生物素——链霉亲和素放大免疫酶法在鼻咽癌血清学检测中的应用

[目的] 探讨生物素--链霉亲和素放大免疫酶法(BSA)应用于鼻咽癌(NPC)IgA/EA血清学早期筛查效果,提高鼻咽癌早期诊断效率.[方法] 免疫酶法(IE)检测广西鼻咽癌示范基地血清中IgA/VCA(针对EBV壳抗原VCA的IgA型抗体),IgAVCA阳性者再用IE法及生物素--链霉亲和素放大免疫酶法(BSA)分别检测血清IgA/EA(针对EBV早期抗原EA的IgA型抗体),以临床病理检查结果为确诊标准.t检验及X2检验统计分析改进前后两种方法在鼻咽癌血清学早期检测方面的差异.[结果] IE法检测IgA/VCA阳性血清388例,IE法检测IgA/EA阳性率3.6%(14例),BSA法检测IgA/EA阳性率12.9%(50例),BSA法检出阳性率显著高于IE法(X2=22.070,P<0.001).在两种方法检测的血清IgA/EA均阳性的样品中,IgA/EA检测滴度的几何平均值(GMT)分别为1:17.04和1:51.87,BSA法显著高于IE法(t=2.804,P<0.05).进一步的病理检测确诊鼻咽癌患者16例,BSA法提高了NPC检测灵敏度(X2=16_347,P<0.001).[结论] 用生物素--链霉亲和素放大免疫酶法(BSA)检测血清EBV相关抗体特异性较高,并且可以提高鼻咽癌血清学早期检测的灵敏度,为在基层开展更有效的流行病学筛查提供了可行的方法.     

应用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附法检测原发性肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶

目的 观察生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附(ELISA)法检测原发性肝癌(PHC)特异性欧曼陀罗凝集素强结合的γ-谷氨酰转移酶(DSA-GGT)的临床应用价值.方法 对45例正常对照者、58例PHC患者和203例非PHC患者(包括其他肿瘤患者36例,肝良性病变患者167例),应用生物素-链霉亲和素ELISA法检测受试者血清中DSA-GGT的水平,同时用ELISA法检测受试者血清中甲胎蛋白(Are)的水平.结果 58例PHC患者中,DSA-GGT阳性38例,检测DSA-GGT诊断PHC的灵敏度为65.5%;203例非PHC患者中,DSA-GGT阳性18例,检测DSA-GGT诊断PHC的特异度为91.1%.该方法的平均批内及批间变异分别为8.9%和11.5%.58例PHC患者中,AFP阳性40例,检测AFP诊断PHC的灵敏度为69.0%;203例非PHC患者中,AFP阳性19例,检测AFP诊断PHC的特异度为90.6%.DSA-GGT与AFP联合检测诊断PHC的灵敏度和特异度分别为93.1%和85.7%.结论 生物素-链霉亲和素ELISA法检测DSA-GGT和ELISA法检测AFP对PHC诊断的灵敏度和特异度相近,且前者的重复性良好,可作为PHC诊断的较好检测方法;DSA-GGT与AFP联合检测可显著提高PHC诊断的灵敏度.     

CD80-链亲和素融合蛋白锚定的鼻咽癌CNE2细胞增强T细胞的杀伤活性

目的：制备CD80-链亲和素（streptavidin,SA）融合蛋白,研究CD80-SA锚定的鼻咽癌CNE2细胞对T细胞杀伤活性的影响。方法：pET21a-CD80-SA-6His质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导CD80-SA融合蛋白的表达,经Ni-NTA亲和层析纯化后透析复性。流式细胞仪检测CD80-SA融合蛋白在CNE2细胞表面的锚定效率;LDH释放法检测CD80-SA锚定的CNE2细胞对T细胞杀伤活性的影响。结果：成功制备和纯化了CD80-SA融合蛋白。CNE2细胞表面低表达CD80分子\[（2.2±0.18）％\]。CD80-SA融合蛋白可有效地锚定于生物素化的CEN2细胞表面,锚定效率可达73%。CD80-SA锚定的CNE2细胞可有效激活T细胞的杀伤作用,效靶比在1∶1、1∶20、1∶40时T细胞的杀伤率分别约为(37±3.12)%、(51±263)%和(58±2.47)%,均显著高于对照CNE2细胞激活的T细胞（均P<0.01)。结论：CD80-SA融合蛋白可有效锚定于生物素化的CNE2细胞表面,从而增强T细胞对CNE2细胞的杀伤活性。     

