miR-182-5p靶向TRIM52逆转卵巢癌SKOV3细胞对顺铂耐药的机制

目的 研究miR-182-5p靶向三结构域蛋白52(TRIM52)对卵巢癌SKOV3细胞顺铂(CDDP)耐药的影响。方法 采用qRT-PCR法测定卵巢癌SKOV3细胞中miR-182-5p水平。以卵巢癌SKOV3细胞作为研究对象,在细胞中转染miR-182-5p mimics,给予CDDP处理(记为SKOV3/CDDP细胞),采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,Transwell小室测定细胞迁移和侵袭,Western blot测定基质金属蛋白酶9(MMP-9)、C-Caspase-3蛋白表达。在线靶基因预测软件预测miR-182-5p和TRIM52 3’UTR端互补结合,使用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将TRIM52过表达载体和miR-182-5p mimics共转染到卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中,检测细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况。结果 卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中miR-182-5p水平低于卵巢癌SKOV3细胞(P<0.001)。miR-182-5p mimics、CDDP和二者联合处理后的卵巢癌SKOV3/CDDP细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降,细胞凋亡增多...     

miR-122-5p通过ADAM10基因抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和转移的研究

目的研究微小核糖核酸122-5p (miR-122-5p)对卵巢癌细胞的作用及机制。方法应用miR-122-5p转染卵巢癌细胞系A2780和SKOV3,测定转染后细胞活性、集落形成和凋亡情况,以及侵袭迁移能力的变化。应用TargetScan工具预测miR-122-5p的可能靶基因,并应用荧光素酶检测方法判定miR-122-5p对其靶基因表达的调节作用。应用miR-122-5p转染卵巢癌顺铂耐药株A2780/DDP检测转染后顺铂的半数抑制量(IC50)的变化。结果 miR-122-5p抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和转移,诱导癌细胞的凋亡。这种作用在引入ADAM10基因后得以逆转,证明ADAM10是miR-122-5p的一个重要靶基因。miR-122-5p在人类卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP中表达下调,过表达miR-122-5p能明显降低该细胞株的IC50。结论 miR-122-5p抑制卵巢癌细胞增殖和迁移,并能逆转癌细胞对顺铂的耐药性。     

miR-599靶向YAP1对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响

目的：探讨miR-599靶向Yes相关蛋白1(YAP1)对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响。方法：采用qRT-PCR检测正常卵巢上皮细胞IOSE-80与卵巢癌细胞SKOV3中miR-599的表达;将SKOV3细胞分为6组：空白组、miR-NC组、miR-599 mimics组、siRNA-NC组、YAP1 siRNA组、YAP1 siRNA+miR-599 inhibitor组,划痕实验检测各组细胞迁移;Transwell实验检测各组细胞侵袭;Western Blot检测各组细胞中YAP1蛋白表达;双萤光素酶实验验证miR-599与YAP1的关系。结果：miR-599在SKOV3细胞中的表达水平显著低于IOSE-80细胞（P<0.05）;过表达miR-599或沉默YAP1均可抑制SKOV3细胞的迁移和侵袭;miR-599可靶向调控YAP1表达;抑制miR-599可逆转沉默YAP1对SKOV3细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论：过表达miR-599通过下调YAP1来抑制SKOV3细胞的迁移和侵袭。     

miR-203靶向Survivin抑制卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的 探讨miR-203靶向抑制Survivin对卵巢癌SKOV3及OVCAR3细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法 构建过表达miR-203、Survivin及空白对照组的慢病毒载体,转染卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,嘌呤霉素筛选后构建空白对照组、过表达miR-203组、过表达Survivin组及过表达miR-203联合Survivin组卵巢癌细胞系。Western blotting方法测定各组卵巢癌细胞中Survivin及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达;MTT和平板克隆实验检测卵巢癌细胞增殖能力的改变;Transwell实验检测对细胞迁移和侵袭能力的影响。 结果 (1) 过表达miR-203抑制Survivin的表达及EMT(P<0.05);(2) MTT、平板克隆实验及transwell实验显示,与空白对照组相比,过表达miR-203组能够抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);而过表达Survivin逆转了miR-203对卵巢癌的抑制作用(P<0.05)。 结论 miR-203通过靶向Survivin抑制EMT从而抑制卵巢癌的增殖、迁移及侵袭,miR-203/Survivin/EMT轴有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测人卵巢上皮细胞HOSEpi C以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区(3’-UTR)的野生型(WT)和突变型(mut)荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义(P <0. 05),选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-126调控SKOV3卵巢癌细胞周期的实验研究

