变长,HLA I和Ⅱ类分子表达增高;②IFN-γ基因转导后,HepG1细胞有多种基因的表达发生变化,其中一些基因较未转导的IFN－γ时表达增高,一些较未转导的IFN－γ时表达减低。表达发生变化的基因主要为与细胞周期和细胞凋亡相关的基因。结论：IFN－γ基因修饰HepG1细胞后使细胞表型发生变化,并且在基因表达上也发生改变。运用微阵列技术为进一步了解这些基因的相互关系及其与肿瘤生物学行为的关系奠定了基础,也可为优化肿瘤免疫基因治疗提供线索。     

HSP70-GST融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建小鼠热休克蛋白70(HSP70)重组原核表达质粒,获取小鼠HSP70-GST融合蛋白。方法先用RT-PCR方法从小鼠脑基因组中扩增出HSP70基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pMD—Tvector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1 中进行表达。结果表达产物经Western Blot分析,在109 KD处有一明显特异带,与预期结果相符。结论构建重组融合表达载体pGEX—HSP70,用基因工程的方法在原核细胞中成功表达出小鼠 HSP70-GST融合蛋白。     

周期型马来丝虫HSP70基因原核表达载体的构建及表达产物的分析

目的在大肠埃希菌宿主系统中表达周期型马来丝虫热休克蛋白70(HSP70)基因,并对表达产物进行SDS-PAGE分析。方法以重组质粒pGEM-T-HSP70为模板,根据报道的HSP70基因序列设计合成一对引物,用PCR法扩增HSP70基因(包括完整开放读码框架片段及其上下游序列共长2 198 bp),PCR产物定向插入原核表达载体pGEX-4T-3中,构建的重组质粒pGEX-4T-3-HSP70经双酶切鉴定。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导GST．Tag融合蛋白的表达,经SDS-PAGE分析并经凝胶图像分析确定目的蛋白的表达水平。结果重组表达质粒pGEX-4T-3-HSP70全长约7 200 bp,经双酶切后应得到长度为4 968 bp的载体和2 198 bp的目的基因2个片段,1%琼脂糖凝胶电泳显示结果同预期完全相符。HSP70相对分子质量(Mr)为70×10~3,质粒pGEX-4T-3的融合部分(GST．Tag)表达产物的Mr约为26×10~3,将重组质粒转化BL-21 (DE3)菌,经IPTG诱导表达,菌体蛋白的SDS-PAGE图谱显示,诱导组出现特异性蛋白表达条带,其Mr约100×10~3,与预计大小相同。目的蛋白占菌体总蛋白的12%左右。结论成功地构建了重组原核表达载体pGEX-4T- 3-HSP70：周期型马来丝虫HSP70基因可在大肠埃希菌中稳定表达,为制备和纯化表达蛋白以及丝虫病疫苗的进一步研究打下基础。     

急性冠状动脉综合征患者HSP70的表达及意义

正常对照组20例,稳定型心绞痛（SAP）组22例,急性冠状动脉综合征（ACS）组38例,以流式细胞仪测定外周血单核细胞热休克蛋白70（HSP70）阳性表达率,ELISA法测定血清高敏C反应蛋白（hsCRP）水平。同时随访经皮冠状动脉介入治疗（PCI）患者院内及30d内主要心脏事件（MACE）的情况。结果ACS组HSP70阳性表达率及hsCRP水平均明显高于SAP组及正常对照组（P〈0．05）,且HSP70阳性表达率与血清hsCRP水平呈显著正相关（r=0．832,P〈0．01）。外周血HSP70阳性表达率高者MACE发生有下降趋势。     

