HDAC6表达载体转染对胃癌细胞株SGC-7901生物学行为的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)过表达对胃癌细胞SGC-7901的增殖以及对化疗药敏感性的影响.方法:免疫细胞化学法筛选HDAC6表达阳性或表达相对高的胃癌细胞株;HDAC6真核表达载体转染胃癌细胞;WesternBlot进行鉴定;MTT法和克隆形成试验检测转染细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染细胞对常规化疗药诱导凋亡的敏感性.结果:胃癌细胞株HDAC6表达水平SGC-7901细胞(0.28±0.07)明显高于BGC-823细胞(0.19±0.04),差异具有统计学意义(P<0.05);转染细胞HDAC6蛋白表达水平明显高于空载体转染组及非转染组(3592±238vs1900±133.1686±177,P<0.05);细胞增殖能力转染组明显高于非转染组和空载体转染组(P<0.05);转染组细胞凋亡率明显低于空载体转染组和非转染组[(10.46±0.65)%vs(20059±0.88)%,(22.31±1.40)%,P<0.05].结论:HDAC6在胃癌细胞中呈阳性表达,可增强胃癌细胞SGC-7901的增殖能力,降低胃癌细胞对化疗药物的敏感性.HDAC6可能是胃癌治疗的潜在靶点.     

慢病毒介导siRNA干扰CEP55表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响

本文通过慢病毒介导siRNA干扰卵巢癌SKOV3细胞中心体相关蛋白55(CEP55)表达,以观察其对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。实验分为CEP55组(转染CEP55 siRNA慢病毒)、阴性对照组(转染不含CEP55 siRNA的慢病毒)和空白对照组(不处理)。结果显示:CEP55 siRNA慢病毒转染效率为(89.4±4.7)%,CEP55组CEP55的mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.05),第12、24、36、48、72 h时的OD(570)值显著降低(P＜0.05),细胞凋亡率[(23.7±6.9)%]显著增加(P＜0.05),穿膜细胞数目[(11.3±4.1)/个]明显减少(P＜0.05),细胞迁移距离[(245.8±33.7)μm]明显减小(P＜0.05)。提示慢病毒介导siRNA干扰CEP55表达可显著抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、促进其凋亡、降低其侵袭和迁移能力。     

KLF4对胃癌SGC-7901细胞株体外生长增殖的影响

目的探讨Krppel样因子4(krppel-like factor 4,KLF4)对人胃癌SGC-7901细胞株生长增殖的影响。方法以人胃癌SGC-7901细胞株为研究对象,脂质体介导转染pcDNA3.1IE-KLF4重组质粒并建立KLF4稳定过表达细胞株,以未转染KLF4基因和转染空质粒载体的胃癌细胞株为对照。用RT-PCR和免疫细胞化学法检测KLF4 mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期及增值指数。结果 RT-PCR和免疫细胞化学法检测示转染组细胞与未转染组和空载体组相比较,KLF4 mRNA和蛋白均明显表达(P<0.05)。流式细胞术检测显示转染组G1期细胞增多[(65.08±3.43)%,P<0.05],而S期和G2/M期细胞减少[(30.39±1.80)%、(4.53±1.66)%,P<0.05],增殖指数亦降低[(34.92±3.42)%,P<0.05]。结论 KLF4对SGC-7901细胞株体外生长增殖具有抑制作用。     

