射线损伤对睾丸Claudin-11 mRNA表达的影响

目的:Claudin-11为支持细胞紧密连接的组分,在构建血睾屏障及维持生精上皮空间构象中呈现重要作用。本研究拟通过射线局部照射致睾丸氧化应激,观察Claudin-11转录水平变化,探讨氧化应激损伤精子发生的作用机制。方法:48只雄性昆明小鼠随机分配至A、B、C、D 4组,每组12只,A组空白对照,B、C、D 3组分别以2、6、10 Gy剂量60Co-γ射线局部照射实验动物下腹部1次,于4周后处死,测定实验小鼠体重及双睾丸重量;HE染色观察睾丸组织学变化;酶联免疫法检测血清性激素水平;实时荧光PCR监测睾丸组织内抑制素βB及Claudin-11转录水平变化。结果:不同剂量射线致睾丸氧化应激损伤后睾丸重量,A组为(182.9±8.43)mg,B组为(129.4±10.81)mg,C组为(87.5±16.83)mg,D组为(56.1±12.36)mg,呈下降趋势,与A组相比,差异有显著性(P<0.05);睾丸指数A组为(4.28±0.31)mg/g,B组为(3.39±0.57)mg/g,C组为(2.46±0.46)mg/g,D组为(1.63±0.44)mg/g,下降更为明显,与A组相比,差异有显著性(P<0.01);组织学分析示,与A组相比,受射线照射3组生精小管分化指数(TDI)下降明显(P<0.01),生精小管直径减小,生精上皮高度显著降低并层次紊乱。血清FSH,A组为(5.77±1.62)IU/L,B组为(6.74±1.95)IU/L,C组为(8.41±2.44)IU/L,D组为(10.93±3.16)IU/L,逐渐升高,D组较A组升高1.9倍。伴随照射睾丸射线剂量增加,组织内抑制素βB mRNA含量下降,Clau-din11转录水平呈现增高趋势,C、D两组Claudin-11 mRNA水平高于正常对照A组(P均<0.01)。结论:射线局部照射致睾丸氧化应激,组织内抑制素βB mRNA降低、血清FSH升高,支持细胞合成及分泌功能受损;同时,睾丸组织Claudin-11表达量则增加。增加的紧密连接组分同升高的FSH致使血睾屏障重建周期延长,生精上皮内处于减数分裂的精母细胞数量减少,导致不育发生。     

地黄多糖干预对多次低剂量X线照射小鼠血清性激素水平的影响

目的探讨地黄多糖(RPS)干预对多次X线照射后小鼠血清性激素水平的影响。方法选择雄性昆明小鼠70只[5~6周龄,体重(22±2)g)],随机分为A组(单纯照射组,21只)、B组(照射+200mg/kg RPS灌胃组,21只)、C组(照射+800mg/kg RPS灌胃组,21只)、D组(对照组7只);再将A、B、C组分别随机分为3组,每组7只。所有小鼠在照射前5d开始每天灌胃1次,其中A组及D组给予0.2 mL生理盐水灌胃,B组及C组分别给予200 mg/kg、800 mg/kgRPS溶于0.2mL生理盐水灌胃,共灌胃20次;A、B、C组采用低剂量X线每天1次全身照射,共15次;单次照射剂量分别为0.025Gy、0.075Gy、0.100Gy,剂量率为0.025Gy/min。所有小鼠在末次照射结束后48h内在麻醉通过下腔静脉采血,脱颈法处死小鼠、摘取睾丸并称重;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平。结果随着X线照射剂量的增加,小鼠睾丸重量及睾体比值逐渐降低(P0.05);给予不同剂量RPS灌胃可以增加0.1Gy照射后小鼠的睾体比值,差异有统计学意义(P0.05);血清FSH在0.1Gy单纯照射组(A组)较对照组(D组)明显增高[(22.54±7.19)U/L vs.(31.61±6.07)U/L](P0.05),而LH、T的变化在A组和D组中差异均无统计学意义(P0.05);给予不同剂量(200mg/kg及800mg/kg)RPS灌胃干预后,不同低剂量X线照对小鼠血清性激素水平均未产生明显影响。结论多次低剂量X线全身照射在大剂量时可引起小鼠血清FSH水平和睾体比值改变,RPS干预对多次低剂量X线全身照射小鼠引起的生殖内分泌功能损伤有一定保护作用。     

