过氧化氢诱导HUVECs氧化应激模型的构建

目的 利用过氧化氢 (H2O2) 诱导人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cells, HUVECs) 构建体外氧化应激细胞模型.方法 H2O2分6个浓度梯度处理HUVECs不同时间, 倒置显微镜观察细胞形态变化, CCK-8法检测细胞存活率, 流式细胞术检测细胞凋亡率, DCFH-DA荧光探针和流式细胞仪检测细胞内活性氧水平, 筛选H2O2的最佳作用浓度和时间.结果 不同浓度H2O2处理细胞不同时间, 对HUVECs均有损伤作用;400、600、800μmol/L H2O2处理HUVECs 24 h, 细胞存活率显著降低 (P<0.05) , 800μmol/L H2O2作用HUVECs不同时间, 细胞存活率随处理时间延长逐渐降低 (P<0.01) ;各组H2O2处理HUVECs 24 h, 细胞凋亡率显著增加 (1 000μmol/L除外, P<0.05) , 坏死率亦显著增加 (100μmol/L除外, P<0.05) ;800μmol/L H2O2处理HUVECs不同时间, 细胞凋亡率随处理时间延长逐渐增加, 24 h时达到最高 (P<0.05) , 细胞坏死率亦逐渐增加, 48 h时达到最高 (P<0.05) ;各组H2O2作用HUVECs 24 h, 浓度400μmol/L时, 细胞内ROS水平达到最高 (P<0.01) , 800μmol/L H2O2处理HUVECs, 胞内ROS水平随处理时间延长而递增 (P<0.01) .结论800μmol/L H2O2与HUVECs作用24 h可构建体外细胞氧化应激模型.     

多器官功能障碍综合征时血管内皮细胞损伤的研究

目的 采用"创伤失血性休克-内毒素"二次打击建立大鼠多器官功能障碍综合征(MODS)动物模型,观察MODS所致血管内皮细胞损伤以及MODS过程中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA表达变化.方法 将SD大鼠90只随机分为对照组、全身炎症反应综合征组(SIRS组)和MODS组.对照组24只,其余2组各33只.对照组不放血和注射内毒素.SIRS组和MODS组用钳夹动物一侧股骨造成骨折和放血的方法复制大鼠创伤失血性休克的动物模型,使休克持续1 h后进行复苏.复苏成功30 min后仅MODS组腹腔注射内毒素(2 mg/kg).从MODS组在注射内毒素后开始计算,3组大鼠在24、36、48 h随机取8只处死并采集标本检测肺组织1CAM-1-mRNA表达,测定血液中内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)含量以及循环内皮细胞(CEC)数量.结果 MODS组ICAM-1mRNA表达在36 h时较24 h时明显升高(P<0.05),48 h进一步升高(P<0.05).相同时间点ICAM-1mRNA表达量在MODS组高于SIRS组(P<0.05),SIRS组高于对照组(P<0.05).SIRS组和MODS组随时间延长CEC数量逐渐增加,3个时间点相互之间的差异均有统计学意义(P<0.5).相同时间点CEC数量在MODS组高于SIRS组(P<0.05),在SIRS组高于对照组(P<0.05).MODS组NO含量36h时较24 h时明显升高,48 h时又下降,并且低于24 h时(P<0.05),相同时间点NO含量在MODS组高于SIRS组(P<0.05),在SIRS组高于对照组(P<0.05).MODS组随时间延长ET-1含量逐渐增加,48 h ET-1含量同24h时的差异有统计学意义(P<0.05).相同时间点ET-1含量在MODS组高于SIRS组(P<0.05),在SIRS组高于对照组(P<0.05).结论 SIRS和MODS时均有血管内皮细胞的损伤,MODS时更为严重和明显,表现为黏附分子表达增强,NO和ET-1分泌紊乱.     

