脐血单个核细胞移植对HIBD大鼠脑白质损伤的影响

目的 探讨脐血单个核细胞（ UCBMC）侧脑室移植对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑白质损伤的影响.方法 7日龄Sprague-Dawley新生大鼠,随机分为正常对照组、HIBD组、移植组与磷酸盐缓冲液（PBS）组.采用Rice法制成HIBD模型.体外分离人UCBMC.HIBD后24 h,侧脑室移植UCBMC.移植后14d,28d,采用髓鞘碱性蛋白（MBP）免疫组织化学法比较各组纹状体与胼胝体MBP吸光度的变化.结果 移植后14d,HIBD组MBP吸光度显著低于对照组（P＜0.01）,移植组与HIBD组MBP吸光度差别不显著（P＞0.05）;移植后28d,移植组胼胝体、纹状体MBP吸光度显著高于HIBD组与PBS组（P＜0.01）,但仍少于正常对照组（P＜0.05）,HIBD组与PBS组MBP吸光度差别不显著（P＞0.05）.结论 HIBD后24h,UCBMC侧脑室移植可促进HIBD新生大鼠胼胝体、纹状体MBP表达增加,从而减轻HIBD新生大鼠脑白质损伤.     

低氧预处理人牙髓干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑白质损伤的影响

目的 探讨低氧预处理人牙髓干细胞移植（H-hDPSCs）对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑白质损伤及内源性神经干细胞的影响。方法 将健康7 d龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组、HIBD组、常氧培养hDPSC移植组（N-hDPSCs组）及低氧预处理hDPSC移植组（H-hDPSCs组），每组11只。采用经典的Rice-Vannucci法复制HIBD模型。模型复制后7 d采用增殖细胞核抗原（PCNA）/巢蛋白（Nestin）免疫荧光双标法检测大鼠侧脑室室管膜下区内源性神经干细胞（NSCs）的增殖；模型复制后3周，滑竿实验、Y迷宫实验及模型复制后4周Morris水迷宫实验检测大鼠的运动及空间记忆能力；行为学实验后采用神经元特异性核蛋白（NeuN）免疫荧光法检测大鼠脑组织皮层和海马CA1区神经元的表达；采用髓鞘碱性蛋白（MBP）及神经纤维丝蛋白重链（NF200）免疫荧光双标法检测纹状体及胼胝体区髓鞘及神经纤维的表达。结果 HIBD组模型复制后7 d的侧脑室室管膜下区增殖NSCs数较假手术组少（P <0.05）,N-hDPSCs组、H-hDPSCs组较HIBD组...     

18 kDa 转位蛋白在异氟醚麻醉致大鼠认知损伤中的神经保护作用

目的：观察18 kDa转位蛋白（ TSPO ）在异氟醚麻醉所致的大鼠认知功能损伤中的神经保护作用。方法选取4月龄SD雄性青年大鼠10只,随机分为青年对照组（ AC组）和青年麻醉组（ AA组）;20月龄SD雄性老年大鼠10只,随机分为老年对照组（ OC组）和老年麻醉组（ OA组）。麻醉组吸入2％异氟醚6h,对照组吸入空气6h。麻醉后1d,2d,3d,4d进行水迷宫测试,检测海马组织TSPO蛋白表达。测定麻醉前（ T1）、麻醉诱导6h（T2）、麻醉后24h（T3）、麻醉后48h（T4）血清TNF-α,IL-1β含量。结果与对照组比较,吸入异氟醚后大鼠逃避潜伏期延长（P＜0．05）,老年大鼠延长明显（P＜0．01）;麻醉后大鼠海马区TSPO蛋白表达增加（P＜0．05）,老年大鼠增加显著（P＜0．01）;与T1相比,T2时大鼠血清TNF-α,IL-1β水平均升高（P＜0．05）,T3,T4时逐渐降至正常水平。结论异氟醚可能通过诱发神经炎症导致大鼠认知功能下降,而其认知功能的恢复可能与海马区TSPO蛋白表达增加有关。     