宫颈癌SiHa细胞和卵巢癌SKOV3细胞染色体着丝粒点变异的研究

目的:探讨染色体着丝粒点(Cd)的变异与宫颈癌S iHa细胞和卵巢癌SKOV3细胞染色体非整倍性畸变的关系。方法:肿瘤细胞株传代后用常规方法制备染色体,用直接法制备胚胎绒毛组织染色体标本,采用Cd-NOR同步银染分析技术研究S iHa细胞和SKOV3细胞染色体Cd的变异。结果:S iHa细胞染色体Cd缺失率为2.70%、Cd迟滞复制率为0.92%、小Cd率为1.58%、Cd-NOR融合率为0.54%、与正常人胚胎绒毛细胞染色体Cd相比较,S iHa细胞染色体Cd缺失显著升高(P<0.0 1 2 5)、Cd迟滞复制显著升高(P<0.0125)。而小Cd、Cd-NOR融合没有显著性差异。SKOV3细胞染色体Cd缺失率为1.95%、Cd迟滞复制率为0.22%、小Cd率为1.62%、Cd-NOR融合率为1.65%、与正常人胚胎绒毛细胞染色体Cd相比较,SKOV3细胞染色体Cd缺失显著升高(P<0.0125)、Cd-NOR融合显著升高(P<0.0125),而Cd迟滞复制、小Cd没有显著性差异。结论:S iHa细胞染色体非整倍性畸变可能主要源于Cd缺失、Cd迟滞复制。SKOV3细胞染色体非整倍性畸变可能主要源于Cd缺失、Cd-NOR融合。     

miR-370-3p靶向HDAC4调节卵巢癌SKOV3细胞的生长和代谢研究

  目的  研究miR-370-3p对卵巢癌（ovarian cancer,OC）细胞的生长和代谢的作用及机制。  方法  选取2017年2月至2019年2月23例于郑州人民医院行OC切除术患者的组织标本,RT-qPCR检测OC组织和细胞中miR-370-3p和组蛋白脱乙酰酶4（histone deacetylase 4,HDAC4）mRNA的相对表达量,双荧光素酶试验检测miR-370-3p与HDAC4的靶向关系,蛋白印迹法检测Ki- 67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、裂解caspase-3、Bax、HDAC4蛋白表达水平,CCK-8检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡率,Seahorse XF24分析仪分析细胞糖酵解能力和线粒体功能,建立移植瘤动物模型,测定移植瘤体积和重量,免疫组织化学法检测Ki-67和caspase-3表达水平。  结果  在OC组织和细胞中miR-370-3p低表达,HDAC4高表达。miR-370-3p靶向下调HDAC4表达。miR-370-3p过表达显著减少SKOV3细胞增殖,增加细胞凋亡,下调PCNA和Ki-67蛋白表达,上调裂解caspase-3和Bax蛋白表达,降低糖酵解速率和糖酵解能力,升高基础呼吸速率和最大呼吸速率。在小鼠体内,miR-370-3p过表达减小移植瘤体积和重量,增加Ki-67阳性细胞比率,减少caspase-3阳性细胞比率,降低糖酵解速率和糖酵解能力,升高基础呼吸速率和最大呼吸速率。  结论  miR-370-3p通过靶向下调HDAC4来抑制OC细胞的生长和代谢。      