氧化应激体外模型的构建及沙利度胺保护作用的研究

目的:通过构建体外氧化应激损伤模型,探讨沙利度胺(Thalidomide)的保护作用以及最佳的作用时间点和浓度。方法:体外氧化应激损伤模型采用脂多糖(LPS)构建,流式细胞术测定LPS最佳造模时间及浓度。MTT法测定沙利度胺的无细胞毒性浓度。流式细胞术测定沙利度胺最佳预处理时间及不同浓度沙利度胺的保护作用。结果:MTT结果显示沙利度胺浓度在0~125 mg/L范围内对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)基本是无损伤的,故选取沙利度胺最大浓度作为后续试验的浓度。流式细胞术结果显示,较低浓度的LPS即可引起凋亡,与处理6、12 h相比,0.25、0.5 mg/L LPS分别处理HUVEC 24 h后的凋亡率增加(P<0.05),且1 mg/L LPS处理HUVEC 24 h后凋亡率最高达到92%,相比处理6 h和12 h后的凋亡率,差异有统计学意义(P<0.05)。2 mg/L LPS处理HUVEC在各个时间点与1 mg/L LPS处理后的凋亡率基本没有差别。100 mg/L沙利度胺预处理6 h后凋亡率比模型组低,差异有统计学意义(P<0.05),但是与预处理12、24 h相比,凋亡率基本没有改变,差异无统计学意义(P>0.05)。此外,100 mg/L沙利度胺预处理后凋亡率(31.5%)相比10 mg/L(52.6%)和1 mg/L(68.6%)的沙利度胺预处理,凋亡率下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:氧化应激损伤模型已成功构建,可用于进一步研究;沙利度胺可以保护LPS诱导的氧化应激下的细胞损伤,为沙利度胺进一步应用于临床提供了很好的依据。     

地塞米松对穿支皮瓣成活率的影响

目的研究局部应用地塞米松对大鼠腹部穿支皮瓣成活率的影响。方法建立大鼠腹壁上动脉穿支皮瓣动物模型,随机分为2组,实验组术后皮瓣内注射地塞米松磷酸钠注射液(5mg/ml)0.2ml,对照组注射0.9%生理盐水0.2ml,术后24h、48h重复注射。术后1,2,3,7d取材,测定皮瓣坏死率和组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的含量。结果实验组皮瓣坏死率较对照组显著降低(P<0.01),SOD活力较对照组明显提高(P<0.05),而MDA和NO含量则降低(P<0.05)。结论局部应用地塞米松能提高穿支皮瓣的成活率。     

生地环烯醚萜苷类成分对AGEs损伤HUVEC的保护作用

目的观察生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷对晚期糖基化终产物（AGEs）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的保护作用。方法体外培养HUVEC,将细胞分为正常对照组、模型组、梓醇组及毛蕊花糖苷组,并设氨基胍组作为阳性对照。加入终浓度为0.05、0.1、0.5、1、5、10、100 μmol/L的药物分别预孵1 h后,加入200 mg/L的AGEs作为刺激物继续培养,24 h后用MTT法检测并计算药物对AGEs致HUVEC损伤的保护率。体外培养HUVEC,加入氨基胍及梓醇、毛蕊花糖苷（终浓度分别为1、10、100 μmol/L）预孵1 h后,加入终浓度为200 mg/L的AGEs,另设模型组及空白对照组,24 h后取各组细胞培养上清液,试剂盒测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）和NO;ELISA法测定内皮素（ET）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、转化生长因子-β(TGF-β)及白介素1β(IL-1β)。结果生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷（0.05、0.1、0.5、1、5、10、100 μmol/L）可减轻AGEs致HUVEC的损伤。与空白对照组比较,模型组细胞上清液中ROS、AngⅡ、MDA含量增加（P<0.05~0.01）,SOD活力和NO水平降低（P<0.05~0.01）,TGF-β、IL-1β分泌增加（P<0.05~0.01）。而梓醇、毛蕊花糖苷给药组（1、10、100 μmol/L）能不同程度的降低ROS、AngⅡ、MDA含量,升高SOD活力和NO水平,减少TGF-β、IL-1β分泌,与模型组比较具有显著性差异（P<0.05~0.01）。结论生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷可通过抑制氧化应激、调节内皮细胞分泌功能、抑制炎症因子及抗细胞粘连等保护血管内皮细胞。      