血管内皮生长因子-C在胃癌中的表达及其反义基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响

目的:探讨胃癌组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达与肿瘤新生淋巴管形成的关系。观察以pCI-neo为载体的反义血管内皮生长因子-C(Anti-VEGF-C)转染的人胃癌细胞SGC-7901中VEGF-C蛋白的表达,及其对人胃癌细胞生长的抑制作用。方法:取72例胃癌标本的癌旁组织,通过RT-PCR检测VEGF-C的mRNA表达;免疫组化检测VEGFR-3,计算出微淋巴管的密度并行相关统计分析。以脂质体转染法转染既往试验合成的重组质粒pCI-neo-anti VEGF-C到体外培养的人胃癌细胞株,以未转染组为对照,用免疫组化和Western blot分析VEGF-C基因及蛋白的表达,最后用MTT法及流式细胞仪分析其对细胞生长的抑制作用。结果:淋巴结转移阳性组中VEGF-C mRNA阳性表达85.7%,高于阴性组的20.0%(P<0.05);VEGF-C mRNA表达阳性组淋巴管密度6.36±1.66,阴性组3.95±1.52(P<0.05);淋巴结转移阳性组淋巴管密度6.65±1.57,阴性组3.75±1.47(P<0.05)。重组质粒pCI-neo-anti VEGF-C转染体外培养的人胃癌细胞株后,免疫组化和Western blot均显示pCI-neo-anti VEGF-C转染组无VEGF-C mRNA及其蛋白的表达,MTT检测表明pCI-neo-anti VEGF-C转染组活细胞数较其它各组均低(P<0.05)。结论:VEGF-C能促进癌旁微淋巴管增生、提高胃癌侵袭力;反义VEGF-C转染可封闭人胃癌细胞SGC-7901VEGF-C mRNA,减少其VEGF-C蛋白的表达,抑制其体外生长。     

siRNA干扰Msi1对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、侵袭与转移的影响。方法针对Msi1 mRNA序列设计合成siRNA,转染SGC-7901细胞。RT-PCR法检测Msi1基因表达;Westernblot检测survivin、caspase3及MMP-9表达;MTT法检测SGC-7901细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果Msi1 siRNA能有效抑制胃癌SGC-7901细胞中Msi1的表达,与空白对照组比较,Msi1 siRNA组SGC-7901细胞生长、增殖速度减缓(P<0.05);survivin、MMP9蛋白表达水平显著下调(P<0.05),而caspase3蛋白表达水平上调(P<0.05);Msi1 siRNA组凋亡率增高。结论沉默Msi1对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、侵袭与转移有负性调节作用。     

小干扰RNA沉默鸟苷酰环化酶C基因促进胃癌细胞的凋亡

目的:利用RNA干扰技术,研究靶向鸟苷酰环化酶C(Guanylyl cyclaseC,GC-C)的小干扰RNA(siRNA)在体外对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法:利用pSilencerTM4.1-CMV neo通过siRNA表达载体法制备GC-CsiRNA,将GC-CsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞,流式细胞检测技术及原位末端标记(TUNEL)法检测转染前后细胞的凋亡。结果:流式细胞仪结果分析示转染组平均凋亡率为5.48%±0.10%(48h)和5.63%±0.11%(72h),较对照组0.50%±0.09%明显增加(P<0.05)。TUNEL检测见特有的凋亡征象,对照组则无明显变化。结论:沉默鸟苷酰环化酶C基因可促进胃癌细胞凋亡,可能为临床探索胃癌生物治疗提供新的靶点。     

血管内皮生长因子小干扰RNA诱导胃癌细胞凋亡机制的研究

目的 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是重要的血管生成因子之一,目前在许多肿瘤组织中均发现VEGF有较高水平的表达,靶向VEGF的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)可明显抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡.文中进一步探讨VEGF siRNA诱导人胃癌细胞SGC7901凋亡的机制.方法 将培养的人胃癌细胞SGC7901分成空白对照组、慢病毒NC-Lv阴性对照组及慢病毒VEGF-siRNA-Lv干扰组,病毒感染96h后,分别提取各组细胞总RNA及蛋白,RT-PCR法检测各组细胞bcl-2及P21 mRNA的表达水平,Western blot 检测各组细胞SIRT1及P53蛋白的表达水平.结果 与空白对照组及阴性对照组相比,RT-PCR显示VEGF-siRNA-Lv组细胞bcl-2 的mRNA表达明显下调(P<0.05),P21 mRNA表达则明显上调(P<0.05),Western blot 显示VEGF-siRNA-Lv组细胞SIRT1蛋白表达下调(P<0.05),P53蛋白表达则明显上调.结论 VEGF siRNA可通过下调SIRT1蛋白的表达,导致P53蛋白表达上调,并调控其下游P21、bcl-2靶基因的转录,从而诱导胃癌细胞SGC7901的凋亡.     

