高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响。方法:采用实对荧光定量聚合酶链反应检测A549细胞中miR-301b和miR-769-5p的表达;使用 qRT-PCR检测增殖相关基因miRNA表达的变化,并将实验组miR-301b和miR-769-5p表达量上调(与阴性对照组比较);采用MTT法检测并对比A549细胞增殖的改变;采用流式细胞仪检测并对比A549细胞周期以及凋亡的改变。结果:qRT-PCR结果表明,浸染了miR-301b和miR-769-5p过表达载体的A549细胞中miR-301b和miR-769-5p水平明显高于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜0.01)。miR-301b过表达使G0/G1期的A549细胞增加,S和G2/M期的细胞减少;miR-769-5p过表达使G0/G1和G2/M期细胞增加,S期细胞减少。结论:miR-301b对靶基因FOXF2具有调控作用,miR-769-5p对靶基因ARID1A具有调控作用。miR-301b和miR-769-5p的过表达对肺癌A549细胞的细胞周期产生了明显影响,但没有影响细胞增殖和凋亡,miR-301b和miR-769-5p有可能成为肺癌分子靶向治疗调控效应靶点,可以进一步探索研究。     

miR-145通过下调OCT4基因抑制肺腺癌干细胞增殖

背景与目的 miR-145是通过miRNA芯片及qPCR验证筛选出的一种潜在肺癌"保护性"miRNA。本研究旨在探讨miR-145与肺癌干细胞之间的关系及分子机制。方法 miRNA芯片对肺腺癌患者瘤旁和正常组织进行表达谱分析;生物信息学软件预测miR-145潜在的靶基因;脂质体2000介导转染miR-145模拟物和阻遏物进入A549细胞株;实时定量PCR检测miR-145表达水平;Western blot检测OCT4蛋白水平;双荧光素酶报告基因验证miR-145是否作用于OCT4mRNA的3’UTR区预测靶位;细胞增殖实验检测miR-145对于A549细胞生长的作用;流式细胞术检测干细胞表型CD133+的表达。结果在肺腺癌组织中miR-145表达明显低于瘤旁正常组织;miRanda软件预测OCT4是miR-145潜在靶基因;与对照组相比,miR-145模拟物组和阻遏物组miR-145表达分别明显上调和下调;miR-145对A549细胞的生长有双向调节作用,过表达miR-145抑制细胞生长;过表达miR-145可明显降低OCT4蛋白水平及干细胞表型CD133百分比,而抑制miR-145表达则明显增加OCT4蛋白水平及CD133百分比。双荧光素酶报告基因检测证明miR-145可作用于OCT4mRNA的3’UTR区预测靶位。结论 miR-145可通过下调OCT4基因表达抑制A549肺腺癌细胞株中干细胞的增殖,是一种潜在的肺癌"保护性"miRNA。     

milk-145通过下调OCT4基因仰制肺腺癌干细胞增殖

背景与目的 miR-145是通过miRNA芯片及qPCR验证筛选出的一种潜在肺癌保护性miRNA。本研究旨在探讨miR-145与肺癌干细胞之间的关系及分子机制。方法 miRNA芯片对肺腺癌患者瘤旁和正常组织进行表达谱分析;生物信息学软件预测miR-145潜在的靶基因;脂质体2000介导转染miR-145模拟物和阻遏物进入A549细胞株;实时定量PCR检测miR-145表达水平;Western blot检测OCT4蛋白水平;双荧光素酶报告基因验证miR-145是否作用于OCT4mRNA的3'UTR区预测靶位;细胞增殖实验检测miR-145对于A549细胞生长的作用;流式细胞术检测干细胞表型CD133+的表达。结果在肺腺癌组织中miR-145表达明显低于瘤旁正常组织;miRanda软件预测OCT4是miR-145潜在靶基因;与对照组相比,miR-145模拟物组和阻遏物组miR-145表达分别明显上调和下调;miR-145对A549细胞的生长有双向调节作用,过表达miR-145抑制细胞生长;过表达miR-145可明显降低OCT4蛋白水平及干细胞表型CD133百分比,而抑制miR-145表达则明显增加OCT4蛋白水平...     