尿酸盐诱导的内皮细胞IL-1表达的研究

目的:通过体外研究探讨尿酸盐(Monosod ium-Urate MSU)直接诱导人血管内皮细胞株(Endothelial cell ofvessels,ECV)白介素-1(IL-1)表达及细胞存活度的影响。方法:对照组不用尿酸盐刺激;刺激组分别用尿酸盐溶液542μmol/L(1/4组)、1084μmol/L(2/4组)、1626μmol/L(3/4组)、2168μmol/L(4/4组),刺激内皮细胞24小时及以1626μmol/L(3/4组)浓度分别刺激内皮细胞1、4、8、24、48小时。用酶联免疫法,在全自动酶标仪上测定内皮细胞培养上清液中IL-1的表达,用MTT法观察细胞活力。结果:①不同浓度、同一时间:对照组和1/4组上清液中无IL-1的表达或表达很低,2/4~4/4刺激组随着尿酸盐浓度上升,IL-1表达较正常组明显提高,体现了浓度梯度关系,尿酸盐溶液2/4、3/4、4/4组与正常组比较均有统计学意义(P<0.05),尿酸盐溶液3/4、4/4组与2/4组比较,差异有显著性意义(P<0.05),4/4组与3/4组比较升幅不大。MTT观察显示:不同浓度的尿酸盐作用后细胞活力受到明显影响。从2/4~3/4浓度细胞活力轻度下降,4/4浓度细胞受到严重损害;②同一浓度、不同时间:IL-1在8小时开始有明显升高,24~48小时后上升至高峰,0~4小时内无明显差异(P>0.05),8、24、48小时各时段间差异有显著性意义(P<0.05)。结论:高尿酸刺激内皮细胞是一个炎症损伤反应过程,高尿酸血症是冠心病发病的高危险因子。     

硫胺素和核黄素对H2O2诱导的DNA氧化损伤的影响

目的 探讨硫胺素和核黄素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞ECV304的DNA氧化损伤的影响.方法 于细胞培养液中分别加入硫胺素(终浓度为10、100、500、1000 mg/L)或核黄素(终浓度为20、100、300、500 nmol/L)预处理24 h,给予H2O2(终浓度为25 μmol/L)反应30 min,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)分析DNA氧化损伤情况.以不加H2O2、硫胺素和核黄素者为阴性对照组;以加H2O2而不加硫胺素、核黄素者为阳性对照组.结果 H2O2诱导ECV304细胞DNA断裂损伤,SCGE分析显示,阳性对照组拖尾细胞率、彗星尾长、尾部DNA含量和Olive尾矩等指标均较阴性对照组升高;经10、100、500 mg/L硫胺素或20、100、300 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标均较阳性对照组显著下降(P<0.05或P<0.01);经1000 mg/L硫胺素或500 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 适宜浓度的硫胺素和核黄素能降低H2O2诱导的DNA氧化损伤,高浓度的硫胺素和核黄素不能保护H2O2诱导的DNA氧化损伤.     

