金属硫蛋白对供心细胞bcl-2、bax和Fas蛋白表达的影响

金属硫蛋白(MT)是普遍存在于各种生物体内的具有多种生物学功能的可诱导蛋白，多种生理及病理情况下均有MT的变化。B淋巴细胞瘤／白血病2蛋白(bcl-2)、bcl-2家族bax蛋白、肿瘤坏死因子Fas抗原等蛋白的表达在细胞凋亡中起重要作用，近来研究亦表明MT与细胞凋亡密切相关，其对供心保存后bcl-2，bax和Fas等相关凋亡蛋白表达的影响尚未可知，我们通过腹腔注射ZnSO4诱导MT在心肌的表达就此做进一步研究．     

金属硫蛋白对供心的保护作用

目的探讨金属硫蛋白(MT)对离体心脏的保护作用。方法16只Wistar大鼠,随机分为2组,对照组腹腔注射蒸馏水0.5ml,24h后取离体心脏行离体灌注(Langendorff模型),测定心功能,然后灌注HTK心脏保护液,4℃下保存3h,再行Langendorff灌注,10min后转为工作心模型15min;实验组腹腔注射36g/LZnSO4(1.5ml/kg),24h后取离体心脏,随后的处理同对照组。测定心肌组织中MT、ATP、丙二醛(MDA)及Ca2 的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性,测定心功能指标、心肌含水量(MWC)、心肌肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;测定心肌细胞线粒体内Ca2 ATPase活性、Ca2 含量及其合成ATP能力;观察心肌超微结构。结果实验组MT的含量明显高于对照组(P<0.01);实验组心功能指标、心肌组织中ATP含量及SOD活性均优于对照组(P<0.05,P<0.01),实验组MWC、MDA和Ca2 的含量以及CK、LDH漏出率均低于对照组(P<0.05,P<0.01);实验组心肌细胞线粒体内Ca2 ATPase活性及合成ATP能力均优于对照组(P<0.01),Ca2 含量低于对照组(P<0.01);实验组心肌细胞超微结构的损伤较对照组明显减轻。结论MT对鼠离体心脏具有保护作用。     

金属硫蛋白对皮瓣存活及细胞凋亡基因的影响

目的 观察金属硫蛋白(MT)对细胞凋亡基因及皮瓣存活影响.方法 大鼠背部形成随意皮瓣,实验组予以MT,对照组予以生理盐水,术后10 d测皮瓣存活率,术后3 d行苏木素-伊红(HE)染色光镜检查,激光多普勒测血运,术后3 d测皮瓣细胞凋亡基因bcl-2、bax蛋白.结果 MT组皮瓣的存活率(69.88±3.12)%高于对照组(60.65±2.98)%(P＜0.01).MT组中性粒细胞较多,激光多普勒血流量相对值(LDF值)下降少(P＜0.01).bcl-2蛋白表达MT组(2.98±0.23)较对照组(1.24±0.11)高(P＜0.01).bax蛋白(0.09±0.02)较对照组(0.23±0.09)低(P＜0.01).结论 皮瓣术后MT促进bcl-2,抑制bax,从而提高皮瓣存活率.

Abstract：

Objective To investigate whether metallothionein (MT) influences necrosis and expression of bcl-2 and bax in random pattern skin flaps of rats. Methods After flap operation, the rats in MT group were injected with MT, and those in control group received an injection of drug-free saline. Survival rate of the flaps was measured and the changes in the tissue were observed under the light microscopy.By using Doppler, the blood flow of flap was measured. The expression of bcl-2 and bax was detected. Results The survival area in MT group (69. 88 ±3. 12)% was significantly greater (P＜0.01) than that in control group (60. 65 ± 2. 98) %. There were more inflammatory cells in control group than in MT group.LDF in MT group was significiently higher than that in control group (P ＜0.01 ) 1st h, 2nd h, 3rd h, 6th h,1 st day, 3rd day, 6th and 7th day postoperation and at the 10th day postoperation (P ＜ 0. 05 ). At the 3rd day postoperation, the expression of bcl-2 in MT group (2.98 ± 0. 23 ) was significantly higher than that in control group ( 1.24 ± 0. 11 ) ( P ＜ 0. 01 ). The expression of bax in MT group ( 0. 09 ± 0. 02 ) was significantly lower than that in control group (0. 23 ± 0. 09) ( P ＜ 0. 01 ). Conclusion MT can affect the expression of bcl-2 and bax and significantly promote survival of skin flap.     

