铜绿假单胞菌EsBLs基因分布及同源性分析

目的 研究温州医学院附属第一医院临床分离铜绿假单胞菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)产生情况、基因分布及流行特性,为临床合理使用抗菌药物、控制耐药性的传播提供理论依据。方法 选取2005～2009年每年6～9月临床连续分离非重复铜绿假单胞菌共169株。PCR方法检测超广谱β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、VEB、PER、GES、TLA、IBC、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、OXA Ⅰ、OXAⅡ、OXAⅢ、OXAⅣ和OXAV)。采用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)分析产超广谱β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌株间的同源性。结果 169株铜绿假单胞菌,经PCR方法检测,检出产超广谱β-内酰胺酶菌株84株,阳性率为49.7％;169株PA中检出TEM、CTX-M-9、CTX-M-1、CTX-M-2、OXA Ⅰ、OXAⅣ、GES、OXAⅡ基因型各占32.0％,5.3％,4.7％,2.4％,1.8％,1.8％,1.2％,0.6％。在54株TEM阳性PA中,挑取同一病区不同患者不同标本分离的铜绿假单胞菌共21株,利用PFGE分析其同源性,多呈现散发流行,仅三株具有同源性。结论 铜绿假单胞菌超广谱β-内酰胺酶基因型以TEM为主,GES、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9、OXA Ⅰ、OXAⅡ、OXAⅣ等基因都有检出,未检出PER基因。脉冲场凝胶电泳结果显示,本院临床分离的铜绿假单胞菌大多无同源性,呈散发流行趋势,个别病区存在轻微的克隆播散现象。     

铜绿假单胞ESBLs基因分布及同源性分析

目的研究温州医学院附属第一医院临床分离铜绿假单胞菌超广谱β-内酰胺酶（EsBL8）产生情况、基因分布及流行特性,为临床合理使用抗菌药物、控制耐药性的传播提供理论依据。方法选取2005—2009年每年6-9月临床连续分离非重复铜绿假单胞菌共169株。PCR方法检测超广谱β-内酰胺酶基因（TEM、SHV、VEB、PER、GES、TLA、IBC、CTX—M-1、CTX—M-2、CTX—M-8、CTX—M-9、OXAⅠ、OXAⅡ、OXAⅢ、OXAⅣ和OXAⅤ）。采用脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）分析产超广谱β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌株间的同源性。结果169株铜绿假单胞菌,经PCR方法检测,检出产超广谱β-内酰胺酶菌株84株,阳性率为49．7％;169株PA中检出TEM、CTX—M-9、CTX—M-1、CTX—M-2、OXAⅠ、OXAⅣ、GES、OXAⅡ基因型各占32．0％,5．3％,4．7％,2．4％,1．8％,1．8％,1．2％,0．6％。在54株TEM阳性PA中,挑取同一病区不同患者不同标本分离的铜绿假单胞菌共21株,利用PFGE分析其同源性,多呈现散发流行,仅三株具有同源性。结论铜绿假单胞菌超广谱β-内酰胺酶基因型以TEM为主,GES、CTX—M-1、CTX—M-2、CTX—M-9、OXAⅠ、OXAⅡ、OXAⅣ等基因都有检出,未检出PER基因。脉冲场凝胶电泳结果显示,本院临床分离的铜绿假单胞菌大多无同源性,呈散发流行趋势,个别病区存在轻微的克隆播散现象。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制研究

目的了解汕头地区对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌（PA）的耐药情况及其机制。方法收集临床分离耐亚胺培南的PA共141株,PCR法检测包括KPC,SME,GES,PER和VEB型超广谱β内酰胺酶（ESBLs）22．PSE酶基因。结果菌株对头孢哌酮,舒巴坦的耐药率较低,未发现产KPC,SME,GES,PER和VEB型ESBLs,6株菌株产PSE酶。结论ESBLs并非汕头地区铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因,可能是多种机制协同作用的结果。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性及超广谱β-内酰胺酶的基因分析

