云南汉族、彝族躯体攻击行为与MAOA μ-VNTR多态性的关联性分析

目的探讨云南汉族、彝族人群躯体攻击行为(aggressive behavior,AB)与单胺氧化酶A基因(Monoamine oxidase-A,MAO-A)启动子区域30bp-VNTR (MAOAμ-VNTR)多态性的关联性,以及其与文化程度、婚姻状况、吸烟、饮酒4个潜在风险因素之间是否存在交互作用。方法对495例男性躯体攻击行为者和527例男性健康对照,应用荧光标记引物结合毛细管电泳分型技术进行MAOAμ-VNTR基因分型。运用SPSS软件进行数据统计。结果云南汉族、彝族群体的MAOAμ-VNTR多态性与躯体攻击行为无直接相关性(P>0.05),且与4个潜在风险因素之间不存在交互作用;躯体攻击行为的风险因素为有无吸烟史以及低文化程度(P=0.001)。结论云南汉族、彝族群体的MAOAμ-VNTR多态性与躯体攻击行为不存在相关性;两个群体的躯体攻击行为发生的风险因素为低文化程度和吸烟史。     

建立序列特异性引物PCR检测儿茶酚胺氧位转移酶与单胺氧化酶基因多态性的方法

目的建立用PCR-SSP检测儿茶酚胺氧位转移酶(COMT)与单胺氧化酶(MAOA)的基因多态性的方法。方法根据COMT与MAOA的基因序列,采用针对变异位点的点突变方式设计出顺序特异性引物(SSP)进行PCR扩增,并借助常规电泳确定基因型。结果用PCR-SSP来研究COMT与MAOA基因多态性的方法特异性强,重复性好,而且简便、经济、快速。结论PCR-SSP可对具有单核苷酸突变的基因分型,应用前景良好。     

血浆游离DNA的STR分型检测研究

目的：探讨利用血浆中游离DNA进行短串联重复序列（short tandem repeat,STR）分型检测,解决法医学个体识别和亲权鉴定问题的可行性。方法采集36例无关健康个体EDTA-Na2抗凝血样,分离血浆,采用经典酚-氯仿法分别处理血浆和血细胞,对提取的DNA进行15个STR基因座常规PCR扩增和荧光标记复合扩增,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳检测2种STR分型方法进行检测。结果常规PCR扩增银染检测和荧光标记复合扩增毛细管电泳检测两种STR分型方法的结果表明,同一个体的血浆游离DNA和血细胞DNA STR分型一致,且分型效果接近。结论血浆游离DNA可作为一种有效的生物学样本进行STR分型检测,应用于法医个体识别和亲权鉴定。     

西安地区汉族人群13个STR基因座多态性分析

随着DNA分析技术的飞速发展及广泛应用,以多色荧光标记引物复合扩增短串联重复序列STR(short tandem repeat,STR)毛细管电泳及自动荧光扫描检测分析技术为主的STR基因座检测方法正在国内外迅速发展普及,已经广泛应用于个体识别、亲权鉴定。本研究用Profiler Plus和Cofiler两个荧光标记复合扩增系统分析了西安地区汉族人群13个STR基因座频率的遗传多态性分布。     

利用毛细管电泳技术分析云南回族人群7个STR基因座的遗传多态性

目的 对云南回族群体的D3S1358 /THO1 /D21S11 /D18S51/ D5S818 /D13S317 /D7S820等7个STR基因座的遗传多态性进行群体遗传学研究.方法 利用荧光标记复合扩增及毛细管电泳自动荧光检测的方法, 对204例无关个体的7个STR基因座进行检测.结果 获得7个基因座的各基因座等位基因的分布频率和基因型频率, 结果均符合Hardy - Weinberg平衡.计算了各基因座的杂合度(He)、个人识别能力(PD)、偶合率(PM)、非父排除率(PE)和多态性信息总量(PIC)等群体遗传学数据. 结论 利用毛细管电泳技术可对这7个STR基因座进行很好的检测, 这些基因座多态性丰富、灵敏度高, 可用于人类遗传分析及法医学中的亲子鉴定和个人识别.     