硫胺素和核黄素对H2O2诱导的DNA氧化损伤的影响

目的 探讨硫胺素和核黄素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞ECV304的DNA氧化损伤的影响.方法 于细胞培养液中分别加入硫胺素(终浓度为10、100、500、1000 mg/L)或核黄素(终浓度为20、100、300、500 nmol/L)预处理24 h,给予H2O2(终浓度为25 μmol/L)反应30 min,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)分析DNA氧化损伤情况.以不加H2O2、硫胺素和核黄素者为阴性对照组;以加H2O2而不加硫胺素、核黄素者为阳性对照组.结果 H2O2诱导ECV304细胞DNA断裂损伤,SCGE分析显示,阳性对照组拖尾细胞率、彗星尾长、尾部DNA含量和Olive尾矩等指标均较阴性对照组升高;经10、100、500 mg/L硫胺素或20、100、300 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标均较阳性对照组显著下降(P<0.05或P<0.01);经1000 mg/L硫胺素或500 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 适宜浓度的硫胺素和核黄素能降低H2O2诱导的DNA氧化损伤,高浓度的硫胺素和核黄素不能保护H2O2诱导的DNA氧化损伤.     

丙泊酚对先天性心脏病肺动脉高压患者术后血管紧张素Ⅱ、内皮素、一氧化氮的影响

目的:探讨丙泊酚对先天性心脏病肺动脉高压患者术后血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)、内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)的影响.方法:将来本科就诊的46例室间隔缺损合并中、重度肺动脉高压患者随机分为治疗组和对照组,治疗组术后给予丙泊酚持续静脉输注,对照组未用药.2组均于术后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h采静脉血,采用放射免疫法测定血清Ang-Ⅱ、ET-1含量,采用硝酸还原酶法测定NO浓度.结果:①治疗组术后6 h、12 h、24 h、48 h、72h血清Ang-Ⅱ含量分别为(69.57±17.98)ng/L、(65.71±19.37)ng/L、(57.62±18.35)ng/L、(63.35±24.34)ng/L、(61.25±16.39)ng/L,对照组分别为(72.41±19.38)ng/L、(81.62±22.59)ng/L、(85.07±16.23)ng/L、(70.68±19.64)ng/L、(68.77±23.21)ug/L,2组比较差异有统计学意义(P<0.05).②治疗组术后不同时间点血清ET-l含量分别为(13.27±4.24)ng/L、(12.55±3.07)ng/L、(12.34±2.95)ng/L、(11.37±3.32)ng/L、(11.84±1.76)ng/L,对照组分别为(14.25±3.61)ng/L、(16.78±2.64)ng/L、(18.76±3.18)ng/L、(15.35±2.74)ng/L、(14.51±2.90)ng/L,2组比较除术后6 h外其他时间点差异均有统计学意义(P<0.05).③治疗组术后6h、12 h、24 h、48 h、72 h NO浓度分别为(25.69±7.31)ttmoL/L、(27.34±5.36)μmol/L、(26.58 4-6.21)μmol/L、(28.09±5.16)μmol/L、(27.89±4.55)μmol/L,对照组分别为(26.38±6.73)μmol/L、(22.51±5.08)μmol/L、(22.67±6.91)μmoL/L、(24.36±4.01)μmoL/L、(25.76±6.37)μmol/L,2组比较除术后6 h外其他时间点差异均有统计学意义(P<0.05).结论:先天性心脏病合并中、重度肺动脉高压患者术后给予丙泊酚输注,可明显降低血Ang-Ⅱ、ET-1含量,升高NO浓度,有利于降低肺动脉压力和肺血管阻力,改善术后心肺功能.     

原花青素对体外阿尔茨海默病的预防作用

目的:研究原花青素(PC)对体外阿尔茨海默病模型(AD)的预防作用。方法:H2O2100μmol/L诱导PC12细胞损伤18 h复制体外阿尔茨海默病模型,原花青素80 mg/L、40 mg/L、20 mg/L、Tempol 800μmol/L于造模前30 min预处理后,双抗体一步夹心法酶联吸附实验(ELISA)检测细胞上清液中硫氧还蛋白(Trx)含量;黄嘌呤氧化酶法检测细胞中的总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力;硫代巴比妥酸盐法测定细胞上清液的丙二醛(MDA)。结果:H2O2100μmol/L诱导PC12细胞损伤后,细胞内Trx浓度和T-SOD活力显著降低,MDA含量显著升高(P<0.01);原花青素各剂量组可增高Trx浓度和T-SOD活力,降低MDA含量(P<0.01,P<0.05)。结论:原花青素能减轻H2O2引起PC12细胞的氧化应激损伤。     