目的:探讨临床分离铜绿假单胞菌的药敏谱及其产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况、基因分布和流行特性。方法:分析208株铜绿假单胞菌对16种抗生素的药敏谱,筛选耐亚胺培南铜绿假单胞菌,采用PCR检测ESBLs基因(TEM、SHV、OXA-10、OXA-2、PER、VEB)。结果:53株对亚胺培南耐药,耐药率为25.48%(53/208),且对头孢替坦(CTE)、头孢唑林(CZ)、氨苄西林/舒巴坦(AMS)、呋喃妥因(FTN)等耐药率较高;53株亚胺培南耐药菌经PCR检测,产ESBLs菌株23株,其中TEM型16株,OXA-10型4株,PER型3株,未检测出OXA-2和SHV型。结论:耐亚胺培南铜绿假单胞菌中产ESBLs菌株的基因型主要为TEM型,且为多重耐药,临床应结合药敏谱,合理使用抗生素。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及β-内酰胺类耐药基因研究

目的 分析我院2005年1．12月临床分高34株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特征以及β-内酰胺类耐药相关基因存在状况。方法 应用BD Phoenix100全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药物敏感试验，头孢哌酮，舒巴坦采用K-B法。应用PCR方法检测12种β-内酰胺类耐药相关基因，分别为TEM、SHV、CARB、OXA．10、PER、VEB、GES、DHA、IMP、VIM、GIM、SPM。结果 亚胺培南耐药铜绿假单胞菌除对阿米卡星100％敏感外，对哌拉西林、哌拉西林，他唑巴坦敏感率为48％-54％，对三代、四代头孢菌素，氨曲南，喹诺酮类等抗生素抗菌活性差，敏感率为3％-29％。对美洛培能有29％敏感，对氨苄西林，舒巴坦、氯霉素、四环素、复方新诺明全部耐药。β-内酰胺类耐药相关基因TEM、CARB、DHA、IMP阳性率分别为5．9％、32．4％、14．7％、17．6％，而SHV、OXA-10、PER、VEB、GES、VIM、GIM．SPM均为阴性。结论 耐亚胺培南的铜绿假单胞菌除对阿米卡星敏感外，对其它常用抗生素耐药严重。携带TEM、CARB、DHA、IMP基因是本组试验菌株对β-内酰胺类抗生素和亚胺培南耐药的重要机制。     

34株多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性及β-内酰胺酶基因分析

目的:对34株多重耐药铜绿假单胞菌的药敏结果和β-内酰胺酶基因进行分析,以指导临床合理用药。方法:用KB法对铜绿假单胞菌进行常规药敏试验,选取34株多重耐药铜绿假单胞菌,并用PCR扩增方法检测其β-内酰胺酶基因:TEM,SHV,PER,VEB。结果:34株多重耐药铜绿假单胞菌对12种常用抗生素的耐药率为20.5%~100%,PCR检测出TEM为44.1%,SHV为11.8%,VEB为5.9%,PER为0%。结论:我院多重耐药铜绿假单胞菌携带的β-内酰胺酶基因以TEM为主。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因研究

目的:了解十堰地区铜绿假单胞菌β-内酰胺类药物的耐药表型和基因分布情况,并探讨基因型与表型的相关性。方法:用VITEK 2 Compact高级专家系统判定2011年1～9月分离的896株铜绿假单胞菌对β-内酰胺类药物的耐药表型,用PCR检测25株铜绿假单胞菌的13种β-内酰胺酶基因。结果:896株铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类药物的耐药表型有9种,连续分离的25株铜绿假单胞菌中耐药表型有4种,主要表型均为高水平耐药+碳青霉烯酶(不渗透性),分别占47%和48%。检出阳性的8种耐药基因包括bla OXA-10、bla DHA、bla SHV、blaCARB、bla GIM、bla GES、bla TEM,阳性率分别为4%、4%、20%、12%、8%、8%、16%,另bla oprD2基因缺失率为60%,未检出bla IMP、bla VIM、bla PER、bla VEB和bla SPM。结论:本院铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药与携带bla OXA-10、bla DHA、bla SHV、bla CARB、bla GIM、bla GES、bla TEM基因以及膜孔蛋白基因oprD2基因缺失有关,这也是本地区β-内酰胺类药物耐药的主要原因。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的β-内酰胺类耐药基因研究