金属硫蛋白对离体心脏细胞凋亡和NO、NOS表达的影响

目的 探讨金属硫蛋白（Mr）与离体心脏细胞凋亡和一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）的关系。方法 Wistar大鼠16只，分为2组：对照组（c），腹腔注射蒸馏水0．5ml24h后取离体心脏灌注HTK心脏保护液，4℃保存3h后建立Langendorff灌注模型，灌注KH液2h；实验组（E）腹腔注射3．6％ZnSO4（1．5ml／ks）24h后取离体心脏，处理方法同C组。测定心肌MT含量、心肌细胞凋亡率、NO、NOS的含量。结果 MT含量E组明显较C组增高（P〈0．05），心肌细胞凋亡率E组明显低于C组（P〈0．01），琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯E组与C组比较，光密度明显减弱（P〈0．01），E组与C组比较，NO、NOS的含量明显增多（P〈0．01）。MT含量与凋亡细胞率呈负相关（r=-0．96，P〈0．01），与心肌组织中NO含量呈正相关（r=0．97，P〈0．01）。结论 心肌MT可增加心肌中NO、NOS的表达，减少再灌后心肌细胞凋亡的发生。     

金属硫蛋白1E对胰腺癌SW1990细胞生长的影响

目的 观察外源性人金属硫蛋白1E(MT1E)基因对胰腺癌SW1990细胞生长的影响.方法 构建MT1E基因真核表达载体,转染SW1990细胞并获得阳性单克隆细胞.用Westernblot技术检测转染前后MT1E蛋白表达,噻唑蓝(MTT)实验检测其增殖能力的变化,流式细胞仪分析细胞周期时相分布.同时检测Cyclin D1与p53的表达.结果 MT1E融合蛋白在SW1990MT1E细胞中表达.MTT结果表明,与SW1990和SW1990MT1E空细胞比较,SW1990MT1E细胞增殖速度明显增快.SW1990MT1E细胞与SW1990和SW1990空细胞比较,G0/G1期细胞明显减少,S期明显增多,差异有统计学意义.SW1990MT1E较SW1990空的细胞Cyclin D1与p53表达明显升高.结论 MT1E能够促进SW1990增殖,可能和上调Cyclin D1促使细胞进入S期增多,通过失活p53蛋白使细胞恶性变.     

锌对烫伤大鼠肝脏金属硫蛋白的影响

OBJECTIVE: To investigate the changes in liver metallothionein (MT) in scalded rats. METHODS: The scalded rats in deficient zinc condition were fed with diets containing zinc 4 micrograms/g, 10 micrograms/g, and 80 micrograms/g respectively. The changes in serum zinc, liver zinc and liver MT were observed. RESULTS: The serum zinc decreased, liver zinc and MT increased. The higher diet zinc levels were, The higher serum zinc, liver zinc and MT became. The correlation analysis showed that the changes between liver zinc level and liver MT was positive relationship(r = 0.85, P < 0.01). CONCLUSION: Serum zinc decrease, liver zinc increase after burn. This is connect with increment of MT synthesis in liver, zinc is inducer to MT. It can improve synthesis of liver MT.     

锌对烫伤大鼠肝脏金属硫蛋白的影响

目的　探讨烫伤大鼠补锌后金属硫蛋白（ Ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ Ｍ Ｔ） 的变化。方法　观察了 Ｓ Ｄ 大鼠在缺锌状态下烫伤,进食缺锌（４μｇ／ｇ） 、低锌（１０μｇ／ｇ） 、高锌（８０μｇ／ｇ） 三种含锌量不同饲料,其血清锌、肝脏锌、肝 Ｍ Ｔ 的变化。结果　血清锌下降,肝脏锌、肝脏 Ｍ Ｔ 升高,含锌量越大,血清锌、肝脏锌、肝脏 Ｍ Ｔ 越高。高锌组最明显,肝脏 Ｍ Ｔ 高出低锌组９ 倍（ Ｐ＜ ０ ．０１） 。相关分析表明,肝脏锌与肝 Ｍ Ｔ 的变化呈正相关（ ｒ ＝ ０８５ , Ｐ＜ ０ ．０１） 。结论　烫伤后血清锌下降肝脏锌增加,与肝脏 Ｍ Ｔ 合成增多有关;锌是 Ｍ Ｔ 的诱导剂,促进 Ｍ Ｔ 的合成。     