γ干扰素对甲状腺刺激抗体作用下FRTL5细胞TG、TPO基因表达的影响

目的：观察γ干扰素对甲状腺刺激抗体（TSAb)作用下FRTL5细胞甲状腺球蛋白（TG）,甲状腺过氧化物酶TPO基因表达的影响。方法：本研究运用Graves病患者血清经聚乙二醇4000处理获得TSAb的粗提物,用3H掺入法及Northern印迹杂交法观察γ干扰素对TSAb作用下FRTL5细胞生长及TG,TPO基因表达的影响。结果：TSAb上调FRTL5细胞的生长和TG,TPO基因的表达,而γ干扰素对TSAb诱导作用下的FRTL5细胞生长及基因转录（TG,TPO mRNA) 起抑制作用。结论：γ干扰素可抑制Graves病的自身体抗TSAb对甲状腺细胞生长和功能的刺激作用,推测γ干扰素在Graves病的发病中起一定的调节作用。γ     

小鼠干扰素γ诱导蛋白10的真核表达及临床意义

中晚期特别是激素抵抗性前列腺癌患者,目前尚无有效治疗手段。研究证实,T细胞介导的免疫应答在机体抗肿瘤过程中起着主导作用。干扰素7诱导蛋白10（IP-10）能够诱导活化的T细胞等趋化。另外,IP-10还能够抑制肿瘤血管生成。本实验旨在构建小鼠IP-10（mIP-10）真核表达质粒,探讨其在真核细胞中的表达,为进一步研究IP-10的生物学活性及肿瘤的基因治疗奠定基础。     

HSP70对急性白血病预后的影响及其与mdr-1的关系

目的探讨热休克蛋白-70（HSP70）对急性白血病（AL）预后的影响及与多药耐药基因mdr．1的关系。方法应用反转录聚合酶链反应半定量分析50例初治AL患者（其中难治组10例,缓解组40例）细胞中HSP90、mdr-1的表达水平。结果难治组HSPT0表达水平明显高于缓解组（P〈0．01）;mdr-1阴性组HSPT0表达水平明显低于mdr-1阳性组;mdr-1mRNA的表达与HSP70mRNA的表达呈显著正相关。结论HSP70mRNA的高表达是AL疗效差、预后不良的标志,且HSP70与mdr-1协同影响耐药。     

热休克蛋白70 mRNA表达上调对兔心房快速起搏电重构的影响

目的：探讨热应激诱导心肌热休克蛋白70（HSP70）mRNA表达上调后,对兔快速心房起搏电重构的影响。方法：将24只新西兰大白兔随机分成热应激＋起搏组（n=8）、起搏组（n=8）和假手术组（n=8）。热应激造模：将新西兰大白兔麻醉后,放入恒温箱中加热,肛温达41℃后持续15 min,再放入室温恢复24 h。起搏：以600次/min行右心房起搏,测量0 h、2 h、4 h、6 h的右房有效不应期（AERP200、AERP150）,AERP频率适应性,心房颤动（AF）诱发率。起搏组对未造模的兔起搏。假手术组只测量不起搏。用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组心肌HSP70 mRNA含量。结果：（1）快速心房起搏后,起搏组AERP200和AERP150立即缩短,起搏2h接近最小值[AERP200（79.38±6.23）ms,AERP150（71.25±6.94）ms],较起搏前[AERP200（100.00±6.55）ms,AERP150（89.38±6.78）ms]显著缩短（P〈0.01）;热应激＋起搏组起搏前后AERP无显著变化;（2）0 h时,起搏组右心房处（AERP200-AERP150）/50 ms为（0.21±0.10）ms,起搏2 h、4 h、6 h后分别为（0.16±0.07）、（0.14±0.05）、（0.13±0.05）ms,较起搏前非常显著缩短（P〈0.001）;（3）快速心房起搏前,予以程序性刺激和猝发刺激,各组AF诱发率均为0,起搏后2 h、4 h、6 h AF诱发率：起搏组分别为50.0%、75.0%、87.5%;热应激＋起搏组分别为25.0%、25.0%、37.5%;较起搏组显著减少（P〈0.05）;（4）热应激＋起搏组心脏各部位HSP70 mRNA表达较起搏组和假手术组明显增高（P〈0.05）,起搏组和假手术组间无显著差异。结论：心脏热休克蛋白70 mRNA表达上调后可抑制右心房快速起搏引起的心房电重构。     