miR-144-3p靶向zeb1调控卵巢癌细胞SKOV3的增殖和凋亡

目的:探讨miR-144-3p是否通过靶向E盒锌指结合蛋白1（zeb1）调控卵巢癌细胞SKOV3的增殖和凋亡。方法:qRT-PCR检测miR-144-3p在卵巢癌细胞和正常人卵巢上皮细胞中的表达差异。在卵巢癌细胞SKOV3中转染miR-144-3p mimics,MTT法测定细胞增殖,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中cyclinD1、p27、C-caspase-3蛋白表达。生物信息学软件预测miR-144-3p的靶基因可能为zeb1,荧光素酶报告系统鉴定其靶向关系。在卵巢癌细胞SKOV3中共转染miR-144-3p mimics、pcDNA3.1-zeb1,利用上述方法测定细胞增殖、周期和凋亡变化。结果:miR-144-3p在卵巢癌细胞中的表达水平低于正常人卵巢上皮细胞。转染miR-144-3p mimics后的卵巢癌细胞SKOV3增殖能力下降,细胞周期被阻滞在G1期,细胞凋亡增多,细胞中cyclinD1蛋白表达减少,p27、C-caspase-3蛋白表达增加。miR-144-3p靶向调控zeb1表达。pcDNA3.1-zeb1可以逆转miR-144-3p mimics对卵巢癌细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。结论:miR-144-3p靶向zeb1抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖并诱导细胞凋亡。     

Beclin1进化保守区-SA融合蛋白偶联生物素-A10适配子制备PSMA靶向系统及其对前列腺癌细胞的抑制

目的:构建链霉亲和素(streptavidin,SA)与Beclin1进化保守区(evolutionary conserved district,ECD)融合蛋白原核表达载体,将融合蛋白与生物素-前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)特异性适配子A10偶联制备PSMA靶向系统,鉴定其促进PSMA+前列腺癌细胞凋亡及自噬的功能.方法:采用基因合成技术获得融合基因SA-ECD,克隆至PUC57载体鉴定无误后,再将其定向插入原核表达载体PET30a,IPTG诱导融合蛋白表达,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,Western blotting鉴定.按照生物素-A10∶ SA-ECD摩尔比为4∶1的比例制备PSMA特异性的偶联物即靶向系统,凝胶迁移阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证SA-ECD与生物素的结合,流式细胞术、Western blotting、锥虫蓝染色分别检测靶向系统对前列腺癌细胞凋亡、自噬相关蛋白表达和细胞活力的影响.结果:双酶切及基因测序证实重组质粒PET30a-SA-ECD构建成功,IPTG诱导SA-ECD融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达并经亲和凝胶层析成功纯化.EMSA实验证明SA-ECD能有效结合生物素-A10.靶向系统可促进PSMA+前列腺癌细胞凋亡和自噬,同时抑制癌细胞活力.结论:成功表达并纯化融合蛋白SA-ECD,构建的生物素-A10∶ SA-ECD靶向系统能够杀伤PSMA+前列腺癌细胞.     

选择性环氧化酶-2抑制剂对卵巢癌细胞抑制作用的体内体外研究

目的:研究选择性环氧化酶-2抑制剂美洛昔康在体内体外对卵巢癌生长侵袭的抑制作用。方法:使用2种卵巢癌细胞株,研究不同浓度的美洛昔康对于卵巢癌细胞增殖的抑制作用。利用移植卵巢癌细胞株小鼠模型,研究美洛昔康对小鼠背部皮下移植瘤生长以及肿瘤中VEGF表达、微血管密度以及细胞凋亡的影响,并将之与顺铂的作用相比较。结果:在体外实验中,美洛昔康对2种卵巢癌细胞的增殖均有抑制作用,且呈剂量依赖性。体内实验证明美洛昔康明显抑制小鼠皮下移植瘤的生长,其抑制率为30.79%（P＜ 0.0001）。各组肿瘤组织中VEGF的表达经半定量测定分别为:每高倍视野对照组5.17±0.52、、顺铂组4.32±0.73及美洛昔康组4.81±0.58。与对照组相比,美洛昔康饲养的小鼠肿瘤中VEGF的表达受到明显抑制（P＜0.0001）并伴随微血管密度的明显减低。TUNEL法对肿瘤组织中凋亡细胞计数,结果分别为:对照组12.8±1.3、顺铂组11.5±1.8及美洛昔康组23.3±2.7。与对照组比较,美洛昔康饲养的小鼠肿瘤中,细胞凋亡的数量明显增多（P＜0.001）。美洛昔康的抗肿瘤效果在某些方面优于顺铂。结论:美洛昔康在体内体外实验中表现出抗卵巢肿瘤生长和侵袭的作用。选择性环氧化酶-2抑制剂或许可以作为潜在的新型抗卵巢癌药物应用于临床。     