三七皂苷Rg1对慢性应激大鼠脑组织神经颗粒素表达的影响

［摘要］目的　探讨三七皂苷Rg1对慢性应激模型大鼠皮层、海马神经颗粒素（neurogranin,Ng）表达的影响．方法　成年雄性SD大鼠36只,随机分为对照组（CON）、模型组（CUS）和治疗组（CUS-G）,采用慢性不可预见性应激方法建立慢性应激动物模型,运用Morris水迷宫实验对大鼠进行学习记忆力测试,QPCR、Western blot分别检测皮层、海马Ng mRNA及Ng蛋白含量．结果　水迷宫实验显示慢性应激后动物学习记忆能力显著降低,而治疗组大鼠逃避潜伏期明显降低（P＜0.0 5）;应激6周后,慢性应激大鼠皮层、海马Ng mRNA水平皆与模型大鼠有差异（P＜0.05、P＜0.01）,治疗组大鼠皮层、海马Ng mRNA水平皆与模型大鼠有差异（P＜0.01、P＜0.05）;慢性应激大鼠皮层、海马Ng含量水平与模型大鼠有差异（P＜0.05、P＜0.01）,治疗大鼠皮层、海马Ng含量亦与模型大鼠有差异（P＜0.01、P＜0.05）．结论　慢性不可预见性应激导致大鼠皮层、海马Ng mRNA水平、NG 蛋白含量显著下降,造成大鼠学习记忆功能减退,三七皂苷Rg1可上调Ng mRNA水平、NG蛋白含量表达,且对慢性应激所致外显行为有积极调节作用．     

缺氧预处理新生大鼠缺氧缺血脑组织中Limk1蛋白表达

目的：观察Limk1蛋白在缺氧预处理后不同时间段新生大鼠缺氧缺血和对照组脑组织中的表达差异。方法：采用7日龄SD大鼠54只,随机分为于单纯缺血缺氧组18只,假手术对照组18只,缺氧预处理组18只。各组再分为处理后0h、1d、7d组,每组各6只。用免疫组化法检测观察Limk1在不同组脑组织各部位的表达差异。结果：Limk1蛋白阳性神经元在各组的吸光度：单纯缺血缺氧组0h（21．658±3．990）、1d（30．369±5．156）、7d（41．546±5．677）;缺氧预处理组0h（30．261±4．266）、1d（43．129±5．785）、7d（56．309±7．198）;假手术组0h（14．113±2．983）、1d（16,098±3．116）、7d（15．983±3．009）。在单纯缺血缺氧组及缺氧预处理组脑组织的表达比假手术组增多（P〈0．01）。在同一时间段上,缺氧预处理组比单纯缺血缺氧组Limk1的表达明显增多（P〈0．01）。同样在缺血缺氧后,无论是单纯缺血缺氧组还是缺氧处理组,Limk1的表达随着0h、1、7d的推移表达渐增多（P〈0．05）。结论：缺氧预处理能够增加新生大鼠缺血缺氧性脑组织中Limk1的表达,其提示缺氧预处理后的新生大鼠缺血缺氧的脑组织可能存在更强的神经重塑作用。     

MicroRNA-134在缺氧预处理新生大鼠缺氧缺血脑组织中的表达及意义

目的：观察microRNA-134（miR-134）在缺氧预处理新生大鼠缺氧缺血后不同时期脑组织中的表达差异及其表达的特点及意义。方法：采用7日龄SD大鼠制备新生大鼠缺血缺氧性脑损伤动物模型。完全随机分为单纯缺血缺氧组、假手术对照组、缺氧预处理组（各18只）。3组又各分为处理后0h、1d、7d组（n=6）。每组6只用于荧光实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）观察miR-134转录量的差异。结果：miR-134在各组脑组织转录的表达量,单纯缺血缺氧组0h（5．061±0．761）、1d（4．120±0．685）、7d（2．873±0．397）;缺氧预处理组0h（3．341±0．575）、1d（2．769±0．351）、7d（1．658±0．290）;假手术组0h（6．617±1．988）、1d（5,798±1．116）、7d（5．984±1．879）。miR-134在单纯缺血缺氧组及缺氧预处理组脑组织的表达显著比假手术组减少（P〈0．01）,在同一时间段上,缺氧预处理组比单纯缺血缺氧组miR-134的表达明显减少（P〈0．01）。同样在缺血缺氧后,无论是单纯缺血缺氧组还是缺氧处理组,miR-134的表达随着0h、1、7d的推移表达渐减少（P〈0．05）。结论：miR-134的表达在调控神经系统发育中可能起着重要作用,缺氧预处理对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤存在保护作用。     