miR-365对胃癌SGC-7901细胞的作用及其机制

摘要 目的：探究miR-365对胃癌细胞的作用机制。方法：提取人正常胃黏膜上皮细胞ＲGM-1和胃癌SGC-7901内的miR-365,通过RT-PCR测定其表达的差异;采用脂质体转染的方法将miR-365转入细胞中。MTT法检测转染后的SGC-7901增殖情况;流式细胞术检测转染后细胞的凋亡情况;Western blotting检测转染48h后p21及Cyclin D1的表达。结果： miR-365的表达显著低于RGM-1细胞 (P<0.05)。转染miR-365 mimics后, miR-365转染组中miR-365表达显著高于空白对照组和阴性对照组。转染2d后,空白对照组中miR-365的OD值显著高于干扰组细胞,差异显著(P<0.05)。miR-365 转染组细胞的凋亡率明显增加 (P <0.05)。转染后的p21蛋白表达量显著升高,而Cyclin D1的表达量显著下降 (P <0.05).结论：转染miR-365促进细胞凋亡的同时也抑制了胃癌细胞的增殖。     

脂质体介导c-myc反义寡核苷酸诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

目的体外研究C-MYC反义寡核苷酸(ASODN)对人宫颈癌HELA细胞凋亡的影响,寻求提高肿瘤细胞放射敏感性的方法。方法免疫组化、流式细胞术、半定量RT-PCR法鉴定ASODN的有效性;GIEMSA染色、流式细胞术检测凋亡指数(AI)、DNA LADDER检测细胞凋亡。结果转染后,免疫组化结果显示C-MYC蛋白表达降低;半定量RT-PCR结果显示C-MYC MRNA表达较空白对照组及阴性对照组明显减弱(P<0.05)。GIEMSA染色可见凋亡小体;流式细胞术结果显示转染后凋亡指数为(10.29±0.66)%,转染ASODN(C-MYC)联合放射的凋亡指数为(16.83±0.57)%,均明显高于空白对照组(1.79±0.19)%(P<0.05);DNA LADDER呈现具有凋亡特征的梯带。结论本实验所设计的ASODN能有效地抑制C-MYC基因的表达;转染ASODN(C-MYC)能够显著增加HELA细胞凋亡,从而提高肿瘤细胞的放射敏感性。     

调控microRNA-99b表达对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用

 [目的] 探讨上调microRNA-99b(miR-99b)表达对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用及可能的机制。[方法] 宫颈癌SiHa细胞分正常对照组、阴性对照组和miR-99b调控组。利用siPORT NeoFX Transfection Agent，阴性对照组细胞转染Cy3 dye labeled PremiR Negative Control，miR-99b调控组细胞转染Pre-miR-hsa-miR-99b miRNA Precursor。实时定量PCR方法检测miR-99b表达，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot检测靶基因细胞分裂周期25A（CDC25A）蛋白表达。[结果] 实时定量PCR结果显示，miR-99b调控组细胞，miR-99b表达增加107.23倍。正常对照组、阴性对照组和miR-99b调控组细胞增殖率分别为（3.26±0.44）%、（3.65±0.47）%和（2.24±0.45）%，细胞凋亡率分别为（8.12±1.54）%、（8.75±1.67）%和（14.26±1.70）%，细胞CDC25A蛋白表达分别为0.50±0.06、0.59±0.05和0.31±0.05。与正常对照组和阴性对照组比较，miR-99b调控组细胞增殖率、凋亡率和CDC25A蛋白表达差异均有统计学意义（P＜0.05）。[结论] 上调miR-99b表达可通过降低靶基因CDC25A表达，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，miR-99b可能成为宫颈癌治疗的靶基因。     

