LAMP在下呼吸道感染病原菌快速检测中的临床应用

目的 利用环介导等温扩增检测（loop mediated isothermal amplification,LAMP）即呼吸道病原菌核酸联合检测法（13联）分析痰标本病原菌的检出情况,为临床诊疗提供病原学循证依据。方法 选取2022年1月至12月铜仁市人民医院收治的1642例下呼吸道感染患者作为研究对象,采集痰标本/肺泡灌洗液进行LAMP（13联）检测,分析呼吸道病原菌检出情况及其与性别、年龄、季节的关系。结果 13种呼吸道病原菌的总体检出率男性明显高于女性（P<0.01）。在不同年龄组中,3~6岁患者流感嗜血杆菌和肺炎链球菌的检出率、6~18岁患者肺炎支原体的检出率、>60岁患者耐甲氧西林葡萄球菌、嗜麦芽窄食单胞菌和肺炎克雷伯菌的检出率均明显高于其他组（P<0.05）。在不同季节组中,肺炎链球菌和肺炎衣原体好发于春季,肺炎支原体在秋节感染率最高,差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 LAMP可快速检测出病原菌,为下呼吸道感染的预防及临床诊疗提供病原学依据。     

495例肺炎患儿支气管肺泡灌洗液与痰液细菌培养对比研究

目的探讨肺炎患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)与痰液细菌培养的阳性率差异。方法采集2015年3月～2017年11月我院综合内科诊断为肺炎,住院期间既取痰液又取支气管肺泡灌洗液行细菌培养和鉴定的患儿495例,比较痰液及支气管肺泡灌洗液培养阳性率的差异。结果 495例患儿支气管肺泡灌洗液培养阳性者34例,阳性率为6.9%,居前三位者分别为:肺炎链球菌16例(47.1%),肺炎克雷伯菌11例(32.4%),大肠埃希菌4例(11.8%),其他3例(8.7%);培养结果与病情相符者32例,符合率94.1%。痰培养阳性者41例,阳性率为8.3%,居前三位的细菌分别为:肺炎链球菌21例(51.2%),金黄色葡萄球菌9例(22.0%),流感嗜血杆菌5例(12.2%),其他6例(14.6%);培养结果与病情相符者28例,符合率68.3%。结论支气管肺泡灌洗液与痰液细菌培养阳性率无明显差异,但支气管肺泡灌洗液培养结果有更高的临床符合率,结果更可靠,对抗生素使用的指导意义大于痰液。     

不同取材方法及检测技术在重症肺炎病原学诊断中的应用

目的：不同取材方法标本的合格率、不同微生物检测技术结果阳性率有差异,探究不同取材方法及检测技术在重症肺炎病原学诊断中的应用,以期提高病原学诊断的准确性。方法：回顾性分析2018年1月—2020年12月中国人民解放军联勤保障部队第九〇四医院收治的123例重症肺炎患者的临床资料,同时收集患者经鼻或气管插管留痰培养、肺泡灌洗液培养、肺泡灌洗液宏基因组二代测序技术（mNGS）病原检测等数据,对标本的合格率及阳性率进行分析。结果：123例患者中经鼻或者气管插管留痰标本合格率70%、病原菌生长41例（33.3%）,肺泡灌洗液标本合格率92%、病原菌生长76例（61.8%）、肺泡灌洗液mNGS病原菌核酸片段检出107例（86.9%）。经抗感染、抗休克、器官支持等治疗后,115例患者治愈出院,8例死亡。结论：肺泡灌洗液mNGS可以提高重症肺炎患者病原诊断阳性率,可为临床治疗提供依据。     