锌对烫伤大鼠肝脏金属硫蛋白的影响

目的探讨烫伤大鼠补锌后金属硫蛋白(Metallothionein MT)的变化。方法观察了SD 大鼠在缺锌状态下烫伤,进食缺锌(4μg/g)、低锌(10μg/g)、高锌(80μg/g)三种含锌量不同饲料,其血清锌、肝脏锌、肝 MT 的变化。结果血清锌下降,肝脏锌、肝脏 MT 升高,含锌量越大,血清锌、肝脏锌、肝脏 MT 越高。高锌组最明显,肝脏 MT 高出低锌组9倍(P<0.01)。相关分析表明,肝脏锌与肝 MT 的变化呈正相关(r=0.85,P<0.01)。结论烫伤后血清锌下降肝脏锌增加,与肝脏 MT 合成增多有关;锌是 MT 的诱导剂,促进 MT 的合成。     

钙预处理对未成熟心肌细胞凋亡与凋亡相关蛋白的影响

目的探讨Ca^2＋预处理对未成熟心肌细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法实验于2000年6月至2001年12月在武汉大学人民医院心血管外科完成。日本长耳大白兔12只,雌雄不限,14~21 d,体重230~300 g。按随机数字表法分为2组,每组6只。缺血-再灌注组（I/R组）：常规建立Langendorff模型,灌注重碳酸氢盐缓冲液（Krebs-Henseleit,KH）20 min,停灌45 min,复灌120 min;钙预处理组（CP组）：建立Langendorff模型,灌注KH液20 min后无钙KH液灌注45 s,反复3次,KH液灌注5 min,停灌45 min,复灌120 min。采用凋亡细胞原位标记和半定量分析检测心肌细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯,Western blot法检测bcl-2、bax和fas的表达。结果 CP组的心肌细胞凋亡率低于I/R组（4.53%±1.22%vs.12.30%±2.12%,t=7.780,P=0.000）。CP组琼脂糖凝胶电泳检测的DNA片段梯与I/R组比较明显减弱（光密度值：56460±1640 vs.135212±3 370,t=51.460,P=0.000）。I/R组bcl-2表达与CP组比较明显减少（光密度值：13217±1 770 vs.31790±1 018,t=22.280,P=0.000）,I/R组bax（光密度值：30 176±1025 vs.7954±730,t=43.260,P=0.000）和fas（光密度值：29 197±1 233vs.8140±867,t=34.220,P=0.000）表达与CP组比较均明显增高。结论 Ca^2＋预处理能影响bcl-2、bax和fas的表达,可减少未成熟心肌细胞凋亡。     

锌—金属硫蛋白对大鼠皮肤烫伤创面的影响

目的 研究Wistar大鼠深Ⅱ度烧伤后皮肤活力的下降与脂质过氧化反应的关系。方法 以氧耗量、琥珀酸脱氢酶、Schiff’s碱及创面愈合时间为指标,以金属硫蛋白作为保护剂外用于烫伤创面,分别采用空白对照及5×10^-6mol/L,1×10^-5mol/L两种浓度,测定伤后8,24,48h各项指标的变化。结果 皮肤氧耗量、琥珀酸脱氢酶活性下降,Schiffs碱含量明显升高。应用金属硫蛋白保护后,皮肤活性（氧耗及琥珀酸脱氢酶含量）均显著高于对照组（P＜0．05或P＜0．01）,同时Schiff’s碱含量下降（P＜0．05或P＜0．01）,创面愈合时间平均提前2天。结论 烫伤组织损伤与脂质过氧化反应有一定的关系,而金属硫蛋白有一定保护作用。     