肿瘤靶向DNA载体--转铁蛋白-多聚乙烯亚胺体外介导小鼠IL-12基因转染小鼠骨肉瘤细胞的实验研究

目的 评价转铁蛋白-多聚乙烯亚胺(Transferrin-polyethylenimine，Tf-PEI)靶向性转染小鼠骨肉瘤细胞的可行性。以Tf-PEI为载体，将小鼠IL-12基因导入小鼠骨肉瘤细胞。方法 以Tf-PEI为载体，将荧光素酶基因和小鼠IL-12基因分别导入小鼠骨肉瘤细胞，并检测其转染效率。以游离转铁蛋白竞争性拮抗Tf-PEI，并观察其对转染效率的影响。结果 Tf-PEI可以高效的、靶向性的转染小鼠骨肉瘤细胞。当N/P比值为5时，Tf-PEI的转染效率最高。游离转铁蛋白能够显著的拮抗Tf-PEI的转染。Tf-PEI还可以成功地将小鼠IL-12基因导入小鼠骨肉瘤细胞。结论 Tf-PEI是一种高效、低毒、肿瘤靶向性的基因转染载体，它能成功地将mlL-12基因导入骨肉瘤细胞，广泛应用于体内外恶性肿瘤基因治疗的实验。     

人卵巢癌细胞SKOV3对硼替佐米和紫杉醇联合应用的药物敏感性及可能机制

背景与目的:蛋白酶体抑制剂硼替佐米是新型抗癌药物,体外对多种恶性肿瘤细胞均具有良好的疗效.本实验研究硼替佐米与紫杉醇单独及联合应用对人卵巢癌细胞株SKOV3的存活率和凋亡率的影响,并对糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和髓样白血病-1基因(Mcl-1)在其诱导细胞凋亡中的作用机制进行探讨,为临床治疗卵巢癌提供理论依据.方法:用50 nmol/L硼替佐米、90 nmol/L紫衫醇,或50 nmol/L硼替佐米联合90 nmol/L紫衫醇分别作用于SKOV3细胞12、24、36、48及72 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活性,并计算细胞存活率,Annexin-V/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测相关蛋白表达水平.结果:50 nmol/L硼替佐米和90 nmol/L紫衫醇联合作用于SKOV3细胞,12、24、36、48及72 h时间点细胞存活率分别为(65.2±5.8)%,(58.3±14.4)%, (35.3±5.0)%,(19.2±1.5)%和(11.4±2.5)%,与紫杉醇单用组比较,细胞生长抑制增强,差异有显著性(P<0.05).药物单独或联合作用细胞24 h后,紫杉醇单用组、硼替佐米单用组和两者联用组细胞凋亡率分别为(14.7±0.5)%、(15.1±0.8)%和(20.5±0.7)%,硼替佐米与紫杉醇联用组凋亡率显著增高(P<0.05).药物处理细胞后,经免疫印迹法检测p-GSK-3β和Mcl-1蛋白表达水平,硼替佐米与紫杉醇联用组p-GSK-3β和Mcl-1表达水平降低最为明显,分别为正常细胞组表达水平的(19.3±0.4)%和(31.6±3.1)%,差异均有显著性(P<0.05).硼替佐米和紫杉醇单用组中p-GSK-3β表达水平有所降低,分别为正常细胞组的(78.7±1.2)%和(85.1±1.6)%,Mcl-1表达水平分别为对照组的(68.2±4.5)%和(57.0±4.1)%,差异均具显著性(P<0.05).结论:硼替佐米与紫杉醇联用能增强人卵巢癌细胞对紫杉醇的药物敏感性,并促进GSK-3β磷酸化Mcl-1,使其降解,诱导细胞,GSK-3β/Mcl-1信号通路可能在硼替佐米与紫杉醇联用诱导凋亡中发挥了重要作用.     

