阿仑膦酸钠对人骨髓间充质干细胞体外骨向诱导的研究

目的:探讨不同浓度阿仑膦酸钠对人骨髓间充质干细胞体外骨向诱导增殖和成骨诱导分化能力的影响.方法:取生长状态良好的第四代细胞,分为实验组(不同浓度的阿仑膦酸钠,A-F组)、空白对照组(L-DMEM,G组)和阳性对照组(地塞米松,H组)各自诱导成骨分化.观察细胞形态,放射免疫法检测各组hBMSCs骨钙素的分泌能力,实时荧光定量PCR检测各组细胞培养液中Runx2和Osx mRNA的表达情况,并检测经成脂肪细胞诱导分化后细胞内脂蛋白脂酶(LPL)mRNA的表达情况.结果:hBMSCs诱导分化至第7天时,A-F组大部分细胞仍呈长梭形,G组部分细胞开始出现形态学改变;各组细胞培养基中骨钙素均随诱导分化时间推移而增多;各组细胞表达Osx和Runx2 mRNA也随诱导分化时间推移而增多;hBMSCs经诱导分化21 d时,A-F组细胞Osx和Runx2 mRNA表达量进一步增加,E组和F组超过半数细胞阳性表达,高于其他阿伦磷酸钠工作液诱导组;在阴性对照组,始终未见有细胞形态学改变、骨钙素表达和Osx和Runx2 mRNA表达.结论:ALN能促进hBMSCs增殖和骨向分化,1×10-6mol/L为其诱导分化的合适浓度.     

经声诺维转染骨形态发生蛋白2后促进人牙周膜成纤维细胞成骨向分化

目的 研究通过声诺维(SonoVue)转染骨形态发生蛋白2(BMP2)进入人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的条件及其对HPDLFs成骨向诱导的作用.方法 原代培养HPDLFs,按不同声诺维浓度、超声强度和辐照时间转染细胞,筛选获得最佳转染参数.将细胞随机分为4组:声诺维+质粒+超声组、脂质体+质粒组、超声组和空白对照组,按所筛选条件进行转染,分别于转染后3、5、7、9d时检测碱性磷酸酶活性,21 d时通过茜素红染色检查钙化情况;7、10、14 d时行RT-PCR对骨桥素(OPN)、骨涎蛋白(BSP)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、骨钙素(OCN)、成骨特异性转录因子(Runx2)的mRNA进行半定量检测.结果 超声功率为0.8 W/cm2、辐照时间为90 s、声诺维浓度为20％时细胞转染率与存活率均较佳,以该参数条件为转染参数.各时间点声诺维+质粒+超声组细胞的碱性磷酸酶活性及钙化结节形成量均高于空白对照组和超声组(P＜0.05);RT-PCR结果显示各时间点声诺维+质粒+超声组细胞OPN、BSP、Col Ⅰ、OCN、Runx2的mRNA表达量均高于超声组与空白对照组(P＜0.05),但与脂质体+质粒组相比差异无统计学意义.结论 通过声诺维能成功将BMP2转染进入HPDLFs并诱导其成骨向分化,为声诺维在牙周组织工程的应用奠定了基础.     

TNF-α对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）的核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）及其饵受体骨保护素（OPG）mRNA表达的影响,了解TNF-α在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法 将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度的TNF-α处理24h,通过半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）来观察人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达强度变化。结果 TNF-α上调人牙周膜成纤维细胞的RANKLmRNA表达,RANKL／OPG比率呈上升趋势。结论TNF-α通过调节人牙周膜成纤维细胞的RANKL／OPG的比值可间接地调节破骨细胞分化和活性,从而影响骨代谢。     

他克莫司对小鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

目的:研究他克莫司对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖及成骨分化的影响。方法:取小鼠BMSC分为3组,低、高剂量他克莫司组分别用含不同浓度(50、500 nmol/L)他克莫司的成骨诱导培养基培养,空白对照组用不含他克莫司的成骨诱导培养基培养。培养3 d,通过CCK-8法检测细胞的增殖能力;培养5、10 d,采用qRT-PCR检测成骨分化相关基因Runt相关转录因子2(Runx2)、锌指结构转录因子(Osterix)、碱性磷酸酶(Alp)、骨钙蛋白(Ocn)mRNA的表达水平;培养10、14 d,用ALP染色和茜素红染色检测细胞的成骨分化能力。结果:与空白对照组相比,低、高剂量他克莫司组BMSC增殖能力增强,成骨分化相关基因Runx2、Osterix、Alp、Ocn表达上调,ALP活性增强,矿化结节形成增多(P<0.05)。结论:他克莫司可促进小鼠BMSC的增殖和成骨分化。     