毛细管电泳法检测肝细胞癌微卫星基因表型的影响因素

目的：分析影响肝细胞癌微卫星—自动毛细管电泳检测结果的技术因素。方法：应用MegaBACE500毛细管电泳测序仪对一组高度多态性微卫星PCR扩增产物进行电泳，应用Genetic Profiler软件进行基因表型分型，比较PCR扩增产物在不同处理条件下对基因分型的影响。结果：PCR反应体系残留混合物(dNTP、引物和盐离子的浓度等)对基因分型的结果有明显的影响，当PCR体系中益离子和DNA的浓度比＞10000：1时可使等位基因片段分析系统评分出现偏差而导致结论错误，基因组DNA—PCR样品浓度在50ng/μl时较为合适。结论：毛细管电泳测序体系中PCR反应体系残留混合物的浓度是影响基因分型结果的一个重要因素。     

应用通用荧光引物筛选裸鼹鼠微卫星位点方法的建立

目的 建立使用通用荧光引物分步PCR法筛选裸鼹鼠微卫星位点的方法.方法 在特异性引物F链的5'端连接通用引物,先以特异引物R链和加长引物F链进行PCR,再加入通用荧光引物进行第二步PCR,最后使用琼脂糖电泳和毛细管电泳检测扩增产物,同时以传统的荧光引物PCR为对照.结果 琼脂糖电泳结果显示,通用荧光引物PCR产生的目的片段清晰,引物特异性强,目的片段多态性与传统PCR产生的多态性一致,且片段大小均比传统PCR产生的目的片段大15 bp左右,与预期一致.毛细管电泳结果也显示,通用引物PCR结果检测的等位基因数与传统荧光引物PCR方法产生的数量完全一致,无杂带,扩增效率高,具有较强的可操作性.结论 使用通用荧光引物分步PCR法结果可应用于裸鼹鼠基因组大量微卫星位点的筛选.     

STR基因座在湖北土家族人群多态性研究

目的:对湖北土家族群体D3S1358、THO1、D21S11、D18S51、PentaE、PentaD、VWA、D8S11798个STR基因座的遗传多态性进行群体遗传学研究。方法:利用荧光标记复合扩增及毛细管电泳自动荧光检测的方法,对226例无关个体的8个STR基因座进行检测。结果:在湖北土家族人群中8个STR基因座个人识别率为0.843～0.981,多态性信息含量为0.66～0.90。所有基因座经卡方检验符合Hardy-Weinberg平衡。结论:上述8个STR基因座在湖北土家族人群中等位基因分布较好,个体识别率高,可用于人类遗传分析及法医学中的亲子鉴定和个体识别。     

延安地区汉族人群15个STR基因座多态性分析

目的调查15个STR基因座在延安地区汉族人群中的多态性分布,为群体学研究、法医学个体识别和亲权鉴定提供基础数据.方法应用美国ABI公司Identifiler荧光标记复合扩增试剂盒,结合PE9700扩增仪和ABI3100Avant遗传分析仪,对延安地区100名汉族无关个体的静脉血进行PCR扩增和电泳检测,并利用Genescan和Genotype软件进行自动分型.结果 15个STR基因座在延安汉族人群中的等位基因频率分布在0.005～0.550之间,基因型频率分布在0.010～0.310之间,累计耦合概率为2.5×10-17,累计非父排除率为0.999999999.结论本研究所应用的15个STR基因座在延安汉族人群中具有较高的多态性,适合于该地区的群体学研究、法医学个人识别和亲权鉴定.     