丙戊酸对体外培养上皮性卵巢癌细癝KOV3细胞增殖的影响

目的:研究丙戊酸(valproic acid,VPA)对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶2、9(matrix metallo-proteinase-2、9,MMP-2、9)和上皮性钙黏附素(E-cadherin)表达的影响。方法:将VPA以不同浓度(0、1、2、3、4和5mmol/L)、不同作用时间(24、48和72h)作用于SKOV3细胞,在相差显微镜下观察细胞形态的变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;用流式细胞仪测定细胞周期动力学变化;用免疫细胞化学方法检测VEGF、MMP-2、MMP-9和E-cadherin蛋白表达情况;用流式细胞仪测定SKOV3细胞VEGF、MMP-2、MMP-9和E-cadherin蛋白含量。结果:1)3mmol/L作用48h后SKOV3细胞形态出现明显变化。2)不同浓度(0、1、2、3、4和5mmol/L)VPA作用不同时间(24、48和72h),作用72h时,细胞抑制率分别为1.08%、5.41%、18.92%、32.70%和48.65%,呈现明显的剂量依赖关系,差异有统计学意义,P=0.004;不同浓度(0、1、2、3、4和5mmol/L)VPA作用不同时间(48和72h)后,首先引起细胞周期分布的改变,随剂量加大和用药时间延长,凋亡率逐渐升高。3)3mmol/L VPA作用48h后与对照组相比,SKOV3细胞质中VEGF、MMP-2和MMP-9棕色颗粒减少,E-cadherin蛋白棕色颗粒增多。SK-OV3细胞VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白含量明显减少,E-cadherin蛋白含量明显增多。结论:VPA抑制SKOV3细胞生长,其作用机制可能与其下调VEGF、MMP-2、MMP-9表达和上调E-cadherin表达有关。     

IL-12转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其机制

背景与目的:卵巢恶性肿瘤发病率、复发率、转移率均较高,有研究表明IL-12具有明显的抗肿瘤作用.本研究探讨白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)对人卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用机制及其对裸鼠皮下种植瘤成瘤能力的影响.方法:应用脂质体转染技术将含有小鼠IL-12全长基因的质粒转染到SKOV3细胞(SKOV3/IL-12组),同时以空白质粒载体转染SKOV3细胞(SKOV3/neo组)和未转染SKOV3细胞作为对照.ELISA法检测3组细胞上清中IL-12表达.MTT法检测3组SKOV3细胞的抑制率和细胞倍增时间.建立裸鼠皮下卵巢癌种植模型,分别接种SKOV3/IL-12、SKOV3/neo、SKOV3细胞,观察肿瘤生长情况.ELISA法检测裸鼠血清中IL-12及γ-干扰素(gamma interferon,IFN-γ)的表达,免疫组化法检测裸鼠种植瘤中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、微血管密度(microvessel density,MVD)及干扰素诱生蛋白-10(IFN-gamma-inducible protein 10,IP-10)的表达.结果:转染48、60 h后细胞上清中IL-12蛋白表达量,SKOV3/IL-12组[(473.0±38.0)pg/ml、(522.0±32.0)pg/ml]高于SKOV3/neo组[(16.0±1.3)pg/ml、(18.0±1.6)pg/ml]及SKOV3组[(16.0±1.2)pg/ml、(17.0±1.4)pg/ml](P＜0.01).SKOV3/IL-12组细胞增殖抑制率为63.7%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),SKVO3/IL-12组细胞倍增时间(45.8±2.7)h明显长于SKOV3/neo细胞组(27.6±2.2)h和SKOV3组(28.2±2.1)h(P＜0.01).裸鼠皮下卵巢癌种植模型中,SKOV3/IL-12组裸鼠成瘤率(5/8)低于对照组(8/8)(P＜0.01);平均成瘤时间[(15.0±5.0)天]长于SKOV3/neo组[(7.9±3.2)天]和SKOV3组[(7.8±2.4)天](P＜0.01);SKOV3/IL-12组种植瘤体积、重量和裸鼠体重低于SKOV3/neo组和SKOV3组(P＜0.01),种植瘤生长速度缓慢,抑瘤率达61.3%.SKOV3/IL-12组裸鼠血清中IL-12、IFN-γ表达量高于SKOV3/neo组和SKOV3组(P＜0.01).SKOV3/IL-12组裸鼠种植瘤中IP-10阳性率(100%)高于对照组(P＜0.01),VEGF阳性率(62.5%)及MVD低于对照组(P＜0.01).结论:转染IL-12能有效地抑制SKOV3细胞生长;转染IL-12的SKOV3/IL-12细胞在裸鼠皮下的成瘤能力降低;IL-12可通过诱导IFN-γ诱生IP-10抑制肿瘤血管形成而实现其抗卵巢癌的作用.     