二氢杨梅素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的影响

目的 ：研究二氢杨梅素（DMY）对过氧化氢（H2O2）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响并探讨其作用机制。方法：用不同浓度DMY（5μg·mL-1,20μg·mL-1,80μg·mL-1）预处理保护HUVECs 12 h,再用0.5 mmol·L-1 H2O2干预12 h,用MTT法检测细胞活力;用Hoechst33258进行细胞核染色;并取上清液检测超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量;用流式细胞仪分别测活性氧（ROS）和细胞内钙离子含量。结果：DMY能明显提高H2O2（0.5 mmol·L-1）损伤后HUVECs存活率（P＜0.05）,增加上清液SOD活性,降低MDA含量,减少细胞内ROS表达,下调细胞内钙离子浓度,其中DMY 5μg·mL-1时效果最明显。结论：DMY对H2O2诱导内皮细胞损伤具有保护作用,其机制与清除细胞内ROS,抑制细胞内钙离子介导的细胞凋亡相关,浓度以DMY 5μg·mL-1时效果最明显。     

齐墩果酸对损伤血管内皮细胞的保护作用及其机制探讨

目的:探讨齐墩果酸(oleanic acid,OA)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及其机制?方法:培养HUVECs,分为正常组?H2O2模型组?H2O2+OA (0.25 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (0.50 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (1.00 ?滋mol/L)组?H2O2+维生素C(1.50 mmol/L)组?各组培养24 h后,通过MTT法检测细胞增殖能力,酶生化法测定上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,酶生化法测定细胞裂解液中的丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量?谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,流式细胞仪测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和细胞凋亡率?结果:OA能够恢复H2O2损伤的细胞活力,减轻H2O2诱导的LDH释放,减少H2O2诱导的MDA生成,恢复H2O2损伤的GSH-Px和SOD活力,清除H2O2诱导的ROS,减轻H2O2诱导的细胞凋亡,提高HUVECs细胞NO的生成?结论:OA对损伤血管内皮细胞有保护作用,这与OA能够启动HUVECs细胞内抗氧化防御机制,清除细胞内的ROS,提高HUVECs细胞NO的生成,抑制H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡有关?     

表皮生长因子对角膜成纤维细胞生长的影响

目的　研究表皮生长因子 (EpidermalGrowthFactor,EGF)对角膜成纤维细胞生长的影响。方法　通过含不同浓度EGF的培养基培养角膜成纤维细胞 ,分别于 2 4、48和 72h用 0 .5 %台盼蓝法对每组进行细胞活力的测定。结果　 0 .1、1.0mg/L的EGF在细胞培养 48、72h后对细胞生长有一定的促进作用 (P <0 .0 5 ) ,但在 2 4h时对细胞生长无明显影响 (P >0 .0 5 )。浓度为 0 .0 1mg/L的EGF对角膜成纤维细胞生长无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论　一定浓度的EGF对角膜成纤维细胞的生长具有促进作用     

