犬颅脑枪弹伤后神经细胞凋亡及c-myc的表达

[目的]研究犬脑枪弹伤后神经细胞凋亡机制及c-myc的变化规律.[方法]建立犬颅脑枪弹伤模型,制备不同时期、不同部位脑组织切片.采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)检测脑神经细胞凋亡,用免疫组织化学方法检测c-myc的动态变化.[结果]对照组犬偶见神经细胞凋亡,神经细胞中有微弱c-myc的表达,枪弹伤后凋亡神经细胞于2 h开始增加(P＜0.05),24 h达高峰(P＜0.01),48 h开始下降.c-myc伤后30 min开始增加(P＜0.05),2 h达高峰(P＜0.01),6 h开始下降,24 h同对照组.不同区域表达不一致.[结论]犬脑枪弹伤后神经细胞凋亡及c-myc的表达增强,但c-myc先于神经细胞凋亡的表达,在不同时期、不同部位具有时空规律性.神经细胞的凋亡与凋亡保护基因的调节有关.     

大鼠脑创伤后Bax蛋白表达与神经细胞凋亡

①目的 探讨颅脑创伤后神经细胞凋亡的机制。②方法 采用重型闭合性颅脑创伤模型，将Wistar大鼠204只，随机分为脑创伤组及假手术组，每组又分别划分成伤后3、6、12、24、48、72、168及336小时等8个时相组，每时相组各12只．另12只作为正常时照组。采用免疲组织化学及原位细胞凋亡检测，动态观察大鼠颅脑创伤后皮质、海马、丘脑及齿状回区神经细胞凋亡和Bax蛋白的表达情况。③结果 脑创伤后皮质、海马、丘脑及齿状回区出现神经细胞凋亡，皮质、海马及丘脑出现Bax蛋白表达增加．而齿状回在各时相点均无Bax蛋白表达。④结论 大鼠颅脑创伤后皮质、海马、丘脑及齿状回出现神经细胞凋亡；Bax蛋白表达增加可能参与了脑创伤后皮质、海马及丘脑神经细胞凋亡，而不参与齿状回区的神经细胞凋亡。     

实验性脑出血后大鼠神经细胞凋亡与Caspase-3蛋白表达

目的研究实验性脑出血后大鼠神经细胞凋亡与Caspase-3蛋白表达的关系。方法利用自体股动脉血制作脑出血模型。在大鼠脑出血后6小时,1天、3天、7天处死取脑,制备冰冻切片。应用原位末端标记技术(TUNEL)和免疫组织化学方法,分别检测相邻切片的凋亡细胞和Caspase-3蛋白的表达。结果TUNEL染色和Caspase-3蛋白表达的阳性细胞分布于出血灶周围和出血灶同侧大脑皮层;大部分是神经元,少部分是神经胶质细胞和血管内皮细胞;在脑出血后6小时开始出现,1天明显增多,3天达高峰,之后逐渐减少,至7天与对照组比较仍有显著性差异。结论凋亡机制可能参与脑出血后某些神经细胞损伤,且与Caspase-3蛋白激活有关。     

大鼠脑创伤后皮质Bax蛋白表达及神经细胞凋亡对运动功能影响的实验研究

近年来 ,分子生物学研究发现 ,大脑皮质作为脑损伤后易损区 ,伤后出现神经细胞延迟性死亡 ,从而出现长期运动功能障碍。目前 ,国内外有关这一领域的研究大多局限于缺血性脑损伤 ,而有关脑创伤后这一领域的确切机制尚无全面的报道。因此 ,本研究利用Ｍａｒｍａｒｏｕ重型闭合性颅脑损伤模型[1] ,采用免疫组织化学、原位细胞凋亡检测及ＮＳＳ评分对大鼠脑创伤后神经细胞凋亡以及运动功能障碍的相关机制进行探讨 ,同时应用美洛宁进行治疗 ,以期为临床治疗颅脑创伤患者提供新的理论基础和治疗途径。1　材料与方法1.1　实验动物分组　取成年健康…     