雄黄抑制卵巢癌细胞株SKOV3增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 研究中药雄黄主要成分As₄S₄对卵巢癌细胞株SKOV3细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法 不同浓度As₄S₄(20 μmol/L、40 μmol/L、60 μmol/L、80 μmol/L),处理SKOV3细胞24 h,48 h,72 h后,透射电镜观察细胞形态变化;MTT法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化;RT-PCR法和Westernblot法检测As₄S₄对卵巢癌细胞株SKOV3细胞Bcl-2和Bax mRNA和蛋白的表达影响。结果 不同浓度As₄S₄处理的卵巢癌细胞株SKOV3,细胞增殖受到抑制,作用呈明显的浓度、时间依赖性,差异有统计学意义(P＜0.01);流式细胞仪进行细胞周期DNA成分分析结果显示,随着As₄S₄浓度的增加SKOV3细胞G₀/G₁期细胞百分比明显降低,S期细胞百分比上升;Bcl-2的表达随药物作用浓度的增加而递减,Bax的表达随药物作用浓度的增加而增强。结论 四硫化四砷具有抑制SKOV3细胞生长增殖的作用,其作用机制与诱发细胞凋亡和调节Bcl-2与Bax表达有关。     

Effects and mechanisms of endostatin on the growth of ovarian cancer SKOV3 cells in vitro and in vivo

Objective To evaluate the inhibitory effect of Endostatin on ovarian cancer cell line SKOV₃ and to investigate the possible mechanism of the inhibition. Methods Using MTT, transmission electron microscope (TEM) and immunocytochemistry, the effects of Endostatin on the proliferation of SKOV₃ cells were studied. Nude mice were subcutaneously implanted with SKOV₃ cells. The cell apoptosis of implanted tumor was detected by TUNEL and TEM. The expressions of bcl-2 and bax in implanted tumor tissues were measured by RT-PCR and immunohistochemistry. Results Endostatin significantly inhibited the proliferation of SKOV₃ cells in vitro (P<0.01) and induced cell apoptosis, whereas the expressions of bcl-2 and bax were not changed obviously in SKOV₃ cell treated with Endostatin. The mean tumor weight of Endostatin treated group was markedly lower than that of PBS control group (P<0.05). The expression of bcl-2 was down-regulated in Endostatin treated group, but bax was not influenced. Conclusions The results demonstrated that Endostatin might have anti-tumor effect on ovarian carcinoma. One of the important mechanisms of Endostatin effect of anti-angiogenic and anti-tumor activities might involve regulating the bcl-2/bax expression and inducing apoptosis. Biography: LIU Mei-mei(1977–), female, candidate doctor of medicine, The Second Affiliated Hospital, Harbin Medical University, majors in gynecology.     

