苦参碱对胃癌细胞培养基上清液诱导的人脐静脉内皮细胞增殖及迁移的抑制作用

目的:研究苦参碱(Matrine)对人胃癌细胞SGC-7901培养基上清液诱导的人脐静脉内皮细胞ECV-304增殖及侵袭能力的影响.方法:人胃癌细胞SGC-7901培养基上清液诱导人脐静脉内皮细胞ECV-304细胞增殖,不同浓度苦参碱干预后,MTT法检测内皮细胞增殖抑制率;采用Transwell共培养模型观察苦参碱对SGC-7901诱导血管内皮细胞ECV-304迁移的抑制作用.结果:15μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml、240μg/ml苦参碱干预48小时,ECV-304增殖抑制率分别为(20.8±1.3)%、(25.1±2.2)%、(40.9±1.1)%,(62.9±2.2)%,(77.2±1.9)%;呈剂量依赖(P<0.05).对照组和苦参碱浓度在2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml时内皮细胞迁移细胞数分别为350.8±51.3、230.0±13.7、144.1±12.6、 53.6±4.9,呈剂量效应关系.结论:苦参碱可抑制人胃癌细胞诱导的人脐静脉内皮细胞增殖和迁移能力.     

刺梨和金荞麦提取物抑制内皮细胞生长和血管生成

[目的]探讨刺梨提取物（CL）、金荞麦提取物（FR）对人脐静脉内皮细胞ECV-304增殖及凋亡的影响以及对鸡胚尿囊膜血管新生的影响。[方法]IC30浓度CL/FR单独或两药的1/2IC30浓度联合作用于ECV-304细胞,MTT法检测ECV-304细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测ECV-304细胞早期凋亡细胞比例;RT-PCR和Western blot法分析Ki-67及Bax、Bcl-2 mRNA/蛋白表达的变化。计算经100μg/mlCL、100μg/mlFR、CL50μg/ml＋FR50μg/ml联合作用后的7日龄鸡胚尿囊膜血管抑制率。[结果]IC30CL、IC30FR和1/2（IC30CL＋IC30FR）对ECV-304细胞的抑制率分别为30.87%±1.2%,32.93%±1.4%和43.67%±1.5%。CL、FR单独应用或联合使用均可明显抑制ECV-304细胞生长,呈剂量依赖性,且诱导凋亡。与单独用药组比较,联合用药组Ki-67、Bcl-2 mRNA/蛋白表达率均有显著降低,而Bax mRNA/蛋白表达均显著增高。CL、FR单独或联合应用均可抑制鸡胚尿囊膜新生血管的生长,以CL作用更明显。[结论]CL和FR单药及联合应用都具有抑制ECV-304细胞增殖和诱导凋亡的效用,两药联合比单药更明显。两药单用和联合都可明显抑制鸡胚尿囊膜血管生成。     

CL联合苦参碱抑制胃癌细胞共培养内皮细胞增殖与凋亡

目的探讨刺梨提取物CL联合苦参碱（m atrine）抑制人胃癌细胞SGC-7901培养上清诱导的人脐静脉内皮细胞ECV-304的增殖和凋亡及其机制。方法人胃癌细胞SGC-7901培养上清诱导培养人脐静脉内皮细胞ECV-304,多个质量浓度苦参碱、CL单药干预,或多个质量浓度苦参碱联合CL干预,M TT法检测内皮细胞增殖抑制率,中效原理法判断联合用药的相互作用;采用RT-PCR和蛋白印迹法分析K i-67、B ax、B cl-2 mRNA/蛋白表达变化。结果10 m g/L、20 m g/L、40 m g/L、80 m g/L、160 m g/L质量浓度的CL干预48小时,其抑制率分别为（15.1±2.1）%、（23.1±2.3）%、（34.1±3.3）%、（46.9±3.8）%、（68.8±2.9）%;15 m g/L、30 m g/L、60 m g/L、120 m g/L、240 m g/L质量浓度的苦参碱干预48小时,ECV-304抑制率分别为（20.8±1.3）%、（25.1±2.2）%、（40.9±1.1）%、（62.9±2.2）%、（77.2±1.9）%;CL＋苦参碱联合干预48小时,其抑制率分别为（33.8±2.1）%、（46.8±2.4）%、（84.2±2.0）%、（88.1±2.2）%、（94.8±0.9）%,以上均呈剂量依赖（P〈0.05）。IC50浓度（75 m g/L）CL、IC50浓度（75 m g/L）苦参碱、1/2 IC50（CL＋苦参碱）分别干预ECV-304细胞,抑制率分别为（40.7±1.3）%、（46.2±1.2）%、（51.4±0.7）%,联合用药抑制率增高（P〈0.05）;中效原理得出一定浓度范围两药联合为协同效应;与单独用药组比较,联合用药组K i-67、B cl-2 mRNA/蛋白表达显著降低,而B ax mRNA/蛋白表达显著增高。结论刺梨提取物CL、苦参碱均可抑制人脐静脉内皮细胞ECV-304的增殖,两药联合应用存在协同作用。     