环介导等温扩增技术对结核分枝杆菌检测的临床应用价值

目的评估环介导等温扩增技术(LAMP)对肺结核的诊断价值。方法回顾性分析2017年4月至2018年9月郑州大学第一附属医院进行LAMP检测的413例患者,其中LAMP检测标本情况为肺泡灌洗液266例、痰标本147例。根据临床诊断情况将患者分为肺结核病组和非肺结核病组。将患者抗结核治疗前的LAMP结果与最终临床诊断及痰涂片结果进行比较,评价其敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比及阴性似然比。应用χ~2检验对肺结核患者肺泡灌洗液及痰标本的阳性率差异进行分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果 413例中119例(28.8%)为临床诊断的肺结核病患者,其中65例LAMP阳性,LAMP的综合敏感度为54.6%(65/119)。294例(71.2%)为非肺结核病患者,其中276例LAMP检测结果为阴性,特异度为93.9%(276/294),阳性预测值为78.3%(65/83),阴性预测值为83.6%(276/330),阳性似然比为11.42,阴性似然比为0.32。LAMP在痰涂片阳性标本中的敏感度为95.2%,在痰涂片阴性标本中的敏感度为45.9%,特异度为93.9%。在临床诊断肺结核患者中肺泡灌洗液标本和痰标本中LAMP的阳性率分别为63.2%(48/76)和39.5%(17/43)(χ~2=6.183,P<0.05)。结论 LAMP检测痰标本和肺泡灌洗液标本中的结核分枝杆菌用于结核病诊断具有良好的特异度。在临床诊断的肺结核患者中,LAMP对肺泡灌洗液标本检出的阳性率高于痰标本。     

成人下呼吸道感染患者痰液及支气管肺泡灌洗液细菌分布及耐药性分析

目的分析成人下呼吸道感染患者痰液及支气管肺泡灌洗液细菌分布及耐药性情况。方法选取镇平县中医院收治的600例成人下呼吸道感染患者,均采集痰标本、支气管肺泡灌洗液标本,进行细菌鉴定与药敏试验,分析病原菌分布情况及耐药情况。结果 600例成人下呼吸道感染患者中,获取230株病原菌,阳性率为38.33%;其中革兰阴性杆菌206株,占89.57%(206/230);革兰阳性球菌24株,占10.43%(24/230)。耐药性分析:成人下呼吸道感染患者对碳青霉烯类、氨基糖苷类、头孢哌酮/舒巴坦、克林霉素、红霉素耐药率较高,且鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌出现多重耐药性。结论对成人下呼吸道感染患者痰液及支气管肺泡灌洗液采取细菌鉴定及药敏试验,发现其病原菌以革兰阴性杆菌为主,根据具体耐药情况制定治疗方案,有助于合理选取抗菌药物治疗。     

液基细胞学检测技术和传统细胞学涂片对肺癌的诊断价值比较

目的 比较液基细胞学检测(liquid-based cytology test,LCT)技术和传统细胞学涂片(coventional smear,CS)检测不同标本对肺癌的诊断价值.方法 研究标本包括痰液、胸腔积液、支气管黏膜刷检物、肺泡灌洗液和肺细针吸活检标本.对比上述两种方法诊断肺癌的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值;并分析两种方法的涂片质量和检出的癌细胞的形态结构.结果 LCT法检测痰液、胸腔积液、支气管黏膜刷检物、支气管肺泡灌洗液、细针吸活检标本对诊断肺癌的敏感度分别为28.6%、37.5%、37.5%、30.0%、87.5%;准确度分别为65.2%、75.0%、62.1%、57.6%、91.5%;阴性预测值分别为59.6%、70.6%、51.0%、48.1%、78.9%;CS法检测痰液、胸腔积液、支气管黏膜刷检物、支气管肺泡灌洗液、细针吸活检标本诊断肺癌的敏感度分别为14.3%、12.5%、22.5%、15.0%、75.0%;准确度分别为58.3%、65.0%、53.0%、48.5%、83.0%;阴性预测值分别为55.1%、63.2%、45.6%、43.3%、65.2%.LCT法在涂片质量、癌细胞形态学判断方面较CS法好.结论 LCT法检测痰液、胸腔积液、支气管黏膜刷检物、支气管肺泡灌洗液及肺细针吸活检物诊断肺癌的敏感度、准确度、阴性预测值均较CS法高,故LCT法对肺癌的诊断价值高于CS法,涂片质量也明显优于CS法.     

