光动力疗法联合NS-398抑制Bcl-2促进QBC939细胞凋亡的机制研究

目的 研究光动力疗法(PDT)和选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398联合对人胆管癌细胞QBC939凋亡的影响及其机理.方法 QBC939细胞体外培养后分组:光动力组、NS-398组、联合实验组和空白对照组,分别将0、2、4、6、8、10 μg/mL浓度的血卟啉衍生物(HPD)在0、5、10、15 J/cm...     

阻断ErbB4受体对人胆管细胞癌QBC939细胞系增殖与转移的影响

目的:通过体外培养人胆管癌QBC939细胞系,阻断ErbB4受体,检测肿瘤生物学行为的改变,从而探讨人类第4表皮生长因子(ErbB4)受体介导人胆管细胞癌肿瘤生物学行为的分子机制.方法:体外培养人胆管癌QBC939细胞系细胞,分别加入终浓度为0μmol/L,1μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L,100μmol/L的AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用CCK-8法测量各组胆管癌细胞增殖情况,然后利用SPSS软件计算AG1478对人胆管癌QBC939细胞的半数抑制浓度(IC50值);根据IC50值选择使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用划痕实验检测各组胆管癌细胞迁移能力的变化.分别使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L浓度AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用Transwell小室法实验检测各组胆管癌细胞侵袭能力的变化.结果:AG1478以浓度依赖方式抑制QBC939细胞增殖,其IC50值为:49.14μmol/L;AG1478抑制ErbB4受体后,胆管癌QBC939细胞的迁移、侵袭能力减弱.结论:在体外抑制ErbB4受体能使胆管癌肿瘤细胞生长、迁移、侵袭能力减弱;ErBb4在胆管癌的发生、发展中具有重要的作用,ErbB4可能成为胆管癌分子治疗的新靶点.     

TRAIL联合5-氟脲嘧啶体外杀伤胆管癌细胞作用的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人胆管癌的作用及联合化疗药物5-氟脲嘧啶(5-FU)共同作用胆管癌细胞对TRAIL抗瘤活性的影响。方法:应用四氮唑蓝快速比色(MTT)检测单独应用不同浓度TRAIL(1、10、100、1000ng/ml)及不同浓度(1、10、100、1000ng/ml)TRAIL 10mmol/ml5-FU对胆管癌细胞QBC939活性的抑制作用。结果:单独应用(1、10、100、1000ng/ml)TRAIL作用于QBC939细胞后抑制率分别为15.6%、31.2%、37.5%、40.6%(1、10、100、1000ng/ml)TRAIL 10mmol/ml5-FU作用于QBC939细胞后抑制率分别为46.9%、62.4%、68.7%、78.1%,5-FU与TRAIL联合应用对QBC939细胞抑制率明显高于单独应用TRAIL(P<0.05)。结论:TRAIL通过诱导胆管癌细胞凋亡而起到抑癌作用,化疗药物5-FU能加强TRAIL的抗癌活性。     

PPAR-γ配体罗格列酮对胆管癌细胞增殖抑制作用的实验研究

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)配体罗格列酮(RGZ)对胆管癌细胞增殖的影响.方法 采用不同浓度RGZ对胆管癌细胞系QBC939进行干预,计算不同浓度下QBC939细胞的增殖抑制率,用流式细胞技术检测各浓度下细胞周期变化和凋亡发生率.结果 RGZ对胆管癌细胞有明显的增殖抑制作用,以1200 mg/L浓度组最为明显,最高增殖抑制率达83.66%;在1200 mg/L、600 mg/L、300 mg/L、150 mg/L、75 mg/L和37.45 mg/L组经48 h和72 h培养处理后,细胞增值抑制率与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.001).细胞周期亦受到明显的调控,高浓度组有62.77%细胞停滞于G0/G1期.结论 PPAR-γ配体RGZ在体外对胆管癌细胞系QBC939有明显的增殖抑制作用.     

内脂素对人胆管癌细胞QBC939侵袭及增殖影响的体外研究

目的:研究人内脂素(visfatin)对胆管癌细胞QBC939体外增殖和侵袭能力的影响,并初步探讨可能存在的机制.方法:培养胆管癌细胞QBC939,在不同浓度的内脂素作用不同时间后,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力,用Transwell小室检测内脂素(200ng/ml)24 h后对胆管癌QBC939细胞侵袭...     