RN Ai对胃癌SGC-7901细胞侵袭及迁移能力的影响

目的：运用RNA干扰（RNAi）技术抑制HER2基因的表达,探讨其对胃癌SGC‐7901细胞侵袭及迁移能力的影响。方法设计、构建RNAi片段靶向抑制HER2高表达的胃癌细胞株（HER2‐RNAi组）,以转染阴性对照系列（阴性对照组）及未转染的SGC‐7901细胞（空白对照组）为对照组。利用RT‐PCR和Western blot法检测各组胃癌SGC‐7901细胞中 HER2的表达情况;采用Transwell小室模型及划痕实验检测RNAi对胃癌细胞体外的侵袭和迁移能力的影响。结果 RNAi片段转染后SGC‐7901细胞的HER2 mRNA和蛋白表达水平明显下降（P＜0．05）;侵袭实验结果显示,HER2‐RNAi组的穿膜细胞数[（31．5±3．8）个／视野]显著低于未转染组[（103．6±4．5）个／视野];迁移实验结果显示,HER2‐RNAi组的穿膜细胞数[（63．6±5．1）个／视野]显著低于未转染组[（193．5±6．2）个／视野],各组间比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 RNAi沉默 HER2基因可以抑制胃癌SGC‐7901细胞的侵袭和迁移能力,提示RNAi基因沉默技术有可能成为进展期胃癌治疗的新方法。     

AZT对SGC7901胃癌细胞凋亡及Bax蛋白和PCNA表达的影响

目的:研究端粒酶抑制剂3′-叠氮3′-脱氧胸腺核苷(AZT)对SGC 7901胃癌细胞凋亡及Bax蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制.方法:将处于对数生长期的SGC 7901胃癌细胞分为对照组及1.0 mmol·L-1 AZT处理组,应用AZT 6 d后,采用MG-P-MY组合...     

血管内皮钙黏蛋白在非小细胞肺癌血管生成中的作用

［摘 要］ 目的:探讨血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）在非小细胞肺癌(NSCLC)血管生成中的作用,为NSCLC的抗血管生成治疗提供实验依据。方法:将人肺癌A549细胞分为空白对照组、干扰组和阴性对照组,VE-cadherin-siRNA瞬时转染A549细胞,实时定量PCR和Western blotting法检测VE-cadherin在各组细胞中表达水平;新型四唑氮盐（MTS）比色法检测A549细胞吸光度(A490)值的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;ELISA法分析A549细胞瞬时转染上清中VE-cadherin的表达水平;并分析上清液作用后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)A490值、各周期(G0/G1、G2/M和S)细胞比率、凋亡率和Matrigel小管形成数的改变。结果:干扰组VE-cadherin mRNA的表达水平（0.299±0.039）明显低于空白对照组（1.137±0.082）和阴性对照组（1.001±0.076）（P<0.05）;干扰组VE-cadherin蛋白的表达水平（0.297±0.045）明显低于空白对照组（0.833±0.119）和阴性对照组（0.794±0.095）(P<0.05);各组A549细胞A490值、各周期细胞比率和凋亡率比较差异无统计学意义;干扰组上清液中VE-cadherin的表达水平［(2.89±0.07) μg/L］明显低于空白对照组［（11.43±0.09）μg/L］和阴性对照组［（11.15±0.04）μg/L］（P<0.05）。干扰组与阴性对照组上清液作用后G0/G1、G2/M和S期HUVECs所占百分比比较差异无统计学意义(P>0.05);干扰组上清液明显抑制了HUVECs的增殖,作用24、48和72 h细胞增殖抑制率分别为29.2%、33.8%和30.1%;作用48 h干扰组HUVECs的凋亡率为27.12%±5.22%,显著高于阴性对照组(13.43%±3.50%)（P<0.05）。干扰组HUVECs小管形成数为1.53±0.31,显著低于阴性对照组（14.53±1.51）（P<0.05）。结论:VE-cadherin可能通过促进血管生成参与NSCLC的发生发展,有望成为NSCLC抗血管生成治疗的新靶点。     