周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液p53基因突变及其临床意义

目的:DHPLC分析周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液标本p53突变及其作为分子诊断标记的可行性.方法:DHPLC分析46例支气管肺泡灌洗液标本(33例肺癌,13例对照)p53基因Exon5～9突变.结果:肺癌组p53突变检出率36.36%(15/33),对照组未检出一例,两组p53突变率比较具有明显差异(P＜0.05);p53突变作为肺癌诊断分子标记,灵敏度36.36%(12/33),特异度100%(13/13).结论:DHPLC分析周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液标本p53基因热点突变可以作为周围型肺癌诊断的分子标记,但在支气管肺泡灌洗液标本检测单一基因突变不能满足临床诊断的需要.     

呼吸道病原体核酸恒温扩增芯片十三联检在下呼吸道感染常见病原体基因中的检测

目的 探讨呼吸道病原体核酸环介导恒温扩增芯片法 (Loop-mediated amplification, LAMP) 十三联检在下呼吸道感染常见病原体基因诊断中的价值.方法 收集疑似下呼吸道感染患者的深部痰液或肺泡灌洗液样本122例, 分别采用LAMP技术、病原体分离与培养、实时荧光定量PCR (FQ-PCR) 技术检测病原体, 应用SPSS软件及Kappa检验将检测结果按标本类型、年龄段及检测方法进行比对分析.结果 122例呼吸道感染患者标本中, 痰液病原体阳性率 (55.56%) 高于肺泡灌洗液阳性率 (46.88%) , 病原体种类分别以耐甲氧西林葡萄球菌 (MASA) 和肺炎支原体 (MP) 为主 (P<0.05) ;高年龄段 (≥60岁) 以检出MASA为主, 而低年龄段 (≤20岁) 以检出MP为主 (P<0.01) ;LAMP十三联检阳性检出率 (50.00%) 高于病原体分离培养的阳性检出率 (36.67%) , 2种检测方法对肺炎克雷伯菌 (Kpn) 和鲍曼不动杆菌 (CSAB) 的检出率具有一致性 (Kappa>0.4) , 而其它病原体阳性结果的一致性较低 (Kappa<0.4) ;LAMP与实时FQ-PCR法对MP的检测结果具有较高的一致性 (Kappa>0.7) .结论 呼吸道病原体LAMP十三联检具有快速、灵敏、高效、特异及病原体覆盖面广的优势, 可对临床提供快速可靠的实验室诊断依据.呼吸道标本类型及检验方法不同, 其病原体检验结果也可能有所不同, 各具优缺点, 需要临床医生给予密切关注.     

小儿下呼吸道痰液采集法

痰是肺泡、支气管和气管的分泌物 ,当下呼吸道粘膜有炎症时 ,分泌物增多 ,痰液也增多 ,痰主要由粘液和炎性渗出液组成。下呼吸道痰液检测主要是对肺部感染病原体的调查 ,准确及时的检测 (涂片、培养 )出病原体如结核分歧杆菌、肺炎支原体、深部霉菌等 ,则可肯定它与感染有关 ,如测出金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌等亦可是上呼吸道常见菌 ,则要小心判断。病原体检出是有效治疗肺部感染的关键。因此 ,采用正确的方法采集下呼吸道痰液可提高病原体检出的阳性率和可信度 ,为临床提供可靠的病原学诊断依据 [1 ,2 ] ,现将下呼吸道痰液采集法报告如下…     

两种标本采集方法对ICU患者下呼吸道病原学检测的影响

目的：比较两种标本采集方法获取的 ICU 患者下呼吸道样本的病原学检测结果,以确定何种方法可更准确简便地获取标本,为临床治疗提供依据。方法选取40例来自 ICU 的急危重症患者。对同一患者先以无创常规方法采集下呼吸道标本密封,再以纤支镜（OlympusBF P40）获取支气管肺泡灌洗液（BALF）密封后同时送检。结果经无创常规获取痰标本的痰培养阳性率为72.5%,经纤支镜获取 BALF 的培养阳性率为80.0%,两组阳性率比较,差异无统计学意义（P >0.05）;两组培养结果符合率为72.5%（29/40）,两种样本采集方法获取的样本中病原菌检测结果具有一致性（Kappa =0.658,P =0.000）。结论无创常规标本采集方法仍然是一种省时、省力、经济且较准确的获取高质量样本的方法。     