PC12细胞应激损伤中能量限制的效应及SIRT3的表达

目的 研究H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤中,能量限制(CR)及SIRT3参与的调控效应.方法 实验分4组:H2O2组,H2O2+CR组,CR组和正常对照组;MTT法检测不同浓度H2O2作用下CR对细胞生存率的影响;TUNEL染色法检测过氧化氢作用后CR对细胞的凋亡的影响;免疫荧光检测PC12细胞中SIRT3的表达定位;RT-PCR及Western印迹检测SIRT3、Caspase-3的表达变化.结果 60μmol/L H2O2作用6 h后,H2O2组细胞生存率(74.01±2.21)%可维持在70%以上,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);120μmol/L H2O2作用下,H2O2组的细胞活力显著下降(38.22±3.34)%,后续研究选取60μmol/L H2O2浓度作为应激源;60μmol/L H2O2作用6 h后H2O2组细胞生存率(74.01±2.21)%与CR+H2O2组(97.26±1.92)%间比较差异有统计学意义(P＜0.05).TUNEL凋亡检测H2O2+CR组凋亡率较H2O2组显著降低.免疫荧光双染色证实PC12细胞中SIRT3为一种线粒体蛋白.Western印迹显示与正常对照组(5256±144)比较,CR组中SIRT3表达升高(6857±157),差异有统计学意义(P＜0.05)、H2O2组中表达降低(3786±160),差异有统计学意义(P＜0.05).与H2O2组(3786±160)比较,CR+H2O2组中SIRT3表达上升(5056±121),差异有统计学意义(P＜0.05).与正常对照组比较(5342±420),H2O2组中Caspase-3表达升高(8499±426),差异有统计学意义(P＜0.001).CR+H2O2组(5750±438)中Caspase-3表达较H2O2组表达下降(8499±426),差异有统计学意义(P＜0.001).RT-PCR显示与正常对照组(6204±134)比较,CR组(7214±148)中SIRT3表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05)、H2O2组中表达降低(4807±143),差异有统计学意义(P＜0.05).与H2O2组(4807±143)比较,CR+H2O2组中SIRT3表达上升(6195±166),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PC12细胞中,CR具有抗氧化应激损伤及凋亡的效应;CR可上调PC12细胞中SIRT3的表达,在H2O2诱导的PC12应激损伤中CR-SIRT3的调控具有保护效应,SIRT3是否具有延缓神经元衰老作用值得进一步研究.

Abstract：

Objective To study the regulation effects of CR (caloric restriction) and SIRT3 in the H2O2-induced oxidative stress injury of PC12 cell. Methods The cells were divided into four groups:H2O2, H2O2+CR, CR and control (high glucose). For control and H2O2 group, cells were cultured in DMEM containing 0.45% glucose; for group in CR condition, cells were treated with the medium containing 0.1% glucose. For groups with H2O2, the H2O2 was diluted in EMEM medium to obtain the final concentration containing 60 μmol/L. Viability of PC12 cells were measured by MTT assay. The medium was refreshed with different concentration of H2O2 (from 10 to 120 μmol/L). The absorbance of the samples was measured at 492 nm using a microtiter plate reader. We detected TUNEL-positive cells using the In Situ Cell Apoptosis Detection kit pretreated with CR and H2O2. Immunofluorescence double staining detected the expression and localization of SIRT3. RT-PCR and Western-blot mehtods detected the expression of SIRT3,Caspase-3. Results After pretreating with 60 μmol/L H2O2 for 6 h, the viability of PC12 cells in H2O2 group (74.01±2.21)% retained above 70%, and have statistical significance contrasted with control group (P＜0.05); After pretreating with 120μmol/L H2O2, the viability of PC12 cells declined significantly (38.22±3.34)%. So 60μmol/L H2O2 is our experiment concentration . The viability of H2O2 group (74.01±2.21)% was much lower than CR + H2O2 group (97.26±1.92)% (P＜0.05). After pretreating with H2O2, TUNEL staining showed the apoptosis cells of CR+H2O2 group decreased significantly contrasted with H2O2 group. The immunofluorescence double staining results showed that SIRT3was a mitochondria protein. Western-blot showed the expression of SIRT3 in CR group (6857±157) (P＜0.05) increased and decreased in H2O2 group (3786±160) (P＜0.05) contrasted with control group (5256±143). The expression of SIRT3 in CR + H2O2 group(5056±121)(P＜0.05)increased contrasted with H2O2 group(3786±160). We also detected that Caspase-3 in H2O2 group(8499±426)(P＜0.001 )was much higher than control group than (5342±420), but in the CR + H2O2 group (5750±438 ) theexpression of Caspase-3 was much lower than H2O2 group(8499±426) (P＜0.001). RT-PCR also showed that the expression of SIRT3 in CR group (7214±148) increased and decreased in H2O2 group (4807±143 ) (P＜0.05) contrasted with control group (6204 ± 134 ). The expression of SIRT3 in CR + H2O2 group (6195 ± 166) increased contrasted with H2O2 group (4807 ± 143 ) ( P＜0.05). Conclusion CR causes anti-oxidative injury and has apoptotic effects in PC12 cell. It up-regulates the expression of SIRT3 and the effects of CR-SIRT3 can prevent PC12 cell from H2O2-induced apoptosis. And SIRT3 may be a novel molecule of regulating target in the delay of neuronal senescence.     