五色荧光标记27个Y染色体短串联重复序列基因座复合扩增体系的建立

目的建立27个Y染色体短串联重复序列(Y-STR)基因座的复合扩增体系,评估其法医学应用价值。方法采用五色荧光素标记技术,对27个Y-STR基因座进行复合扩增和毛细管电泳检测;检测体系的灵敏度、均衡性、一致性、特异性和稳定性,并观察混合、降解和脱落细胞检材的分型情况。结果五色荧光标记复合扩增检测体系的阳性DNA样本分型正确,内标和等位基因分型标准物符合要求;等位基因间的均衡性≥70%,同一荧光标志基因座间的均衡性≥50%,不同标志荧光素间的均衡性≥30%。灵敏度达0.125 0 ng,种属特异性高;混合、降解和脱落细胞检材的分型正确。结论 27个Y-STR基因座复合扩增体系分型效果良好,对建立Y染色体STR数据库、研究群体遗传学和进行法医学鉴定有重要意义。     

基于SNaPShot-FCA的乙醛脱氢酶2基因型微量检测

  目的  建立单碱基末端延伸-荧光毛细分析法(SNaPShot-fluorescence capillary analysis, SNaPShot-FCA)快速检测乙醛脱氢酶2基因(ALDH2)rs671位点的基因型。  方法  收集人外周血细胞,提取基因组DNA;采用R6G-ddATP和cy5-ddGTP作为荧光底物,用SNaPShot法扩增ALDH2基因,生成3′末端带有不同荧光标记的DNA产物;琼脂糖凝胶电泳分离并回收产物,用FCA微量检测,根据荧光光谱鉴定ALDH2 rs671的基因型;样本检测均重复3次,并与DNA测序结果相比较。  结果  优选的R6G-ddATP和cy5-ddGTP浓度分别为1.4 μmol/L和8.0 μmol/L;在最适条件下运用SNaPShot-FCA对106例样本进行了ALDH2基因型检测,检测结果显示:野生型(GG)67例,杂合型(AG)38例,突变纯合型(AA)1例,与测序结果一致。  结论  成功建立了微量检测ALDH2基因型的SNaPShot-FCA,可用于ALDH2基因的快速筛查与鉴定。     

MAOA基因多态性与内化性精神障碍的关联性分析

目的： 探讨MAOA基因多态性与内化性精神障碍的关系,为内化性精神障碍的易感基因研究奠定基础。方法：对194例内化性精神障碍大学生(病例组)和177名健康大学生(对照组)MAOA基因上的tag SNP位点采用多重聚合酶链式反应 (PCR) 和连接酶检测反应 (LDR) 的方法进行基因型检测。采用拟合优度χ2检验分析基因型频率分布是否符合Hardy-Weinberg平衡,应用χ2检验分析病例组与对照组,仅患1种内化性精神障碍组、患2种及2种以上内化性精神障碍组和对照组3组中该tag SNP位点的基因型和等位基因频数分布与内化性精神障碍的关联性。结果： 病例组和对照组中的rs2283724位点的基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg 平衡定律 (χ2 =3.763,P>0.05;χ2 = 3.213,P>0.05)。rs2283724位点在病例组与对照组,仅患1种内化性精神障碍组、患2种及2种以上内化性精神障碍组和对照组3组中的基因型和等位基因频数分布差异均无显著性(P>0.05)。结论：MAOA基因可能与内化性精神障碍的发生无关联,提示MAOA基因可能不是内化性精神障碍发生的主要易感基因。     

毛细管电泳技术检测原纤蛋白1基因微卫星标记

目的 探讨毛细管电泳技术对检测原纤蛋白1(FBNl)基因微卫星标记的应用价值。方法 应用15号染色体FBNl基因侧翼区的4个微卫星为遗传标记，联合运用荧光标记引物的聚合酶链反应和毛细管电泳技术对40名正常人的FBNl基因微卫星标记进行检测。结果 毛细管电泳技术检测FBNl微卫星方法简便稳定，重复性好。所测定的40名正常人FBNl微卫星基因频率与国外学者报道存在一定差异。结论 毛细管电泳技术检测FBNl微卫星方法可望成为马凡综合征症状前诊断的简便易行的手段。     

Tracking of CFSE-labeled endothelial progenitor cells in laser-injured mouse retina

Background  Endothelial progenitor cells (EPCs) transplantation is a promising therapeutic strategy for ischemic retinopathy. The current study aimed to establish a simple, reliable and fluorescent labeling method for tracking EPCs with 5-(and-6)-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) in laser-injured mouse retina.

