抗人BORIS单克隆抗体的制备及在乳腺疾病和正常乳腺组织中的分布

目的制备抗BORIS的单克隆抗体(mAb),并在蛋白水平上研究BORIS抗原在乳腺癌、良性乳腺病及正常乳腺组织(癌旁远端组织)上的分布特点。方法以人BORIS重组蛋白免疫BALB/c小鼠,应用B淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌抗BORISmAb的杂交瘤细胞株。用免疫组化染色法检测BORIS抗原在睾丸组织、乳腺癌、乳腺良性病和正常乳腺组织(癌旁远端组织)中的表达。结果获得4株稳定分泌抗BORISmAb的杂交瘤细胞株。其中抗体编号为FMU-BORIS13(IgG1)可用于免疫组化的染色。结果显示,BORIS抗原在正常睾丸的精原细胞和精母细胞的细胞核内表达,符合CT抗原的表达特点。组织芯片的免疫组化染色结果显示其在乳腺癌组织中呈高水平的表达,阳性率为85%(94/110),在良性乳腺病组织中其表达的阳性率为95%(21/22)。另外,在6例乳腺癌癌旁远端近似于正常的乳腺组织中也检测到BORIS抗原的表达。BORIS抗原在乳腺癌组织中的表达远高于其在良性乳腺病和正常的乳腺组织(癌旁远端组织)中的表达。结论BORIS的高表达可能与乳腺癌的发生发展有一定的关系。     

hK6单克隆抗体制备及在胃和乳房肿瘤组织中的初步应用

目的:原核表达人组织激肽释放酶6(human kallikrein 6,hK6),采用杂交瘤技术制备其单克隆抗体,建立免疫组织化学方法,检测hK6在胃癌、乳腺癌组织中的表达情况.方法:通过原核表达hK6融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备特异性单克隆抗体,并用间接ELISA、SDS-PAGE及Western-blot鉴定抗体,protein A agarose亲和层析柱纯化抗体,并以此抗体建立免疫组织化学方法检测人胃癌、乳腺癌组织中hK6表达情况.结果:成功筛选出4株高分泌型特异性杂交瘤细胞株,其制备抗体可与hK6融合蛋白发生特异性结合;免疫组织学显示,hK6主要分布在胃癌细胞胞浆中,成阳性表达,而在癌旁胃黏膜中成阴性表达;在乳腺癌组织中定位于胞浆,成弱阳性表达,癌旁组织成阴性表达.结论:成功制备了高纯度、特异性的抗hK6单克隆抗体;该抗体为深入研究hK6功能和建立高特异性、高敏感性检测组织和体液中hK6的方法奠定基础.     

抗人体乳腺癌单克隆抗体6C_6杂交瘤细胞系的建立及研究

近年来国外一些较为理想的乳腺癌单克隆抗体相继问世,但国内有关报道甚少。我们采用原发性乳腺癌组织细胞膜提取物免疫BALB/c小鼠,取其脾脏细胞与鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合建立了分泌抗人体乳腺癌单克隆抗体6C_8杂交瘤细胞系并进行了研究。     

抗人乳腺癌单克隆抗体HD1特性的研究

HD1是一株用人乳腺癌细胞MCF-7免疫BALB/c小鼠,取脾细胞再与MCF—7细胞孵育后,取吸附于靶细胞的脾细胞和Sp2/0融合得到的杂交瘤。我们将杂交瘤进行了腹水扩增,用Protein A-Sepharose 4B纯化了抗体(IgG1)。经检测,杂交瘤上清抗体分     

抗AGR2单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备鼠抗AGR2单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定及其初步应用研究。方法:以AGR2-MBP融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗AGR2的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Western blot鉴定mAb的特异性。用免疫荧光、免疫沉淀和MTT法对mAb进行初步应用研究。结果:获得1株可持续、稳定分泌抗AGR2的mAb的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-6。Western blot检测显示,在Mr为20000处有1条清晰的带。免疫荧光显示,该mAb可与乳腺癌细胞中的AGR2蛋白结合。免疫沉淀证实该mAb可与天然状态的AGR2有效结合。MTT实验显示该mAb对乳腺癌细胞MCF7的生长有抑制作用。结论:制备出的鼠抗AGR2的mAb效价高、特异性良好,可抑制细胞的生长,有一定的应用价值,为进一步研究AGR2的功能及其在乳腺癌、前列腺癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。     