热休克蛋白70对大鼠离体心脏细胞凋亡的影响

目的 观察热休克蛋白70(HSP70)对离体大鼠供心心肌细胞凋亡相关蛋白bcl-2、bax表达的影响.方法 Wistar大鼠18只,分为2组:对照组(C,n=9),腹腔注射生理盐水0.5 ml,24 h后取离体心脏灌注HTK心脏保护液,4 ℃保存3 h后建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注KH液2 h;实验组(E,n=9)腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素(溶于生理盐水中)3.1 μmol/kg(0.53 mg/kg),腹腔注射24 h后取离体心脏,处理方法旧C组.运用免疫组织化学SP法测定心肌HSP70含量、bcl-2、bax蛋白的含量并做统计学处理比较.结果 HSPT0含量E组(17.78±1.82)较C组(5.22±1.05)明显增高(P＜0.01),bel-2的表达E组(41.88±5.09)较C组(31.36±3.27)明显增多(P＜0.01),bax的表达E组(22.61±3.49)较C组(40.52±4.17)明显减少(P＜0.01),bel-2/bax比值E组(1.86±0.11)较C组(0.77±0.01)明显增高(P＜0.05).结论 心肌HSP70高表达能促进心肌抗凋亡蛋白bcl-2的表达,减少促凋亡蛋白bax表达,增加bel-2/bax比率,抑制心肌细胞凋亡.     

七氟醚后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注时心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨七氟醚后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注(IR)时心肌细胞凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠48只,随机分4组(n=12),制备离体心脏灌注模型,K-H液平衡灌注30 min后,C组灌注K-H液120 min;IR组缺血30 min,K-H液再灌注90 min;缺血后处理组(IP组)缺血30 min后行4个循环复灌20 s/缺血20 s,再灌注K-H液;七氟醚后处理组(SP组)缺血30 min后灌注含七氟醚的K-H液5 min,K-H液冲洗10 min,再灌注K-H液.IP组和SP组再灌注总时间90 min.灌注期间测定心功能,灌注结束时取心脏测定心梗面积、Bcl-2、细胞色素C和Caspase-3蛋白表达水平,计算心肌细胞凋亡指数(AI).结果 与C组比较,其余各组左心室最大上升或下降速率(±dp/dt)、左心室发展压(LVDP)、HR降低,左心室舒张末压(LVEDP)和AI升高,Bel-2、细胞色素C和Caspase-3蛋白表达上调(P<0.05);与IR组比较,IP组和SP组±dp/dt、LVDP升高,LVEDP和AI降低,心梗面积减小,Bcl-2表达上调,细胞色素C和Caspase-3蛋白表达下调(P<0.05).结论 七氟醚后处理可减少大鼠离体心脏IR时心肌细胞凋亡,其机制与其下调细胞色素C和Caspase-3蛋白表达,上调Bcl-2表达有关.     

缺血后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的作用

目的探讨缺血后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的作用。方法24只Wistar大鼠,随机分为3组(n=8):正常对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理组(IPC组)。采用大鼠离体心脏Langendorff灌流模型,C组用K-H液灌注160min;I/R组全心缺血40 min,再灌注120 min; IPC组全心缺血40 min后,再灌注10 s,缺血10 s,反复6次,然后持续再灌注118 min。测定再灌注15、30、120 min时冠脉流量(CF)及冠脉流出液心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度,再灌注120 min时,取心肌组织,测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,电镜下观察心肌细胞超微结构。结果缺血再灌注可导致CF降低,冠脉流出液cTnI浓度升高,心肌SOD活性下降,MDA含量升高,心肌细胞超微结构产生病理学改变,缺血后处理可减弱上述改变。结论缺血后处理减轻脂质过氧化反应,对大鼠离体缺血再灌注心脏产生保护作用。     

肾上腺髓质素心肌保护作用机制的实验研究

目的　探讨肾上腺髓质素 (Adm1 5 0 )对缺血再灌注大鼠心肌组织血管细胞粘附分子 1(VCAM 1)表达的影响。方法　 2 4只雄性SD大鼠 ,制作离体心脏缺血再灌注模型 ,并随机分为A、B、C、D4组 ,每组 6只。心脏缺血 6 0min ,A组用氧合K H液再灌注 6 0min ,B、C、D组用氧合K H液分别加入10 -9mol/L、10 -8mol/L、10 -7mol/L的Adm1 5 0再灌注 15min ,再用K H液灌注 45min。逆转录 -聚合酶链式反应 (RT PCR)法检测心肌组织VCAM 1mRNA表达 ,并测定磷酸肌酸激酶同工酶 (CK MB)释放。结果　Adm1 5 0抑制再灌注大鼠心肌组织VCAM 1表达的作用呈浓度依赖性。Adm1 5 0减少了再灌注末心肌组织CK MB漏出量 ,A组 ( 31 5± 3 3)U/L、B组 ( 2 9 7± 3 3)U/L、C组 ( 2 4 3± 3 0 )U/L、D组 ( 19 3± 3 2 )U/L ,C、D组与A组比较P <0 0 1。结论　心肌缺血再灌注时 ,Adm1 5 0通过抑制VCAM 1mRNA表达而产生心肌保护作用。     