柠檬酸合成酶对卵巢癌SKOV3细胞上皮间质转化的影响

目的:探讨柠檬酸合成酶（citrate synthase,CS）对上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）细胞SKOV3上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）及生物学行为的影响。方法:利用Lipofectamine 2000体外瞬时转染化学法合成的CS siRNA,通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Western blot检测转染效率;Transwell实验检测转染前后SKOV3细胞侵袭和迁移能力的变化;Western blot检测转染前后上皮标记分子E-cadherin、间质标记分子Vimentin蛋白水平和Wnt通路关键分子β-catenin蛋白水平,实时荧光定量PCR检测转染前后EMT相关转录因子Slug、Snail和Twist的mRNA水平。结果:siRNA干扰序列显著降低SKOV3细胞中CS表达;CS低表达显著抑制SKOV3细胞的侵袭和迁移能力,促进上皮标记分子E-cadherin表达,抑制间质标记分子Vimentin表达,降低Wnt通路关键分子β-catenin表达;EMT相关转录因子Snail和Twist表达显著降低(P＜0.001,P＜0.01),Slug表达下降不显著(P＞0.05)。结论:CS低表达显著抑制卵巢癌SKOV3细胞EMT,其机制可能是通过降低Snail和Twist转录因子实现的,为卵巢癌的转移治疗提供初步的实验及理论基础。     

反基因V-erbB寡核苷酸对卵巢癌细胞株SKOV3的影响

目的 探讨反基因V-erbB寡核苷酸(Oligo)对卵巢癌细胞株SKOV3的影响.方法 将体外合成的经硫代磷酸修饰的反基因V-erbB Oligo作用于SKOV3卵巢癌细胞株,采用流式细胞术检测SKOV3细胞表达、增生指数及凋亡率.结果 终浓度为5 mmol/L反基因V-erbB Oligo对卵巢癌细胞具有显著作用(P＜0.01),癌细胞的p185蛋白表达、细胞增生均受到明显抑制(P＜0.01);细胞凋亡也显著增加.而叠加剂量的药物浓度并无叠加效应.结论 反基因V-erbB寡核苷酸能有效地封闭细胞原癌基因C-erbB的表达,但其剂量具有一定的饱和浓度.     

Id2通过非HLH结构域促进SKOV3细胞的侵袭性

目的：观察分化抑制因子2（inhibitor of differentiation2，Id2）基因转染卵巢癌SKOV3细胞后，对细胞生长和侵袭能力的影响，探讨№基因缺失螺旋-环-螺旋（helix—loop—helix，HLH）结构域后对SKOV3细胞的影响。方法：以携带野生型，d2、Id2-DBM和Id2-DBM-δHLH基因的质粒（peDNA3．1-Id2、peDNA3．1-Id2-DBM和pcDNA3．1-Id2-DBM-8HLH）经脂质体介导转染SKOV3细胞。采用Western印迹法和RT—PCR法检测转染后SKOV3细胞Id2、Id2-DBM和Id2-DBM-8HLH的表达水平；MTT法检测SKOV3细胞的增殖曲线；划痕试验和Transwell小室检测细胞的迁移能力；Western印迹法检测Id2对MCF-7细胞上皮钙黏附素表达的影响。结果：mRNA及蛋白水平显示质粒成功转入；细胞生长曲线显示各组细胞的增殖无显著差异；与空白对照组相比，转染peDNA3．1-Id2、pcDNA3．1-Id2-DBM和peDNA3．1-Id2-DBM-δHLH后，细胞的侵袭能力增强，且peDNA3．1-Id2-DBM和peDNA3．1-Id2-DBM-δHLH组细胞明显伴有上皮钙黏附素表达水平的降低。结论：Id2蛋白的过表达可促进卵巢癌SKOV3细胞的侵袭能力，与上皮钙黏附素表达水平的降低有关，且该作用在缺失HLH结构域后依然存在。     