miR-133b靶向PKM2基因对肺癌A549干细胞增殖及药物敏感性的影响

背景与目的 已有研究表明miR-133b可抑制肺癌细胞生长,miR-133b表达水平在肺癌组织及患者血清中显著降低,miR-133b通过靶向丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)基因提高鳞癌细胞的放疗敏感性,但其机制尚未明了.本研究通过提取非小细胞肺癌细胞株A549的CD133+/CD34+干细胞,研究miR-133b对其增殖及顺铂类药物(cisplatin,DDP)敏感性的影响,探讨miR-133b与PKM2基因的关系,以及它们在肺癌干细胞中的作用.方法 使用miRBase和miRNAMap数据库进行miR-133b与PKM2基因的序列比对.应用免疫磁珠分选法从A549细胞中分选出CD133+/CD34+肺癌干细胞,流式细胞仪检测纯度.转染miR-133b进入CD133+/CD34+细胞,qRT-PCR检测验证miR-133b表达情况,CCK8法检测细胞增殖情况;15μg/mL DDP处理转染miR-133b细胞,检测0 h、12 h、24 h、72 h的细胞凋亡情况;采用Western blot检测PKM2蛋白水平的表达.结果 PKM2基因可能为miR-133b的靶基因;流式结果显示CD133+/CD34+细胞的纯度为(92.15+4.27)%.qRT-PCR结果显示,与对照组相比,过表达miR-133b后,miR-133b明显上调,miR-133b抑制表达后,miR-133b明显下调(P<0.05).细胞增殖实验及Western blot结果显示,与对照组相比,miR-133b mimics组细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),PKM2蛋白水平明显降低(P<0.05);而抑制miR-133b表达则明显增加细胞的增殖能力及PKM2蛋白水平(P<0.05).DDP处理12 h后miR-133b mimics组细胞的凋亡持续明显高于对照组(P<0.05).miR-133b mimics+DDP组PKM2蛋白的表达明显低于对照组及miR-133b inhibitor组(P<0.05).结论 过表达miR-133b能够通过下调PKM2而抑制肺癌干细胞的生长和增殖,并且可以增强肺癌干细胞对DDP的敏感性.     

miR-218在子宫颈癌组织中的表达及预测的靶基因的生物信息学分析

目的 探讨miR-218在子宫颈癌组织中的表达,并对其预测的靶基因进行生物信息学分析,为miR-218在子宫颈癌发生中的作用机制研究提供理论基础.方法 利用miRNA芯片技术检测3份子宫颈癌组织及3份正常子宫颈组织中miRNA表达谱,用实时定量聚合酶链反应（PCR）法在55例子宫颈组织中进行验证.通过生物信息学预测miR-218的靶基因,并对其靶基因进行基因本体（G0）功能富集分析及KEGG信号转导通路富集分析.结果 芯片结果显示子宫颈癌组织中有15个miRNA表达上调（＞2倍）,10个miRNA表达下调（＜0.5倍）,其中miR-218下调最明显.miR-218预测靶基因集合功能富集于生物学调控、蛋白代谢、细胞迁移和黏附、细胞分化等生物学过程,以及蛋白结合、连接酶活性等分子功能上;KEGG通路分析涉及癌通道、黏附连接、胰岛素信号通路、凋亡等信号转导通路及前列腺癌、急性和慢性髓系白血病等疾病通路.结论 miR-218在子宫颈癌组织中呈低表达,miR-218预测靶基因集合显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中.     