毛钩藤碱对H2O2诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制

目的：观察毛钩藤碱（HS）对H2O2诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用,并初步探讨其机制。方法：选取出生1～2 d的大鼠乳鼠提取原代心肌细胞作为研究对象,用400 μmol/L浓度的H2O2刺激细胞,复制细胞氧化应激模型。将细胞分为4组：Control组、HS组、H2O2组、H2O2+HS组。采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞活性,采用Tunel法检测细胞凋亡情况,采用免疫荧光法检测细胞形态结构,采用蛋白质印迹法（Western blot）检测Bcl-2、Bax、Caspase 3、Cleaved-caspase 3、Nrf2及HO-1的蛋白水平表达情况。结果：细胞活力检测结果发现,与Control组比,H2O2处理6、12、24 h,细胞活性均显著降低（P ＜0.01）;与H2O2 组比,H2O2+1 μmol/L HS、H2O2+10 μmol/L HS组细胞活力显著升高（P ＜0.01）;与H2O2组比,H2O2+100 μmol/L HS组细胞活力显著下降（P ＜0.01）。细胞凋亡检测结果显示,与H2O2组比,H2O2+HS组细胞凋亡显著下降（P ＜0.05）,肌节结构相对完整;与H2O2组比,H2O2+HS组细胞Bax/Bcl-2、Cleaved-caspase 3/Caspase 3 蛋白比值下调（P ＜0.05）,Nrf2、HO-1 蛋白表达上调（P ＜0.05）。结论：HS对H2O2诱导的大鼠心肌细胞线粒体凋亡有保护作用,其机制可能通过Nrf2/HO-1信号通路发挥作用。     

糖基化终末产物对人内皮细胞分泌前列环素和内皮素-1的影响

目的 了解糖基化终末产物（AGES）对人内皮细胞分泌前列环素（PGI2）和内皮素-1（ET-1）的影响,以及α-硫辛酸（α-LPA）对其的影响。方法 采用酶消化法收集人脐静脉内皮细胞,经原代培养后随机分为4组：正常对照组、AGES组、正常+AGES组和AGES + α-LPA组;放免法测定培养24、48、72h时培养基中的PGI2和ET-1含量。结果 ①AGES组较正常对照组PGI2显著下降(P＜0.05),ET-1显著升高(P＜0.05);②AGES +α -LPA组较AGES组PGI2显著升高 (P＜0.05),ET-1显著下降 (P＜0.01)。结论 AGES对血管内皮细胞有损伤作用,α-LPA可减轻这种损伤,提示抗氧化剂可用于保护血管内皮细胞。     

