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目的:探究miR-153对人胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)侵袭转移的影响及相关作用机制。方法:利用qRT-PCR检测miR-153在GBM中的表达;将miR-153转染至胶质瘤U251细胞后,应用qRT-PCR 验证转染效率;应用Western blot、Transwell及划痕实验检测U251细胞的上皮间质转化、细胞侵袭及转移能力的变化;应用qRT-PCR及Western blot检测ZEB2的mRNA和蛋白表达;利用质粒转染技术过表达miR-153后,同时过表达ZEB2,再应用Transwell及划痕实验检测U251细胞的侵袭及转移能力的变化。结果:与对照相比,miR-153在GBM中低表达;过表达miR-153显著抑制胶质瘤U251细胞的上皮间质转化、细胞侵袭及转移,并能够抑制U251细胞中ZEB2的蛋白表达;ZEB2过表达有效阻断了miR-153抑制U251细胞侵袭及转移的作用。结论:miR-153能够靶向下调ZEB2,进而抑制胶质瘤U251细胞上皮间质转化及细胞侵袭转移。 相似文献
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目的:观察电压-门控钠离子通道(voltage-gated sodium channel, VGSC)亚型nNav1.5在人脑胶质瘤组织中的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞迁移及侵袭的影响。方法:收集中国医科大学附属第一医院神经外科于2011年10月至2012年10月手术切除并经病理证实的脑胶质瘤组织标本68例,应用免疫组织化学S-P法检测脑胶质瘤组织中nNav1.5的表达。设计并化学合成nNav1.5基因特异性小干扰RNA(nNav1.5-siRNA),用脂质体介导转染胶质瘤U251细胞,应用Real-time PCR和Western blotting法分别检测U251细胞中nNav1.5 mRNA和蛋白的表达水平,并采用细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测U251细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:nNav1.5在人脑胶质瘤组织中表达的阳性率显著高于正常组织(72.6% vs 23.0%,P<0.01),并且其在高级别胶质瘤(WHO Ⅲ~Ⅳ级)组织中的阳性率明显高于低级别胶质瘤(WHOⅠ~Ⅱ级)组织(85.8% vs 52.9%,P<0.01)。nNav1.5-siRNA转染可显著抑制U251细胞中nNav1.5 mRNA和蛋白的表达(P<0.01);转染后U251细胞的迁移距离明显小于未转染细胞\[(0.019±0.015) vs(0.223±0.031)mm,P<0.01\],且其侵袭指数明显低于未转染细胞\[(2.99±0.15)% vs(6.77±0.26)%,P<0.01\]。〖JP2〗结论:nNav1.5在人脑胶质瘤组织中高表达,干扰nNav1.5表达可显著抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力,nNav1.5是胶质瘤恶性侵袭的调控因子并有望成为胶质瘤的新标志物和治疗靶点。 相似文献
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目的:观察Snail蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达情况,探讨Snail表达对人脑胶质瘤U251细胞侵袭的影响。方法:收集首都医科大学附属北京天坛医院及北京安贞医院神经外科手术切除的脑胶质瘤组织65例,应用免疫组织化学S-P法检测人脑胶质瘤组织中Snail的表达。体外化学合成Snail序列特异性小干扰RNA(Snail-siRNA),应用脂质体介导转染U251细胞;RT-PCR、Western blotting检测转染后U251细胞中Snail mRNA和蛋白、E-cadherin蛋白表达水平变化,并采用Transwell小室检测转染后U251细胞侵袭能力的变化。结果:与正常脑组织相比,人脑胶质瘤组织中Snail蛋白阳性表达率明显增强(66.2%vs0,P<0.01),并且Ⅰ~Ⅱ级的胶质瘤组织阳性Snail阳性率明显低于Ⅲ~Ⅳ级(44.8%vs83.3%,P<0.01)。Snail-siRNA转染抑制U251细胞中Snail mRNA和蛋白的表达。Snail-siRNA转染组U251细胞中E-cadherin蛋白的表达明显高于Ctrl-siRNA组与未转染组(0.64±0.21vs0.15±0.16,0.21±0.19,P<0.01)。Snail-siRNA转染显著抑制U251细胞的侵袭(87.0±2.4vs140.0±4.9,136.0±5.3;P<0.05)。结论:人脑胶质瘤组织高表达Snail蛋白,siRNA干扰Snail蛋白的表达可抑制胶质瘤U251细胞的侵袭。 相似文献