高强度聚焦超声联合超声造影剂消融肝脏VX2移植瘤的实验研究

目的 探讨高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)联合超声造影剂(ultrasound contrast agents,UCA)治疗肝癌时的最适消融范围. 方法构建新西兰兔肝VX2移植肿瘤模型.51只模型兔分为3组:HIFU联合UCA沿肿瘤边缘消融肿瘤(A组)、消融肿瘤及肿瘤周围2 mm内的组织(B组)、消融肿瘤及周围4mm内的组织(C组).比较治疗后靶组织的病理情况、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平、肝内、肺及腹腔的转移情况以及生存期的差异.结果 HIFU联合UCA治疗后,各组靶区肿瘤组织均发生凝固性坏死;治疗后3 d、5 d,C组患者ALT显著升高,组间比较差异有统计学意义(F=12.933、18.37,均P＜0.01),C组最高;治疗后14 d,B组、C组ALT降至正常,组间比较差异无统计学意义(F=0.043,P＞0.05),A组ALT水平高于B组和C组(F=17.2,P＜0.05).治疗后两周肝内、肺及腹腔转移率A组均明显高于B组和c组(分别x2=9.918、6.300、7.6701,均P＜0.05),B组和C组差异无统计学意义(均P＞0.05),平均生存期A组(29 4±5.4)与B组(48±13.6)、C组(51±12.1)差异均有统计学意义(P＜0.05),B组和C组差异无统计学意义(P>0.643).结论 HIFU联合UCA在消融移植瘤周围组织2mm以上时可明显降低治疗后转移率,延长荷瘤兔的生存时间.     

早期肠内肠外营养支持对肝硬化大鼠肝切除术后的影响

目的 观察早期肠内肠外营养支持对肝硬化大鼠肝部分切除术后的影响.方法 采用24只雄性SD大鼠随机分为3组:A组正常大鼠肠内营养;B组肝硬化大鼠肠内营养;C组肝硬化大鼠肠外营养.3组大鼠行肝部分切除术后1 d分别进行等热量[690 kJ/(kg·d)]等氮量[1.22g/(kg·d)]营养支持,共5 d.术后6 d测定大鼠体质量、肝功能、前白蛋白、转铁蛋白、肝组织白蛋白(ALB)mRNA的表达及细胞增殖核抗原(Ki-67)蛋白表达水平.结果 与术前比较,术后A组大鼠体质量增加,B、C组体质量减轻,差异有统计学意义[A:(6.16±3.28)g;B:(5.46±2.59)g;C:(6.13±3.21)g,P＜0.05).术后B、C组大鼠肝功能与A组比较,血清AST、ALT、ALP升高,ALB降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);B组与C组比较,ALP升高,差异有统计学意义[B:(209±81)IU/L;C:(271:±92)IU/L,P＜0.05).术后B、C组大鼠血清前白蛋白和转铁蛋白与A组比较均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);C组与B组比较,血清前白蛋白降低,差异有统计学意义[B:(161±37)mg/L;C:(133±29)mg/L,P＜0.05].术后B、C组肝组织ALB mRNA表达水平比A组下降,差异有统计学意义(A:1.46±0.12;B:1. 07±0.14;C:0.84±0.18,P＜0.05);B组与C组比较,C组肝组织ALB mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).术后A组肝组织Ki-67蛋白表达指数比B、C组高,差异有统计学意义(A:8.90±0.45;B:5.60±0.34;C:3.80±0.21,P＜0.05);而B组Ki-67指数比C组高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肝硬化大鼠肝部分切除术后存在明显的肝功能不全和肝再生能力下降,虽经过积极的肠内或肠外营养支持,其术后各项指标的恢复均明显差于无肝硬化的大鼠.肠内营养较肠外营养更能促进肝硬化大鼠肝部分切除术后肝脏蛋白质的合成代谢和肝再生,肠内营养途径可进一步降低与肠外营养相关的胆汁淤积并发症的发生.     