目的探讨miR-126对卵巢癌细胞株的细胞周期和形态的影响,评价miR-126靶向调控卵巢癌增殖侵袭的作用。方法体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,通过慢病毒包装miR-126并转染卵巢癌SKOV3细胞系,将其分为三组：转染miR-126表达组（SKOV3/LV3-has-miR-126组）、转染阴性对照组（SKOV3/LV3NC组）和空白对照组（SKOV3组）,观察转染miR-126后细胞形态变化,并用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期,分析转染miR-126后细胞形态与细胞周期的改变情况。结果转染miR-126后卵巢癌细胞组短梭形细胞居多,片状伪足减少,这均不有利于肿瘤细胞的迁移。同时SKOV3组、SKOV3/LV3NC组、SKOV3/LV3-has-miR-126组S期细胞平均比例分别为（53.8±4.5）%、（55.2±4.2）%和（39.7±6.6）%,而G1细胞比例则分别为（43.2±13.2）%、（42.6±13.2）%和（55.6±13.2）%,可见SKOV3组和SKOV3/LV3NC组细胞S期和G1期细胞比例相近（P〉0.05）,而与其他两组比较,SKOV3/LV3-has-miR-126组的细胞S期增殖指数较低,而停留在G1的细胞比例则较高,两期比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论经miR-126转染后SKOV3卵巢癌细胞S期合成显著抑制,而G1期细胞明显增加,细胞伪足减少,提示转染miR-126的SKOV3卵巢癌细胞其增殖和侵袭能力降低。     

LncRNA FOXD3-AS1在卵巢癌SKOV3细胞中的表达及对SKOV3细胞恶性生物学行为的影响

目的 探究LncRNA FOXD3-AS1在卵巢癌SKOV3细胞中的表达及影响SKOV3细胞恶性生物学行为的作用机制。方法 收集2020年10月~2021年6月我院病理科经过临床确诊的55例卵巢癌患者,利用RT-qPCR技术分析卵巢癌组织、癌旁组织、SKOV3细胞和IOSE80细胞中FOXD3-AS1、miR-325和CDCA5的表达;siRNA靶向敲降FOXD3-AS1和CDCA5的表达,通过细胞克隆形成实验、细胞迁移实验和Western blot检测SKOV3细胞增殖、迁移及其EMT能力。miRanda、TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析LncRNA FOXD3-AS1与miR-325、miR-325与CDCA5之间的关系。miR-325 inhibitor转染细胞,或pcDNA-FOXD3-AS1与miR-325 mimics共转染细胞后分析SKOV3细胞增殖、迁移和EMT情况。结果 与IOSE80细胞、癌旁组织对比,SKOV3细胞、卵巢癌组织内LncRNA FOXD3-AS1、CDCA5表达上调（P＜0.01）,miR-325表达下调（P＜0.01）。siRNA靶向敲降FOXD3-AS1和CDCA5的表达抑制了SKOV3细胞增殖、迁移与EMT;LncRNA FOXD3-AS1的下游作用靶点为miR-325,miR-325的作用靶点为CDCA5;pcDNA-FOXD3-AS1与miR-325 mimics共转染细胞后部分逆转了miR-325 mimics转染细胞对SKOV3细胞增殖、迁移和EMT的抑制作用。结论 LncRNA FOXD3-AS1在卵巢癌SKOV3细胞中表达上调及通过miR-325/CDCA5轴影响SKOV3细胞恶性生物学行为。     

