miR-130a对卵巢癌A2780细胞顺铂耐药性的影响及其机制的研究

目的 探讨miR-130a表达的改变对卵巢癌A2780细胞（包括顺铂敏感细胞株A2780s和耐药株A2780/DDP）顺铂耐药性的影响及其机制。方法 将A2780s、A2780/DDP细胞各分为4组,分别予以单纯脂质体处理、转染阴性对照小RNA、miR-130a模拟物(可使miR-130a表达增加)、miR-130a抑制物(降低miR-130a表达)处理,MTS法检测各组细胞增殖情况和对顺铂的耐药性,RT-PCR、Western blot 法检测未处理和处理后细胞多耐药基因1（MDR1）、抑癌基因（PTEN） mRNA和蛋白的表达。结果 A2780/DDP细胞MDR1 mRNA和MDR1的表达产物P-糖蛋白(P-gp）的表达高于A2780s细胞（PMDR1 mRNA和P-gp表达水平;下调miR-130a的表达,同样不影响细胞的增殖, 但增强其对顺铂的敏感性, 并可降低MDR1 mRNA和P-gp的表达,提高PTEN蛋白的表达。结论 miR-130a抑制物通过上调PTEN蛋白和下调P-gp的表达来逆转卵巢癌A2780细胞系对顺铂的耐药性。miR-130a有望成为耐药性卵巢癌基因治疗的新靶点。     

卵巢癌细胞系Smac基因的表达及意义

目的 探讨Smac基因在卵巢癌细胞系A2780、COC1及其顺铂(DDP)耐药株A2780/DDP、COC1/DDP中的表达及其意义.方法 半定量逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹法检测卵巢癌细胞A2780、COC1及其顺铂耐药株A2780/DDP、COC1/DDP中Smac mRNA和蛋白的表达.结果 卵巢癌细胞A2780、COC1及其顺铂耐药株A2780/DDP、COC1/DDP四种细胞系中均有Smac mRNA和蛋白的表达;Smac在A2780、COC1中的表达高于其顺铂耐药株.结论 低表达Smac抑制凋亡,低表达Smac可能与耐药有关.     

miR-200b与miR-200c靶向DNA甲基转移酶对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨miR-200b与miR-200c靶向DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A和DNMT3B对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响。方法以人卵巢癌细胞株(A2780)、人卵巢癌顺铂耐药细胞株(A2780/DDP)作为研究对象,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测A2780、A2780/DDP细胞株中miR-200b与miR-200c表达量。耐药细胞株A2780/DDP转染后分为si-miR-200b组、si-miR-200c组、si-NC组,MTT法检测转染后3组细胞IC50值;蛋白印迹免疫法(Western blotting)检测转染后3组细胞DNMT1、DNMT3A和DNMT3B蛋白表达水平;流式细胞术检测转染后细胞凋亡率。结果qRT-PCR结果显示A2780细胞系中miR-200b与miR-200c表达高于A2780/DDP细胞系(P＜0.05)。 si-miR-200b组和si-miR-200c组IC50值、DNMT1、DNMT3A 和DNMT3B 蛋白表达水平低于si-NC组(P＜0.05)。结论miR-200b与miR-200c高表达能抑制DNMT1、DNMT3A和DNMT3B基因表达,从而逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药性。     

miR-141-3p表达与卵巢癌细胞顺铂化疗敏感性的相关性研究

［摘要］ 目的 探讨miR-141-3p在卵巢癌细胞对顺铂耐药中的表达和作用。 方法 采用实时荧光定量PCR法检测A2780/DDP细胞中miR-141-3p的表达水平;下调/过表达miR-141-3p后,采用CCK-8法检测卵巢癌细胞对顺铂的增殖率并计算药物IC50;采用Western blot法检测增殖相关蛋白（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达水平。 结果 miR-141-3p在顺铂耐药的卵巢癌细胞株A2780/DDP中的表达显著高于顺铂敏感的卵巢癌细胞株A2780（P＜0.05）。与对照组比较,A2780细胞中过表达miR-141-3p后可显著增加细胞对顺铂的IC50,增殖相关蛋白PCNA表达亦增加（P＜0.05）。与对照组比较,A2780/DDP细胞中下调miR-141-3p表达后,细胞对顺铂的IC50显著下降,增殖相关蛋白PCNA表达下降（P＜0.05）。 结论 miR-141-3p在顺铂耐药卵巢癌细胞的耐药机制中表达增加,下调miR-141-3p可增加顺铂耐药的卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。     

切除修复交叉互补基因表达与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的:探讨卵巢癌细胞系COC1、COC1/DDP、A2780、A2780/DDP中切除修复交叉互补基因(ERCC1)表达与顺铂耐药的关系.方法:采用RT-PCR方法检测4种卵巢癌细胞系中ERCC1基因的表达,MTT检测各细胞系对顺铂的敏感性.结果:4种细胞系中均有ERCC1基因表达,耐药细胞中的表达量明显高于敏感细胞(P＜0.05).DDP作用于COC1、COC1/DDP细胞72小时后,随着ERCC1基因表达的升高,细胞对顺铂的耐药性增加.结论:卵巢上皮性癌细胞系中ERCC1基因表达的升高与卵巢癌顺铂耐药相关.     

