外周淋巴细胞冻存技术在复发性流产主动免疫治疗中的应用研究

目的:探讨外周淋巴细胞冻存技术用于复发性流产(RSA)主动免疫治疗的临床效果。方法:对2014年11月-2016年1月经本院中医科门诊确诊的77例RSA患者的临床资料进行回顾性分析,所有浓缩白细胞通过无偿献血方式获得,进一步采用Ficoll密度梯度离心法分离淋巴细胞,淋巴细胞经自体血浆冻存,深低温保存,分次复苏后用于RSA患者主动免疫治疗。通过台盼蓝拒染实验和流式细胞技术比较冻存不同时期淋巴细胞存活率和CD3~+T、CD3~+CD8~+T和CD3~+CD4~+T细胞免疫表型变化,评价冻存淋巴细胞的活性和稳定性;通过比较治疗前后RSA患者HLA-Ⅰ、Ⅱ类特异性封闭抗体转阳率和再次妊娠成功率,评价冻存外周淋巴细胞用于RSA治疗的效果。结果:与新鲜分离的淋巴细胞比较,存活7、15、30、60、90 d的淋巴细胞存活率和细胞表型稳定性比较,差异均无统计学意义(P0.05);经冻存淋巴细胞主动免疫治疗后,封闭抗体累计转阳率为93.5%。封闭抗体阳性者再次妊娠成功率为90.3%,显著高于阴性者的20.0%,差异有统计学意义(P0.05)。结论:外周血淋巴细胞经自体血浆冻存,深低温保存后,不影响细胞存活率和稳定性,且对RSA患者治疗效果明确。此外,此法获得的淋巴细胞来源安全、可靠,患者依从性高,且可一定程度缓解临床血液制品来源困难的处境,具有进一步临床推广使用的价值。     

淋巴细胞免疫治疗对反复妊娠流产患者封闭抗体表达的影响及其临床意义

目的:探究淋巴细胞免疫治疗对反复性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者封闭抗体(blocking anti-bodies,BA)的表达影响及其临床意义。方法:选取2015年1月-2016年1月本院确诊为RSA患者269例,均行淋巴细胞免疫疗法。检测患者治疗前后外周血BA表达、免疫球蛋白浓度、淋巴细胞亚群数量及相关比值,患者治疗后均随访1年,记录随访期间患者妊娠情况。结果:治疗前BA阳性24例(8.92%),低于治疗后的225例(83.64%),比较差异有统计学意义(x~2=324.51,P=0.000);治疗后Ig A、Ig M、Ig G水平均低于治疗前(P0.05);且治疗后,CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+均低于治疗前,CD8~+高于治疗前,比较差异均有统计学意义(P0.05);BA阳性孕妇妊娠成功率为92.18%(165/179),明显高于BA阴性孕妇的60.00%(3/5),比较差异有统计学意义(x~2=6.344,P=0.012)。结论:淋巴细胞免疫治疗RSA有助于提高患者BA表达,调节患者免疫水平并增加妊娠成功率。     

异源淋巴细胞免疫治疗后反复妊娠丢失患者的外周血NK细胞变化

目的 观察异源淋巴细胞免疫治疗后反复妊娠丢失(RPL)患者的外周血自然杀伤(NK)细胞变化情况.方法 选取2012年1月至2013年12月期间在我院门诊就诊的反复妊娠丢失并具备免疫治疗适应证的患者30例(RPL组),采用流式细胞术分析异源淋巴细胞免疫治疗后其外周血NK细胞及亚群的变化,并以26例正常妇女做为健康对照组进行比较.结果 异源淋巴细胞主动免疫治疗前,RPL组患者外周血CD3-CD56+NK细胞比例明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而其余亚群比例CD3+CD56+、CD56dimCD16+、CD56brightCD16-、CD56+CD69+比较则差异均无统计学意义(P>0.05);经过治疗后,患者外周血CD3-CD56+NK细胞比例从治疗前的(17.07±8.19)降为治疗后的(10.02 ± 7.32),差异有统计学意义(P<0.05),而其余亚群比例治疗前后比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 异源淋巴细胞免疫治疗可能通过降低CD3-CD56+NK细胞比例促进再次妊娠的成功.     