三七总皂苷对高糖诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察三七总皂苷(PNS)对高浓度葡萄糖致大鼠视网膜微血管内皮细胞(RRCECs)损伤的保护作用和对细胞黏附分子-1(ICAM-1)的影响。方法体外原代培养RRCECs,并通过免疫荧光化学方法鉴定;用PNS作用于4~6代的RRCECs,实验分为正常组、高糖组(30 mmol/L)和高糖不同浓度PNS(20、50、100 mg/L)组,分别使用MTT比色法和台盼蓝计数法观察PNS对细胞活力及数目的影响,使用Western blotting检测药物作用前后ICAM-1的表达变化。结果 MTT比色法结果显示,PNS 50、100 mg/L作用48 h和72 h可明显减轻高糖造成的RRCECs损伤,提高RRCECs活力(P0.01);台盼蓝计数结果显示,在PNS作用48 h后PNS 100 mg/L组细胞数目明显增加(P0.01),72 h后PNS 50、100 mg/L组细胞数目均明显增加(P0.05)。Western blotting检测显示,随着PNS药物浓度的增高,高糖环境下RRCECs中的ICAM-1表达量逐渐减少(P0.05)。结论PNS可以减轻高糖引起的RRCECs损伤,减少高糖环境下RRCECs中ICAM-1表达。PNS对RRCECs的保护作用与ICAM-1表达调节之间的关系有待进一步研究。     

1, 25-二羟维生素D3对软脂酸诱导的胰岛素抵抗血管内皮细胞功能的影响

目的：探讨1, 25-二羟维生素D3[1, 25(OH)2D3]对软脂酸（PA）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs） 的胰岛素抵抗的影响及其可能作用机制。方法：用含0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9mmol/LPA 的DMEM培养基培养HUVECs,建立胰岛素抵抗内皮细胞模型。分别用0、0.01、0.1、1.0、10、100nmol/ L1, 25(OH)2D3干预,硝酸盐/亚硝酸盐荧光试剂盒测定NO含量,Westernblot法测定pAkt及peNOS蛋白的 表达,qPCR法测定VDR、ET-1的表达。结果：0.6mmol/L的PA培养HUVECs18h后,培养液中的葡萄糖浓度 耗减显著低于对照组,细胞活力降低,胰岛素抵抗的内皮细胞模型建立。PA干预后NO含量较对照组HUVECs 减少（ P ＜0.05）,1nmol/L1, 25(OH)2D3干预胰岛素抵抗的内皮细胞后NO含量增加,在1min时NO量达最 大值。1nmol/L浓度1, 25(OH)2D3干预胰岛素抵抗的内皮细胞后peNOS及pAkt的蛋白表达量明显增加（ P ＜ 0.05）,ET-1的mRNA表达水平明显减少（ P ＜0.05）。结论：1, 25(OH)2D3增加PA诱导的胰岛素抵抗血管内皮细 胞peNOS、pAkt的表达,增加NO产生,降低ET-1的表达,可能对胰岛素抵抗的血管内皮细胞存在一定的保护作用。     

硫氢化钠对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞的影响

目的 观察硫氢化钠(NaHS,外源性的H2S供体)对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的作用。方法 以0.125%胰酶和0.01%EDTA灌注法获得HUVECs,分别用5.5mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS及50μmol/L NaHS处理72h,采用MTT法检测各组细胞的存活率,Western blot法检测H2S生成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-Iyase,CSE)的变化。结果 MTT检测表明,25mmol/L葡萄糖组的HUVECs存活率比5.5mmol/L葡萄糖组下降28.37%(P<0.05),而50μmol/L NaHS和25mmol/L葡萄糖共同处理组的细胞存活率比25mmol/L葡萄糖组上升30.3%(P<0.05),50μmol/L NaHS组与5.5mmol/L葡萄糖组无明显差异(P>0.05)。与5.5mmol/L葡萄糖组相比,以25mmol/L葡萄糖处理72h后能使CSE蛋白的表达下降(P<0.05),而25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS 则能改善这种损害作用(P<0.05),CSE蛋白的表达比25mmol/L葡萄糖组增强。结论 高浓度葡萄糖降低人原代脐静脉内皮细胞的生长和存活率,减少CSE蛋白的表达,而NaHS能够减轻高浓度葡萄糖对CSE的作用。