釉基质蛋白对人皮肤成纤维细胞黏附、增殖及Ⅰ型胶原前mRNA合成影响的体外研究

目的 观察釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对体外培养的人正常皮肤成纤维细胞黏附、增殖及Ⅰ型胶原前mRNA合成的影响.方法 取自愿捐赠包皮环切术后包皮组织,采用组织块法培养人皮肤成纤维细胞,取第3～6代细胞进行实验.以终浓度为50、100、150、200 μg/mL的EMPs工作液预铺培养板.①细胞黏附实验:取细胞以1 × 106个/mL置于预铺EMPs的96孔培养板,每孔0.2 mL,作为实验组(A、B、C、D组).培养1.5、3.0和4.5 h后MTT比色法测定黏附细胞量.②细胞增殖实验:取细胞以5 × 104个/mL置于预铺EMPs的培养板,每孔0.2 mL,作为实验组(A1、B1、C1、D1组).于第2、4、6、8天以MTT比色法测定增殖细胞量.③细胞Ⅰ型胶原前mRNA合成实验:取细胞以1×106个/mL置于预铺EMPs培养板,每孔2 mL,作为实验组(A2、B2、C2、D2组).于培养第5天RT-PCR法测定Ⅰ型胶原前mRNA合成的量.以上实验均以相同浓度细胞悬液加入未预铺EMPs的板孔作为对照组,每组均3个复孔.结果 ①细胞黏附实验中,各时间点B、C、D组与A组及对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);A组与对照组间及B、C、D组间比较差异均无统计学意义(P＞005).②细胞增殖实验中,第2天各组间差异均无统计学意义(P＞0.05):第4、6天,B1、C1、D1组吸光度(A)值分别为0.598±0.020、0.582±0017、0.574±0.021及0.639±0.016、0.641±0.020、0.635±0.021,均高于对照组的0.548±0.021及0.605±0.019(P＜0.05);A1组A值分别为0.545±0.023及0.603±0.016,与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).第8天,B1、C1组A值分别为0.629±0.012、0.631±0.014,高于对照组的0.606±0.031(P＜0.05),A1、D1组与对照组比较,差异无统计学意义(P＞005).③细胞Ⅰ型胶原前mRNA合成实验中,B2、C2、D2组Ⅰ型胶原前mRNA合成量高于对照组.结论 EMPs促进人正常皮肤成纤维细胞黏附、增殖及Ⅰ型胶原前mRNA合成,且EMPs在100μg/mL浓度时可发挥最大促进作用.     

天然水蛭素对猪随意型皮瓣静脉淤血影响的实验研究

目的 探讨局部应用天然水蛭素对猪随意型皮瓣移植后静脉淤血的影响. 方法 6～8月龄广西巴马小型猪3只,雌雄不限,体重10～15 kg.于每只猪背两侧制备6个大小为14 cm×4 cm的随意型皮瓣,共18个皮瓣.根据术后注射药物不同,皮瓣随机分为3组(n=6).术后即刻、1、2、3 d,A组:局部注射3 mL生理盐水,作为对照组;B组:局部注射3 mL天然水蛭素20 ATU:C组:局部注射3 mL天然水蛭素40 ATU.术后1、10 d行大体观察,1、7d行组织学观察,3、7 d测定湿重/干重比值,5 d测定皮瓣表面温度,7 d皮瓣局部血流彩色超声检测,12 d测定皮瓣成活率. 结果 术后即刻,3组皮瓣均出现远端2/3范围内轻度淤血,差异无统计学意义(P＞O.05):术后1 d,A组皮瓣淤血长度明显长于B、C组(P＜0.05),B、C组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);术后10 d,A、C组皮瓣坏死长度明显长于B组,差异有统计学意义(P＜0.05),A、C组比较差异无统计学意义(P＞0.05).组织学观察:术后1 d,B组真皮内毛细血管及微静脉红细胞淤滞现象较A组明显减轻;术后7 d,B组皮下胶原及肉芽组织增生明显优于A组.术后3 d,A、B、C组湿重/干重比值分别为3.94 4±0.14、3.43±0.14、3.60±0.19,A组与B、C组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),B、C组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05);术后7 d,A、B、C组湿重/干重比值分别为3.61±0.11、3.08±0.13、3.34±0.21,A组与B、C组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),B、C组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).术后5 d,A、B、C组皮瓣表面温度分别为(36.64±0.70)、(38.61±0.42)和(37.50±0.46)℃,A组与B、C组比较差异有统计学意义(P＜0.05),B、C组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).术后7 d,皮瓣局部血流彩色超声检测示A组血流信号稀少,B组见较完整的动静脉回流信号,可见垂直于皮肤的动脉穿支,C组可见动脉血流信号.术后12 d,A、B、C组皮瓣成活率分别为45%4±7%、67%±4%、52%±4%,B、C组与A组比较,筹异有统计学意义(P＜0.05),B、C组问比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 局部应用天然水蛭素对猪随意犁皮瓣移植后静脉淤血有较明显的改善作用.     