抗大鼠乳腺癌的单克隆抗体的肿瘤定位以及阿霉素-抗体结合物对肿瘤生长的抑制作用

单克隆抗体技术创立以来,解决了大量生产与细胞表面反应的特异性抗体的问题,并且也解决了用抗体作为肿瘤治疗剂的载体的问题。作为肿瘤治疗剂的载体的问题。作者对此在大鼠体内、外进行了研究。作者用大鼠Sp4乳腺癌细胞免疫同系大鼠后,取其脾细胞与P3NSI小鼠骨髓瘤细胞融合。生成的杂交瘤细胞可产生针对大鼠自发乳腺癌Sp4细胞表面抗原的单克隆抗体。取此杂交瘤细胞的上清液用偶联有羊抗大鼠免疫球蛋白的Sepharose4B洗脱、提纯抗Sp4瘤细胞     

应用持续表达重组IL-6的骨髓瘤亲本细胞提高产生总的和特异性单抗杂交瘤的频率

已经发现IL-6能增加分泌特异性单抗杂交瘤的比例。作者报道了一种用含有IL-6基因逆转录病毒转染的能持续表达鼠IL-6(mlL-6)的Sp2/0细胞作为融合亲本细胞,从而提高产生总的和特异性单克隆抗体杂交瘤频率的方法。 杂交瘤是由Sp2/mIL-6作为亲本细胞     

刺激因子对人-人杂交瘤融合频率的促进作用

本文总结了人B淋巴细胞系μc729—6与32例肿瘤患者引流区淋巴细胞融合的结果。在22例成功的融合中,共获得324个杂交瘤,其中约有130个杂交瘤能分泌人免疫球蛋白,以分泌人IgG(24.6％)和IgM(54.6％)居多。杂交瘤生长率约为每1×10~7个淋巴细胞可平均出现22个杂交瘤。对10例有霉菌污染的融合实验进过分析,发现污染与淋巴结标本的收     

单克隆抗体用于生产乳腺癌选择性免疫毒素

将人乳腺癌手术后的新鲜癌肿组织,应用多元匀浆法(Polytronhomogenization)及非连续蔗糖梯度离心沉淀法制备出细胞膜萃取物。用这些萃取物或人乳腺癌活细胞系对BALB/c小鼠进行免疫,经过追加免疫后,取免疫的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,共进行52次融合,筛选出14,000个孔有乳腺癌选择性抗体的存在。95株杂交瘤产生的抗体对     

人-人杂交瘤细胞系分泌单克隆抗体的差异

用妇女阴癌患者局部引流淋巴细胞与抗6-巯基鸟嘌呤的UC-729-6人淋巴母细胞样B细胞系于一次融合中获得3株杂交瘤细胞:VLN_3G_2、VLN_5G_7和VLN_1H_(12)。这些细胞株经过一年以上培养,仍然稳定,连续产生抗体,但株与株之间产生抗体的质和量均有效大的差异。 为了研究这些差异,对杂交瘤细胞和亲本UC729 6细胞的4天培养液,反复复冻融杂交瘤细胞制备细胞浆蛋白及用NP-40提取的膜蛋白三部分进行分析。所用方法为样品经葡     

分泌抗脲酶单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和初步应用

用脲酶(Urease)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞用PEG融合。ELISA法筛选分泌抗脲酶单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,建立起6株杂交瘤细胞。细胞分泌抗体滴度高、亲和力强、特异性好,长期传代稳定。     