维生素C对热应激小鼠肝脏HSP70 mRNA及蛋白表达的影响

目的通过对小鼠肝脏热休克蛋白70（HSP70）表达的实验研究,验证在夏季高温季节运输过程饮水中添加维生素C（VitC）对热应激缓解作用的可行性。方法昆明小鼠30只,随机分为3组,A组为常温对照组,B组为热应激组,C组为实验组（热应激＋VitC组）,B、C组在恒温箱内30℃饲养6 h,于实验后处死各组小鼠,取其肝脏组织,利用半定量法和Western blot蛋白印记技术检测HSP70的表达情况,做组间比较分析。结果 B、C组HSP70 mRNA和蛋白表达水平均高于对照组（P〈0.01或P〈0.05）,且B组均高于C组（P均〈0.05）。结论饮水中添加VitC使HSP70的表达趋于正常,对热应激有一定的缓解作用。     

肢体缺血预处理诱导大鼠缺血再灌注海马HSP70表达

目的探讨肢体缺血预处理(limb ischemic preconditioning,LIP)对大鼠缺血再灌注海马HSP70表达的影响。方法将66只凝闭椎动脉大鼠随机分为假手术组、脑缺血组和LIP+脑缺血组,后两组根据脑缺血后再灌流时间不同进一步分为1、62、4、72和120 h组。采用免疫组织化学方法检测海马HSP 70的变化。结果假手术组海马各区未见明显的HSP70表达。脑缺血组海马CA1区未见明显着色,但在CA3区及齿状回颗粒细胞中可见HSP70着色,以再灌注后24 h最明显。在LIP+脑缺血组,海马CA1区于再灌注1 h未见明显的HSP70表达;再灌注6 h HSP70表达明显增强,与假手术组和脑缺血6 h组比较,阳性细胞数明显增加(P<0.01);再灌注24 h HSP70表达达高峰;再灌注72 h HSP70表达有所下降;至再灌注120 h HSP70表达明显下降。结论损伤性脑缺血前给予LIP,可明显增加CA1区HSP70的阳性表达,诱导CA1区锥体细胞耐受缺血损伤。     

γ-干扰素抑制肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原和基质金属蛋白酶组织抑制因子基因表达

目的观察γ干扰素(γIFN)对二甲基亚硝胺(DMN)诱导肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)基因表达的作用。方法45只Wistar大鼠随机分为正常对照组(15只)、模型组(15只)和γIFN预防组(15只)。模型组用0.5%DMN10mgkg体重腹腔内注射,共6周,第1周连续3次,其后每周2次;γIFN预防组大鼠则在用DMN腹腔注射同时,每天皮下注射γIFN105Ukg体重,停止DMN注射后再用药2周,共8周。正常对照组以生理盐水腹腔内注射。于第8周处死大鼠,进行病理组织学检查、羟脯氨酸含量测定;以RTPCR法检测肝组织中ColⅠ、ColⅢ和TIMP1mRNA水平,BioRad凝胶成像系统对电泳结果进行半定量分析。结果肝组织病理检查显示,模型组大鼠在第6周停用DMN时,多数大鼠肝纤维化达2～3级,有的大鼠甚至出现腹水,停用DMN后,肝纤维化程度仍持续加重,至8周末所有大鼠肝纤维化达3～4级,且大多数伴有腹水。γIFN预防组病变较轻,最严重肝纤维化只有3级。RTPCR结果显示,正常对照组ColⅠ、ColⅢ、TIMP1mRNA表达水平分别为0.66±0.05、0.59±0.05、0.56±0.04,而模型组则分别为0.92±0.06、0.75±0.07、0.91±0.07,与对照组相比均明显升高,差异有统计学意义,γIFN预防组分别为0.73±0.06、0.66±0.07、0.66±0.05     