外周血淋巴细胞亚群分布对同种免疫型复发性流产病因及淋巴细胞免疫治疗效果的评估价值

目的:探讨外周血淋巴细胞亚群对同种免疫型复发性流产病因及淋巴细胞主动免疫治疗(LIT)效果的评估价值。方法:选取2015年4月-2018年4月本院收治的自愿接受LIT的同种免疫型复发性流产患者85例作为观察组,以同期正常妊娠者78例作为对照组,比较两组外周血淋巴细胞亚群分布差异。对接受LIT的患者,比较一疗程组与两疗程组患者外周血淋巴细胞亚群分布差异。结果:观察组与对照组的外周血CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞、Th/Ts、CD19~+B细胞、CD3~-CD56~+NK细胞比例比较,差异均无统计学意义(P0.05);一疗程组治疗前CD4~+CD25~+T细胞比例显著高于两疗程组,差异有统计学意义(P0.05);一疗程组与两疗程组治疗前的CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞、CD19~+B细胞、CD3~-CD56~+NK细胞、CD3~-CD56~+CD16~-NK细胞比例比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:外周血CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞、Th/Ts、CD19~+B细胞及CD3~-CD56~+NK细胞比例不能对同种免疫型复发性流产进行病因评估,外周血淋巴细胞亚群是否能评估同种免疫型复发性流产的发生仍需多组数据论证。患者外周血CD4~+CD25~+T细胞可在淋巴细胞免疫治疗前预评估封闭抗体转为阳性情况,为评估治疗效果提供参考。     

复发性流产患者细胞因子水平与妊娠结局的关系

目的通过检测正常妊娠者、孕龄期非妊娠者及复发性流产患者(RSA)的细胞因子水平,探究复发性流产患者的发病机制及妊娠结局,为免疫治疗提供理论依据。方法随机选取2014年1月到2015年12月期间,正常妊娠者50名,孕龄期非妊娠者50例,复发性流产患者50例。酶联免疫吸附法(ELISA)测定3组受检者静脉血中的TH1型,TH2型细胞因子水平,对3组细胞因子水平的差异进行相关的分析比较。结果妊娠组与非妊娠组相比,在THl、TH2型细胞因子中,其差异无统计学意义(P0.05),在TH1,TH2型细胞因子中,流产组与妊娠组及非妊娠组相比,差异具有统计学意义(P0.01)。RSA患者组、妊娠组及非妊娠组CD4~+、CD8~+、CD16~+CD56~+T淋巴细胞在流产1月后变化水平为逐渐下降至平缓状态,其中1月最高。RSA患者妊娠后CD4~+、CD8~+的比例及CD16~+CD56~+T淋巴细胞的比例均显著低于正常妊娠前,非妊娠组干扰素-γ与白介素-4间存在正相关关系(r=0.368,P=0.02)。结论 TH1型细胞因子表达水平高或TH2型细胞因子表达水平低,将会增加流产机率,RSA患者血液中CD16~+CD56~+T细胞亚群比例比妊娠组及非妊娠组高,导致流产。     

复发性流产淋巴细胞免疫治疗前后再次妊娠保胎的临床观察

目的:探讨复发性流产淋巴细胞免疫治疗前后再次妊娠保胎的临床效果。方法:对156例自然流产2~5次封闭抗体阴性的复发性流产患者进行孕前孕后淋巴细胞主动免疫治疗。结果:156例治疗一疗程封闭抗体转阳性145例,未转阳的11例,8例两个疗程转阳,3例三个疗程转阳;一疗程转阳率92.95%,两疗程转阳率98.08%。妊娠56例,48例保胎成功,保胎成功率85.71%;流产8例,流产率14.29%。29例封闭抗体阴性孕后接受淋巴细胞主动免疫治疗,20例保胎成功,保胎成功率68.97%;流产9例,流产率31.03%。结论:淋巴细胞主动免疫治疗能促使封闭抗体转阳并提高复发性流产患者再次妊娠保胎成功率,孕前淋巴细胞免疫治疗转阳后,孕后继续主动免疫治疗者保胎成功率高。     

反复自然流产患者封闭抗体及CD25分子的流式分析

目的探讨抗CD4,CD8,CD3和HLA-DR封闭抗体及淋巴细胞CD25在反复自然流产(RSA)诊治中的临床意义.方法应用流式细胞仪分别检测对照组及患者治疗前后淋巴细胞CD25及其配偶淋巴细胞与患者血清作用后的CD4,CD8,CD3和HLA-DR表达率.并通过与正常男性AB血清进行对照,计算出正常生育者或RSA患者血清对其配偶淋巴细胞CD4,CD8,CD3和HLA-DR的封闭效率.结果RSA患者CD4,CD8,CD3和HLA-DR封闭效率(BE,%)明显降低,依次为(2.5±1.4),(1.6±2.1),(8.1±3.9)和(2.6±3.7).淋巴细胞CD25明显升高(6.4±1.9),与正常妊娠组及治疗后均差异有显著性(p＜0.01).结论抗CD4,CD8,CD3和HLA-DR的封闭抗体在正常妊娠中有重要的生物学作用,封闭抗体及淋巴细胞CD25的流式分析有可能成为RSA患者的辅助诊治和判断疗效的指标之一.     