慢性癫痫与抑郁共病大鼠脑白质中髓鞘碱性蛋白MBP的表达变化

目的探讨脑白质髓鞘变化在慢性反复发作性癫痫（SRS）伴发抑郁共病发生中的作用。方法本实验采用幼年期致癫痫发作后进入SRS的大鼠模型,运用行为学实验、髓鞘特异快蓝染色（LFB）和髓鞘碱性蛋白（MBP）免疫组化染色、分子生物学技术等技术,观察癫痫与抑郁共病的发生比率,以及共病鼠髓鞘发育变化的特征,明确二者间是否存在相关性。结果进入SRS期大鼠中高架迷宫和强迫游泳两项行为学联合评估均表现出抑郁样行为特征的比率占25％。癫痫伴抑郁共病鼠脑在胼胝体（cc）、扣带回（cg）等脑白质区域中LFB和MBP免疫阳性信号染色均显示染色强度较正常对照显著减弱（P〈0．01）,RT—PCR检测显示共病组脑白质中MBPmRNA的表达明显降低（P〈0．01）。结论SRS伴抑郁共病大鼠脑白质中存在髓鞘脱失,可能与抑郁行为的发生密切相关。     

L-NAME对新生鼠缺氧性脑损伤内源性NO和ET的影响

目的 用新生大鼠急性缺氧模型,探讨NO合成酶抑制剂L－硝基－精氨酸甲酯（L－NAME）在缺氧后脑损伤中的作用,进而探讨一氧化氮（NO）和内皮素（ET）在早期缺氧性脑损伤中的作用地位。方法 检测正常对照组、缺氧组和缺氧前应用L－NAME预处理的新生大鼠血浆ET及脑组织匀浆NO含量及NOS的活性,并观察各组大鼠脑组织病理改变及毛细血管充盈不良程度。结果 缺氧组血浆ET水平较正常对照组显升高（P＜0．01）,而脑NO水平及NOS活性无显变化（P＞0．05）,脑脑毛细血管充盈不良程度与正常对照组相比明显加重（P＜0．05）;L－NAME组血浆ET水平较缺氧组显升高（P＜0．05）,脑NO含量及NOS活性较缺氧组显下降（P＜0．01）,脑毛细血管充盈不良程度与缺氧组相比明显加重（P＜0．05）。结论 急性缺氧早期,ET异常增高是脑损伤的主要因素;此时抑制内源性NO的合成,可加重脑组织的微循环障碍而导致脑缺氧缺血性损害的进一步加重。     

褪黑素对慢性间歇性缺氧大鼠心肌GSH-PX、SOD及T-AOC的影响

目的探讨褪黑素对常压下慢性间歇性缺氧SD大鼠心肌的保护作用。方法将24只SD大鼠随机分为3组,每组8只。对照组在自然环境下正常饲养：实验A组置于低氧舱内避光间歇缺氧,并灌服褪黑素1mg/kg;实验B组置于低氧舱内避光间歇缺氧,并灌服生理盐水。比较3组大鼠体重（BM）、右心室/左心室加室间隔质量比值（RVM/LVSM）、右心室/体重质量比值（RVM/BM）、心肌谷胱苷肽过氧化物酶（GSH-PX）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、总抗氧化能力（T-AOC）。结果实验B组的RVM/LVSM、RVM/BM比值明显高于实验A组、对照组（P＜0．05）,而BM、GSH-PX、SOD、T-AOC活性明显低于实验A组、对照组（P＜0．05）,而实验A组与对照组上述指标比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论褪黑素对慢性间歇性缺氧SD大鼠心肌具有保护作用。     

诱导型一氧化氮合酶和胱硫醚-β-合酶在新生大鼠缺氧缺血脑组织中的表达

目的研究缺氧缺血(HI)对新生大鼠脑白质细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及胱硫醚-β-合酶(CBS)表达的影响及二者的相关性,以及它们在新生大鼠脑白质损伤(WMD)发病机制中的作用。方法将80只3日龄大鼠随机分为实验组和对照组,每组40只。建立新生大鼠WMD模型,分别于HI后12、24、48、72 h及7 d处死,取大鼠脑组织应用免疫组织化学法检测iNOS及CBS的表达水平。结果实验组大鼠脑白质和胼胝体中iNOS于HI后12 h表达开始增加,72 h达高峰,7 d仍有表达;CBS于HI后12 h表达开始增加,24 h达高峰,7 d仍有表达。实验组大鼠HI后12、24、48、72 h及7 d iNOS和CBS在胼胝体和脑室周围白质的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。iNOS和CBS在大鼠脑室周围白质和胼胝体的表达呈正相关(rs=0.66、0.68,P<0.05)。结论 HI可导致新生大鼠脑白质iNOS及CBS表达水平增高,iNOS和CBS可能参与新生大鼠WMD的病理生理过程。     