Methods  EPCs were isolated from human umbilical cord blood mononuclear cells, cultivated, and labeled with various concentrations of CFSE. Based on fluorescence intensity and cell morphology, a 15 minutes incubation with 5 μmol/L CFSE at 37°C was selected as the optimal labeling condition. The survival capability and the apoptosis rate of CFSE-labeled EPCs were measured by Trypan blue staining and Annexin V/PI staining assay respectively. Fluorescence microscopy was used to observe the label stability during the extended culture period. Labeled EPCs were transplanted into the vitreous cavity of pigmented mice injured by retinal laser photocoagulation. Evans Blue angiography and flat mounted retinas were examined to track the labeled cells.

Results  EPCs labeled with 5 μmol/L CFSE presented an intense green fluorescence and maintained normal morphology, with no significant changes in the survival capability or apoptosis rate after being labeled for 2 days, 1 and 4 weeks. The fluorescence intensity gradually decreased in the cells at the end of 4 weeks. Evans Blue angiography of the retina displayed the retinal capillarity network clearly and fluorescence leakage was observed around photocoagulated spots in the laser-injured mouse model. One week after transplantation of labeled EPCs, the fluorescent cells were identified around the photocoagulated lesions. Four weeks after transplantation, fluorescent tube-like structures were observed in the retinal vascular networks.

Conclusion  EPCs could be labeled by CFSE in vitro and monitored in vivo for at least 4 weeks, and participate in the repair of injured retinal vessels.

     

金黄色葡萄球菌的蛋白A基因多态性分型

目的 建立金黄色葡萄球菌的蛋白A基因（spa）多态性分型方法,并初步测定了结核患者鼻腔定植的金黄色葡萄球菌的spa基因型。方法 采用PCR方法扩增10株金黄色葡萄球菌spa基因的X区,测序后通过数据库（http：//www．ridom．de／spaserver／）进行分型,并与脉冲场凝胶电泳（PFGE）结果相比较。结果 5例患者抗结核治疗前后前鼻腔定植的金黄色葡萄球菌spa分型相同,结果与PFGE一致。5例患者定植的金黄色葡萄球菌spa型分别为：t795、t179、t189、t758和t796,其中t795、t758和t796为新发现的型。结论 Spa分型是一个较好的金黄色葡萄球菌快速基因分型方法。     

毛细管电泳-激光诱导荧光检测大鼠脑组织多巴胺含量

目的: 采用毛细管电泳-激光诱导荧光法建立检测大鼠脑组织多巴胺含量的方法。方法: 低温匀浆大鼠脑组织离心后,取上清用pH11.010mmol/L硼砂缓冲液,在室温下衍生反应10h连接上FITC荧光基团;毛细管电泳分离条件为pH10.3100mmol/L硼酸-Tris缓冲液。结果: 在选定的实验条件下,方法检测限(S/N=3)达2.1nmol/L水平,批内相对标准差(RSD)为3.4%,回收率达96.05%,在10-8~10-10mol/L范围内呈良好线性关系。结论: 应用毛细管电泳-激光诱导荧光法可检测鼠脑组织多巴胺含量。     

毛细管电泳-发光二极管诱导荧光分析尿液蛋白

目的：建立人体尿液蛋白质毛细管电泳分析方法,检测正常人与膀胱癌患者尿液蛋白质成分的差异性。方法：对正常人与膀胱癌患者尿液蛋白质用异硫氰酸荧光素进行荧光标记,进行毛细管电泳-发光二极管诱导荧光法分析,获得人尿液蛋白质电泳图,比较两种电泳图的差异。结果：建立了人体尿液蛋白质毛细管电泳分析方法,成功将正常人与膀胱癌患者尿液中的多种蛋白质分离并得到相应电泳图谱,正常人与膀胱癌患者尿液蛋白质电泳图谱存在差异。结论：毛细管电泳-发光二极管诱导荧光法能检测到正常人与膀胱癌患者尿液蛋白质的差异。