Drosha基因在人卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达研究

目的 探讨Drosha基因和卵巢癌顺铂耐药的关系.方法 分别采用实时定量PCR和免疫印迹法检测Drosha基因mRNA及其蛋白在A2780/DDP及A2780细胞中表达的差异.结果 A2780/DDP细胞中Drosha基因mRNA及其蛋白的表达量分别是A2780细胞表达量的(56.79±1.65)%和(50.16±1.34)%,两者比较差异均有统计学意义(P＜0.001).结论 Drosha基因在A2780/DDP细胞中明显下调,提示Drosha基因和卵巢癌顺铂耐药相关.     

凋亡抑制基因在人卵巢癌细胞敏感株及耐药株中的表达

目的 探讨凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌细胞敏感株(A2780)及耐药株(AD6)中的表达及其在卵巢癌多药耐药发生中的分子机制.方法 采用DNA电泳、流式细胞技术及半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测不同浓度(3.0、6.0、9.9μg/ml)顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株A2780及耐药株AD6的细胞凋亡及其Bcl-2和Bcl-XL基因的表达水平.结果 ①DNA凝胶电泳显示,不同浓度的顺铂均能诱导A2780和AD6细胞产生凋亡,呈现典型的凋亡梯度(DNA Ladder).②流式细胞仪分析结果显示,不同顺铂浓度作用下A2780和AD6细胞凋亡率不同,AD6明显低于A2780(P＜0.05).③RT-PCR结果显示,A2780和AD6细胞均表达Bcl-2、Bcl-XL,但在AD6细胞株中2基因的表达明显强于A2780.在6.0μg/ml顺铂作用下A2780和AD6细胞株中2基因表达下调,但仍以在AD6的表达强于A2780.结论 顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡,凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌多药耐药细胞株中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因.     

低剂量奥沙利铂联合紫杉醇诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡的内质网应激机制研究

目的:本文对低剂量奥沙利铂联合紫杉醇诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡相关机制进行研究,为新药开发和临床治疗提供参考.方法:人卵巢癌细胞A2780经低剂量奥沙利铂联合紫杉醇处理后,MTT法检测细胞增殖情况;采用real-time PCR及Western Blotting方法检测内质网应激相关蛋白PERK,CHOP以及细胞凋亡蛋白Caspase3和Caspase9的表达情况.结果:低剂量奥沙利铂(1μM)联合紫杉醇(10 mM)处理72 h后,A2780细胞抑制率为39.5％,明显高于其他组,差异具有统计学意义(P＜0.01);且PERK、CHOP及细胞凋亡蛋白在mRNA和蛋白质水平上均明显上调,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:低剂量奥沙利铂联合紫杉醇可能通过激活人卵巢癌细胞A2780的内质网应激及细胞凋亡通路起抑制细胞增殖的作用.     

LY294002联合顺铂对卵巢癌细胞A2780和SKOV3增殖、侵袭的影响及机制

目的 探讨LY294002联合顺铂对卵巢癌细胞A2780和SKOV3的影响及机制研究.方法 将A2780和SKOV3细胞分为正常对照组、LY294002组、顺铂组和LY294002+顺铂组,采用CCK-8法检测不同浓度的LY294002(10、20、40、60)μmol/L和顺铂(5、15、25、40)μmol/L处理...     

肺耐药蛋白与卵巢癌顺铂耐药表型的相关性

目的探讨肺耐药蛋白（lung resistance protein，LRP）与人卵巢癌顺铂耐药细胞A2780／DDP顺铂耐药表型的关系及其分子机制。方法应用Lipofectamine^TM介导反义寡核苷酸（AsODN）体外转染人卵巢癌细胞；采用RT-PCR和Western blot法检测转染前后细胞中LRP基因的表达；应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞仪检测顺铂对转染前后细胞的杀伤效应；通过高效液相色谱仪（HPLC）检测经LRP AsODN或抗LRP单克隆抗体作用后，顺铂在A2780／DDP细胞质、核中的吸收和排泄情况。结果与非耐药亲本细胞A2780相比，A2780／DDP细胞内LRP表达明显增高。LRP AsODN能明显降低A2780／DDP细胞中LRP表达水平，逆转其顺铂耐药表型。经LRP AsODN或抗-LRP单克隆抗体作用后，A2780／DDP细胞中顺铂含量明显增高，尤以胞核中的含量上升为甚，而其从核中的排泄受到显著性抑制。结论LRP可能参与介导人卵巢癌细胞顺铂耐药表型的产生，并可能与顺铂在卵巢癌细胞胞质囊泡以及细胞核质交换中的代谢过程密切相关。