喷他脒对卵巢癌SKOV3细胞抑制作用的体内体外研究

目的探讨喷他脒对人卵巢癌SKOV3细胞株及卵巢癌SKOV3细胞株裸鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法通过MTT法测定卵巢癌细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率;建立人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠转移瘤模型,按不同剂量喷他脒给药,观察并记录各组裸鼠及其皮下移植瘤的生长情况,计算肿瘤体积和肿瘤生长抑制率。结果经不同浓度的喷他脒处理后,卵巢癌SKOV3细胞生长明显受到抑制,且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性,凋亡率增加。在卵巢癌裸鼠皮下移植瘤动物模型中,喷他脒能够明显抑制移植瘤的生长,且呈剂量依赖改变,高剂量的10 mg/kg组喷他脒对肿瘤抑制作用更明显。结论 (1)喷他脒可以抑制卵巢癌细胞的增殖及诱导凋亡。(2)高、中、低3种喷他脒给药剂量对荷瘤裸鼠无明显毒性作用。(3)喷他脒对荷瘤裸鼠皮下移植瘤的生长有抑制作用,并呈剂量依赖。     

干细胞标志物在卵巢癌SKOV3细胞侧群细胞中的表达

目的：检测干细胞相关标志物在卵巢癌SKOV3细胞系侧群（side population,SP）细胞和非侧群（Non-SP）细胞中的表达差异,确定卵巢癌干细胞特异性标志物。 方法： Hoechst 33342染色检测SKOV3细胞中SP细胞的比例,流式细胞术检测SKOV3细胞的SP和Non-SP细胞中干细胞标志物CD133、CD117、CD44、ABCG2、ALDH1 的表达情况,荧光定量PCR检测SP和Non-SP细胞中 ABCG2、ALDH2、NANOG、OCT4、SOX2、CD133、CD117 mRNA的表达水平。 结果： SKOV3细胞中SP细胞比例为(1.56±0.35)%。 ALDH1、ABCG2在SP细胞中表达率分别为（87.3±5.76）%、（29.48±4.43）%,在Non-SP的表达率分别为（5.32±0.47）%、（3.01±1.69）%,差异有统计学意义（ P <0.01）;CD44在这两种细胞亚群中的表达率均高于99%（ P >005）;CD133、CD117在这两种细胞亚群中均不表达。 ALDH1、ABCG2、 NANOG、OCT4和SOX2 mRNA在SP细胞中的表达分别是Non-SP细胞的21.03倍（ P =0.001）、3.14倍（ P =0.001）、23.94倍（ P =0.001）、10.73倍（ P =0.009）和21.46倍( P =0001), CD133、CD117 mRNA在两种细胞亚群中均不表达。 结论： 人卵巢癌细胞株SKOV3中存在SP细胞亚群, ALDH1、ABCG2和NANOG、OCT4、SOX2 mRNA可能是卵巢癌干细胞标志物,为诊断及治疗卵巢癌提供了潜在的靶点。     

三氧化二砷对人卵巢癌SKOV3细胞VEGF表达的影响

目的：从转录及翻译两个水平观察As2O3对卵巢癌SKOV3细胞VEGF表达的影响,从而明确As2O3是否可以通过抑制卵巢癌细胞表达VEGF而达到抗卵巢癌血管生成的目的。方法：RT-PCR半定量法测定不同浓度As2O3作用于SKOV3细胞24h后VEGF mRNA含量的变化。用ELISA法测定不同浓度和作用时间下As2O3对SKOV3细胞培养上清液中VEGF蛋白表达的影响。结果：1μmol/L-4μmol/L As2O3能显著抑制VEGF mRNA的表达,且具有浓度依赖性。1μmol/L-4μmol/L As2O3能明显降低培养上清中VEGF蛋白表达,具有浓度依赖性,但随时间延长抑制作用减弱。结论：As2O3能通过降低卵巢癌SKOV3细胞VEGF mRNA表达及VEGF蛋白分泌抑制肿瘤血管生成。