电针对脑缺氧缺血新生大鼠海马结构Nestin与Brdu表达的影响

目的：通过观察电针对脑缺氧缺血新生大鼠海马结构中神经上皮干细胞蛋白（Nestin）与5-溴-2-脱氧脲嘧啶（Brdu）表达的影响。了解电针对脑缺氧缺血后神经发生水平的干预，为电针穴位疗法的临床应用提供实验依据。方法：100只7日龄健康Wistar大鼠，体重12～15g，随机分为4组：空白对照组、模型判定组、缺氧缺血组与缺氧缺血后电针治疗组，各组动物（除空白对照组外）分别结扎左侧颈总动脉，然后将动物置于8％O2-92％N2混合气中2h后取出。模型判定组动物在缺氧缺血48h后处死，制备脑组织切片。脑缺氧缺血后电针组在缺氧缺血后恢复2d，开始刺激“百会”和“大椎”两穴。24d后除模型判定组外，各组动物分别取左侧脑组织制作标本，行Nestin与Brdu免疫组化染色。结果：脑缺氧缺血后电针组海马CA1区Nestin免疫阳性细胞数高于正常对照组及脑缺氧缺血组（P〈0．05）。脑缺氧缺血后电针组齿状回Brdu免疫阳性细胞数高于正常对照组及高于脑缺氧缺血组（P〈0．05）。结论：电针穴位治疗可明显提高仂Ⅱ强1脑缺氧缺血后海马结构神经发生的水平（能力）。     

叶酸对缺氧新生鼠神经干细胞体外增殖的影响

目的：探讨叶酸（FA）对缺氧条件下体外新生大鼠神经干细胞（NSCs）增殖的影响。方法：取24h内新生SD大鼠大脑半球,进行NSCs原代培养。分为正常对照组、缺氧模型组、缺氧叶酸添加组、缺氧叶酸缺乏组共4组。培养第3天除正常对照组外其他3组进行缺氧处理,造成缺氧损伤：培养6d后收集细胞,进行MTT法、5-溴脱氧尿苷（BrdU）掺入法和免疫组化双标记法检测叶酸对缺氧NSCs增殖的影响。结果：MTT检测显示,正常对照组细胞OD值较缺氧模型组高,差异有统计学意义（P〈0．05）;缺氧叶酸添加组OD值明显高于其它缺氧组,差异均有统计学意义（P〈0．05）;免疫组化双标阳性率比较,缺氧模型组双标阳性率明显下降,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,缺氧叶酸添加组明显高于其它几组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：长时间持续缺氧可造成神经干细胞缺氧损伤;添加叶酸使缺氧神经干细胞增长率增加．提示叶酸能促进体外缺氧新生鼠神经干细胞的增殖。     

丙泊酚对SD乳鼠少突胶质细胞髓鞘碱性蛋白表达和髓鞘形成的影响

目的探讨不同剂量丙泊酚对新生SD乳鼠少突胶质细胞合成髓鞘碱性蛋白（MBP）和大脑髓鞘形成的影响。方法出生后 7 d（P7）SD乳鼠57只,随机分为对照组（n=13）、溶剂脂肪乳组（n=5）、25、50和100 mg/kg丙泊酚组（各组n=13）,单次腹腔注射给 药。采用qPCR和Western blot检测注药后8 h mbp mRNA、caspase-3 mRNA和MBP、Cleaved Caspase-3蛋白的表达;免疫荧光 法检测注药后8 h少突胶质细胞凋亡以及24 h大脑胼胝体和内囊处髓鞘形成情况。结果与对照组相比,各丙泊酚组8 h mbp mRNA和MBP蛋白呈剂量依赖性下调（P<0.05）,caspase-3 mRNA和Cleaved Caspase-3 蛋白转录表达水平均呈剂量依赖性 增加（P<0.05）;同时少突胶质细胞凋亡明显增加,且50 和100 mg/kg 组较25 mg/kg 组凋亡显著增多（P<0.05）;24 h 胼胝体处 100 mg/kg丙泊酚组、内囊处50和100 mg/kg丙泊酚组髓鞘形成均明显减少（P<0.05）。结论丙泊酚可致SD乳鼠少突胶质细胞 呈剂量依赖性凋亡增加,MBP表达减少,并且不同程度的影响胼胝体和内囊处髓鞘的形成。     