沉默AFP基因可抑制肝癌HepG2细胞Survivin mRNA的表达

  目的  探讨肝癌HepG2细胞AFP基因沉默对Survivin表达的影响。  方法  通过siRNA技术下调肝癌HepG2细胞中AFP的表达,采用ELISA法测定转染前后上清液AFP浓度,MTT法检测转染前后细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞凋亡率,RT-PCR检测转染前后细胞Survivin mRNA水平。  结果  转染48 h后,实验组上清液中AFP浓度显著下降,肝癌细胞生长活性下降43.1%,凋亡率增加24.3%,HepG2细胞中Survivin mRNA表达降低78.0%。对照组和空白组的上述指标均无明显变化。  结论  沉默肝癌HepG2细胞AFP的表达,能有效抑制肝癌细胞生长、促进细胞凋亡,这一作用可能与细胞内Survivin mRNA水平降低有关。      

Raf激酶抑制蛋白增强卵巢癌细胞的化疗敏感性

摘 要　目的：探讨Raf激酶抑制蛋白（Raf kinase inhibitor protein,RKIP）对卵巢癌SKOV-3细胞化疗敏感性的影响。方法：以脂质体法将含有人全长RKIP基因的真核表达质粒pcDNA3.1-ssRKIP转染入SKOV-3细胞中,Western blotting检测SKOV-3细胞中RKIP蛋白的表达。不同浓度顺铂作用转染后的SKOV-3细胞,MTS法观察RKIP基因转染对顺铂处理后SKOV-3细胞增殖的影响,流式细胞仪检测RKIP基因转染对顺铂诱导SKOV-3细胞凋亡及细胞周期的影响。结果：pcDNA3.1-ssRKIP转染的SKOV-3细胞RKIP表达明显升高。不同浓度顺铂处理细胞24、48、72 h后,RKIP基因转染细胞增殖抑制率显著高于对照细胞（P<0.05）。用2.5 μg/ml顺铂作用SKOV-3细胞24 h后,RKIP转染细胞的凋亡率为（10.86±0.73）%,明显高于未转染细胞的（4.27±0.67）%和空质粒转染细胞的（4.02±0.43）%（P<0.01);在无顺铂作用情况下,RKIP转染细胞的凋亡率为（3.11±0.78）%,仍然高于未转染细胞的（1.51±0.13）%和转染空质粒细胞的（1.97±0.46）%（P<0.01)。细胞周期检测结果显示,RKIP转染细胞G0/G1期的比例下降,S期的比例增加,转染的SKOV-3细胞发生S期阻滞。结论：RKIP基因的转染可以增加卵巢癌SKOV-3细胞对化疗药物顺铂的敏感性。     

腺病毒介导Her2／neu siRNA对卵巢癌细胞的生长抑制作用

目的观察腺病毒介导的针对Her2／neu基因RNAi表达载体对Her2／neu的抑制及抑制后对卵巢癌SKOV-3细胞的生长的影响。方法通过构建的针对Her2neu的siRNA重组腺病毒（滴度为1．6×10^8PFU／mL）感染卵巢癌细胞SKOV-3后，采用Western—blot法观察Her2／neu基因的沉默效果，流式细胞仪分析细胞周期变化，cell Proliferation法检查细胞体外增殖能力。结果构建的重组腺病毒Adeno—Her2siRNA感染卵巢癌细胞SKOV-3后Her2／neu的蛋白表达降低；S期细胞较对照组未感染细胞比例增加；肿瘤细胞胞增殖速度缓慢（P〈0．05）。结论成功构建的重组腺病毒Adeno-Her2siRNA感染后可有效降低Her2／neu蛋白水平表达，阻滞细胞感染于S期，造成感染细胞生长速度减慢，有望为卵巢癌的基因治疗提供一种选择手段。     