化学去细胞同种异体神经复合缓释神经生长因子修复周围神经缺损

目的 探讨化学去细胞异体神经复合缓释神经生长因子(nerve growth factor,NGF)修复周围神经缺损的效果. 方法采用药物微球技术制备NGF微球,与生物纤维蛋白胶混合形成NGF复合缓释制剂.取健康雄性SD大鼠20只,体重280～300 g,制备化学去细胞异体神经.取健康雄性Wismr大鼠52只,体重250～300 g,制备大鼠左侧世骨神经10 mm缺损模型.根据修复缺损材料不同,随机分成4组(n=13):自体神经移植组(A组)、化学去细胞异体神经移植加NGF复合缓释制剂组(B组)、化学去细胞异体神经移植组(C组)和化学去细胞同种异体神经移植和纤维蛋白胶组(D组).右侧不作处理作为空白埘照组.术后行大体观察;术后2周测鼍神经轴突生长距离;术后16周行电生理检测,计算术侧坐骨神经运动传导速度恢复率、术侧小腿三头肌收缩力恢复率及湿重恢复率,并行移植神经吻合中段HE和半薄切片甲苯胺蓝染色观察. 结果 所有动物均存活至实验完成,切口愈合良好.术后2周A组神经再生距离较其余3组长(P＜0.05),B组优于C、D组(P＜0.05),C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).术后16周,A、B、C、D组术侧坐骨神经运动传导速度恢复率分别为73.37%±7.82%、70.39%±8.45%、53.51%±6.31%、55.28%±5.37%;A、B组与C、D组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).A、B、C、D组术侧小腿三头肌收缩力恢复率分别为85.33%±5.59%、69.79%±5.31%、64.46%±8.49%、63.35%±6.40%:A组与B、C、D组比较筹异有统计学意义(P＜0.05),B、C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).A、B、C、D组术侧小腿三头肌湿重恢复率分别为62.54%±8.25%、53.73%±4.56%、46.37%±5.68%、45.78%±7.14%;A组与B、C、D组比较筹异有统计学意义(P＜0.05),B组与C、D组比较差异有统计学意义(P＜0.05),C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).组织学图像分析示B组有髓神经纤维数量、轴突直径及髓鞘厚度均优于C、D组(P＜0.05),B组轴突直径小于A组(P＜0.05). 结论 复合缓释NGF的化学去细胞同种异体神经能满意修复一定长度的周围神经缺损,是一种有效的周围神经组织工程修复材料.     

TGF-β1抗体复合生物蛋白胶预防鞘管区术后粘连的实验研究

目的 研究TGF-β1抗体(TGF-β1,antibody,TGF-β1Ab)复合生物蛋白胶(fibdn glue,FG)预防鞘管区屈肌腱粘连的作用和对肌腱愈合的影响. 方法 72只成年雄性来亨鸡制备左足第3、4趾趾深屈肌腱横断模型.按鞘管区给药随机分为4组A组0.2 mL TGF-β1Ab、B组0.2 mL FG、C组0.2 mL TGF-β1.Ab及FG复合液、D组0.2 mL生理盐水,仅术中注入1次.术后1、3及8周,每组各取6只鸡第4趾行大体及组织学观察;3、8周第3趾行生物力学测定. 结果 术后1周各组肌腱粘连程度评分无明显差异(P＞0.05);3及8周C组与A、B及D组比较差异有统计学意义(P＜0.05).组织学观察,术后3、8周A、B及D组胶原纤维排列紊乱,C组胶原纤维排列整齐.术后3周,各组肌腱滑动距离比值分别为0.45 4±0.05、0.40±0.10、0.79±0.09、0.25±0.07;模拟主动屈曲度比值分别为0.61±0.02、0.67±0.03、0.91±0.03、0.53±0.04;屈曲功分别为(18.00±0.77)、(17.80±1.13)、(27.60±1.73)、(15.60±1.27)°/N.C组3项指标与A、B及D组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);各组最大抗断裂载荷分别为(14.2±1.9)、(15.2±2.2)、(16.0±2.2)、(14.7±2.7)N,各组间差异均无统计学意义(P＞0.05).术后8周,各组肌腱滑动距离比值分别为0.45±0.07、0.43±0.08、0.80±0.09、0.29±0.05;模拟主动屈曲度比值分别为0.61±0.02、0.63±0.03、0.92±0.03、0.53±0.03;屈曲功分别为(18.30±0.84)、(18.60±0.80)、(27.90±1.24)、(15.30±0.75)°/N.C组3项指标与A、B及D组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);各组最大抗断裂载荷分别为(51.9±3.0)、(51.4±1.4)、(53.3±1.3)、(52.3±2.2)N,各组间差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 TGF-β1Ab复合FG可以有效预防术后肌腱粘连,不影响肌腱的正常愈合.     