miRNA-381 对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及机制

目的 观察miRNA-381 对胃癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T 及BSG823 和正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1 中miRNA-381 的表达;将AGS 细胞系分成两组,阴性对照组和miRNA-381 模拟物组,采用Lipofectamine TM 2000 分别转染miRNA-381 scramble 及mimics,采用CCK-8、Transwell 实验测定两组细胞增殖和侵袭的影响,Western blot 检测两组细胞肝受体类似物1（LRH-1）和扭曲相关蛋白1（Twist1）表达水平。结果 胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T 及BSG823 中miRNA-381 相对表达量较正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1 为低。miRNA-381 模拟物组在转染后72 和96 h OD 450 nm 值低于阴性对照组（P <0.05）;阴性对照组侵袭细胞数为（79.6±7.2）个,miRNA-381 模拟物组侵袭细胞数为（31.70±4.2）个,miRNA-381 模拟物组侵袭细胞数少于阴性对照组（P <0.01）;miRNA-381 模拟物组LRH-1 蛋白相对表达量为（0.39±0.04）,阴性对照组为1.0,miRNA-381 模拟物组LRH-1 蛋白相对表达量低于阴性对照组（P <0.01）;miRNA-381 模拟物组Twist1蛋白相对表达量为（0.51±0.05）,阴性对照组为1.0,miRNA-381 模拟物组Twist 1 蛋白相对表达量低于阴性对照组（P <0.01）。结论 miRNA-381 低表达于胃癌细胞系,miRNA-381 过表达可抑制胃癌细胞增殖和侵袭能力,其机制可能与下调LRH-1 和Twist1 的表达有关。     

miRNA-21-5p通过pdcd4靶向调控胃癌细胞对顺铂敏感性的机制研究

目的:探究微小RNA-21-5p（miRNA-21-5p）通过下调pdcd4基因表达调控胃癌耐药细胞系SGC-7901/DDP对顺铂敏感性机制的研究。方法:采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度的顺铂（0、1、2、4、8、16、32 μmol/L）对胃癌细胞系SGC7901及胃癌耐药细胞系SGC7901/DDP增殖抑制的影响。通过实时荧光定量PCR检测SGC7901/DDP细胞中瞬时转染miRNA-21-5p inhibitors后miRNA-21-5p相对表达量的变化。采用Western blot及实时荧光定量PCR检测转染组、无关序列转染组（NC组）及空白转染组（CON组）分别转染miRNA-21-5p inhibitors及无关序列后对靶基因pdcd4蛋白及mRNA表达量的影响。结果:MTT实验结果显示耐药细胞SGC7901/DDP相对于亲本细胞SGC7901对顺铂不敏感（P<0.05）。实时荧光定量PCR结果表明,转染组miRNA-21-5p表达量均明显低于NC组和CON组（P<0.01）,转染组pdcd4 mRNA表达量均明显高于NC组和CON组（P<0.01）。Western blot检测结果示,转染组pdcd4蛋白表达量均明显高于NC组和CON组（P<0.01）。结论:miRNA-21-5p表达水平的升高在一定程度上有利于胃癌细胞增殖,并通过下调pdcd4的表达,降低胃癌细胞对顺铂的敏感性。     

ALCAM基因1沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的 探讨活化白细胞黏附分子(ALCAM)基因沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并对其分子机制进行初步研究.方法 将ALCAM 和对照shRNA转染至胃癌细胞SGC-7901中,建立稳定细胞系,分别采用实时荧光定量(RT-PCR)技术和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测转染后SGC-7901细胞中ALCAM mRNA和蛋白水平;采用CCK-8法检测转染后SGC-7901细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测转染后SGC-7901细胞凋亡情况.采用胃癌肿瘤模型分析ALCAM基因沉默对肿瘤生长的影响.结果 ALCAM shRNA稳定细胞系ALCAM mRNA(1.01 ±0.26)和蛋白质的表达水平(1.66 ±0.23)低于对照 shRNA组细胞ALCAM mRNA(0.12 ±0.06)和蛋白质水平(0.23 ±0.09),差异有统计学意义(P<0.05).与对照shRNA稳定细胞系比较,ALCAM shRNA 稳定细胞系细胞增殖活性下降(P<0.05)、凋亡水平升高(P<0.05)、荷瘤小鼠肿瘤生长速度减缓(P<0.05).ALCAM下调并不影响总蛋白激酶B(AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达,而降低了AKT和mTOR磷酸化水平,抑制了mTOR活性,此外,ALCAM蛋白敲低提高了Caspase-3蛋白的表达水平,激活了凋亡信号通路.结论 ALCAM基因沉默能够降低胃癌细胞中ALCAM的表达水平,抑制胃癌细胞的增殖,增加细胞凋亡.     