[目的]了解临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌（PAE）的相关耐药基因存在状况。[方法]对16株铜绿假单胞菌采用PCR检测亚胺培南耐药的相关基因（TEM、OXA-10群、SHV、oprD2、IMP、CARB、blaDHA、VIM、PER、GES、VEB）。[结果]16株铜绿假单胞菌TEM阳性4株（25.00%）、OXA-10群阳性5株（31.25%）、SHV阳性5株（31.25%）、orpD2阳性16株（100%）、IMP阳性2株（12.50%）CARB阳性1株（6.30%）、blaDHA阳性1株（6.30%）、VIM阳性1株（6.30%）、PER阳性0株（0）、GES阳性1株（6.30%）、VEB阳性0株（0）,且部分菌株携带3个以上的耐药基因。[结论]临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌携带多种耐药基因,没有导致院内感染的流行耐药菌株。     

铜绿假单胞菌耐药性分析及其超广谱β-内酰胺酶的流行分布

目的研究临床分离的铜绿假单胞菌的耐药性及其超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的流行分布情况。方法收集2011年1月至2012年6月广州医科大学附属第一医院微生物室分离出的头孢他啶耐药(MIC≥16)的铜绿假单胞菌111株,分析其对11种抗生素的耐药性特点和多重耐药情况,采用表型确证试验筛选产ESBLs的菌株,并对表型试验阳性菌株进行相关耐药基因的多重PCR检测。结果 111株头孢他啶耐药的铜绿假单胞菌对11种抗生素的不敏感率如下:哌拉西林94.4%、哌拉西林/他唑巴坦90.8%、头孢吡肟81.1%、氨曲南91.9%、美罗培南72.7%、亚胺培南72.9%、庆大霉素55.9%、妥布霉素41.4%、阿米卡星31.5%、环丙沙星73.0%、左旋氧氟沙星66.7%;ESBLs表型确证试验阳性菌株共23株,阳性率为20.7%;用多重PCR对23株表型试验阳性菌株进行检测,发现20株β-内酰胺酶基因检测阳性,其中19株为PER型,5株为TEM型,4株同时携带PER型和TEM型耐药基因。结论头孢他啶耐药的铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物不敏感率高,对氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物不敏感率则稍低,多重耐药现象普遍;其ESBLs基因可表现为不同的耐药基因型,不同的ESBLs基因型可出现在同一株细菌中;本院铜绿假单胞菌ESBLs基因以PER型最常见。     

多重PCR检测临床产ESBLs大肠埃希菌的耐药基因型研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药性、产ESBLs的阳性率及耐药基因之间的关系。方法采用Kirby-Bauer(K-B)琼脂扩散法检测120株临床分离的大肠埃希菌对18种抗生素的耐药性,用酶抑制剂增强实验纸片法检测产ESBLs菌株,运用多重PCR技术检测相关耐药基因,用DNA序列分析确认基因亚型。结果120株大肠埃希菌产ESBLs的有51株,阳性率为42.5%。120株大肠埃希菌对亚胺培南全部敏感,产ESBLs的大肠埃希菌对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶等头孢类抗菌药物的耐药率高达100%;51株产ESBLs菌株其中46株扩增到CTX-M型耐药基因,44株扩增到TEM型基因,2株扩增到SHV基因,1株OXA型基因,未检出PER和VEB型。结论大肠埃希菌产ESBLs较高,耐药显著,碳青酶烯类抗生素是目前治疗产ESBLs大肠埃希菌最有效的药物;产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型别为CTX-M型和TEM型。     

重症监护室多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因分型研究

目的 了解ICU检出多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因存在情况。 方法 将ICU检出Pae菌株进行体外耐药监测，并对其中19株多重耐药菌株进行耐药相关基因OprD2、IMP-1、GIM、SPM、VIM、TEM、PER、DHA和VEB检测。 结果 PCR结果显示OprD2基因、IMP-1基因阳性率100％；TEM基因阳性率73.7％；VEB基因阳性率10.5％；PER、DHA 、GIM、SPM、VIM基因无阳性检出。 结论 ICU铜绿假单胞菌中携带率多种耐药基因是导致菌株出现多重耐药性的重要原因。     