槲皮素对脑出血大鼠神经细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的作用研究

目的通过观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的动态变化及槲皮素的干预作用,探讨槲皮素可能的神经保护作用及机制。方法以雄性健康SD大鼠通过自体血注入法制备大鼠脑出血模型,并随机分为假手术组、脑出血模型组、槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组,共4组,每组30只;槲皮素低剂量组和槲皮素高剂量组分别给予槲皮素10、50 mg/(kg·d)腹腔内注射,假手术组和脑出血模型组给予同等体积生理盐水腹腔内注射,每日1次,连续7 d;各组大鼠分别在术后第6小时、1天、2天、3天、7天通过前肢放置试验评分法评估神经功能缺损,采用TUNEL法检测血肿周围神经细胞凋亡,采用Western blot法检测血肿周围Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果与模型组比较,槲皮素低剂量组在脑出血后第3天、7天及槲皮素高剂量组在第2天、3天、7天的前肢放置试验评分和Bcl-2蛋白表达均明显增加(P<0.01);与模型组比较,槲皮素低剂量组在第3天、7天及槲皮素高剂量组在第1天、2天、3天、7天的神经细胞凋亡率和Bax蛋白表达均明显降低(P<0.01)。结论槲皮素能减轻脑出血后神经功能损伤,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,从而减少神经细胞凋亡有关。     

大鼠脑缺血再灌注后海马区p53蛋白的表达对神经细胞凋亡的影响

近年来 ,分子生物学研究发现 ,动物脑海马区作为脑缺血后选择易损区 ,伤后出现神经细胞延迟性死亡 ,目前已得到国内外学者的公认 ,有关其确切机制尚无全面的报道。本研究利用动物暂时性脑缺血模型 ,采用免疫组织化学、原位细胞凋亡检测对大鼠脑缺血后神经细胞凋亡的相关机制进行探讨。1　材料与方法1.1.　实验动物分组　取 30 0只健康成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠(购自北京大学医学部实验动物中心 ) ,体重 30 0～ 35 0 ｇ,随机分成脑缺血组、假手术组及美洛宁治疗组。每组又分别划分为伤后 3、6、12、2 4、4 8、72、16 8、336ｈ等 8个时相组 ,…     

中药有效成分抑制氧化应激诱导的神经细胞凋亡机制研究进展

氧化应激诱导的神经细胞凋亡,在神经退行性疾病的发生及发展过程中发挥重要作用,其调控途径主要包括NF-κB通路、p53通路、MAPK通路、PI3K/Akt通路、Nrf2通路等信号通路。大量文献报道,中药有效成分具有显著抑制氧化应激诱导的神经细胞凋亡的生物活性。本文综述近5年来中药有效成分抑制氧化应激诱导的神经细胞凋亡的相关机制研究进展,以期为阐释中药有效成分防治神经退行性疾病的作用机制,更有效地防治神经退行性疾病提供参考依据和线索。     

硫酸镁对实验性脑出血大鼠细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的研究硫酸镁对实验性脑出血大鼠模型神经细胞凋亡及Caspase-3表达的影响。方法将108只大鼠随机分为3组:假手术组、模型组和硫酸镁干预组各36只,应用立体定向技术将自体不凝血注入大鼠尾状核区制备脑出血模型,制模成功后用25%硫酸镁400 mg/kg腹腔注射,分别在术后1d、3d、7d、14d、21d、28d不同时间点各取6只大鼠断头取脑,连续切片作TUNEL染色和Caspase-3免疫组化染色。结果与假手术组比较,模型组脑组织中凋亡的神经细胞及Caspase-3表达均增加(P<0.05),在使用25%MgSO_4治疗后干预组神经细胞凋亡明显减少,Caspase-3表达降低,随着用药时间的延长,脑组织中神经细胞凋亡及Caspase-3表达均较模型组有明显降低(P<0.05)。结论硫酸镁可通过抑制脑出血大鼠神经细胞凋亡与Caspase-3活化从而起到显著的脑保护作用,且随应用时间的延长疗效更加显著。     

养阴清热法对放疗后食管癌大鼠c-myc蛋白表达和细胞凋亡的影响

目的:探讨养阴清热法对放疗后食管癌大鼠c-myc蛋白表达及细胞凋亡的影响.方法:130只Wistar大鼠,20只为空白对照组(空白组),余110只用药物诱发食管癌,1次/周,连续20周,经病理证实造模成功后,20只作为食管癌造模组(食管癌组),余90只局部60Co照射5d后分为5组:单放组[蒸馏水10 mL/( kg·...     