多次低剂量X线照射对小鼠睾丸重量及血清性激素水平影响

目的探讨多次低剂量X线全身照射对小鼠睾丸重量及血清性激素水平影响.方法采用0、0.025、0.075及0.1Gy X线多次照射小鼠,电子天平测定小鼠体重、睾丸重量,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)及黄体生成素(LH).结果0.025 Gy组睾丸重量及睾/体比值较对照组无明显差异(P>0.05),0.075、0.1Gy 组睾丸重量及睾/体比值均明显低于正常对照组(P<0.05);各剂量照射组小鼠血清T及LH较对照组无明显差异(P>0.05),0.025、0.075Gy照射组小鼠血清FSH较对照组无明显差异(P>0.05),0.1 Gy照射组小鼠血清FSH与对照组相比较具有显著统计学差异(P<0.05).结论多次低剂量X线照射可使小鼠睾丸重量及睾/体比值下降,且具有剂量效应,对血清T及LH无明显影响,一定剂量X线照射可升高血清FSH水平.     

5-ALA-纳米金光动力治疗小鼠光老化的初步研究

目的:初步探讨5-ALA-纳米金光动力治疗小鼠皮肤光老化的作用。方法:48只雄性健康ICR小鼠分为正常对照组(8只)、光老化组(40只),正常组不予特殊处理,光老化组照射紫外线,肉眼观察和HE染色验证光老化模型。40只光老化组小鼠分为B组光老化对照组,C组红光组、D组纳米金组、E组5-ALA组、F组5-ALA-纳米金组,C、D、E、F组小鼠背部分别涂抹不同溶液0.5ml(分别为生理盐水、纳米金溶液、5-ALA溶液和5-ALA-纳米金组溶液)避光封包3h,红光照射10min,2周治疗1次,共治疗2次,A组为正常组对照组不予任何处理。观察各组小鼠皮肤表现和组织病理改变。结果:与A组比较,紫外线照射后,B组小鼠皮肤皮肤增厚,出现皮屑、深皱纹、缺乏弹性等光老化特征;组织切片显示,B组小鼠表皮厚度[(168.235±13.665)μm]较A组[表皮(87.165±2.627)μm]增厚(P0.05),而胶原纤维面积密度[(7.390±2.5)%]均较A组[(40.114±3.0)%]明显减少(P0.05)。与B组相比,C、D、E和F组小鼠的表皮变薄[分别为(154.458±2.942)μm,(114.958±2.229)μm,(50.623±4.203)μm和(31.694±1.970)μm,P0.05],胶原纤维面积密度增加[分别为(15.840±3.0)%,(27.320±2.5)%,(60.812±2.0)%和(70.024±3.0)%,P0.05],其中以F组效果最显著。结论:5-ALA结合体能提高光动力疗法治疗小鼠光老化的疗效,同时纳米金的光热作用可能用于治疗光老化。     

颈交感神经在臂丛神经慢性卡压伤中的作用

目的 研究颈交感神经在臂丛神经慢性卡压伤中的作用.方法 24只雄性SD大鼠,随机分成A、B、C三组,每组8只.A组:臂丛神经下干慢性卡压模型;B组:臂丛神经下干慢性卡压模型,加颈中交感神经节切除;C组:对照组.3个月后,各组进行神经电生理检测第一骨间肌复合肌肉动作电位(CMAP),记录其波幅和潜伏期;切取臂丛神经下干卡压远侧3 mn神经干和C组臂丛神经下干,行甲苯脓蓝染色,半薄横切片,计数有髓神经纤维;切取C8、T1背根神经节,用RT-PCR方法检测背根节中P物质(SP) mRNA.结果 神经电生理检测CMAP波幅:A组(2.2± 1.1)mV,B组(3.9±1.1)mV,C组(8.6±2.0)mV;A组＜B组＜C组,差异有统计学意义(P＜0.01).潜伏期:A组(4.8±0.9)ms,B组(3.9±0.5)ms,C组(2.8±0.2)ms;A组＞B组＞C组,差异有统计学意义(P＜0.01).有髓神经纤维总数:A组(3583.0±540.0),B组(5098.0±742.0),C组(7934.0±868.0);A组＜B组＜C组,差异有统计学意义(P＜0.01).P物质mRNA表达水平:A组(3.6±0.8)×10-2,B组(2.2±0.7)×10-2,C组(1.2±0.3)×10-2;A组＞B组＞C组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在交感神经作用下,臂丛神经慢性卡压伤的损伤程度加重,背根神经节中疼痛介质P物质表达增强,去交感神经有利于减轻臂丛神经慢性卡压伤损伤程度,有利于减轻因卡压引起的疼痛.交感神经激惹可能是臂丛神经慢性卡压性疾病发展的一个协同因素.     