124株肺炎克雷伯菌耐药性分析和产ESBLs株耐药基因分型研究

目的 探讨肺炎克雷伯菌耐药性以及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型的流行状况.方法 用K-B法检测肺炎克雷伯菌对24种常用抗生素的耐药情况;用PCR扩增所有产酶株的TEM、SHV及CTX-M基因片段,分析ESBLs各基因型的流行状况.结果 肺炎克雷伯菌除对碳青霉烯类药物敏感外,对其他抗生素耐药严重;产ESBLs肺炎克雷伯菌检出50株,检出率40.32％.ESBLs基因分型结果显示,多株同时携带2种或2种以上基因型,且多为CTX-M型与TEM型或SHV型基因共同存在.结论 常用抗菌药物耐药严重、呈多重耐药.ESBLs检出率较高,产ESBLs肺炎克雷伯菌的基因型以CTX-M为主.     

儿科临床分离铜绿假单胞菌对β-内酰胺类耐药相关基因的研究

目的 研究儿科临床分离对β-内酰胺类抗生素耐药铜绿假单胞菌的耐药性及其对β-内酰胺类耐药相关基因的检出情况.方法 收集2004年1月至2006年12月北京儿童医院住院患儿中分离出的146株对β-内酰胺类抗生素耐药铜绿假单胞菌.使用琼脂稀释法进行药敏试验,测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)值,按照临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐标准判断结果 ,再使用PCR方法 进行β-内酰胺类耐药相关基因的检测.采用WHONET 5.3软件进行数据分析.结果 146株对β-内酰胺类抗生素耐药铜绿假单胞菌多呈现多重耐药现象.产金属β-内酰胺酶的共46株(31.5%),IMP基因阳性38株(82.6%),VIM基因阳性8株(17.4%).外膜孔蛋白OprD2缺失的114株,占78.1%.对超广谱β-内酰胺酶TEM、SHV、OXA、PER、GES、CTX.M和质粒型AmpC酶DHA、MIR及FOX基因的检测均为阴性.结论 目前儿科临床分离对β-内酰胺类抗生素耐药铜绿假单胞菌,产生金属酶及外膜孔蛋白OprD2缺失是其耐药的主要原因,并且外膜孔蛋白OprD2缺失现象更为严重.     

铜绿假单胞菌耐药基因及毒力因子分布特征分析

目的:了解我院铜绿假单胞菌毒力因子及耐药基因分布情况,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法:采用ROCHE COBAS E601电化学发光分析仪检测疑似细菌性感染病人降钙素原(PCT)水平,PCT显著升高病人且微生物送检标本单纯检出的12株铜绿假单胞菌为研究对象;采用PCR方法对毒力因子(tox A、exo U、exo S、exo T、Pvoein protein、nor A、las B)及耐药基因(TEM、SHV、PER、VEB1、OXA-10、Amp C、0pr D、KPC)表达情况进行分析;结果:12株铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药率为91.7%(11/12),毒力因子阳性率最高者为Tox A和exo T(91.7%),耐药基因阳性率最高者为Amp C和Opr D(91.7%)。结论:铜绿假单胞菌毒力因子Tox A、exo T及耐药基因Amp C和Opr D携带率较高,不同菌株间耐药特征差异明显,在疑似铜绿假单胞菌感染病人时应依据抗菌药物敏感试验结果针对性选择抗生素,特别对于无菌部分分离的铜绿假单胞菌。     

ICU产ESBLs大肠埃希菌耐药性及基因型分析

目的了解医院重症监护病房(ICU)产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药性及β-内酰胺酶基因型分布特点。方法采用BD Phoenix 100全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药物敏感试验,聚合酶链反应检测β-内酰胺类耐药相关基因,包括TEM、CTX-M-1群、DHA、SHV、oprD2、GES、OXA和VIM。结果 51株产ESBLs大肠埃希菌呈现多重耐药,对亚胺培南、哌拉西林-他唑巴坦和阿米卡星的耐药率分别为2.0%、8.0%和11.8%,其余14种抗生素的耐药率为54.9%~100.0%。51株产ESBLs大肠埃希菌共检出TEM、CTX-M-1群、SHV和oprD2等4种β-内酰胺酶基因,其阳性率分别为76.50%、37.3%、5.9%和31.4%。结论 ICU分离的产ESBLs大肠埃希菌多重耐药严重,携带的β-内酰胺酶基因以TEM为主。     

