1株滇重楼内生真菌的研究——抑真菌活性及分离鉴定

目的 分离滇重楼内生真菌,研究其抑制病原性真菌的作用并进行分类鉴定.方法 从滇重楼植株中分离培养内生真菌.在体外,用指示菌株金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、普通变形杆菌、痢疾杆菌、大肠埃希菌及白色念株菌进行抑菌活性筛选.对具有抑制白色念珠菌的内生真菌菌株进行培养,观察显微形态特征,确定其分类地位.结果 从滇重楼的根中分离到一株内生真蒲菌株,对白色念株菌有较强抑制作用,鉴定为尤孢菌群.结论 滇重楼内生真菌无孢菌群菌株LRF4具有抑制白色念珠菌的作用.     

滇重楼内生细菌分离及抑制人体病原菌活性菌株筛选

目的分离滇重楼内生细菌,研究其抑制人体病原菌的能力.方法从表面消毒的滇重楼新鲜植株中分离内生细菌.在体外,用提取物抑制金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、普通变形杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌及白色念珠菌生长.结果来自温室的植株分离到更多的内生细菌,植株地下部位中内生细菌比地上部位更多;约60%内生细菌对指示菌有一定抑制作用,其中LRB11抑菌效果较明显.结论由于内生细菌与宿主相互作用,故具抑菌作用的内生细菌可用于新药的开发或中药植物的生防.     

金叶女贞内生真菌分离及抑菌活性

［摘要］目的　探讨金叶女贞内生真菌的多样性及其次生代谢产物抑制细菌活性．方法　采用植物组织块培养分离法从金叶女贞茎和叶中分离内生真菌,分别进行YPD液体培养,将培养物过滤后用丙酮萃取次生代谢产物,以大肠杆菌（Escherichia coli）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为试验指示菌株,用滤纸片法分别测定次生代谢产物对3种供试菌的抑菌活性．结果　从金叶女贞茎和叶中共分离得到29株内生真菌,有25株内生真菌对试验菌株有一定的抑制作用,占总分离菌株的86.2%．不具抗菌活性的菌株为4株,占总分离菌株的13.8%．结论　金叶女贞茎、叶中均存在丰富的内生真菌资源,其次生代谢产物具有良好的抑菌活性．     

华南毛蕨内生真菌抑菌活性筛选及活性菌株Pestalotiopsis sp.CYC38代谢产物的研究

目的 筛选具有抑菌活性的华南毛蕨内生真菌及分析其中1株活性较强的菌株的代谢产物.方法 以敏感型金黄色葡萄球菌、耐药型金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌为供试指示菌,采用琼脂块法对43株内生真菌进行抑菌活性筛选,以Pestalotiopsis sp.CYC38作为目标菌株,对其次级代谢产物进行分离,并采用波谱学分析手段鉴定化合物结构.结果 43株内生真菌中有19株菌株至少对1种指示菌有抑菌作用,占分离菌株总数的44%;从高活性菌株CYC38的发酵产物中分离到2个化合物,分别鉴定为啤酒甾醇和1-(4-羟基苯基)-2氨基乙醇.结论 华南毛蕨内生真菌具有较好的抗菌活性,且对耐药型金黄色葡萄球菌也表现出良好的抑制作用,该结果为开发新型的抗耐药菌药物提供基础.     

植物内生真菌的抗菌活性研究

目的　研究植物内生真菌的抗菌活性。方法　在紫金山和栖霞山采集的 18种健康植物中共分离得到了 1838株内生真菌 ,分属于 4 6个类群分别测定对发酵液乙酸乙酯提取物的抗菌活性 ,对药用植物络石活性菌株头孢菌Tj5R代谢产物进行富集与分离并进行活性追踪。结果　在检测的 2 33株内生真菌发酵液乙酸乙酯提取物的抗菌实验中 ,15 6株内生真菌的代谢产物对一种或多种测试真菌或细菌具有一定的抑制作用 ,其中 15株具有很强的抗菌活性。在药用植物络石的活性内生菌株头孢菌Tj5R富集的固体发酵代谢产物中分离得到的 8个化合物中有 3个化合物表现出抗菌作用 ,其中一个化合物对白色念珠菌的MIC值为 1.95 μg/mL ,比阳性对照酮康唑 (MIC值 3.9μg/mL)活性要强。 结论　内生真菌的代谢产物普遍具有一定的抗菌作用      

滇重楼内生真菌转化万古霉素的研究

目的 利用滇重楼内生真菌生物转化万古霉素.方法 分离滇重楼内生真菌并筛查它们的生物转化能力.鉴定具有转化能力的内生真菌.结果 有2株内生真菌可以转化万古霉素.经鉴定为产黄青霉和Fusarium nematophilum.菌株G01和G03在添加万古霉素的液体培养基中培养6d后,HPLC （High Performance LiquidChromatography）分析发现,万古霉素的峰面积下降并有新吸收峰出现.结论 内生真菌发酵产生了某些新成分。     