应用杂交瘤技术产生单克隆抗HBsAg群活性决定簇“a”抗体

用纯化HBsAg adr亚型免疫的小鼠脾细胞与NS-1和653-P10骨髓瘤细胞进行的9次融合实验中,筛选到6株分泌抗-HBs的杂交瘤细胞,对定名为Z26F7-S6C9杂交瘤细胞株分泌抗-HBs的特异性用ELISA双抗原夹心法、PHA法、免疫电镜等     

抗温和气单胞菌单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗温和气单胞菌(Aeromonassobria,As)单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法以灭活的温和气单胞菌免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备抗温和气单胞菌mAb。用间接ELISA法对mAb的特性进行初步鉴定。结果获得6株能稳定分泌抗温和气单胞菌mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A8、2A8、2F11、3C6、3D11、4G2。经测定杂交瘤细胞培养上清及其诱生的腹水mAb效价分别为1×10-2~1×10-3、1×10-5~1×10-6。6株杂交瘤细胞系所分泌的mAb亚类是2A8、2F11为IgG1,1A8、3D11为IgG2a,3C6为IgG2b,4G2为IgG3。其中mAb3C6经交叉反应试验证明,与弧菌属其他几种细菌均不起反应,特异性强。结论成功地制备了抗温和气单胞菌mAb的杂交瘤细胞株,为该病的免疫学诊断及防治提供了基础。     

抗RecQ解旋酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体(m Ab),鉴定其生物学特性并开展其对肿瘤细胞中RecQ解旋酶的检测。方法以纯化鉴定后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗RecQ解旋酶m Ab。用秋水仙素阻断法对杂交瘤细胞进行染色体核型分析,用间接ELISA检测m Ab的免疫球蛋白(Ig)亚型与效价,用Western blot法和荧光偏振技术鉴定m Ab的生物学特性,使用间接免疫荧光技术检测m Ab与MDA-MB-231乳腺癌细胞中BLM、RecQ4和RecQ5的作用。使用免疫组织化学染色法分析该m Ab与K562肿瘤细胞及其干细胞中RecQ解旋酶的结合。结果获得能稳定分泌抗RecQ解旋酶m Ab的杂交瘤细胞株6H5,染色体数目在94~104,抗体亚型为Ig G1型,腹水效价为1×10-7。该m Ab能特异性结合大肠杆菌RecQ解旋酶,抑制其与DNA的结合,并能识别BLM、RecQ4和RecQ5解旋酶,还可敏锐检测K562肿瘤细胞与肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的表达。结论成功制备获得效价高、特异性强的抗RecQ解旋酶m Ab。     

抗人成骨肉瘤杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定

目的 建立分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体（mAb)的杂交瘤细胞系，并对其分泌的mAb进行鉴定。方法 用成骨肉瘤细胞系（OSPS-9607）免疫Balb/c小鼠，取脾细胞按常规方法融合，筛选，克隆化及腹水mAb制备，取骨肉瘤手术标本（60例）及正常组织（6种），用mAb进行免疫组化ABC染色。结果 筛选出2株能持续，稳定分泌特异性抗骨肉瘤mAb的杂交瘤细胞株（6E5和3F7），2株杂交瘤细胞经过100d连续培养，分泌mAb的特性稳定，mAb特异性强，效价高。免疫组化染色检测表明，mAb6E5和3F7针对的抗原，在成骨肉瘤组织及成骨肉瘤细胞系均呈高表达（70%）。针对mAb6E5的抗原主要分布于细胞核上，针对mAb3F7的抗原主要分布于细胞浆内，6种正常组织中除胃粘膜可见弱阳性反应外，其余未见明确的阳性反应。结论 此两株杂交瘤细胞分泌的mAb对成骨肉瘤细胞具有特异亲和性，为成骨肉瘤的早期诊断。免疫治疗及发现成骨肉瘤新的标志物奠定了基础。     

乙型肝炎病毒e抗源单克隆抗体研制及临床初步应用

基因工程菌生产的HBeAg,用十二烷基磺酸钠(SDS)和2-巯基乙醇(2-ME)处理后作为抗原免疫雌牲BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,共获约3000个杂交瘤细胞克隆。经二种不同的ELISA筛选,得到16个分泌抗HBe McAb的杂交瘤细胞系。其中以94.127二株杂交瘤细胞分泌的抗HBe McAb效价较高(ELISA效价均为10~(-6),与HBeAg作琼脂糖双向扩散时还可出现肉眼所见沉淀线)。染色体检查证实为杂交瘤     