促肝再生磷酸酶-3在胃癌患者组织中的表达及其对胃癌细胞生长的影响

目的 评价促肝再生磷酸酶-3(PRL-3)高表达对胃癌预后的影响及沉默PRL-3表达对SGC7901细胞增殖及移植瘤生长的影响.方法 免疫组化法检测137例胃癌标本中PRL-3的表达;Log-rank检验比较PRL-3高表达患者与非PRL-3高表达患者的总体生存率.构建表达人工PRL-3miRNA的慢病毒载体,转染SGC7901细胞并沉默其PRL-3表达,MTT试验评价对SGC7901细胞增殖的影响,移植瘤生长试验评估对胃癌生长的抑制作用.结果 137例原发灶组织中,85例(62%)为PRL-3高表达;26例(19%)为PRL-3中度表达;26例(19%)为PRL-3低表达.PRL-3高表达与胃癌肿瘤大小(P<0.01)、浸润深度(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.01)、肝转移(P<0.01)、周围脏器侵犯(P<0.01)及临床TNM分期(P<0.01)显著相关.PRL-3高表达患者的总体生存率显著低于PRL-3中等度或低度表达的患者(P<0.01).与转染空载体组比较,转染PRL-3 miRNA的慢病毒载体可抑制SGC7901细胞的增殖.荷瘤动物实验表明,转染PRL-3组肿瘤大小为(1.92±0.18)cm3,转染空载体组肿瘤大小为(4.74±0.39)cm3(P<0.01).结论 PRL-3的高表达与胃癌恶性进展有关,沉默PRL-3表达可抑制胃癌SGC7901细胞的增殖,并抑制移植瘤的生长.PRL-3胃癌生长中起着关键作用,可作为胃癌潜在的治疗靶点.     

幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株恶性转化的影响及机制研究

目的 探讨幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株恶性转化的影响并探讨其可能的机制。 方法 将胃癌AGS细胞分为细胞毒素相关基因A (CagA)质粒组(转染pCDNA3.1-CagA质粒)和阴性对照组(转染pCDNA3.1空白质粒)以及CagA质粒组(转染pCDNA3.1-CagA质粒和pEGFP-C1空白质粒)、CagA+程序化细胞死亡因子4(PDCD4)质粒组(转染pCDNA3.1-CagA质粒和pEGFP-C1-PDCD4质粒)和阴性对照组(转染pCDNA3.1空白质粒和pEGFP-C1空白质粒)。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行PDCD4、Twist1、上皮细胞钙粘蛋白E (E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin) mRNA水平,采用蛋白质印迹(Western blot)法测定各组细胞PDCD4、Twist1、E-cadherin、Vimentin蛋白水平,采用transwell小室测定细胞侵袭能力。 结果 CagA质粒组Twist1 mRNA、Vimentin mRNA表达量高于阴性对照组(P<0.05),PDCD4 mRNA、E-cadherin mRNA表达量低于阴性对照组(P<0.05);CagA+PDCD4质粒组Twist1 mRNA、Vimentin mRNA表达量低于CagA质粒组(P<0.05),PDCD4 mRNA、E-cadherin mRNA表达量高于CagA质粒组(P<0.05)。CagA质粒组Twist1蛋白、Vimentin蛋白表达量高于阴性对照组(P<0.05),PDCD4蛋白、E-cadherin蛋白表达量低于阴性对照组(P<0.05);CagA+PDCD4质粒组Twist1蛋白、Vimentin蛋白表达量低于CagA质粒组(P<0.05),PDCD4蛋白、E-cadherin蛋白表达量高于CagA质粒组(P<0.05)。CagA质粒组侵袭细胞数高于阴性对照组(P<0.05),CagA+PDCD4质粒组侵袭细胞数低于CagA质粒组(P<0.05)。 结论 幽门螺杆菌感染可增加胃癌细胞的侵袭能力,其机制可能为幽门螺杆菌独立因子CagA通过抑制PDCD4表达促进胃癌细胞的上皮-间质转化。      