电针联合BM SC_s移植治疗对出血性脑卒中大鼠血清BMP表达的影响

目的:探讨电针联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗对出血性脑卒中大鼠血清髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的影响。方法:将培养的BMSCs和生理盐水分别移植入脑出血模型大鼠尾壳核内,将NSS评分≥9分的模型大鼠随机分为4个实验组:生理盐水组(NS组);电针组(Ea组);BMSCs移植组(BMSCs组);电针联合BMSCs移植组(Ea BMSCs组),每组25只。另选正常对照组(Normal组)5只,不做任何处理;假手术组(FO组)5只,造模和移植都同步麻醉和进针但不注入任何药物。用MK3全自动酶标仪对血清中MBP进行ELISA检测。结果:脑出血各治疗组MBP第1天表达最高,随即下降第3天达谷底,随后快速上升第7天达到波峰后下降,但都高于FO组和Normal组(P0.05)。与NS组比较:Ea组第5、7、14天MBP表达低于NS组(P0.05);BMSCs组MBP表达第14天低于NS组(P0.05);Ea BMSCs组第5、7、14天MBP表达显著低于NS组(P0.01)。与Ea BMSCs组比较:Ea组第1、3天MBP表达低于Ea BMSCs组(P0.05),第14天高于Ea BMSCs组(P0.05);BMSCs组MBP表达第5、7、14天高于Ea BMSCs组(P0.05)。结论:电针联合BMSCs移植治疗脑出血能有效保护神经组织减轻脱髓鞘反应,降低MBP的表达。     

低氧肺动脉高压大鼠蛋白激酶CβⅡ蛋白表达及膜转位水平的变化

目的 建立慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型并初步探讨蛋白基酶CβⅡ（PKCβⅡ）在慢性低氧性肺动脉高压的发生发展过程中所起的作用.方法 建立慢性常压低氧肺动脉高压大鼠模型,将清洁级SD大鼠,随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14d和21d组,检测大鼠右心室收缩压（right ventricle systolic pressure,RVSP）和右心室肥厚指数（right ventricle hypertrophy index,RVHI）,采用HE染色观察肺动脉病理学改变,Western blotting方法检测大鼠肺动脉内PKCβⅡ蛋白表达和膜转位水平的变化.结果 （1）与正常对照组相比,低氧暴露1d、3d、7d、14d、21d后RVSP均明显上升（P＜0.05）; RVHI低氧3d、7d、14d、21 d组较正常对照组明显上升（P＜0.05）;低氧暴露3、7和21 d组肺动脉病理学改变明显.（2）PKCβⅡ蛋白的表达量在慢性低氧3d、7d、14d和21 d与正常对照组相比明显降低（P＜0.05）,慢性低氧3d后PKCβⅡ膜转位水平较正常对照组明显下降（P＜0.05）.结论 PKCβⅡ蛋白表达和膜转位水平的下调可能参与了大鼠慢性低氧性肺动脉高压的发生和发展过程.     

高氧对缺血缺氧新生大鼠远期学习记忆能力的影响

目的 探讨高氧对缺血缺氧新生大鼠生后学习记忆能力的影响,为临床缺血缺氧疾病的治疗提供实验依据。方法 通过左侧颈总动脉结扎制作新生大鼠缺血缺氧性脑损伤模型,给予 60％高氧干预 72 小时,新生大鼠饲养两个月后,利用水迷宫检测大鼠学习记忆能力。结果 高氧组的逃避潜伏期时间平均为 55.87±6.23s,明显高于对照组（P＜0.05）;高氧组大鼠穿越原平台位置的次数和在原平台象限游程、时间百分比均低于对照组（P＜0.05）。结论 高氧干预可能降低缺血缺氧新生大鼠生后学习记忆能力。