两株抗小鼠胰腺癌McAb特性的初步研究

本文报告用盐析,DEAE纤维素层析或亲和层析法纯化2B6、2B102株抗小鼠胰腺癌McAb杂交瘤培养上清及其小鼠腹水中的McAb,并经SDS-PAGE鉴定,FITC标记后,用直接荧光免疫法分析其在35例人类各     

豚鼠气单胞菌抗独特型单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的:制备豚鼠气单胞菌(Aeromonascaviae)抗独特型单克隆抗体(AIdmAb)并进行鉴定。方法:以具有中和作用的抗豚鼠气单胞菌mAb1F1免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备豚鼠气单胞菌AIdmAb。用ELISA法对mAb的效价及其模拟豚鼠气单胞菌的特性进行鉴定。结果:获得4株能稳定分泌豚鼠气单胞菌AIdmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1E12、4F6、6G6、7C1。经测定杂交瘤细胞腹水mAb效价为10-3～10-4。竞争抑制实验结果表明4株AIdmAb均能不同程度地抑制豚鼠气单胞菌与兔抗豚鼠气单胞菌多克隆抗体的结合。制备杂交瘤细胞腹水的BALB/c小鼠血清均能与豚鼠气单胞菌反应,其效价为1∶50～1∶800。结论:成功地制备了豚鼠气单胞菌抗独特型mAb的杂交瘤细胞株,为该菌的抗独特型疫苗制备研究奠定了基础。     

乳腺癌患者血清IL-6、IL-1β、TNF-α的变化及其临床意义

目的探讨乳腺癌患者血清IL-6、IL-1β、TNF-ɑ的变化及其临床意义。方法应用放射免疫法和免疫比浊法检测66例乳腺癌患者、22例乳腺良性增生患者、62名健康对照者空腹血清IL-6、IL-1β、TNF-ɑ水平。用ROC曲线方法确定各指标的最佳诊断临界值,用Logistic回归分析方法进行三种指标联合分析。结果乳腺癌组血清三种指标水平均高于乳腺良性增生组和健康对照组（P〈0.05）。单独用其中一种指标鉴别诊断的敏感性和特异性均不超过83%,若用Logistic回归分析联合＂IL-6＋IL-1β＋TNF-ɑ＂鉴别诊断乳腺癌和乳腺良性增生的敏感度可以达到96.7%,但特异度仅71.4%。结论血清IL-6、IL-1β、TNF-ɑ可作为乳腺癌鉴别诊断的辅助指标。     

抗c-erbB-2p185蛋白胞内区多肽单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的 研制抗c-erbB-2胞内区多肽单克隆抗体,用于乳腺癌等c-erbB-2过量表达的诊断及指导治疗。方法 合成p185蛋白胞内区多肽作为抗原,免疫BALB／C小鼠建立了一组分泌抗该多肽的特异性高亲和力单克隆抗体杂交瘤细胞系,并对该单抗的生化特性及其免疫学反应性进行了研究和测定,并与美国食品药品管理局（FDA）批准的抗c-erbB-2多克隆抗体进行了比较。结果 共获得3株稳定分泌抗p185胞内区单抗的杂交瘤细胞株。其中035－E61株单抗经过39例（T1－2N0M0）乳腺癌患者组织病理切片进行免疫组织化学染色,c-erbB2-2过量表达阳性率为26％,而乳腺纤维腺瘤组织切片没有非特异染色;流产正常胎儿器官组织切片除甲状腺、肾上腺和肾小管上皮表达外,其余均不表达。与FDA批准的DAKO公司多抗的阳性染色符合率为74％。结论 035－E61单抗可特异识别乳腺癌细胞内p185胞内区抗原。对判断乳腺癌预后及指导治疗可能具有应用价值。