60Co-γ照射雄性小鼠建立无精子症动物模型

目的 探词60Co-γ照射雄性小鼠建立无精子症动物模型的合适剂量及方法.方法 将100只昆明小鼠随机分为A～G组(A组为10只,余均为15只),A组为对照组,B组腹腔注射环磷酰胺,C～F组分别给予60Co-γ不同剂量全身均匀照射1次,G组间隔以60Co-γ全身均匀照射2次,观察35 d;作受孕实验,测量各组小鼠睾丸重量,并计算睾丸指数;酶联免疫法测定血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)水平;睾丸组织的组织病理学观察.结果 C、D、G组死亡率均为6.67%,但F、G组受孕率为0;60Co-γ造成小鼠睾丸组织损伤导致T(5.62±2.89)、E2(53.28±2.00)降低的同时,对垂体也会造成损伤,引起FSH(3.00±1.42)、LH(30.10±9.86)的变化(与正常组比较,均P<0.05);精原细胞表面标记c-kjt在A组呈棕褐色环形表达,在其余各组表现为断裂表达或未表达.结论 60Co-γ以6 Gy和4 Gy分2次间隔照射,可建立无精症动物模型.     

1，25（OH）2VD3诱导小鼠胚胎干细胞向成骨细胞分化的研究

目的 探讨1,25(OH)2VD3在诱导小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)向成骨细胞分化过程中的重要作用.方法 取2 d龄昆明小白鼠颅盖骨进行成骨细胞分离培养;参照并改进zur Nieden等的方法制备拟胚体(embryoid bodies,Ebs).将Ebs根据培养液不同分为4组:A组:不含白血病抑制因子Ebs培养液;B组:Ebs培养液中添加50μg/mL维生素C、50 mmol/L β-磷酸甘油;C组:培养液同B组,另每孔接种5×104个第3代成骨细胞;D组与C组相同,另添加4 × 10-9 mol/L 1,25(OH)2VD3.检测ALP活性,实时定量PCR检测骨钙素mRNA的表达,茜素红S染色进行矿化骨结节计数.结果 Ebs贴壁后前5 d,各组ALP表达未发生明显变化,5 d后ALP表达逐渐增加,其中D组在第20天表达水平最高.光镜下可见轮廓清晰大小不等的红色结节.茜素红S染色测得A、B、C、D组骨结节数分别为(20±8)、(18±5)、(31±1)、(50±1)个:实时定量PCR测得A、B、C、D组骨钙素mRNA分别为10.18±1.17、20.29±1.03、18.84±4.07、32.15±5.23:C、D组与A、B组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),A、B组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),C、D组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在浓度为4 × 10-9 mol/L 1,25(OH)2VD3和维生素C、β-磷酸甘油共同作用下,有效促进了ESCs源性成骨细胞的产生.     

钙蛋白酶抑制剂、α-硫辛酸单用及联用治疗癌性恶病质

目的 探讨钙蛋白酶(caplain)抑制剂ALLN(N-acetyl-Leu-Leu-Norleucinal)、α-硫辛酸(α-LA)单用及联用对癌性恶病质小鼠的治疗效果及其机制.方法 结肠腺癌Colon26 (C26)细胞接种于小鼠前腋窝皮下构建恶病质模型.药物干预7d后检测去瘤体质量、腓肠肌湿重、血生化、细胞因子水平、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、肿瘤组织核因子-κB(NF-κB)表达及骨骼肌中caplain-1和泛素mRNA表达.结果 荷瘤对照组caplain-1与泛素mRNA表达值分别为0.84 ±0.10、2.68±0.08,ALLN组、α-LA组、ALLN+ α-LA组caplain-1表达值分别为0.59 ±0.07、0.65±0.07、0.57 ±0.04,泛素mRNA表达值分别为2.29±0.07、2.34 ±0.05、2.20±0.10,均低于荷瘤对照组(P＜0.05),其他指标亦有不同程度的改善(P＜0.05).结论 caplain抑制剂和α-硫辛酸均具改善癌症恶病质的作用,两者联合应用效果更好.     

持续负压穿刺器睾丸抽吸活检术的临床应用

目的:回顾性分析3种睾丸组织活检术的临床资料,总结持续负压穿刺器睾丸抽吸活检术的特点及初步经验。方法:收集271例行睾丸组织活检患者的临床资料,按照手术方式分为3组:睾丸切开组88例(A组);活检枪组87例(B组);持续负压穿刺器组(C组)96例,对手术时间、术中出血量、术后出现血肿、感染并发症发生率、取精成功率等进行分析。结果:手术时间A组(37.0±14.1) min,B组手术时间(7.0±2.1)min,C组(6.0±3.1)min,A组显著较B、C组长(P0.05)。A、B、C组术中出血量分别为(10.2±4.1)、(3.1±1.2)、(1.2±0.6)ml,C组显著少于A、B组(P0.05)。A组术后并发症发生率为8.0%(7/88)、B组为4.6%(4/87)、C组为0(0/96),C组显著低于A、B组(P0.05)。取精成功率A、B、C组分别为95.4%(21/22)、97.2%(35/36)、95.0%(38/40),3组之间无显著差异。A、B、C组单次手术获得足够精子完成ICSI百分率分别为89.4%(59/66)、86.3%(44/51)、82.1%(46/56),2次成功率分别为97.0%(64/66)、98.0%(50/51)、98.2%(55/56),差异均无统计学意义(P0.05)。结论:持续负压穿刺器睾丸抽吸活检术可单人操作,便捷经济,可获得足够睾丸组织进行病理检查或ICSI,且术中出血少,术后并发症发生率低,具有临床推广应用价值。     