甘草酸二铵对脂多糖诱导下人牙周膜成纤维细胞表达前列腺素E_2的影响

目的脂多糖（LPS）干预下,不同浓度甘草酸二铵（Diammonium glycyrrhizinate,DG）对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）表达前列腺素E2（PGE2）的影响。方法取用组织块法原代培养的人牙周膜成纤维细胞,对细胞进行形态学及免疫学鉴别后,以浓度为10 mg/L的LPS进行诱导,用不同浓度的甘草酸二铵进行干预,采用免疫组织化学方法检测PGE2在HPDLFs中的表达变化。结果不同浓度甘草酸二铵能够下调同一浓度LPS诱导的HPDLFs表达的PGE2,随甘草酸二铵浓度的增加PGE2的表达量呈逐渐减弱趋势（P〈0.05）。结论甘草酸二铵可能对LPS诱导的HPDLFs致炎症过程中表达PGE2有重要的抑制作用,为临床牙周病治疗提供新的科研资料。     

云南白药胶囊对C518大鼠膝关节退变软骨细胞增殖和COL-Ⅱ、MMP-13表达的影响

目的：检测云南白药胶囊对C518大鼠膝关节退变软骨细胞增殖和COL-Ⅱ、MMP-13表达的影响。方法：用MTT法检测云南白药胶囊对C518大鼠膝关节退变软骨细胞增殖的影响,并对云南白药胶囊干预后的C518大鼠膝关节退变软骨细胞进行COL-Ⅱ、MMP-13免疫组化染色,同时观察其干预效果。结果：在药物对细胞增殖的影响上,在同一时间点的不同浓度中,各组之间都有显著性差异（P〈0．01）。在同一时间点的云南白药组、氨糖美辛组中,各浓度之间都有显著性差异（P〈0．01）。在生理盐水组中,各浓度之间都无显著性差异（P〉0．05）。在COL-Ⅱ、MMP-13表达水平上,各组之间都有显著性差异（P〈0．01）。结论：云南白药胶囊对C518大鼠膝关节退变软骨细胞有促进增殖的作用,并且细胞对药物浓度有依赖作用。云南白药胶囊能调节C518大鼠膝关节退变软骨细胞中COL-Ⅱ、MMP．13的表达水平,从而延缓KOA的病变发展、,     

蜂胶对人牙周膜成纤维细胞毒性及细胞回复能力的影响

目的 体外研究蜂胶对人牙周膜成纤维细胞的细胞毒性及毒性的可逆性.方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs),选用蜂胶为实验组,碘酚溶液和奥硝唑溶液为药物对照组,培养基作为空白对照组,分别与HPDLFs接触进行细胞培养24h,用MTT法测定细胞相对增殖率(RGR),更换新鲜培养基继续培养细胞24h,测定细胞回复度.结果 3种药物随着药物浓度的增加,细胞相对增殖率均成下降趋势,同种药物不同浓度间比较,差别具有统计学意义(P＜0.05).所选浓度的蜂胶和奥硝唑细胞毒性为1～2级,而对照药物碘酚细胞毒性为4级.更换新鲜培养基继续培养细胞24h后,蜂胶组和奥硝唑组细胞回复度均大于80％,表现出较小的细胞毒性;而碘酚组回复度小于30％,表现出一定的细胞毒性.结论 蜂胶对HPDLFs具有较小的细胞毒性,且毒性可逆.     

人牙龈间充质干细胞条件培养液对人成纤维细胞生物学功能的影响

目的 观察人牙龈间充质干细胞条件培养液（GMSCs-CM）对人成纤维细胞生物学功能的影响。方法 制备GMSCs-CM，将0（空白对照组）、1、5、10、50、100μg/mL浓度的GMSCs-CM作用于成纤维细胞，采用CCK-8法检测成纤维细胞增殖情况，TUNEL法检测成纤维细胞凋亡情况，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测在0（空白对照组）、1、10、100μg/mL浓度的GMSCs-CM作用下成纤维细胞的I型胶原（COL-1）、增殖细胞核抗原（PCNA）、α-平滑肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β（TGF-β）mRNA的表达。结果GMSCs-CM能明显促进成纤维细胞的增殖。当GMSCs-CM浓度为1μg/mL时促进成纤维细胞增殖的作用最为显著，而对细胞凋亡无明显影响。与空白对照组比较，GMSCs-CM浓度为1μg/mL明显提高成纤维细胞COL-1、PCNA、TGF-βmRNA表达水平（均P＜0.05）。结论GMSCs-CM对成纤维细胞的增殖能力有明显的促进作用，而对细胞凋亡无明显影响，有望用于促进皮肤创面愈合治疗。     