基质衍生因子-1对大鼠脑出血后神经细胞凋亡的作用及其机制研究

目的研究基质衍生因子-1(SDF-1)对大鼠脑出血后神经细胞凋亡的作用及其可能机制,从而为探讨SDF-1/CXCR4信号通路在脑出血后继发损伤中的作用奠定基础。方法健康雄性SD大鼠30只,利用立体定位技术向大鼠尾状核内注入VII型胶原酶0.5U建立脑出血模型。设立假手术组、生理盐水对照组、SDF-1处理组,各组于术后72 h经尾状核行冠状切片,TUNEL染色观察神经细胞凋亡,RT-PCR和Western-Blot测定SDF-1的m RNA和蛋白水平。建立体外诱导大鼠皮质神经元凋亡模型,给予SDF-1及其受体CXCR4抑制剂AMD3100处理,流式细胞仪检测神经细胞凋亡情况,Western-Blot法测定凋亡相关蛋白caspase-3基因蛋白表达。结果与假手术组和对照组相比,SDF-1处理组中SDF-1的m RNA和蛋白水平明显增多;且血肿周围凋亡细胞数低于对照组。体外分析表明,80 ng/ml SDF-1处理后可明显减少神经细胞的凋亡,同时降低凋亡相关蛋白caspase-3蛋白的表达水平;AMD3100预处理后,SDF-1抗凋亡能力明显下降,同时caspase-3的水平无明显变化。结论 SDF-1具有抗神经细胞凋亡作用,这一作用可能是由CXCR4介导caspase-3通路来实现的,提示SDF-1/CXCR4可作为受损后神经保护的潜在靶点。     

大鼠脑出血后神经元凋亡与caspase-3表达的关系

目的　研究大鼠实验性脑出血模型中神经细胞凋亡发生的规律以及与caspase 3表达的关系 ,观察caspase抑制剂zVADfmk对出血性脑损伤的保护作用。方法　应用立体定向技术 ,将自体不凝血注入大鼠尾状核区制备脑出血模型 ,将动物随机分为假手术组、出血组和zVADfmk干预组 ,分别在不同时间点断头取脑 ,连续切片作TUNEL染色和caspase 3免疫组化染色。 结果　脑出血后 6h血肿内部及周边组织出现TUNEL阳性细胞 ,72h达高峰 ,2周时仍有少量表达 ;caspase 3在脑出血后 6h表达明显增高 ,2 4h达到高峰 ,各组与假手术组之间差异显著 (P <0 .0 5 )。脑出血后的TUNEL阳性细胞与caspase 3的表达呈正相关 (r =0 .6 0 7,P <0 .0 5 ) ,且caspase 3的高峰时间早于凋亡的发生。经caspase 3抑制剂干预 ,血肿周围组织TUNEL阳性细胞明显减少 ,与对照组相比差异显著 (P <0 .0 5 )。结论　凋亡机制参与了脑出血后继发性损伤的过程 ,而caspase 3的激活在其中起着重要作用 ,通过阻断caspase的激活可以减少脑出血后神经细胞凋亡的发生     

大鼠脑出血后脑组织bax蛋白表达及神经生长因子对其的影响

目的:探讨bax蛋白在脑出血(ICH)后神经损伤过程中的作用以及神经生长因子(NGF)对脑出血损伤的保护机制。方法:采用脑内注射自体新鲜动脉血的方法制作大鼠ICH模型。利用免疫组化方法检测bax蛋白表达的变化。结果:ICH对照组、NGF干预组在ICH后6h即有bax蛋白阳性表达,24h达峰值,之后下降,7d时仍高于生理盐水对照组。NGF干预组与ICH对照组相比较bax蛋白峰值出现的时间无变化,但各时点bax蛋白的表达均较ICH对照组显著减少(P<0.05)。结论:ICH后血肿周围脑组织细胞凋亡增加,加重神经功能损伤。应用NGF可使血肿周围脑组织bax蛋白表达明显下降,起到减轻神经功能损伤,促进神经功能恢复,达到治疗脑出血的目的。     