基于miR-1285在卵巢癌组织中的表达及对癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探索人体卵巢癌细胞微RNA-1285 (miR-1285)的表达及其在卵巢癌病变细胞增殖与凋亡过程中的作用.方法 采用荧光定量PCR法检测卵巢癌患者卵巢癌组织和对应癌旁组织细胞中miR-1285的表达水平;同时在体外进行细胞实验,向人源SKOV3和OVCAR3卵巢癌细胞株转染miR-1285 mimics,运用噻唑兰(MTT)法对转染miR-1285 mimics成功的两株人源卵巢癌细胞进行体外增殖活力的检测,同时通过流式细胞仪检测细胞凋亡的发生情况.结果 荧光定量PCR检测结果表明,miR-1285在患者卵巢癌组织细胞中的表达水平低于其对应癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞体外转染miR-1285 mimics实验结果表明,相较于对照组的细胞株,转染miR-1285 mimics的细胞株SKOV3,其细胞增殖能力明显下降(P＜0.05)、细胞凋亡率明显升高(P＜0.05);同样,转染miR-1285 mimics的细胞株OVCAR3其增殖能力也明显下降、细胞凋亡率明显升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在卵巢癌患者的癌细胞中,miR-1285的表达明显降低,其可能参与卵巢癌的发生、发展,并且与卵巢癌细胞的增殖和凋亡密切相关.     

白藜芦醇通过上调miR-361-3p逆转卵巢癌顺铂耐药的研究

目的 研究白藜芦醇(RES)逆转卵巢癌顺铂(DDP)耐药的作用机制。方法 选取人卵巢癌SKOV3细胞,采用DDP构建SKOV3/DDP耐药细胞株。使用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测RES和DDP对SKOV3/DDP细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)和增殖能力的影响;采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测RES对微RNA-361-3p(miR-361-3p)的调控作用;采用流式细胞术检测RES和DDP对细胞凋亡的作用;细胞转染miR-361-3p抑制剂后检测DDP对细胞增殖和凋亡的作用。采用Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路关键蛋白的表达。结果 RES终浓度4μmol/L对SKOV3/DDP细胞生长无明显抑制作用(P>0.05),可作为最大安全浓度。RES+DDP组的IC₅₀明显低于DDP组(P<0.05)。RES可明显上调SKOV3/DDP细胞miR-361-3p的表达(P<0.05)。miR-361-3p抑...     

miR-211对卵巢癌SKOV-3细胞上皮-间质转化功能的影响及机制

目的 研究microRNA-211(miR-211)对卵巢癌SKOV-3细胞上皮-间质转化(EMT)功能的影响及其相关机制.方法 SKOV-3卵巢癌细胞株分别转染miR-211模拟物(211M组)及其阴性对照模拟物(NCM组),并设立未转染对照组,采用RT-PCR法检测各组细胞miR-211含量;Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力;Western blot法检测3组细胞Snail、α-连环蛋白(α-Catenin)和与性别决定相关的高迁移率基因群4(SOX4)表达水平;采用Western blot法检测SOX4过表达对miR-211抑制EMT的拮抗作用;双荧光素酶实验检测miR-211与SOX4的关系.结果 211M组miR-211的表达水平明显上调,表达水平为未转染对照组的(706.67±30.95)倍(P<0.05).211M组迁移细胞数量为(12.32±0.77)个/视野,明显低于未转染对照组的(82.25±1.05)个/视野(P<0.05).211M组侵袭细胞数量为(9.22±0.32)个/视野,明显低于未转染对照组的(62.10±1.77)个/视野(P<0.05).211M组细胞Snail蛋白表达量明显降低,α-Catenin蛋白表达量明显升高,SOX4蛋白表达量明显降低.SOX4+211M组卵巢癌细胞中Snail蛋白表达量明显升高, α-Catenin蛋白表达量明显降低.双荧光素酶检验结果显示SOX4为miR-211的下游靶基因.结论 miR-211可能通过降低下游靶基因SOX4水平影响EMT相关蛋白表达,抑制卵巢癌SKOV-3细胞的EMT功能.     