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目的:观察电压-门控钠离子通道(VGSCs)亚型nNav1.5在人脑胶质瘤组织中的表达,探讨nNav1.5表达对胶质瘤U251细胞迁移及侵袭的影响。方法:收集本科室手术切除的脑胶质瘤标本68例,应用免疫组织化学S-P法检测胶质瘤组织中nNav1.5的表达。设计合成nNav1.5特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),用脂质体转染至U251细胞,应用Real-time RT-PCR和Western blot法分别检测nNav1.5的mRNA和蛋白表达水平的变化,应用划痕实验和Matrigel侵袭实验检测U251细胞迁移和侵袭能力。结果:与正常组织相比,nNav1.5在胶质瘤组织中表达率明显升高(72.6% vs 23.0%,P < 0.01),并且其在低级别胶质瘤中(WHOⅠ~Ⅱ级)明显高于其在高级别胶质瘤(WHO Ⅲ~Ⅳ级)中的表达率(52.9% vs 85.8%,P < 0.01);siRNA显著抑制U251细胞中nNav1.5的mRNA和蛋白表达并明显降低U251细胞的迁移侵袭能力。结论:电压-门控钠离子通道nNav1.5在胶质瘤中高表达并促进U251细胞的迁移和侵袭能力,nNav1.5是胶质瘤恶性侵袭的调控因子,有望成为胶质瘤的新标记物和治疗靶点。 相似文献
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探讨AKT1基因对上皮性卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力的影响及相关分子机制。方法 针对AKT1基因,设计并构建shRNA质粒和真核表达质粒,双向调节SKOV3细胞中AKT1的表达,运用RT-PCR和western blot检测转染效率。运用Wound healing和Transwell-Matrigel方法检测转染前后细胞迁移和侵袭能力的变化。RT-PCR法检测与细胞运动侵袭相关分子CXCR4、VEGF、MMP-2、MMP-9和uPA在mRNA水平的表达变化。结果 成功构建AKT1基因的真核表达质粒pEF-1α-AKT1和靶向抑制AKT1基因的shRNA表达质粒pRNAT-AKT1。转染上皮性卵巢癌SKOV3细胞后,能有效调控p-AKT表达。参照未转染组和空载体转染组,外源性AKT1促进细胞迁移和侵袭,CXCR4、VEGF、MMP-2和uPA的mRNA表达水平升高。shRNA靶向抑制AKT1基因的表达可抑制细胞迁移和侵袭,CXCR4、VEGF、MMP-2和uPA的mRNA表达水平下降。结论 AKT1可能通过调控CXCR4、VEGF、MMP-2和uPA的转录水平来影响细胞侵袭和运动能力。 相似文献
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目的:研究microRNA-10a( miR-10a)对人脑胶质瘤细胞系U87MG侵袭性的影响.方法:脂质体包被miR-10a反义寡聚核苷酸(miR-10a antisense oligodeoxynucleotide,miR-10a-anti-ODN),转染胶质瘤U87MG细胞,并设无义miRNA转染组和空白对照组,... 相似文献
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背景与目的:Nir1是CCL18的跨膜受体,CCL18能与之特异性结合而促进乳腺癌细胞的侵袭与转移,但其在胶质瘤细胞中的作用尚不清楚。该文旨探讨Nir1在胶质瘤侵袭中的作用及分子机制。方法:应用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Nir1在不同胶质瘤细胞系中的表达;利用siRNA技术抑制U251细胞中Nir1的表达;采用Western blot检测转染后Nir1蛋白的表达和转染前后U251细胞中Akt磷酸化的情况;使用体外侵袭实验检测转染后细胞的运动和侵袭能力;采用F-actin聚合实验检测F-actin的聚合能力。结果:Nir1在各胶质瘤细胞中均呈高表达;小RNA干扰技术沉默Nir1基因后,U251细胞中Nir1的蛋白表达量明显下降,侵袭并穿透Matrigel胶的细胞数目明显比对照组少(P=0.00);在CCL18刺激后细胞内的F-actin聚合量比对照组减少;Akt磷酸化试验结果显示,对照组细胞在CCL18的刺激下Akt更易发生磷酸化,实验组细胞无论是否存在CCL18,Akt磷酸化都受到抑制。结论:在胶质瘤细胞中存在Nir1蛋白高表达,通过与细胞膜上CCL18特异性结合来调节胶质瘤细胞的F-actin聚合和Akt的磷酸化进而调控胶质瘤细胞的运动和侵袭能力。 相似文献
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目的 探讨信号转导与转录激活因子1(STAT1)对胶质瘤细胞系U251细胞周期的影响及其机制。方法 利用LipofectamineTM2000转染试剂体外瞬时将pcDNA3.1-STAT1转染入胶质瘤细胞系U251,将细胞分为Mock组(无转染)、空载组(转染pcDNA3.1)和STAT1组(转染pcDNA3.1-STAT1),采用Western blot法检测胶质瘤U251细胞中STAT1表达水平,MTT法检测转染STAT1的U251细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期指标,划痕实验检测细胞迁移指标,通过Western blot法检测转染细胞中P53、P21、bcl-2、Caspase-8的表达水平及变化趋势。结果 与Mock和空载组相比,STAT1组中STAT1蛋白表达量明显增高(P<0.05),细胞增殖明显减慢(P<0.05),G0/G1期细胞比例明显升高,细胞的迁移能力明显下降; P53、P21、Caspase-8表达明显增强(P<0.05),bcl-2表达明显减弱(P<0.05)。结论 高表达的STAT1对人脑胶质瘤U251细胞具有抑制增殖或促进凋亡的作用,并且STAT1可调控多分子信号转导通路,对脑胶质瘤的发生和发展起到了关键的作用。 相似文献