人miR-29b过表达慢病毒载体的构建及其对A549细胞迁移的影响

摘 要：［目的］ 构建能高效表达人miR-29b的慢病毒载体,研究其对人肺腺癌A549细胞迁移的影响。［方法］ PCR扩增miR-29b前体序列,克隆入慢病毒表达载体,测序鉴定。包装好的慢病毒感染A549细胞,流式细胞仪分选后用荧光定量PCR检测miR-29b表达水平,划痕实验观察过表达miR-29b对A549细胞迁移的影响。［结果］ 测序结果证明成功构建人miR-29b过表达慢病毒载体。miR-29b过表达慢病毒感染效率为88.56%,使A549细胞中miR-29b表达升高2.78倍。与A549细胞相比,稳定过表达miR-29b的A549-miR-29b细胞的迁移能力显著性降低。［结论］ 成功构建miR-29b过表达慢病毒载体,过表达miR-29b可抑制A549细胞的迁移,为进一步研究miRNA对肿瘤转移的调控作用奠定了基础。     

肺癌缺氧A549细胞的microRNA芯片表达谱分析

目的:研究缺氧对肺腺癌A549细胞中microRNA表达谱的影响,分析靶基因参与的生物学功能和通路。方法:基于miRNA芯片技术和生物信息学分析方法,分析缺氧条件和正常氧条件下培养的A549细胞中差异表达的miRNA,并预测这些miRNA的靶基因,分析靶基因参与的生物学功能和通路。结果:本研究共筛选出14个差异表达miRNA,包括9个在缺氧细胞中上调miRNA和5个下调miRNA。上调和下调miRNA的靶基因都参与DNA转录、核染色质修饰等功能,并且都参与Wnt信号、TGF-β信号和MAPK信号通路。结论:缺氧的肺腺癌A549细胞中miRNA表达谱发生了显著改变,差异表达miRNA对某些基因具有调控作用。     

非小细胞肺癌顺铂化疗耐药相关微RNA的筛选及鉴定

 目的　探讨肿瘤细胞微RNA（miRNA）对化疗药物敏感性的作用。方法　通过miRNA芯片技术检测顺铂（DDP）耐药细胞株A549／DDP与非耐药细胞株A549的miRNA表达的差异,利用荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术验证相应miRNA的表达情况,通过在细胞株中抑制或过表达目标miRNA,研究其对细胞化疗药物敏感性的影响。结果　A549／DDP细胞对DDP的耐药为A549细胞的18倍。A549／DDP细胞与A549细胞存在51个表达水平差异在4倍以上的miRNA,其中24个表达上调,27个表达下调。PCR进一步证实miR-376c、miR-31、miR-29a、miR-221在A549／DDP细胞中显著上调,miR-196a、miR-20a、miR-20b、miR-17、miR-451在A549／DDP细胞中显著下调。在提高A549／DDP细胞中miR-17的表达后,细胞对DDP的敏感度增加了11.7 %,提高miR-451的表达或者抑制miR-29a的表达后,对DDP的敏感度分别下降了15.5 %、12.9 %,抑制miR-376c、miR-31、miR-221或过表达miR-196a、miR-20a、miR-20b均不影响A549／DDP细胞对DDP的敏感度。结论　非小细胞肺癌DDP耐药细胞与非耐药细胞的miRNA表达谱有差异,miRNA参与肺癌化疗耐药,miR-17具有逆转非小细胞肺癌DDP耐药的潜力。     

肠炎和肠炎相关结直肠癌miRNA表达检测及生物信息学分析

背景与目的：炎症性肠病(inflammatory bowel diseases,IBD)为一组慢性肠道疾病,包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)与克罗恩病(Crohn’s disease,CD)。肠炎相关性结直肠癌(colitis-associated col-orectal cancers,CAC)是由IBD癌化形成的一种恶性肿瘤。该研究通过检测UC、CD和CAC组织中相关微小核糖核酸(miRNA)的水平,初步探讨其作为肠炎癌转化分子标志物的可能性,并对在肠炎和CAC中显著变化的一组miRNAs进行靶基因归集和生物信息学分析,为以miRNAs为靶点的基因治疗提供理论和实验基础。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)技术,检测13例UC组织、3例CD患者组织、12例CAC组织及8例正常肠组织中16种miRNAs的表达。通过生物信息学对显著变化的一组miRNA进行靶基因分析,将文献中已报导的所有靶基因进行汇总,并利用DAVID数据库对靶基因进行功能富集分析(GO-analysis)和信号转导通路富集分析(KEGG-analysis,BIOCARTA-analysis)。结果：炎症相关miR-146a和癌症相关miR-27a、miR-29a、miR-20a、miR-21在UC、CD和CAC中的表达都显著高于正常结肠组织,且这一组miRNA的靶基因都富集在癌症相关通路、免疫信号相关通路和炎癌转换相关通路上。结论：miR-146a、miR-27a、miR-29a、miR-20a和miR-21可能是参与肠炎向结直肠癌转化的一组miRNA。     