淋巴细胞主动免疫治疗对复发性流产患者封闭抗体水平及妊娠结局影响

目的:对复发性流产患者实施淋巴细胞主动免疫治疗,分析患者的封闭抗体(BA)水平变化及妊娠结局的影响。方法:选取100例复发性流产患者,按照随机数字表法分成两组,每组50例。对照组采取常规保胎治疗,研究组在对照组基础上行淋巴细胞主动免疫治疗,对照分析两组治疗前后BA水平以及妊娠结局的变化情况。结果:治疗后,研究组BA转阳情况优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);外周血T淋巴细胞封闭效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅱ型干扰素(INF-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均低于对照组,白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-4(IL-4)水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组成功分娩率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:对复发性流产患者实施淋巴细胞主动免疫治疗不仅可以促进BA转阳,改善相关生化指标水平,还可以提高分娩成功率,具有一定的临床价值。     

主动免疫治疗复发性自然流产的免疫功能监测

目的 :观察复发性自然流产 (recurrentspontaneousabortion ,RSA)患者主动免疫治疗前后细胞免疫功能的变化情况 ,探讨主动免疫对RSA的疗效。方法 :采用小剂量丈夫淋巴细胞皮内注射治疗RSA32例 ,观察其局部皮肤反应及治疗前后外周血CD4、CD8细胞和CD4/CD8的变化。结果 :局部皮肤反应随免疫次数的增加而逐渐减轻 ,首次免疫与末次免疫后皮肤反应面积比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 0 1) ,妊娠结局良好。主动免疫治疗前后CD4细胞百分比无明显改变 (P >0 .0 5 ) ,而CD8细胞百分比治疗后有明显升高 (P <0 .0 5 ) ,CD4/CD8比率明显下降 (P <0 .0 0 1)。结论 :局部皮肤反应联合细胞免疫功能测定可以有效地监测主动免疫治疗效果 ,提高免疫治疗的成功率。     

补肾联合免疫治疗对不同频次URSA先兆流产患者免疫功能的影响

目的观察参芪寿胎丸方联合主动免疫治疗对不同频次原因不明复发性流产(URSA)早期先兆流产患者免疫功能的影响。方法将60例URSA早期先兆流产患者按流产次数分为治疗1组(自然流产2次)与治疗2组(自然流产≥3次),每组30例。观察此方案对不同频次URSA早期先兆流产患者的继续妊娠成功率,比较两组患者治疗前后T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+及CD4/CD8)的变化。结果两组患者治疗后总继续妊娠成功率为91.67%,治疗1组为93.33%,治疗2组为90.00%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗前后,CD3+、CD4+比较差异均无统计学意义(P>0.05),治疗后CD8+显著增高(P<0.05),CD4/CD8降低(P<0.05),组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾中药联合主动免疫治疗,可调节不同频次URSA患者早期先兆流产的免疫功能,纠正患者免疫失衡,继而提高继续妊娠成功率。     

自然流产病人免疫治疗后外周血T淋巴细胞亚群的变化

①目的探讨自然流产病人主动免疫治疗后T淋巴细胞亚群的变化.②方法 30例自然流产妇女采用其配偶静脉血中的淋巴细胞进行免疫治疗,采用抗生物素-生物素-碱性磷酸酶标记的免疫染色方法,对30例妇女的外周血淋巴细胞亚群CD抗原进行检测.③结果经免疫治疗后,CD4+/CD8+比值明显升高(t＝2.65,P＜0.05).④结论自然流产病人免疫治疗后外周血淋巴细胞亚群CD4、CD8抗原检测,可以了解细胞免疫功能的变化,预测疗效.     