槲皮素联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨槲皮素单独及联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法选取对数生长期的卵巢癌SKOV-3细胞作为研究对象,实验分6组:阴性对照组(生理盐水),槲皮素低(25μmol/L)、中(50μmol/L)、高剂量组(100μmol/L),顺铂组(10μmol/L),联合组(槲皮素50μmol/L+顺铂10μmol/L)。采用MTT法检测不同浓度槲皮素单独及联合顺铂对SKOV-3细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测槲皮素作用于SKOV-3细胞Bcl-2及MtP53蛋白表达水平的变化。结果与阴性对照组相比,槲皮素可明显抑制SKOV-3细胞的增殖,并具有显著的时间和剂量依赖关系,槲皮素高剂量组在72 h的抑制率可达63.49%(P<0.05);流式细胞仪分析发现槲皮素可使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少(P<0.05),提示其将细胞周期阻滞于G1期;槲皮素还可明显诱导SKOV-3细胞凋亡,高剂量组的凋亡率可达29.51%;槲皮素作用后,Bcl-2及MtP53表达则明显降低(P<0.05)。结论槲皮素在体外可抑制SKOV-3细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制可能与降低凋亡相关蛋白MtP53和Bcl-2的蛋白表达水平有关;槲皮素与顺铂联用有协同作用。     

小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3增殖和凋亡的影响

目的探讨小蘖碱对体外培养人卵巢癌SKOV-3细胞增殖和凋亡的影响。方法选用人卵巢癌细胞株SKOV-3进行体外培养,以5-100μmol/L小蘖碱分别处理SKOV-3细胞24-72h,MTT法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期;SABC法检测survivin、caspase-3在细胞中的表达。结果小蘖碱能显著抑制SKOV-3细胞体外生长,呈时间剂量依赖性。小蘖碱作用24h随浓度的升高survivin阳性表达逐渐降低,caspase-3阳性表达逐渐升高。流式细胞仪分析证实小蘖碱能使SKOV-3细胞积聚在S期和G2/M期。结论小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3的生长有显著的抑制作用,survivin的表达下降、caspase-3的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

Micro RNA-132对结肠癌细胞生物学功能的作用

目的  探讨microRNA-132（miR-132）对结肠癌细胞系LOVO生物学功能的作用。方法  通过体外转染miR-132 mimic的方式进行获得性功能实验。以细胞计数检测（CCK-8）、平板克隆形成、流式细胞凋亡检测以及划痕实验分析miR-132过表达对LOVO细胞增殖与侵袭的影响。结果  LOVO细胞中，外源性过表达miR-132能够抑制其生长，且抑制率呈时间、浓度依赖性，50 nmol/L miR-132 mimic处理72 h后，抑制率达30%。流式细胞凋亡检测发现miR-132过表达诱导细胞凋亡。miR-132过表达可以抑制LOVO细胞体内的外克隆形成能力。体外平板克隆形成实验显示，miR-132过表达使LOVO细胞克隆形成率从21%降至7%。划痕修复实验结果显示，高表达miR-132各组细胞的迁移能力降低。结论  miR-132过表达能显著抑制结肠癌细胞LOVO发生细胞凋亡及增殖，还能削弱结肠癌细胞LOVO的克隆形成能力。

     

miR-92b 对人胃癌细胞SGC7901迁移、粘附和侵袭的影响

目的探讨miR-92b对胃癌细胞迁移、粘附和侵袭能力的影响及其相关的分子机制。方法在人胃癌SGC-7901细胞中瞬
时转染miR-92b inhibitor和miR-92b mimics后,经划痕实验、细胞迁移实验、基质胶粘附实验和Transwell侵袭实验观察对细胞
转移的影响;Western blot 检测E-Cadherin、Vimentin、Akt 和p-Akt 蛋白的表达水平。结果SGC-7901 细胞转染miR-92b
inhibitors后,迁移、粘附和侵袭的细胞数量减少（P<0.05）;Western blot结果显示E-Cadherin表达升高,Vimentin表达降低,Akt
和p-Akt的表达升高。转染miR-92b mimics后,迁移、粘附和侵袭的细胞数量增多（P<0.05）;E-Cadherin表达降低,Vimentin表
达升高,Akt和p-Akt表达降低。结论miR-92b介导SGC7901细胞发生上皮-间质转化,促进肿瘤细胞的粘附、迁移和侵袭,可能
通过非PI3K/Akt途径促进肿瘤细胞的转移。
     