模拟失重大鼠胰腺组织HSP70表达的变化

目的 研究模拟失重环境下大鼠胰腺组织HSP70表达的变化.方法 健康雄性Wistar 大鼠64只,采用尾悬吊法建立模拟失重动物模型.按完全随机法分为悬尾6、12 h及1、2、3、5、7d组和未悬尾对照组.应用免疫组化法、蛋白质印迹法和RT-PCR法检测各组大鼠胰腺组织HSP70蛋白和mRNA的表达.结果 免疫组化染色显示,对照组大鼠胰腺组织无HSP70蛋白表达,悬尾组大鼠胰腺组织均有HSP70蛋白表达,尤其是胰岛细胞的胞质和胞核在早期即深染.蛋白质印迹法结果显示,悬尾6、12 h及1、2d组大鼠胰腺组织HSP70蛋白持续高表达,分别为0.921±0.078、0.862±0.048、0.838±0.063、0.807±0.071,较对照组的0.693 ±0.055显著增加(P＜0.05);3、5、7d组的HSP70蛋白表达恢复到对照组水平.HSP70 mRNA表达在6h组即明显增加至0.881 ±0.013,然后逐渐回落,3d组降至0.694±0.027,5d组出现回升,达0.836±0.014,7d组又回落至0.674±0.013.结论 模拟失重使大鼠胰腺组织中HSP70蛋白和mRNA表达发生明显变化,早期过表达,后期恢复正常水平.     

表达乙型肝炎核心抗原、干扰素γ重组质粒免疫小鼠诱导的免疫应答

本研究通过HBV核心基因DNA重组质粒联合干扰素(IFN)γ基因表达质粒同时免疫动物,了解经联合细胞因子DNA免疫后,免疫小鼠T细胞增殖、自然杀伤(NK)细胞杀伤活性及细胞因子释放等免疫效应.探讨联合IFN γ基因表达质粒用于DNA免疫的应用价值.     

γ-干扰素抗肝纤维化实验研究

目的观察重组人γ－干扰素（IFN－γ）治疗大鼠肝纤维化疗效。右法用二甲基亚硝胺（DMN）腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型,染毒开始及染毒3周后分别用IFN－γ须防和治疗肝纤维化,并与正常对照组和染毒对照组相比较,观察各组血清透明质酸（HA）、肝组织羟脯氨酸（Hyp）、病理肝纤维化程度分期及α-平滑肌肌动蛋白（α－SMA）变化。结果IFN-γ预防和治疗组肝纤维化程度明显轻于染毒对照组,α－SMA阳性细胞表达较染毒对照组明显减少,肝Hyp、血清HA水平较染毒对照组亦有显著降低。IFN－γ台疗组和IFN-γ预防组之间各项指标无显著差异。结论IFN-γ对DMN所致大鼠肝纤维化有较好疗效。     

HSP70,HSP90在结肠癌中表达及其和生物学行为的相关性

目的:探讨HSP70,HSP90在人结肠癌中的表达情况及其和结肠癌细胞生物学行为的相关性.方法:结肠癌患者手术标本40例,分别以癌组织、癌旁2cm组织和远离癌灶的正常黏膜组织作为病例组和对照组.用亲和免疫组织化学技术方法检测HSP70和HSP90,并收集该40例患者的临床Duke's分期,分析HSP70和HSP90蛋白的阳性程度和结肠癌临床分期是否存在相关性.结果:癌组织HSP70和HSP90的表达明显增高,癌组织、癌旁组织和正常黏膜组织三组之间HSP70和HSP90表达率有明显差异(HSP70:82.5%vs52.5%vs25%,χ2=26.58,P=0.000;72.5%vs42.5%vs22.5%,χ2=20.41,P=0.000);HSP70和HSP90蛋白的阳性程度和结肠癌临床分期存在相关性(HSP70:tau_b=0.392,P=0.006;HSP90:tau_b=0.396,P=0.006).结论:结肠癌细胞存在HSP70和HSP90蛋白的过度表达,HSP70,HSP90和结肠癌细胞的生物学行为存在相关性.     

人肝癌细胞膜上HSP70的表达

用流式细胞仪和Cell-ELISA检测了 4株人肝癌细胞膜上HSP70的表达。结果表明正常情况下人肝癌细胞膜上HSP70的表达较低 ,经热处理后表达增加 (P <0 0 1)并显示出细胞之间的差异 (P <0 0 1)。推测其低表达可能与肝癌细胞逃逸机体免疫监视有关 ,对制定肝癌的防治对策有重要的指导意义。