FTY720对胆管癌细胞系QBC939增殖及侵袭的影响

目的：探讨FTY720对体外培养QBC939细胞系增殖及侵袭的影响。方法：体外培养QBC939细胞系,将其分为对照组、FTY720不同浓度给药组。通过MTT法、流式细胞仪检测周期和凋亡、细胞侵袭等实验观察FTY720对QBC939细胞系增殖及侵袭的影响。结果：当FTY720浓度为2400 ng/ml时,体外培养的QBC939细胞系的增殖受到明显抑制,抑制率为65．4％（ P〈0．05）;流式细胞仪检测提示QBC939细胞系被阻滞于G1期,并促进其发生凋亡;侵袭实验显示FTY720可以明显抑制QBC939细胞系的侵袭,当FTY720浓度为2400 ng/ml时,侵袭抑制率可达80％。结论：FTY720可抑制体外培养QBC939细胞系的增殖,诱导该肿瘤细胞凋亡,并且抑制其侵袭。     

吡格列酮对肝门部胆管癌QBC939细胞增殖、凋亡和侵袭力的影响

目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）配体吡格列酮（pioglitazone,PGZ）对胆管癌细胞增殖、凋亡和体外侵袭力的影响．方法：体外培养人肝门胆管癌QBC939细胞;采用流式细胞技术与TUNEL酶标记法检测PGZ对QBC939细胞增殖和凋亡的影响．通过Matrigel侵袭实验和过河实验检测PGZ对QBC939细胞体外侵袭力和运动能力的影响．结果：流式细胞仪分析显示,PGZ能明显抑制QBC939细胞增殖,使其停滞于G2／M期,促使诱导细胞凋亡;TUNEL酶标记显示凋亡的QBC939细胞出现凋亡小体;Matrigel侵袭实验和过河实验显示,随着PGZ浓度的增加,透过Matrigel膜的细胞数减少,过河时间延长（P〈0．01）,呈剂量一效应关系．结论：PGZ能明显抑制QBC939细胞增殖,诱导细胞凋亡,对QBC939细胞的体外侵袭力有明显的抑制作用．PPAR-γ配体PGZ有望成为治疗胆管癌新的切入点．     

三氧化二砷对胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对胆管癌癌细胞株QBC939的增殖抑制作用并初步探讨其机制。方法 胆管癌细胞株QBC939用不同浓度As2O3处理，活细胞计数和细胞克隆试验观察As2O3对细胞动力学的影响；丫啶橙荧光染色、透射电镜，TUNEL观察细胞凋亡；流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期变化；增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2单抗SABC免疫组化染色。结果 在0．75-6μmol/L范围内，As2O3明显抑制QBC939细胞增殖和诱导细胞凋亡，其作用随As2O3浓度增加和作用时间延长而增强；相应地PCNA和bcl-2表达减弱。流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰，并阻滞细胞周期的G2-M期。结论 As2O3可明显抑制胆管癌细胞株QBC939的生长、诱导癌细胞凋亡，有临床治疗胆管癌的潜在价值。     

PPAR-γ配体吡咯列酮对胆管癌细胞体外侵袭力的影响及其机制

目的探讨PPAR-γ配体吡咯列酮(PGZ)对胆管癌细胞体外侵袭力的影响及机制。方法体外培养人肝门胆管癌细胞系QBC939细胞;MTT法检测PGZ对QBC939细胞的增殖抑制率;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PGZ对QBC939细胞侵袭相关基因MMP-7、TIMP-1表达的影响;Matrigel侵袭实验和过河实验检测PGZ对QBC939细胞体外侵袭力的影响。结果MTT提示在24、48和72h干预点,PGZ显著抑制了QBC939细胞的生长(P<0.01);而12h干预点、浓度(5～40μmol/L)时,PGZ的细胞毒性作用不明显(P>0.05)。荧光定量PCR结果显示,PGZ能分别下调和上调MMP-7mRNA、TIMP-1mRNA的表达,但后者无统计学意义(P=0.125)。Matrigel侵袭实验和过河实验显示,随着PGZ浓度的升高,透过Matrigel膜的QBC939细胞数减少、过河时间延长(P<0.01),呈剂量-效应关系。结论PPAR-γ配体PGZ能抑制QBC939细胞的体外侵袭力,其机制可能与下调MMP-7的表达以及抑制QBC939细胞的运动有关。     