miR-29a在宫颈癌组织中的表达及其上调后对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的检测微小RNA（miR）-29a 在宫颈癌组织和不同种类宫颈癌细胞系中的表达情况及其上调后对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等恶性生物学行为的影响。方法①组织标本检测：收集2014 年7 月-2016 年7 月西南医科大学附属医院活检或手术切除的宫颈组织标本160 例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-29a 的表达情况,并分析宫颈癌组织中miR-29a 的表达与临床病理特征的关系。②细胞学实验：采用qRT-PCR检测miR-29a在不同种类的人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski及C33a）和人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7中的表达水平,选取miR-29a表达最低的宫颈癌细胞系SiHa进行后续研究,使用miR-29a mimics转染SiHa细胞,qRT-PCR检测转染后细胞miR-29a 的表达变化,CCK-8 法检测转染后细胞增殖活力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率的变化,Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果宫颈鳞癌组织中miR-29a 表达低于HSIL、LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）;HSIL组织中miR-29a表达低于LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）,LSIL与正常宫颈组织间miR-29a的表达差异无统计学意义（p >0.05）。宫颈鳞癌组织中miR-29a的表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关（p <0.05）。miR-29a在人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski和C33a）中的表达低于人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7（p <0.05）。SiHa细胞转染miR-29a mimics后,miR-29a表达水平增高（p <0.05）,细胞增殖活力降低（p <0.05）,细胞凋亡率增高（p <0.05）,细胞迁移和侵袭能力下降（p <0.05）。结论miR-29a在宫颈癌组织和细胞中均呈低表达,上调miR-29a的表达能够抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖及侵袭迁移能力,促进细胞的凋亡。     

miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞系SLK细胞迁移、侵袭的影响

目的 通过脂质转染miR-181b-5p模拟物及抑制物到卡波西肉瘤细胞系SLK,研究miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞SLK细胞增殖、迁移、侵袭生物学功能的影响。方法 应用脂质体对人卡波西肉瘤细胞株SLK进行转染,转染miR-181b-5p模拟物及抑制物后应用MTT测定细胞增殖曲线,应用流式细胞仪行检测细胞周期。利用Transwell小室试验后行苏木素染色观察细胞迁移、细胞侵袭生物学特性。结果 miR-181b-5p模拟物促进细胞增殖,促进S期的转变,加速细胞周期进程;miR-181b-5p抑制物抑制细胞增殖,诱导细胞发生G₀/G₁期阻滞,延缓细胞周期进程。Transwell小室迁移实验结果显示,与阴性对照组迁移实验下室面细胞数目151±11个相比,miR-181b-5p模拟物组184±9个,细胞数目明显数量增多,迁移能力均明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell小室侵袭实验结果显示,与阴性对照组侵袭实验下室面细胞数目35±6个相比,miR-181b-5p模拟物组48±5个,细胞数目明显数量增多,侵袭能力均明显提高(P<0.05)。结论 miR-181b-5p在SLK细胞中高表达,其对SLK细胞的增殖、侵袭和迁移能力可能存在正向调控作用,可能成为卡波西肉瘤的潜在治疗靶点。     