急性大鼠脊髓腹侧压迫伤的模型制备

目的 建立急性压迫型大鼠前脊髓综合征模型.方法 将Wistar大鼠放置腹侧致伤钩对其腹侧脊髓形成压迫,造成不同程度脊髓损伤模型,并进行行为学及神经电生理评价.结果 造模后各实验组斜板角度分别为A组(52.89±7.31);B组(47.08±7.27);C组(41.32±7.85);BBB评分分别为A组(8.47±4.14);B组(3.48±3.17);C组(0.83±3.06);均较假手术组明显减小(P＜0.01),轻、中、重度损伤组之间差异有统计学意义(P＜0.05).手术8周后各实验组MEP的潜伏期明显高于对照组(P＜0.05),各实验组间差异有统计学意义(P＜0.05);重度损伤组MEP的潜伏期为(5.74±0.12),明显高于对照组(P＜0.05).结论 前脊髓损伤综合征模型出现明显的行为学、神经电生理及病理学改变,而且可以制备出不同程度前脊髓损伤综合征模型.     

人Ⅰ型前胶原基因反义寡核苷酸抑制增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成

目的 探讨阳离子脂质体介导Ⅰ型前胶原基因(Col Ⅰ A1)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxyneucleotide,ASODN)转染对人增生性瘢痕成纤维细胞Col Ⅰ A1表达的影响.方法 取患者自愿捐赠瘢痕组织,采用组织块法培养人增生性瘢痕成纤维细胞并传代.于6孔板内按32.25×104个/孔的密度接种第4代细胞,根据转染液不同分为4组:A组为脂质体加Col Ⅰ A1 ASODN,B组为Col Ⅰ A1 ASODN,C组为脂质体,D组为空白对照.转染后8 h,1、2、3、4 d分别提取细胞总RNA,行RT-PCR后测定Col Ⅰ A1 mRNA表达量;胃酶消化法提取ECM中Col Ⅰ A1蛋白,ELISA测定其浓度.结果 扩增产物经琼脂糖凝胶电泳榆测显示条带清晰,无杂带、明显的引物二聚体及拖尾现象.Col Ⅰ A1 mRNA相对表达量:转染后8 h,A组小于B、C、D组,B、C组小于D组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05);B、C组间比较筹异无统计学意义(P＞0.05);转染后1 d,A、B组小于C、D组(P＜0.05),A、B组间和C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05):转染后2 d,各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);转染后3、4 d,A组小于B、C、D组,B组小于C、D组(P＜0.05),C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05).Col Ⅰ蛋白浓度:转染后8 h,A组小于B、C、D组,B、C组小于D组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05),B、C组间差异无统计学意义(P＞0.05);转染后1 d,各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);转染后2、3、4 d,A、B组小于C、D组,C组小于D组(P＜0.05),A,B组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Col Ⅰ A1 ASODN抑制Col Ⅰ A1 mRNA和蛋白表达;阳离子脂质体作为载体有增强效果,促进ASODN进入细胞并在核内分布.     

核转录因子抑制蛋白α突变体对大鼠急性胰腺炎的保护作用

目的 观察核转录因子抑制蛋白α突变体(IκBαM)对大鼠急性胰腺炎的保护作用.方法 蛙皮素诱导建立SD大鼠急性胰腺炎模型.分4组:空白对照组A组、急性胰腺炎组B组、转染PcDNA3.0组C组、转染PcDNA 3.0-IκBαM组D组.分别于24 h检测各组血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、淀粉酶的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰腺组织中Fas、FasL、Caspase-3、mRNA的表达;组织学检测胰腺腺泡细胞坏死情况.结果 D组与B、C组比较:血清TNF-α、淀粉酶表达水平明显降低,差异有统计学意义[TNF-α(587±93比915±102;587±93比897±116);淀粉酶(6773±663比8973±825;6773±663比9021+_763),P＜0.05];胰腺组织Fas、FasL、Caspase-3 mRNA表达明显升高,差异有统计学意义[Fas(0.572±0.103比0.473±0.084;0.572±0.103比0.468±0.071);FasL(0.627±0.124比0.397±0.084;0.627±0.124比0.391±0.072);Caspase-3 (0.893±0.142比0.513±0.122;0.893±0.142比0.508±0.130),P＜0.05];胰腺组织腺泡细胞坏死明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).B、C、D组与A组表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IκBαM通过诱导胰腺腺泡细胞凋亡对大鼠急性胰腺炎发挥保护作用.     