miR-19与肿瘤

 miR-17~92基因簇编码6种成熟的miRNA,包括miR-17、miR-20a、miR-18a、miR-19a、miR-19b和miR-92a-1,是一类典型的致癌多作用子miRNA。miR-19（包括miR-19a和miR-19b）是其中最重要的致癌miRNA,在淋巴瘤、白血病、肺癌、乳腺癌、多发性骨髓瘤等肿瘤中均表达上调,成为研究的热点之一。miR-19可通过抑制靶基因如PTEN、PP2A、Bim、SOCS1等促进肿瘤的增殖、侵袭和转移,与PI3K-AKT-mTOR信号转导通路关系密切,在肿瘤的发生发展中起着非常重要的作用。     

Identification of novel molecular targets regulated by tumor suppressive miR-1/miR-133a in maxillary sinus squamous cell carcinoma

Based on our microRNA (miRNA) expression signature analysis of maxillary sinus squamous cell carcinoma (MSSCC), we found that miR-1 and miR-133a were significantly reduced in tumor tissues. Quantitative real-time RT-PCR revealed that the expression levels of miR-1 and miR-133a were significantly downregulated in clinical MSSCC tumor tissues compared with normal tissues. We focused on the functional significance of miR-1 and miR-133a in cancer cells and identification of the novel cancer networks regulated by these miRNAs in MSSCC. Restoration of downregulated miRNAs (miR-1 or miR-133a) in cancer cells revealed that both miRNAs significantly inhibited cancer cell proliferation and induced cell apoptosis. Molecular target identification of these miRNAs showed that transgelin 2 (TAGLN2) and purine nucleoside phosphorylase (PNP) were regulated by miR-1 and miR-133a. Both TAGLN2 and PNP mRNA expression levels were significantly upregulated in clinical MSSCC tumor tissues. Silencing studies of target genes demonstrated that both genes inhibited cancer cell proliferation. The identification of novel miR-1/miR-133a-regulated cancer pathways could provide new insights into potential molecular mechanisms of MSSCC oncogenesis.     

MicroRNA-328 is associated with (non-small) cell lung cancer (NSCLC) brain metastasis and mediates NSCLC migration

Brain metastasis (BM) can affect ～ 25% of nonsmall cell lung cancer (NSCLC) patients during their lifetime. Efforts to characterize patients that will develop BM have been disappointing. microRNAs (miRNAs) regulate the expression of target mRNAs. miRNAs play a role in regulating a variety of targets and, consequently, multiple pathways, which make them a powerful tool for early detection of disease, risk assessment, and prognosis. We investigated miRNAs that may serve as biomarkers to differentiate between NSCLC patients with and without BM. miRNA microarray profiling was performed on samples from clinically matched NSCLC from seven patients with BM (BM+) and six without BM (BM-). Using t-test and further qRT-PCR validation, eight miRNAs were confirmed to be significantly differentially expressed. Of these, expression of miR-328 and miR-330-3p were able to correctly classify BM+ vs. BM- patients. This classifier was used on a validation cohort (n = 15), and it correctly classified 12/15 patients. Gene expression analysis comparing A549 parental and A549 cells stably transfected to over-express miR-328 (A549-328) identified several significantly differentially expressed genes. PRKCA was one of the genes over-expressed in A549-328 cells. Additionally, A549-328 cells had significantly increased cell migration compared to A549 cells, which was significantly reduced upon PRKCA knockdown. In summary, miR-328 has a role in conferring migratory potential to NSCLC cells working in part through PRKCA and with further corroboration in additional independent cohorts, these miRNAs may be incorporated into clinical treatment decision making to stratify NSCLC patients at higher risk for developing BM.