放疗前、中c-myc蛋白表达与宫颈癌细胞凋亡和增殖的关系

目的：探讨在放射治疗前、中宫颈癌细胞ｃ－ｍｙｃ基因表达与细胞凋亡和增殖的关系。方法：对 ４８例宫颈癌患者分别于放疗前、放疗 ２０Ｇｙ／２周取活检,石蜡包埋。应用原位ＤＮＡ缺口未端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测细胞凋亡,应用免疫组化法对ｃ－ｍｙｃ蛋白、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）进行检测。结果。 ４８例宫颈癌患者放疗前、放疗 ２０Ｇｙ凋亡阳性率分别为６７％、８５％,有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。放疗前ｃ－ｍｙｃ蛋白阳性表达率为 ７８％,ＰＣＮＡ阳性表达率为８６％,放疗２０Ｇｙ其表达率分别为４３％和５５％,放疗前、中比较均有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。放疗２０Ｇｙ ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与凋亡有明显相关性。放疗前及放疗２０Ｇｙ ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与ＰＣＮＡ表达有相关性。结论：ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与宫颈癌细胞增殖有关,亦与放射诱导宫颈癌细胞凋亡有关。     

氯化锂对沙土鼠前脑缺血后神经细胞凋亡及磷酸化Akt蛋白表达的影响

目的:观察沙土鼠前脑缺血后神经细胞凋亡的变化及磷酸化Akt蛋白的表达并探讨氯化锂对其干预作用。方法:夹闭沙土鼠双侧颈总动脉5min,制备前脑缺血损伤模型。沙土鼠72只,随机分为假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)、氯化锂预处理组(LI鄄Pre组)、氯化锂治疗组(LI鄄Post组)。依术后处死动物时间的不同,各组再分别分为3个亚组,每个亚组6只动物。采用TUNEL染色法观察海马CA1区神经细胞凋亡的变化,免疫组化(SP法)检测大脑皮质区磷酸化Akt蛋白的表达。结果:①TUNEL染色:脑缺血再灌注后3天,与相应IR组相比较,LI鄄Pre组和LI鄄Post组海马CA1区TUNEL阳性细胞明显减少(P<0.01);②磷酸化Akt免疫组织化学染色:与相应IR组相比较,LI鄄Pre组或LI鄄Post组各时点亚组大脑皮层部位磷酸化鄄Akt阳性细胞表达显著增多(P<0.05或P<0.01)。结论:①氯化锂能显著减轻沙土鼠短暂前脑缺血后海马CA1区神经细胞凋亡;②氯化锂的脑保护作用与其激活PI3鄄K/Akt信号传导通路有关。     

骨髓单个核细胞移植治疗大鼠脑出血后脑损伤的实验研究

目的观察静脉移植骨髓单个核细胞（bonemarrowmononuclearcells,BMMNCs）治疗脑出血（ICH）大鼠脑损伤的效果及对出血后炎症反应的影响。方法应用立体定位技术将Ⅳ型胶原酶注人大鼠尾状核纹状体内制作脑出血模型,建模后按随机化原则分为假手术组、ICH组、PBS组、BMMNCs移植组;梯度离心法提取、分离、纯化大鼠骨髓单个核细胞,ICH6h后经股静脉输注3×10^7BMMNCs或等量PBS缓冲液。采用改良神经功能损伤评分评价脑出血后1d、3d、7d、14d神经行为功能改善情况;干湿重法测定血肿周围脑组织含水量;免疫荧光法检测脑出血侧小胶质细胞活化及中性粒细胞浸润情况。结果BMMNCs移植组大鼠的神经缺损症状在出血后7d、14d明显改善,与ICH组及PBS组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;在脑出血后3d,BMMNCs移植组的大鼠脑组织含水量[（78．62±0．97）％]明显降低,与ICH组[（81．09±0．83）％]及PBS组[（80．99±0．79）％]比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;BMMNCs移植组脑内小胶质细胞活化增殖及中性粒细胞浸润数目[（55．8±22．1）个／mm2、（49．6±12．9）个／mm2]均显著低于PBS组[（125．0±20．7）个／mm2、（86．8±13．6）个／mm2],差异有统计学意义（P〈0．01）。结论骨髓单个核细胞可明显减轻脑出血后脑水肿程度,促进神经功能恢复,其机制与其减轻脑出血后小胶质细胞活化和中性粒细胞浸润有关。     