IL-17C影响小鼠移植肾存活的机制

目的探讨白细胞介素(IL)-17C在小鼠肾移植中的作用及其机制。方法以Balb/c(H-2Kd小鼠为供体,IL-17C基因敲除(IL-17CKO)小鼠(敲除组)、C57BL/6J(H-2Kb)小鼠(野生组)为受体,建立小鼠生命支持型肾移植模型。术后比较两组小鼠的体质量及存活时间。采用苏木素-伊红(HE)染色及过碘酸-雪夫(PAS)染色对移植肾进行病理学检查。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植肾组织中颗粒酶B、干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6及IL-1β的信使核糖核酸(mRNA)表达水平,采用流式细胞术检测移植肾组织中炎症细胞浸润情况。结果移植术后敲除组小鼠存活时间显著短于野生组小鼠(P=0.031),且体质量下降程度更明显,但差异无统计学意义。病理分析发现敲除组小鼠移植肾损伤较野生组小鼠明显加重。敲除组小鼠移植肾组织中颗粒酶B、IFN-γ、TNF-α、IL-6的mRNA表达水平均显著高于野生组(均为P0.01),IL-1βmRNA表达呈降低趋势,但差异无统计学意义(P=0.16)。流式细胞分析发现敲除组小鼠移植肾组织中CD45+CD11b+Ly6G+中性粒细胞和CD45+CD11b+Ly6Chi单核细胞浸润较野生组小鼠明显增加(分别为P0.05,P0.01),而CD45+Ly6Chi F4/80+巨噬细胞浸润无明显变化(P0.05)。结论 IL-17C参与肾移植后炎症反应的调控,可能通过降低促炎细胞因子的表达及炎症细胞的浸润来减轻急性排斥反应,改善移植肾存活情况。     

~(125)I粒子植入对人纤维肉瘤裸鼠皮下移植瘤微血管生成的影响

目的观察不同活度的125I粒子植入对人纤维肉瘤裸鼠移植瘤微血管生成的影响。方法建立人纤维肉瘤细胞HT-1080裸鼠皮下移植瘤模型24只,随机分4组,实验组A、B、C组分别植入单颗活度为14.8、22.2、29.6MBq的125I粒子,对照组D组植入单颗空源。15d后比较各实验组及对照组之间移植瘤大小,计算抑瘤率,观察移植瘤微血管结构的变化及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,比较各组微血管密度(microvascular density,MVD)。结果粒子植入后15d,A、B、C、D组的肿瘤体积分别为:(879.32±54.90)mm3、(186.91±32.70)mm3、(122.01±34.72)mm3和(1302.71±62.39)mm3,各组差异均有统计学意义(F=844.21,P=0.000)。125I粒子对A、B、C组肿瘤体积抑制率分别为32.50%、85.65%和90.63%。与D组比较,实验组可见移植瘤细胞坏死,微血管不同程度减少,内皮细胞杀伤明显。4组VEGF表达阳性率分别为54.2%(13/24)、29.2%(7/24)、20.8%(5/24)、66.7%(16/24),A、D组间VEGF表达差异无统计学意义(χ2=0.784,P=0.376),B、C组的VEGF表达均显著低于D组,差异有统计学意义(χ2=6.762,P=0.009;χ2=10.243,P=0.001),A、C组与B组VEGF表达比较,差异均无统计学意义(χ2=3.086,P=0.079;χ2=0.444,P=0.505),A、C组比较,VEGF表达差异具有统计学意义(χ2=5.689,P=0.017)。4组MVD表达分别为(27.49±3.10)个、(10.27±3.57)个、(9.14±2.49)个、(30.15±4.26)个,差异具有统计学意义(F=253.22,P=0.000),A、D组间MVD表达差异无统计学意义(q=3.814,P0.05),但B、C组的MVD表达均显著低于D组,差异有统计学意义(q=28.502,P0.05;q=30.123,P0.05)。B、C组与A组表达MVD比较,差异有统计学意义(q=24.689,P0.05;q=26.309,P0.05),B、C组间比较差异无统计学意义(q=1.628,P0.05)。结论 125I粒子组织间植入对人纤维肉瘤微血管生成有显著抑制作用,粒子初始活度影响治疗效果。