骨形成蛋白2基因转染的人牙周膜成纤维细胞的生物学特性

目的 建立表达骨形成蛋白2（BMP2）的人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）并观察其生物学特性。方法 利用脂质体将BMP2噬菌粒表达载体pBK－B2转染至HPDLFs,免疫组化ABC法检测BMP2基因的表达,并检测转染细胞的碱性磷酸酶（ALP）活力、骨钙素（OC）含量和矿化能力。结果 转染BMP2基因后,HPDLFs内有BMP2蛋白的表达,ALP活力、OC含量和矿化结节数量均显著增加。结论 BMP2基因在HPDLFs中得到表达并促进其向成骨样细胞分化。     

骨形成蛋白2基因转染的人牙周膜成纤维细胞的生物学特性

目的建立表达骨形成蛋白2(BMPS)的人牙周膜成纤维细胞(HPDLFS)并观察其生物学特性。方法利用脂质体将BMP2噬菌粒表达载体pBK-B2转染至HPDLFs,免疫组化ABC法检测BMP2基因的表达,并检测转染细胞的碱性磷酸酶(ALP)活力、骨钙素(OC)含量和矿化能力。结果转染BMP2基因后,HPDLFs内有BMP2蛋白的表达,ALP活力、OC含量和矿化结节数量均显著增加。结论BMP2基因在HPDLFs中得到表达并促进其向成骨样细胞分化。     

姜黄素对糖尿病大鼠肾组织c-fos及c-jun基因表达上调的抑制作用

目的探讨姜黄素对糖尿病大鼠肾组织c-fos及c-jun基因表达上调的影响。方法大鼠随机分为正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)及姜黄素治疗组(C组),采用腹腔单剂量注射链脲佐菌素(streptozo-tocin,STZ)65mg/kg建立糖尿病大鼠模型。治疗组给予姜黄素30mg/kg-1.d-1腹腔注射。实验第4周各组分别宰杀5只大鼠,取部分右肾皮质,采用RT-PCR及免疫组织化学方法分别检测姜黄素对糖尿病大鼠肾组织c-fos mRNA、c-jun mRNA及其蛋白表达上调的影响,并观察肾组织的病理学变化。结果糖尿病大鼠肾组织c-fos mRNA、c-jun mRNA及其蛋白表达明显上调,姜黄素可显著抑制上述指标表达上调,并减轻糖尿病大鼠肾脏病变。结论姜黄素通过抑制糖尿病大鼠肾组织c-fos及c-jun基因表达上调而减轻糖尿病大鼠肾脏损伤。     

青刺果黄酮对糖尿病大鼠肾组织c-fos基因表达上调的抑制作用

目的探讨青刺果黄酮对糖尿病大鼠肾组织c-fos及c-jun基因表达的影响。方法大鼠随机分为正常对照组（A组）、糖尿病组（B组）及青刺果黄酮治疗组（C组）,采用腹腔单剂量注射链脲佐菌素65mg·kg^-1建立糖尿病大鼠模型。治疗组给予青刺果黄酮300mg·kg^-1·d^-1腹腔注射。分别于第2周和4周末各组随机抽取4只大鼠处死,取肾脏称重;取第4周5只大鼠部分右肾皮质,采用RT-PCR及免疫组织化学方法检测青刺果黄酮对糖尿病大鼠肾组织c-foszaBNA、c-junmRNA及其蛋白表达．的影响。结果糖尿病大鼠肾脏指数显著增加,治疗组肾脏指数显著降低;糖尿病大鼠肾组织c-fosmRNA、c-junmRNA及其蛋白表达明显上调,青刺果黄酮可显著抑制上述指标的表达。结论青刺果黄酮通过抑制糖尿病大鼠肾组织c-fos及c-jun基因表达上调而减轻糖尿病大鼠肾脏损伤。     

缺氧适应与缺血低氧对c-fos和c-jun表达的影响

目的：探讨缺氧适应对缺血低氧脑c-fos，c-jun基图表达的影响。方法：昆明纯种雄性小白鼠36只随机分组：（1）对照组；（2）缺血低氧组（IH）；（3）缺氧适应与缺血低氧组（HA—IH）。采用免疫组化技术检测c-fos，c-jun基因表达。结果：IH组C—fos和c-jun阳性细胞在30min均呈低密度分布，c—fos在1h表达高峰，12h基本消失，而c-jun基因的表达高峰在3h；与IH组比较，HA—IH组c—fos阳性细胞数减少，c-jun表达增加。结论：缺血低氧可诱发中枢神经系统c-fos、c-jun基因表达，且有时间依赖性；缺氧适应可抑制缺血低氧脑c-fos基因的表达，增强c-jun基因的表达。     