异丙酚、芬太尼对离体心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 评价异丙酚、芬太尼对离体心肌缺血再灌注损伤的作用。方法 采用离体鼠Langendroff脏模型,SD大鼠 32只,取心脏用 K-H液恒温恒压主动脉逆灌、平衡 15min,随机分为 4组:（A）脂肪乳剂对照组;（B）5μg·ml-1异丙酚组;（C）10ng·ml-1芬太尼组;（D）5μg·ml-1异丙酚加10ng·ml-1芬太尼组。用含相应药液的 K-H液灌注 10min,常温全心停灌30min,然后用含相应药液的K-H液恢复灌注30min,记录各组用药前、停灌前1min、再灌30min时心脏机械功能变化、冠脉流量以及测定再灌注30min冠脉流出液里乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果 再灌30min时B、C、D组心功能的恢复明显好于A组,D组明显好于B、C组。LDH活性B、C、D组明显低于A组,D组明显低于B、C组。结论5μg·ml-1异丙酚、10ng·ml-1芬太尼能抑制离体心肌缺血再灌注损伤,两者复合应用其作用更强。     

丙酮酸乙酯预先给药对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨丙酮酸乙酯预先给药对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠24只,体重250～320 g,3月龄,制备Langendorff主动脉逆行灌注模型.随机分为3组(n=8),对照组(C组):改良的K-H缓冲液持续灌流120 min;缺血再灌注组(IR组)改良的K-H缓冲液平衡灌注30 min后,全心停灌30 min,再灌注60 min;丙酮酸乙酯组(EP组)改良的K-H缓冲液平衡灌注15 min后,再用含2 mmol/L丙酮酸乙酯的改良K-H缓冲液平衡灌注15 min,全心停灌30 min,最后用含2 mmol/L丙酮酸乙酯的改良K-H缓冲液再灌注60 min.记录各组平衡灌注15 min(基础值)、再灌注10、30、60 min的左室收缩峰压(LVSP)、左心室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax )、冠脉流量(CF),再灌注60 min时测定心肌ATP含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、肌酸激酶(CK)的活性.结果 与C组比较,IR组CF、LVSP、±dp/dtmax、SOD活性、ATP含量降低,MDA含量、CK活性、LDH活性升高(P＜0.05),EP组差异无统计学意义(P＞0.05);与IR组比较,EP组CF、LVSP、±dp/dtmax、SOD活性、ATP含量升高,MDA含量、CK活性、LDH活性降低(P＜0.05).结论 丙酮酸乙酯2 mmol/L预先给药通过提高心肌ATP含量,降低氧化应激反应,可减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.     

离体大鼠心脏胰岛素抵抗与心肌损伤

目的探讨高胰岛素刺激后离体大鼠心脏发生心肌胰岛素抵抗与心肌损伤。方法30只SD大鼠按灌注液中胰岛素含量随机均分为0U/L组(Ⅰ组)、10U/L组(Ⅱ组)、20U/L组(Ⅲ组)、30U/L组(Ⅳ组)和50U/L组(Ⅴ组)五组。采用Langendorff模型以含不同浓度胰岛素的K-H液进行离体心脏灌注。定时搜集并测定冠状动脉流出液样本中葡萄糖浓度,评估心肌葡萄糖氧化情况;测定流出液中肌酸激酶(CK),肌钙蛋白I(cTnI)含量;Western Blot检测心肌细胞胰岛素受体(InsR)含量。结果与Ⅰ组比较,Ⅱ～Ⅴ组大鼠心肌葡萄糖总氧化量明显减少(P<0.05),心肌细胞InsR表达降低,心肌细胞释放CK和cTnI增加(P<0.05)。结论高胰岛素刺激大鼠离体心脏后,心肌细胞出现胰岛素抵抗现象。其程度随胰岛素含量升高而增强,心肌亦受到损伤。