放疗诱导宫颈癌细胞凋亡与c-myc蛋白表达

目的 :探讨在放射治疗前、中宫颈癌细胞凋亡与c myc蛋白表达的关系 .方法 :对 4 8例宫颈癌患者分别于放疗前、放疗 2 0Gy/ 2wk取活检 ,石蜡包埋 .应用原位缺口末端标记法 (TUNEL)检测细胞凋亡 ,应用免疫组化SP法对c myc蛋白进行检测 .结果 :4 8例宫颈癌患者放疗前、放疗 2 0Gy ,凋亡阳性率分别为 6 7%和 85 % ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;宫颈鳞癌患者病理分级增高 ,临床分期越晚凋亡阳性率均有降低 ,但无显著性差异 .放疗前c myc蛋白阳性表达率为 86 % ,放疗2 0Gy其表达率为 4 3% ,显著性降低 (P <0 .0 1 ) ;放疗 2 0Gy,c myc蛋白表达与凋亡有明显相关 .结论 :c myc蛋白表达与放射诱导宫颈癌细胞凋亡有关     

培哚普利对大鼠心肌梗死后氧化应激状态及心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨培哚普利对大鼠心肌梗死(MI)后氧化应激状态及心肌细胞凋亡的影响.方法:通过结扎雄性Wistar大鼠左冠状动脉前降支建造MI模型,成功后随机分为培哚普利干预组(P组,n＝15)和MI组(n＝15),另设假手术组为对照(C组,n＝15).术后1 d起P组给予培哚普利2 mg/(kg·d)灌胃,MI、C组给予生理盐水灌胃.4周后超声心动图测定各组大鼠左室舒张末期内经(dLVED)、左室短轴缩短率(FS)及左室射血分数(LVEF),比色法测定非梗死区心肌组织中羟自由基和超氧阴离子(O2-)含量,TUNEL法观察各组大鼠非梗死区心肌细胞凋亡指数(MAI).结果:4周后,与C组比较,P组和MI组心功能明显下降,表现为dLVED增大,FS和LVEF降低(P均<0.05); 心肌组织中羟自由基、O2-含量及MAI升高(P均<0.05).与MI组相比,P组大鼠心功能明显改善,表现为dLVED降低,FS和LVEF升高(P均<0.05);羟自由基、O2-的含量及MAI降低(P均<0.05).结论:培哚普利可以改善心肌梗死后氧化应激状态,抑制心肌细胞凋亡,从而改善心室重塑,增强心功能.     

氧化应激对血管内皮细胞Grx表达的研究

目的采用体外实验，研究人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells．HUVEC）是否受氧化应激而高表达Grx。方法体外分离培养HUVEC；用不同浓度H2O2处理HUVEC，MTT法检测HUVEC活力。RT—PCR半定量检测GrxmRNA表达水平的差异。结果成功获得体外培养的HU—VEC；300-500mol／L H2O2均在不同程度上抑制细胞增殖（P〈0.05）。RT—PCR结果表明，GrxmRNA的表达随着200umol／L H2O2作用时间的增加而增加，30min时与正常对照组差异显著（P〈0．01）；不同终浓度H2O2作用30min结果表明，300umol／L H2O2作用可使GrxmRNA的表达量最高（P〈0．01）。结论建立了分离培养HUVEC的方法；氧化应激可上调HUVEC Grx mRNA表达，且HUVEC内Grx的表达与H2O2刺激呈时间剂量依赖关系。