SHV、TEM基因介导的铜绿假单胞菌产超广谱β-内酰胺酶的检测

目的 了解铜绿假单胞菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的产生情况及基因型别，并寻求一种适合临床使用的检测铜绿假单胞菌产超广谱β-内酰胺酶的方法。方法 使用PCR法和NCCLS推荐的表型确证试验检测20株多重耐药的铜绿假单胞菌的ESBLs。结果 PCR法共检测出15株TEM型ESBLs，其中1株同时携带有SHV基因组。用NCCLS推荐的表型确证试验未检出ESBLs。结论 我院临床分离株铜绿假单胞菌产ESBLs多为TEM型，NCCLS推荐的表型确证试验不适用于铜绿假单胞菌ESBLs的检测。     

血液中大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶耐药基因型研究

目的 了解本地区血液标本中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的分离率、耐药性和基因型.方法 收集临床血液标本分离的产ESBLs的大肠埃希菌26株,应用PCR基因扩增技术分别检测SHV、TEM、CTX-M、PER、CTX-M-2、Ampc、GES基因,DNA测序确定CTX-M、TEM基因型.结果 在26株菌株中15株为CTX-M型,占57.69%,11株为TEM型,占42.31%.结论 本地区临床血液标本分离的产ESBLs大肠埃希菌流行的主要基因型是CTX-M型和TEM型.     

南京地区鲍曼不动杆菌耐药性及β-内酰胺酶基因型分析

目的:调查和分析南京地区75株鲍曼不动杆菌耐药性及β-内酰胺酶基因型.方法:用KB法测定临床分离的75株鲍曼不动杆菌对5种抗菌药物的耐药性,采用PCR法检测β-内酰胺酶耐药基因型.结果:75株鲍曼不动杆菌中对头孢哌酮/舒巴坦耐药率为8.0%,头孢吡肟和头孢他啶的耐药率分别为61.3%和64.0%,头孢唑啉和头孢呋辛钠的耐药率均在80%以上;PCR扩增后有43株菌检测到TEM型β-内酰胺酶基因,且均对头孢吡肟等抗生素耐药,3株为GES型,2株为VEB型,未检出CARB、DHA和PER基因.结论:南京地区鲍曼不动杆菌以TEM型为主,其对β-内酰胺类的高耐药率与TEM型基因有直接的关系.     

三种非发酵革兰阴性杆菌TEM及SHV型β-内酰胺酶基因检测

多重耐药特别是全耐药非发酵糖革兰阴性杆菌如铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌等所致的医院感染及其严重的耐药性问题受到广泛关注,并已成为临床抗菌感染治疗难点之一[1～4].本研究采用聚合酶链反应技术检测自临床分离的革兰阴性杆菌铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌和黄杆菌属细菌中TEM及SHV型β-内酰胺酶(β-lactamases,BLA)基因存在状况,以期达到进一步明确耐药机制,并为细菌耐药性监测及流行病学调查提供分子生物学依据.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性及基因型分析

目的:了解某医院分离产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药性和基因型,为临床合理用药提供依据。方法:收集大肠埃希菌544株,其中161株为产ESBLs菌株。采用VITEK 2 Compact分析仪进行药敏检测,双纸片协同试验确证产ESBLs菌株,PCR法扩增耐药基因。结果:产ESBLs菌株对多数抗菌药物的耐药率高于不产ESBLs菌株（P<0.05~P<0.01）。161株产EBSLs菌株携带CTX-M-9型基因98株、TEM型84株、CTX-M-1型62株、OXA-2型15株、OXA-10型7株、SHV型5株。CTX-M-1型和TEM+CTX-M-1型菌株对头孢他啶的耐药率分别为43.5%、59.1%明显高于CTX-M-9型和TEM+CTX-M-9型菌株15%、11.8%的耐药率（P<0.05和P<0.01）。结论:该院产ESBLs大肠埃希菌的基因型主要为CTX-M与TEM型,产ESBLs菌株对多数抗菌药物的耐药性高于不产ESBLs菌株。