抵抗素体外对胆管癌细胞侵袭和转移的影响及其机制

目的:观察重组人抵抗素(resistin)对胆管癌细胞系QBC939增殖、侵袭、转移及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法:分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、Matrigel侵袭实验和迁移实验检测不同浓度的抵抗素对QBC939细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响;采用Western blot检测抵抗素对QBC939细胞内MMP-2蛋白表达的影响。结果:当抵抗素浓度高于10 ng/ml时,对QBC939细胞增殖具有明显的促进作用(P<0.01),并呈一定的剂量依赖性;经10、50、100 ng/ml抵抗素处理24 h后,QBC939细胞体外侵袭及迁移能力均较空白对照组明显增强(P<0.01);Western blot法检测抵抗素作用QBC939细胞24 h后MMP-2表达水平显著增加。结论:抵抗素对人胆管癌QBC939细胞的侵袭和转移能力有明显的促进作用,该作用机制可能与提高MMP-2表达水平有关。     

Influence of Photodynamic Therapy on Apoptosis and Invasion of Human Cholangiocarcinoma QBC939 Cell Line

Objective To investigate the effect of photodynamic therapy (PDT) mediated by hematoporphyrin derivative (HPD) on apoptosis and invasion of cholangiocarcinoma QBC939 cell lines. MethodsIn vitrocultured cholangiocarcinoma QBC939 cell line was exposed to 2, 4, 6, 8, 10, 12, and 14μg/ml HPD with 5, 10, and 15 J/cm2 light intensity, respectively. The optical density at 450 nm of the QBC939 cells was measured by CCK8 assay and its growth inhibition ratio was calculated. Flow cytometry and transwell migration assay were applied to detect cell apoptosis and invasion respectively. RT-PCR and immunocytochemistry analyses were used to detect expressions of vascular endothelial growth factor-C (VEGF-C), cyclooxygenase-2 (COX-2), and proliferating cell nuclear antigen (PCNA). Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was carried out to examine the secretion of VEGF-C and COX-2 in QBC939 cells. Results Exposure to HPD-PDT can significantly suppress the growth of QBC939 cells (allP<0.05). HPD-PDT can promote apoptosis of QBC939 cells at the early stage. When the concentration of HPD was 2μg/ml and light irradiation was 5 J/cm2, HPD-PDT had no obvious inhibitory effect on QBC939 cell growth, but can obviously inhibit cell invasion, and significant difference was observed between the HPD-PDT and control groups (P<0.01). The HPD-PDT can reduce the mRNA and protein expressions of VEGF-C, COX-2, and PCNA, and decrease the secretion of VEGF-C and COX-2 in QBC939 cells. Conclusion PDT could promote apoptosis and inhibit growth and invasion of cholangiocarcinoma cells QBC939in vitro.     

去甲斑蝥素和阿霉素对人胆管癌细胞QBC939的联合作用

目的研究去甲斑蝥素与阿霉素对人胆管癌细胞OBC939体外作用。方法以体外培养的人胆管癌细胞OBC939为实验模型，分别或联合应用不同浓度的去甲斑蝥素与阿霉素作用于癌细胞，光学显微镜下观察药物处理后癌细胞的细胞形态学变化，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法分析药物对癌细胞生长的抑制作用，流式细胞技术测定药物作用后癌细胞的细胞周期分布和凋亡率。结果去甲斑蝥素和阿霉素单独作用于癌细胞时都有增殖抑制作用，且呈剂量依赖性（P〈0．05）。两药合用对癌细胞的细胞毒作用优于两者的单纯相加。去甲斑蝥素和阿霉素两药联合使用可以使癌细胞阻滞于G0／C1期（P〈0．05），凋亡率明显升高（P〈0．05）。结论去甲斑蝥素、阿霉素无论单用或合用对癌细胞的增殖均有抑制作用，均能够明显改变癌细胞的细胞周期分布并诱导癌细胞出现凋亡，但二者合用有协同作用。     