淋巴细胞免疫疗法治疗习惯性流产的疗效及机制研究

目的：探讨封闭抗体与淋巴细胞免疫疗法治疗习惯性流产的关系及疗效。方法选择100例封闭抗体阴性不明原因习惯性流产病例,其中60例（试验组）进行淋巴细胞免疫治疗,并于治疗后复查封闭抗体、T 细胞亚群和 IgG、IgM 含量的改变,另40例（对照组）采用常规方法保胎治疗,对比两组妊娠结局。结果试验组妊娠成功率为81.7%,对照组为37.5%,二者有统计学差异（P 〈0.01）。试验组封闭抗体阳性者妊娠成功率为90.3%,封闭抗体阴性者为33.3%,亦有统计学差异（P 〈0.01）。试验组 CD4＋ T 细胞较治疗前下降,CD8＋ T 细胞治疗后上升, CD4＋/ CD8＋下降,IgG 与 IgM 治疗后亦下降明显,以上各指标免疫治疗前后均有显著差异（P 均〈0.05）。结论封闭抗体对妊娠结局有一定影响,封闭抗体阴性患者进行淋巴细胞免疫治疗,安全方便,疗效肯定,值得加强推广。     

主动免疫治疗复发性流产58例疗效分析

目的: 观察采用淋巴细胞对复发性流产进行主动免疫的疗效。方法: 58例原因不明复发性流产患者检测封闭抗体阴性后,采用配偶外周血淋巴细胞进行主动免疫治疗。结果: 妊娠成功49例,成功率为84.5%;3例未孕(仍在治疗中),2例治疗3次后失访,1例宫外孕,3例流产(其中1例双胎妊娠至6个月流产)。结论: 主动免疫对于原因不明复发性流产患者是一种安全、有效的治疗方法,能进一步提高妊娠成功率。     

原因不明性复发性流产91例主动免疫治疗效果分析

目的探讨原因不明性复发性流产(URSA)行主动免疫治疗的疗效及免疫细胞含量的变化特征。方法应用荧光染色和流式细胞技术,分别对2011年1月至2012年8月在安徽医科大学第一附属医院产前诊断中心行淋巴细胞主动免疫治疗的91例URSA患者治疗前后淋巴细胞坏死率及CD3、CD4、CD8及NK细胞比率进行测定;并随访其妊娠结局。结果 79例成功妊娠至12周胎盘形成以后,12例在孕12周以前再次流产,成功率86.81%;治疗后CD3、CD4和NK细胞比例明显下降,CD8及淋巴细胞坏死率显著上升,差异具有统计学意义(P0.05)。结论淋巴细胞主动免疫治疗对于URSA具有显著的疗效,NK细胞的降低有利于妊娠成功。     

补肾健脾法联合免疫疗法治疗封闭抗体缺乏导致反复自然流产临床研究

目的：观察中药补肾健脾法联合免疫疗法治疗反复自然流产（recurrent or repetitive spontaneous abortion,RSA）的临床疗效。方法：收集封闭抗体低下型RSA患者60例,随机分成综合治疗组、单纯淋巴细胞治疗对照组各30例,对照组采用丈夫淋巴细胞皮下注射主动免疫疗法;综合治疗组在对照组基础上加服补肾健脾中药,比较治疗前两组封闭抗体的变化及妊娠成功率。结果：第1个疗程结束后,治疗组与对照组封闭抗体阳转率分别为86.7%、70%,妊娠成功率分别为88.46%、76.19%,综合治疗组封闭抗体阳转率、妊娠成功率均显著高于对照组（P〈0.05）。结论：中药补肾健脾法     

反复自然流产患者主动免疫治疗后封闭抗体和调节性T细胞水平变化

目的 探讨主动免疫治疗反复自然流产(RSA)的妊娠结局及治疗前后外周血封闭抗体(BA)、CD₄⁺CD₂₅⁺T细胞和CD₄⁺CD₂₅^highTreg细胞水平的变化。方法 运用微量淋巴细胞毒试验(MLCT)检测BA,随机选取300例阴性患者行淋巴细胞主动免疫治疗,并随访妊娠结局;随机选取100例患者流式细胞术检测外周血封闭效率、CD₄⁺CD₂₅⁺T细胞和CD₄⁺CD₂₅^highTreg水平。结果 接受主动免疫治疗的300例患者中,265例妊娠,35例仍在治疗中。再次妊娠的患者中10例发生早期流产,165例已成功分娩,90例仍在继续妊娠中,治疗的成功率达96.2%。100例患者BA水平主动免疫治疗后(37.73±2.42%)较治疗前(7.25±0.39%)明显升高,CD₃、CD₄、CD₂₅封闭抗体效率均较治疗前升高,其中CD₃和CD₂₅抗体升高非常显著(P＜0.01);CD₄⁺CD₂₅⁺T细胞和CD₄⁺CD₂₅^highTreg细胞的比率均明显高于主动免疫治疗前,差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05)。结论 RSA的发生可能与患者外周血中封闭抗体、CD₄⁺CD₂₅⁺T细胞、CD₄⁺CD₂₅⁺ Treg减少有关。淋巴细胞主动免疫治疗能够显著提高患者外周血封闭抗体水平、CD₄⁺CD₂₅⁺ T细胞和CD₄⁺CD₂₅^highTreg的比率,是治疗RSA的一种安全有效的方法。     