呼吸道感染病原体九联检与痰培养联合的临床应用

目的探讨临床中呼吸道感染病原体九联检与痰培养联合检测的应用价值。方法选取广东省普宁市人民医院2013年1月～2013年10月诊断为肺炎的172例患者为研究对象,对其痰标本进行呼吸道感染病原体九联检与痰培养两种检测的方法进行联合检测,分析两种方法的肺炎病原菌检测情况。结果痰培养法分离出其中152例肺炎患者痰标本160株病原菌,以革兰阴性杆菌为主,主要有5种主要病原菌,分别为肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌以及金黄色葡萄球菌与真菌,构成比分别为25.0％、25．8％、22.5％、10.6％、8．1％;另40例未检测出致病病原菌的肺炎患者血清标本,对其进行九联检法检测,共检测9种病原菌,主要表现为肺炎支原体、嗜肺军团菌1型、肺炎衣原体、Q热立克次体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒甲型、流感病毒乙型、副流感病毒1、2、5型,构成比分别为20.0％、12.5％、12．5％、5.0％、5.0％、5．0％、12．5％、10.0％、17.5％。结论临床中对于肺炎患者采取呼吸道感染病原体九联检与痰培养联合检测能够有效地提高诊断效果,能够全面地对感染病原菌进行分析,敏感度高,对一些不是细菌引起的肺炎避免使用抗生素,给予患者合理的治疗,同时,呼吸道感染病原体九联检查法的操作曲。比较简单、适合在基层医院推广应用．     

无菌吸痰管吸痰与纤维支气管镜肺泡灌洗在机械通气患者下呼吸道感染病原学诊断中的应用比较

目的：比较无菌吸痰管吸痰与纤维支气管镜肺泡灌洗采样培养在机械通气患者下呼吸道感染病原学诊断中的价值。方法：64例机械通气合并下呼吸道感染患者,均先后使用无菌吸痰管吸取下呼吸道分泌物和纤维支气管镜肺泡灌洗两种方法进行采样,并进行病原学分析和诊断试验的评价。结果：无菌吸痰管与支气管肺泡灌洗采样培养的阳性率分别为71.88%和78.13%(P>0.05),两种方法诊断一致率达81.25%。结论：无菌吸痰管采样对于机械通气合并下呼吸道感染患者,不仅能获得准确的病原,帮助临床医生选择敏感抗生素,而且还是一种简单、安全和经济的病原采集方法,值得推广应用。     

多重PCR检测支气管肺泡灌洗液中细菌性病原体的研究

目的评价呼吸道感染患者肺泡灌洗标本进行多重PCR检测的准确性。方法选取2006～2009年本院住院的158例儿童为研究对象,同时选用需要接受纤维支气管镜检查的30例同龄非感染患儿作为对照。所有儿童24h内接受标准的纤维支气管镜介导的支气管肺泡灌洗。用多重PCR检测灌洗液中肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体和肺炎嗜衣原体。并用细菌培养等常规方法对这些患者的肺泡灌洗液进行分析。结果常规细菌学诊断方法显示,肺炎链球菌,流感嗜血杆菌,肺炎支原体,肺炎嗜衣原体在下呼吸道感染病人中分别占14％,21％,3．2％,和0％。而应用肺泡灌洗液多重PCR这种诊断方法,这些病原体在这些病人中分别占了28％,47％,4％和1％,其敏感性分别为87％。90％,100％和0％,特异性分别为81％,64％,100％和99％。在104位检查前服用了抗生素的支气管镜检患者中,肺炎链球菌通过细菌培养来确诊占2．9％,而通过多重PCR则为31％。在对照组中多重PCR鉴别肺炎链球菌的比例为17％．流感嗜血杆菌为40％。结论在下呼吸道感染病人中,支气管肺泡灌洗液结合多重PCR能够有效的用来鉴别肺炎链球菌,流感嗜血杆菌,肺炎支原体,肺炎嗜衣原体,这在已经用抗生素治疗的病人中尤为有效。     