Experimental Studies on Cyclooxygenase-2 Inhibitor Induced Cervical Cancer Hela Cell Apoptosis and Its Molecular Mechanism

Objective To investigate the Hela cells growth inhibition and apoptosis possible molecular mechanisms. Methods Hela cells were treated with various concentrations (100 μmol/L,200 μmol/L, 300 μmol/L,400 μmol/L) of NS-398 (selective for COX-2 inhibition). Cell growth was measured by MTT (Thiazolyl blue). Apoptosis was detected by double staining flow cytometry (FCM). Levels of PGE2 were measured by radioimmunoassay. The expres- sions of COX-2 protein were also examined by Western blot analysis. Results After treated with different concentrations of NS-398, the growth of Hela cells was suppressed significantly in a dose-and time-dependent manner (P<0.01). The NS-398 can induce apoptosis with the apoptosis rates at 8.53%-43.46% by FCM in a dose-dependent manner. The release of PGE2 was reduced in Hela cells with the values of 69.26 ± 2.13, 47.46 ± 2.18, 28.15 ± 1.64 and 17.01 ± 1.12, respectively, there was significant difference compared with control group (83.78 ± 1.11) (P<0.01). The NS-398 could inhibit the activity and expression of COX-2 in a dose- dependent manner and down-regulated the expression of COX-2 protein greatly. Conclusion NS-398 could inhibit the proliferation and increase apoptosis in human Hela cells. These effects may be depended on the inhibition of the expression of COX-2 and PGE2 by NS-398.     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对食管癌细胞株EC9706的生长抑制作用

目的:探讨NS-398对人食管癌细胞株EC9706的生长抑制作用。方法:采用3H-TdR掺入法检测不同浓度(0、10、20、50、100μmol/L)和作用24、48、72、96h的NS-398对细胞的增殖抑制效应;采用流式细胞术(FCM)及DNA片段分析法检测NS-398诱导的细胞凋亡情况。结果:EC9706经不同浓度的NS-398处理后,实验组3H-TdR掺入量明显减少,具有时间和剂量依赖关系,与对照组比较差异显著(P<0.05或P<0.001)。FCM检测发现实验组在G1期前出现亚倍体凋亡峰,细胞凋亡率达(45.23±1.08)%,并出现典型的细胞凋亡梯带;而对照组无凋亡峰出现,细胞凋亡率为(2.14±0.28)%,两组比较有显著性差异(P<0.001)。结论:NS398对食管癌细胞株EC9706细胞具有增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用。     

Effect of ligand pioglitazone activating PPAR-gamma on the invasiveness of cholangiocarcinoma cell in vitro and the expression regulation of related genes]

OBJECTIVE: To explore the effect and mechanism of ligand pioglitazone (PGZ) activating PPAR-gamma on the invasiveness of cholangiocarcinoma cell in vitro. METHODS: Human hilar cholangiocarcinoma cell line QBC939 was selected and cultured in vitro for this research. The rate of QBC939 cell growth inhibition was detected by MTT, and the influence of PGZ on the expression of MMP-7 mRNA and TIMP-1 mRNA was measured by using FQ-PCR. The in vitro invasiveness and mobility of QBC939 were quantified by Matrigel invasion assay and crossing-river test. RESULTS: Among the low concentration (5 micromol/L-40 micromol/L) groups at the point of 12-hours, PGZ did not show to inhibit significantly the growth of QBC939 cells (P>0. 05). However, the PGZ could down-regulate the expression of MMP-7 mRNA in QBC939 cells (P<0. 01), and up-regulate the TIMP-1 mRNA expression to be without obvious statistics significance (P>0. 05). At last, PGZ could reduce the number of QBC939 cell breaking through the matrigel and prolonging the time of crossing-river significantly (P< 0. 01) in a dose-dependent manner. CONCLUSION: For ligand PGZ to activate PPAR-gamma can inhibit the invasiveness of QBC939 cells in vitro via regulating the expression of MMP-7 and the mobility of QBC939 cells probably.