熊果酸通过调节miR-373-3p对肺癌A549细胞凋亡和迁移的影响

目的探讨熊果酸通过调节mi R-373-3p对肺癌A549细胞凋亡和迁移的影响。方法 MTT法检测熊果酸对肺癌A549细胞的毒性作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法、流式细胞术检测熊果酸作用于转染mi R-373-3p的A549细胞后对A549细胞凋亡影响;实时荧光定量PCR法分别检测熊果酸加药组和转染mi R-373-3p mimics组中A549细胞mi R-373-3p表达程度;RT-PCR和免疫印迹法检测熊果酸作用下mi R-373-3p调控的下游靶基因TXNIP m RNA及蛋白的表达;细胞划痕愈合实验检测mi R-373-3p细胞迁移能力。结果熊果酸显著降低肺癌A549细胞的生长活力(P<0.05),IC 50为60μmol/L;瞬时转染mi R-373-3p mimics可以上调A549细胞中mi R-373-3p的表达(24 h,11.367±2.120;48 h,12.167±1.108);熊果酸作用于转染mi R-373-3p mimics的A549细胞后,能够显著提高细胞中mi R-373-3p mimics的表达水平(24 h,16.787±3.109;48 h,16.980±3.106);并且mi R-373-3p mimics下游预测的目标基因TXNIP m RNA(10.757±0.79)及蛋白表达量(0.8210±0.043)均明显上升;FCM结果显示:mi R-373-3p能够促进肺癌A549细胞凋亡(46.20±5.970)。细胞转染mi R-373-3p mimics后,迁移能力明显受到抑制(P<0.001)。结论熊果酸能够通过促进肺癌A549细胞凋亡抑制其迁移,其作用机制可能是通过上调mi R-373-3p表达来完成的。     

NCOA5通过调控上皮间质转化促进卵巢癌细胞的侵袭转移能力

目的 研究核受体共激活因子5 (NCOA5)对卵巢癌细胞侵袭和转移能力的作用及分子机制。方法 常规培养卵巢癌细胞株SKOV-3、A2780、OC3、HO-8910和正常卵巢上皮细胞系IOSE80,Western blot检测各细胞中NCOA5蛋白的表达水平。选取高表达NCOA5的卵巢癌细胞SKOV-3 和A2780,各分为si-NC组、si-NCOA5组,并分别转染NC siRNA和NCOA5 siRNA。Boyden实验检测各组细胞侵袭能力,Transwell实验检测各组细胞转移能力,Western blot检测各组细胞上皮间质转（EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、vimentin和Slug蛋白的表达水平。结果 Western blot结果显示NCOA5在卵巢癌细胞中的表达显著上调(P<0.05)。在SKOV-3和A2780细胞中干扰NCOA5的表达均显著抑制卵巢癌细胞侵袭和转移能力 (P<0.05),并促进EMT相关蛋白E-cadherin的表达,抑制细胞中EMT相关蛋白N-cadherin、vimentin和Slug蛋白的表达(P<0.05)。结论 NCOA5促进卵巢癌侵袭转移能力,具有作为卵巢癌新型预后生物标志物和治疗分子靶点的潜力。     

过表达miR-18a靶向ATM对结肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究miR-18a通过靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因 (ataxia telangiectasia mutated gene, ATM)调控结肠癌细胞的生物学特性。方法 通过软件预测miR-18a其中一个靶基因。设计合成miR-18a的模拟剂（mimics）和抑制剂（inhibitor）,通过转染不同组分上调或下调内源性miR-18a在结肠癌细胞株HCT116中的表达。采用实时荧光定量（qRT）-PCR、Western blot、 MTT法、克隆形成实验、Transwell等方法,检测过表达miR-18a调控ATM基因的表达对体外结肠癌细胞增殖及迁移能力的影响。结果 软件预测发现miR-18a的其中一个靶基因是ATM。通过瞬时转染,过表达内源性miR-18a,可降低HCT116细胞内靶基因ATM蛋白的表达水平。 转染miR-18a mimics后能够下调HCT116细胞的增殖活力,同时显著降低HCT116细胞的克隆形成能力、横向迁移能力及纵向侵袭能力,以上各项改变均与miR-18a过表达有关。结论 证实了miR-18a通过负向调控ATM的表达,抑制结肠癌细胞HCT116的增殖和迁移能力。