贵阳地区儿童重症社区获得性肺炎肺泡灌洗液病原及药敏分析

目的分析贵阳地区儿童重症社区获得性肺炎支气管肺泡灌洗液（BALF）病原学分布及耐药特点。方法收集989例重症社区获得性肺炎患儿临床资料，将支气管肺泡灌液采用支气管镜取出进行细菌培养、病毒以及肺炎支原体(MP)检测。结果（1）989例重症社区获得性肺炎患儿病原检出阳性716例，阳性率72.40%，细菌、病毒、支原体检出率分别33.27% （329例）、22.45%（222例）、31.45%（311例）。（2）细菌感染中的肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌为最为常见的革兰阳性菌株(G+)；而肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌为最为常见的革兰阴性菌株(G-)。培养菌株对青霉素类、红霉素、第1、2、3代头孢类抗生素有较高的耐药性，对头孢吡肟、拉氧头孢、哌拉西林、左氧氟沙星有较高的敏感性，对亚胺培南、万古霉素、利奈唑烷均无耐药发生。（3）病毒感染检出222例，其中呼吸道合胞病毒131例，腺病毒检测49例，流感病毒6例（A型2例，B型4例），副流感病毒36例（1型3例、2型4例、3型29例），病毒检出率以0～12月龄组最高，RSV、ADV感染主要集中在冬春季节。（4）肺炎支原体检出阳性率31.45%（311例），肺炎支原体检出率以3～5岁组最高。结论贵阳地区重症肺炎中肺炎克雷伯杆菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌为重要的细菌病原。重要病毒为腺病毒和呼吸道病毒为主，1～12月龄组的病毒感染检出率比较高。     

尿肺炎链球菌抗原检测在儿童肺炎链球菌肺炎诊断中的临床意义

目的 探讨尿肺炎链球菌抗原检测在儿童肺炎链球菌肺炎诊断中的临床价值。方法 选取2013-02～2014-02在广东省茂名市妇幼保健院儿科住院的小于3岁的下呼吸道感染患儿298例,入院后留取痰培养,同时用尿标本检测肺炎链球菌抗原。结果 298例患儿的痰液纯培养阳性率9.7%,尿肺炎链球菌抗原阳性率16.4%,痰液纯培养阳性组患儿的尿肺炎链球菌抗原阳性率(86.2%)明显高于阴性组(8.9%)(P＜0.01)。尿肺炎链球菌抗原检测的敏感性为86.2%,特异性为91.1%,准确度为90.6%。结论 尿肺炎链球菌抗原检测在儿童肺炎链球菌肺炎诊断中有较好的临床价值,与痰培养结合有助于提高该病的诊断准确率,值得临床推广应用。     

先天性心脏病合并下呼吸道感染患儿痰培养及药敏结果分析

目的分析先天性心脏病合并下呼吸道感染患儿痰培养阳性率、病原菌分布及药敏试验结果,为临床防治感染提供选药依据。方法选择我院2008年7月-2011年6月住院的先天性心脏病合并下呼吸道感染患儿63例,对其痰液进行培养和药敏试验。结果63例标本痰液培养阳性46例,阳性率73．02％。检出菌种11种,革兰阴性菌（G-菌）6种,革兰阳性菌（G．菌）5种。阳性标本共分离出细菌53株,其中G-菌37株,占69．8l％,G＋菌16株,占30．19％。革兰阴性菌对左氧氟沙星、环丙沙星、阿米卡星、头孢他啶、头孢唑肟、头孢哌酮／舒巴坦、亚胺培南敏感率较高,对头孢曲松、头孢噻肟中度敏感,对阿奇霉素、复方新诺明耐药。革兰阳性菌对左氧氟沙星、环丙沙星、阿米卡星、万古霉素、阿奇霉素敏感,对头孢曲松、头孢他啶、头孢唑肟、亚胺培南、利福平中度敏感,对头孢噻肟、头孢哌酮／舒巴坦、复方新诺明耐药。结论先天性心脏病合并下呼吸道感染患儿的痰液培养病原菌种类多,耐药菌株多,临床用药限制多,应选择对致病菌敏感的抗生素为主,痰培养结果指导临床合理用药非常必要。     