预知护理干预对腹腔镜胃癌根治术后生活质量的影响

目的 研究预知护理干预对腹腔镜胃癌根治术后生活质量的影响。 方法 2012年8月-2016年2月选择在哈尔滨医科大学附属肿瘤医院进行诊治的早期胃癌患者132例,根据随机信封抽签原则分为观察组与对照组各66例,所有患者都给予腹腔镜胃癌根治术,对照组采用传统护理,而观察组采用传统护理同时也提供预知护理干预,观察与记录2组患者预后恢复情况。 结果 所有患者的手术都成功完成,无术中严重并发症发生,术后观察组肠鸣音恢复时间、住院时间以及肛门排气时间[(19.03±5.23) h、(76.76±22.30) h、(12.29±1.84) d]短于对照组[(25.98±6.76) h、(89.55±21.84) h和(16.39±1.73) d,均P<0.05]。观察组术后1个月的吻合口瘘、切口感染、肺部感染、肠梗阻、发热并发症发生率为4.5%,对照组为21.2%,观察组术后并发症发生率明显低于对照组(P<0.05)。观察组术后1个月的认知功能、躯体功能、角色功能、情绪功能、社会功能等方面的生活质量评分高于对照组(P<0.05)。 结论 预知护理干预在腹腔镜胃癌根治术中的应用能促进患者康复,减少术后并发症的发生,使患者最大限度的从手术中获益,提高其生活质量。      

沉默ADRB2基因对卵巢上皮性癌细胞生物学特性及顺铂敏感性的影响

目的 探讨下调β2型肾上腺素受体(beta-2 adrenergic receptor,ADRB2)基因表达对卵巢上皮性癌细胞顺铂敏感性以及细胞增殖、凋亡的影响及机制。 方法 以人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP为研究对象,采用小RNA干扰技术沉默ADRB2的表达,实验分为4组:ADRB2 shRNA1感染组、ADRB2 shRNA2感染组、阴性对照shRNA感染组、未感染的SKOV3/DDP细胞作为空白对照组。采用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40 μmol/L)顺铂作用后,采用CCK-8法检测4组卵巢癌细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测4组细胞的凋亡率,Western blot法检测4组卵巢癌细胞中caspase-9、Bcl-2及Bax蛋白的表达,采用单因素方差分析进行比较。 结果 不同浓度的顺铂处理后,4组细胞的生长抑制率均逐渐升高,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的顺铂耐药IC50分别为(29±8)μmol/L和(32±11)μmol/L,明显低于阴性对照组[(104±15)μmol/L,P<0.01]和空白对照组[(112±10)μmol/L,P<0.01];4组细胞的凋亡率逐渐增加,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的凋亡率均明显高于阴性对照组(P<0.01)。4组细胞的caspase-9、Bax蛋白的表达水平逐渐增加,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的caspase-9、Bax蛋白水平均明显高于阴性对照组(均P<0.05)。4组细胞的Bcl-2蛋白的表达水平逐渐降低,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的Bcl-2蛋白水平均明显低于阴性对照组(均P<0.05)。 结论 顺铂诱导可使ADRB2基因下调的顺铂耐药卵巢癌细胞的增殖减少、凋亡增加,其可能机制为通过调节caspase-9、Bcl-2和Bax凋亡家族蛋白的表达,从而增加细胞对顺铂的敏感性。