茶多酚对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 观察茶多酚对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响.方法 采用组织块培养法培养原代人牙周膜成纤维细胞并传代,经免疫组化SABC法检测角蛋白和波形丝蛋白鉴定,取5～8代细胞用于实验;按茶多酚不同浓度分1 mg/ml(B组)、0.5mg/ml(C组)、0.25mg/ml(D组)、0.125mg/ml(E组)、0.0625mg/ml(F组)组和空白对照组(A组),采用细胞计数法、MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞DNA含量.结果 不同浓度茶多酚均促进人牙周膜成纤维细胞的增殖和DNA合成(P＜0.05),茶多酚作用的最适浓度为0.5 mg/ml,最佳作用时间为48 h.结论 茶多酚对人牙周膜成纤维细胞增殖具有明显的促进作用.     

角质形成细胞转染人乳头瘤病毒后c-jun、c-fos及MDM2基因的表达

目的 研究正常角质形成细胞转染人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６后，c－jun、c－fos、ＭＤＭ２mＲＮＡ表达情况。方法 在无血清的Ｍ１５４培养基上培养角质形成细胞，适当时进行传代培养。采用转染试剂ＦuＧＥＮＥ∧ＴＭ６将质粒pＳＶ２－neo/ＨＰＶ１６转入正常角质形成细胞，应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的方法检测转染后角质形成细胞中c－jun、c－fos、ＭＤＭ２mＲＮＡ表达。结果 转染质粒pＳＶ２－neo/ＨＰＶ１６后角质形成细胞形态的所改变，细胞变大，胞核结构疏松，胞浆出现颗粒。转染细胞株中，检测到ＨＰＶ１６mＲＮＡ的表达，扩增产物为１１０bp；同时检测到ＨＰＶ１６ＤＮＡ片断（７．９kb）。转染后角质形成细胞中有c－jun、c－fos、ＭＤＭ２mＲＮＡ的表达。结论 体外试验提示ＨＰＶ感染可能通过c－jun、c－fos、ＭＤＭ２的表达而促进细胞的增生。     

孕激素对MG-63细胞株孕激素受体和c-fos、c-jun的影响

目的观察18-甲左炔诺孕酮对人成骨肉瘤MG-63细胞株增殖、孕激素受体和c-fos、c-jun表达的影响。方法用不同浓度18-甲左炔诺孕酮干预MG-63细胞株,以不含左炔诺孕酮的MEM培养液作对照,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR测定孕激素受体(PR)、c-fos、c-jun mRNA表达,Western Blot和免疫组化法测定PR、c-fos、c-jun蛋白质的表达。结果与对照组比较,10-10mol/L、10-8mol/L和10-6mol/L左炔诺孕酮分别增加MG-63细胞增殖达7.72%、24.36%和36.54%(P<0.01或P<0.05)。干预24h后,MG-63细胞中PRA、PRB mRNA和蛋白质表达无明显变化(P>0.05)。干预2h后,左炔诺孕酮增加MG-63细胞中c-fos、c-jun mRNA和蛋白质表达(P<0.01或P<0.05),呈剂量依赖性。结论孕激素可能通过增加c-fos、c-jun的表达来促进MG-63细胞增殖。     

c-jun mRNA和c-fos mRNA在成年猫脊髓及L_6背根神经节的定位

目的了解成年猫脊髓及背根节内即刻早期基因c-jun mRNA、c-fos mRNA的定位分布情况.方法将成年健康雄性猫4只经灌注固定后取各只猫的脊髓L3～L6节段和L6DRG,应用原位杂交组织化学的方法分析c-jun mRNA和c-fos mRNA在成年猫脊髓及L6背根神经节中的亚细胞定位和分布.结果c-jun mRNA和c-fos mRNA的阳性反应产物呈紫蓝色颗粒状,主要位于细胞质.阳性细胞主要分布于脊髓灰质前角、背核和脊髓白质,L6背根神经节也呈c-jun和c-fos mRNA反应阳性.结论脊髓及背根节内有大量c-jun mRNA和c-fos mRNA的分布,提示c-jun和c-fos的作用可能与脊髓及背根节的生理过程有关,且其功能的发挥可能涉及神经轴突的再生.     

自发性高血压大鼠颈动脉血管平滑肌中抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc mRNA表达的研究

目的探讨自发性高血压大鼠颈动脉中抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc mRNA的表达.方法用逆转录聚合酶链式反应检测两种基因的表达水平.正常雄性大鼠作为对照组.结果 SHR颈动脉中,抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc均有高表达,较WKY差异有显著性(P<0.05).结论自发性高血压大鼠颈动脉组织中抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc均有高表达,癌基因的活化可能与自发性高血压大鼠颈动脉血管重构有关.