支气管肺泡灌洗液细菌培养阳性患儿165例临床分析

目的：分析支气管肺泡灌洗液（BALF）细菌培养阳性患儿的临床特征、病原谱及药敏结果,为儿童下呼吸道感染临床诊治提供依据。方法：回顾性分析2013年1月-2015年12月送检BALF培养的1 159例住院患儿的临床资料、病原学检查及药敏试验结果等。结果：检出致病菌株165例,其中男99例（占60.0%）,女66 例（占40.0%）。临床诊断肺炎最多见,为116例（占70.4%）,其中支气管肺炎91例,大叶性肺炎25例;其次是毛细支气管炎合并细菌感染19例（占11.5%）,迁延性细菌性支气管炎（PBB）12例（占7.3%）。165株细菌革兰染色阳性112株（占67.9%）,其中肺炎链球菌最多见,为102株,其次为金黄色葡萄球菌8株;革兰染色阴性53株（占32.1%）,其中以流感嗜血杆菌最多见,为14株,其次为铜绿假单胞菌13株,大肠埃希菌8株。65例（占39.4%）患儿存在基础疾病,其中呼吸道畸形最多见,共22例,主要为气管和（或）支气管软化、狭窄,其次是支气管哮喘,共14例。102株肺炎链球菌药敏结果显示对青霉素敏感25株,对青霉素中介35株,对青霉素耐药42株,提示以青霉素不敏感菌株为主（占75.5%）。金黄色葡萄球菌中以耐甲氧西林菌株为主,但无耐万古霉素及利奈唑胺菌株。流感嗜血杆菌对青霉素及二代头孢菌素耐药率高,对三代头孢菌素仍较敏感。大肠埃希菌8株,其中产超广谱β内酰胺酶5株。肺炎克雷伯菌5株,其中产超广谱β内酰胺酶3株。结论：BALF细菌培养阳性患儿临床诊断以肺炎最多见,其次是毛细支气管炎合并细菌感染和迁延性细菌性支气管炎;细菌病原以肺炎链球菌及流感嗜血杆菌为主。     

Characterization of candida species isolated from cases of lower respiratory tract infection

Objectives: (1) To identify and characterize the Candida species isolates from lower respiratory tract infection. (2) to determine the rate of isolation of Candida species from sputum samples. Methods: This study was carried out in the Department of Microbiology, Manipal Teaching Hospital, Pokhara, Nepal from June 2002 to January 2003. A total of 462 sputum samples were collected from patients suspected lower respiratory tract infection. The samples were processed as Gram staining to find out the suitability of the specimen, cultured on Sabouraud's Dextrose Agar (SDA) and also on blood agar and chocolate agar to identify the potential lower respiratory tract pathogens. For the identification of Candida, sputum samples were processed for Gram stain, culture, germ tube test, production of chlamydospore, sugar fermentation and assimilation test. For the identification of bacteria, Gram stain, culture, and biochemical tests were performed by standardized procedure. Result: Out of 462 samples, 246 (53.24%) samples grew potential pathogens of lower respiratory tract. Among them Haemophilus influenzae 61(24.79%) and Streptococcus pneumoniae 57 (23.17%) were the predominant bacterial pathogens. Candida species were isolated from 30 samples (12.2%). The majority of Candida species amongst the Candida isolates were Candida albicans 21(70%) followed by Candida tropicalis 4(13.33%). Candida krusei 3(10%), Candida parapsilosis 1(3.33%) and Candida stellatoidea 1(3.33%). The highest rate of isolation of Candida was between the age of 71 and 80. Conclusion: Candida isolation from sputum samples is important as found in the present study in which Candida species were the third most common pathogen isolated from patients with lower respiratory tract infection. Key words: Candida albicans, Pulmonary candidiasis, Nepal.