红树林内生真菌抗细菌和抗真菌活性的初步研究

目的分离和筛选具有抗细菌和抗真菌活性的红树林内生真菌。方法从红树林植物桐花树、海漆、秋茄、木榄、白骨壤、银叶树中分离到60株内生真菌,对其代谢产物进行抗菌检测,通过滤纸片法来检测内生真菌代谢产物抗细菌和抗真菌活性。结果共有35株内生真菌具有抗细菌活性,占待侧菌株总数的58.3%,其中以不产孢类、青霉属、曲霉属、镰孢属为主,分别占活性菌株总数的51.4%、8.6%、8.6%、8.6%;共有49株内生真菌具有抗真菌活性,占待侧菌株总数的81.7%,其中以不产孢类和盘长孢属为主,分别占活性菌株总数的44.9%、17.1%。结论红树林内生真菌是抗菌活性物质的一个潜在的、丰富的资源库,值得进一步研究和开发。     

滇重楼内生灰黄青霉抑菌产物的热稳定性

目的 对1株滇重楼内生灰黄青霉的代谢产物108号洗脱物进行成分分析和热稳定性研究, 并与阿莫西林的热稳定性进行对比.方法 采用薄层色谱法和柱色谱法分离提纯该菌株的次生代谢产物;在体外以金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、屎肠球菌为指示菌, 检测108号洗脱物抑菌效果 (纸片法) , 根据抑菌圈直径对比108号洗脱物与阿莫西林的热稳定性.结果 从该灰黄青霉次生代谢产物中, 分离得到组分108号洗脱物.经紫外扫描法及薄层色谱分析, 初步判定分离产物108号洗脱物为单一化合物.常温下, 其对3种不同指示菌的抑菌圈依次为24 mm、25.3 mm、7.6 mm;经121.3℃加热处理后, 与阿莫西林相比, 该化合物对指示菌均保持了较稳定的抑菌圈直径.结论 化合物108号洗脱物可以耐受高压蒸汽灭菌, 在一定程度上具有较强的热稳定性.     

太子参内生真菌体外抗肿瘤、抗氧化活性研究

目的 探讨太子参内生真菌代谢产物的体外抗肿瘤、抗氧化活性. 方法 采用组织块法对太子参内生真菌进行分离,用MTT法检测抗肿瘤活性;DPPH法检测抗氧化活性. 结果 从太子参中共分离出18株内生真菌,其中有6株菌株对肿瘤细胞具有显著的抑制作用(IC50＜200 μg/mL),3株具有较好的抗氧化活性(IC50＜ 100 ...     

忽地笑内生菌的分离及发酵产物抑菌活性研究

目的 探讨忽地笑内生菌的分离及发酵产物抑菌活性.方法 从忽地笑鳞茎中分离内生菌,分别进行发酵培养,采用其发酵浓缩液做体外抑菌试验,观察对常见病原菌的抑制作用.结果 从忽地笑鳞茎中分离出10株内生菌,其中真菌L-10对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌均有不同程度的抑制作用,其抑菌圈直径分别达到15、11 mm.结论 忽地笑内生菌可以产生具有抑菌活性的次生代谢产物,为新型抗菌药物的筛选提供了新的分离途径.     

Polyketide and benzopyran compounds of an endophytic fungus isolated from C innamomum mollissimum: biological activity and structure

ObjectiveTo study bioactivity and compounds produced by an endophytic Phoma sp. fungus isolated from the medicinal plant Cinnamomum mollissimum.MethodsCompounds produced by the fungus were extracted from fungal broth culture with ethyl acetate. This was followed by bioactivity profiling of the crude extract fractions obtained via high performance liquid chromatography. The fractions were tested for cytotoxicity to P388 murine leukemic cells and antimicrobial activity against bacteria and pathogenic fungi. Compounds purified from active fractions which showed antibacterial, antifungal and cytotoxic activities were identified using capillary nuclear magnetic resonance analysis, mass spectrometry and admission to AntiMarin database.ResultsThree known compounds, namely 4-hydroxymellein, 4,8-dihydroxy-6-methoxy-3-methyl-3,4-dihydro-1H-isochromen-1-one and 1-(2,6-dihydroxyphenyl) ethanone, were isolated from the fungus. The polyketide compound 4-hydroxymellein showed high inhibitory activity against P388 murine leukemic cells (94.6%) and the bacteria Bacillus subtilis (97.3%). Meanwhile, 4,8-dihydroxy-6-methoxy-3-methyl-3,4-dihydro-1H-isochromen-1-one, a benzopyran compound, demonstrated moderate inhibitory activity against P388 murine leukemic cells (48.8%) and the fungus Aspergillus niger (56.1%). The second polyketide compound, 1 (2,6-dihydroxyphenyl) ethanone was inactive against the tested targets.ConclusionsThese findings demonstrate the potential of endophytes as producers of pharmacologically important compounds, including polyketides which are major secondary metabolites in fungi.     