279例复发性流产封闭抗体检测及淋巴细胞主动免疫治疗疗效观察

目的 观察原因不明复发性流产（RSA）患者经丈夫或无关个体淋巴细胞免疫治疗后其体内封闭抗体（BA）的变化及妊娠成功率.方法 279例封闭抗体阴性的患者分为实验组和对照组,实验组237例给予丈夫或无关个体的外周血淋巴细胞免疫治疗及常规保胎治疗,对照组42例只进行常规保胎治疗,比较两组治疗前后BA的变化及再次妊娠的结局.结果 BA阴性者237例,经过2个疗程的主动免疫治疗后BA转为阳性者152例.3个月内B超监测到排卵后妊娠126例,其中中晚期妊娠或分娩共109例,17例妊娠12周内再次发生流产,治疗成功率为71.71％ （109/152）.经过2个疗程免疫治疗后仍为阴性者85例,妊娠39例,妊娠大于20周或分娩共21例,治疗成功率为24.71％ （21/85）.上述两组数据经统计学分析,有显著性差异（x2值=48.64,P＜0.05）;对照组42例,妊娠17例,妊娠维持20周以上7例,流产10例.妊娠成功率为16.67％ （7/42）.实验组妊娠成功率为54.85％,与对照组比较有显著性差异（x2值=20.82,P＜0.05）.结论 淋巴细胞主动免疫治疗可提高BA阴性的不明原因复发性流产患者BA的阳性率,提高母体免疫耐受,提高再次妊娠成功率.     

复发性流产患者血清维生素D水平与自身免疫抗体、淋巴细胞亚群的关系研究

目的探讨复发性流产（RSA）患者血清维生素D 水平与自身免疫抗体、淋巴细胞亚群的关系。方法回顾性分析RSA患者125 例,根据血清25 羟维生素D[25（OH）D]水平,分为25（OH）D 正常水平组50 例、25（OH）D低水平组75 例,分析两组自身免疫抗体阳性率及淋巴细胞亚群水平。结果25（OH）D低水平组抗心磷脂抗体（ACA）、抗核抗体（ANA）的阳性率及甲状腺过氧化物酶（TPO）抗体阳性率均高于25（OH）D正常水平组,差异有统计学意义（P <0.05）;25（OH）D低水平组外周血CD3+CD4+、CD4+/CD8+、CD19+及CD56+百分率均高于25（OH）D正常水平组,差异有统计学意义（P <0.05）。结论RSA 患者中维生素D 缺乏的比例较高,维生素D 缺乏的RSA 患者ACA、ANA 及TPO 抗体阳性率较高,RSA 维生素D 水平与CD4+T 细胞、B 细胞及NK细胞免疫平衡有关。     

淋巴细胞主动免疫治疗不明原因复发性流产的临床研究

目的研究不明原因复发性流产患者免疫治疗前后的封闭抗体（BA）变化及其妊娠结局。方法封闭抗体阴性的复发性流产患者采用丈夫外周血淋巴细胞主动免疫治疗,比较治疗前后封闭抗体变化,并比较接受免疫治疗与未接受治疗的妊娠成功的患者的妊娠结局。结果主动免疫治疗后封闭抗体阳性率为72．91％;接受免疫治疗者妊娠成功率为68．86％,BA阴性未接受免疫治疗者妊娠成功率为27．13％,差异有统计学意义;免疫治疗后封闭抗体阳性者妊娠成功率达82．95％,免疫治疗后BA阴性者妊娠成功率为34．93％,差异有统计学意义;两组患者病理妊娠结局、新生儿畸形率差异无统计学意义。结论封闭抗体缺乏是不明原因复发性流产的一个重要原因,淋巴细胞主动免疫治疗是比较有效的治疗手段。