产紫青霉G59的两株突变株新产抗肿瘤活性产物研究

目的 阐明无活性真菌产紫青霉G59的两株抗肿瘤活性突变株2-2-3和PDN-f-2新产活性产物。方法 采用与原始菌样品直接对照和活性跟踪分离的实验模式,利用液液萃取、柱层析、重结晶等方法分离纯化活性产物。利用现代波谱技术鉴定化合物结构。用MTT法测试样品对K562细胞的抑制活性。结果 从2-2-3和PDN-f-2发酵物中分别分离鉴定了ergone (1) 和citrinin (2)。化合物1和2抑制K562细胞的IC50分别为7.4和48.0 μg/ml。结论 化合物1和2均为产紫青霉产物中未见报道的G59的两株突变株新产活性产物。将无活性真菌野生株转化成活性突变株并研究其新产活性产物,将有可能成为拓展药源真菌活性菌株新资源的很好途径。     

特殊生态环境真菌的分离培养及抗肿瘤活性筛选

目的 从特殊环境样品中分离纯化真菌,并筛选获取抗肿瘤活性菌株供筛选新药、无活菌株供真菌核糖体工程转化研究。方法 利用单菌落挑选与划线培养技术,分离纯化真菌。通过摇床发酵培养,提取制备发酵样品。采用MTT法结合细胞形态学检测的方法,用K562细胞测试发酵样品的抗肿瘤活性。结果 从采自湖北巴东偏远山区6个不同砖窑内的窑土样品中分离真菌32株,从天津塘沽驴驹河渤海湾潮间带海泥样品中分离真菌102株。其中,在100 mg·L^-1样品浓度下有明显抗肿瘤活性的陆生真菌2株、海洋来源真菌12株,即使在1 000 mg·L^-1的高浓度下也没有抗肿瘤作用的无活性真菌8株。结论 从窑土、潮间带海泥等样品中分得真菌134株,从中筛选获取抗肿瘤活性菌株14株（占菌株总数的10.4%）,无活性菌株8株。活性菌株为筛选抗肿瘤天然产物提供了药源菌株,无活性菌株则为真菌核糖体工程转化研究提供了菌株材料。     

海洋来源微生物的分离培养与抗肿瘤活性筛选

目的 从海洋环境样品中分离纯化微生物,经发酵培养与活性筛选,获取抗肿瘤活性菌株以供筛选药源活性产物,获无活性菌株以供核糖体工程转化研究。方法 通过单菌落挑选与划线培养分离纯化微生物菌株,经摇床发酵和提取操作制备活性测试样品。采用MTT法结合显微镜下细胞形态学检测的方法,测试样品的抗肿瘤活性。结果 从渤海湾驴驹河潮间带海泥样品中分离得到了微生物127株,其中真菌80株、放线菌47株。在127株中100 mg·L^-1样品浓度下对K562细胞的抑制率大于40%的活性菌株为8株,占菌株总数的6.3%(其中放线菌4株,占放线菌数的8.5%,真菌4株,占真菌数的5%),抑制率在20%～40%的放线菌6株,占放线菌数的12.7%。结论 从渤海湾海泥样品中分离得到真菌80株、放线菌47株,从中获得抗肿瘤活性真菌4株、放线菌10株,从放线菌中获得抗肿瘤活性菌株的频率远远高于真菌。活性菌株为寻找药源活性产物提供了菌株,无活性菌株则为核糖体工程拓展药源菌株来源研究提供了资源。     

利用稻瘟霉模型筛选粗疣合叶苔内生真菌中的活性菌株

目的 利用稻瘟霉模型快速筛选粗疣合叶苔内生真菌中具有生物活性的菌株,并对活性菌株 T11 进行鉴定。方法 首次对粗疣合叶苔内生真菌进行了分离,通过观察内生真菌醋酸乙酯提取物引起稻瘟霉分生孢子或菌丝形态生长异常或生长抑制的情况,初步确定具有生物活性的菌株,进一步进行体外抗真菌及抗肿瘤活性筛选,对活性最好的 T11 菌株进行了分类鉴定。结果 粗疣合叶苔分离得到47株内生真菌,具有抗稻瘟霉活性的活性菌株40株,占总分离菌株的 85.1%。其中 T11 号菌株可明显抑制真菌生长和肿瘤细胞增殖。结论 粗疣合叶苔内生真菌具有明显的抗真菌和细胞毒作用,是潜在的抗菌、抗肿瘤药物资源。     

真菌转化三七产物抑菌作用的初步研究

目的：寻找能发酵三七使其新增抗病原细菌功能的菌株。方法：108株真菌采用固态发酵对三七进行转化，对比发酵前、后产物对大肠埃希氏杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌的抑菌作用。结果：6株菌固态发酵三七后，其发酵物对革兰氏阳性病原细菌有较好抑制作用。结论：真菌发酵三七过程中能够产生新的抑菌活性物质。