长链非编码RNA FOXD2-AS1对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

  目的  观察长链非编码RNA（lncRNA）FOXD2-AS1对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响。  方法  收集2017年2月至2017年9月华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院（武汉市妇幼保健院）手术切除的16例卵巢癌患者的组织标本,采用荧光实时定量聚合酶链式反应（quantitative PCR,qPCR）检测组织标本、人卵巢癌细胞系及人正常卵巢上皮细胞系中的FOXD2-AS1表达水平。将HO-8910细胞分为实验组和对照组,分别转染siRNA-FOXD2-AS1和阴性对照RNA。细胞计数CCK-8法、Transwell迁移实验分别检测沉默FOXD2-AS1表达对卵巢癌HO-8910细胞增殖活性和迁移能力的影响。生物信息学方法预测FOXD2-AS1的下游靶基因,qPCR检测下游靶基因表达,Western blot法检测葡萄糖调节蛋白94（glucose regulated protein94,GRP94）和信号通路Wnt/β-catenin的蛋白表达。  结果  卵巢癌组织中的FOXD2-AS1相对表达量8.56±0.51明显高于正常癌旁组织的2.38±0.21（P < 0.01）,FOXD2-AS1在卵巢癌细胞系OC3、HO-8910、A2780、SKOV-3中表达明显增加（P < 0.05）。下调FOXD2-AS1表达明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖活性和迁移能力（均P < 0.01）。生物信息学方法显示,FOXD2-AS1靶向结合miR-150-5p后,可靶向结合GRP94基因。实验组和对照组miR-150-5p相对表达量分别为5.45±0.91和1.01±0.08（P < 0.01）,GRP94 mRNA相对表达量分别为0.32±0.05和1.02±0.11（P < 0.01）。GRP94和Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达减少。  结论  FOXD2-AS1在卵巢癌组织和细胞系呈高表达,下调FOXD2-AS1可调控miR-150-5p表达,抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖和迁移,可发挥抑癌基因的功能。      

PI3K特异性抑制剂LY294002对卵巢癌紫杉醇耐药细胞株逆转作用的研究

  目的  研究磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002对卵巢癌紫杉醇耐药细胞株（A2780/Taxol）多药耐药逆转的影响。  方法  将PI3K特异性抑制剂LY294002处理卵巢癌紫杉醇耐药细胞24 h后, 用CCK-8（Cell Counting Kit-8）法检测细胞的增殖速度、对紫杉醇敏感性的分析; 采用流式细胞技术检测细胞周期和凋亡。应用Western blot检测细胞中P-glycoprotein（P-gp）、Akt和p-Akt蛋白的表达情况。  结果  用LY294002处理A2780/Taxol细胞后细胞增殖速度变慢、对紫杉醇的半数抑制浓度（IC₅₀）降低。实验组和对照组细胞的凋亡率分别是（2.64±0.90）%和（10.98±1.16）%（P < 0.05）。LY294002处理后的G₀/G₁期细胞增加, S期明显减少, 差异有统计学意义（P < 0.05）。LY294002处理后的细胞与对照组相比P-gp和p-Akt的蛋白表达降低。  结论  LY294002能够有效的逆转卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol产生的多药耐药。      

卵巢癌腹水CD4+ CD25+调节性T细胞免疫抑制功能及机制的研究

  目的  研究卵巢癌患者腹水内CD4+ CD25+调节性T细胞（Treg）免疫抑制功能与患者临床病理特点的关系及其与患者初治及复发状态是否相关,并进一步探讨卵巢癌腹水内CD4+ CD25+调节性T细胞（Treg）发挥免疫调节性作用的具体机制。  方法  应用免疫磁珠分选法分选28例卵巢癌患者腹水内CD4+ CD25+调节性T细胞及CD4+ CD25- T细胞,采用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein succinimidylester,CFSE）标记CD4+ CD25- T细胞,CD4+ CD25+ Treg与自体CFSE标记CD4+ CD25- T细胞以1:1比例共培养,经流式检测CFSE表达及Modfit软件分析CD4+ CD25- T增殖指数（PI）,计算各标本内Treg对自体CD4+ CD25- T细胞增殖抑制率。应用中合性抗IL-10抗体及中合性抗TGF-β1抗体探究腹水内CD4+ CD25+ Treg介导免疫逃逸作用是否通过抑制性细胞因子IL-10或TGF-β1发挥作用。  结果  Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌腹水内CD4+ CD25+ Treg对自体CD4+ CD25- T细胞增殖抑制率为（75.72±17.04）%,较Ⅰ~Ⅱ期Treg抑制率（59.61±16.97）%显著增强（P < 0.05）。复发卵巢癌患者腹水内Treg对自体CD4+ CD25- T细胞增殖抑制率为（85.89±7.07）%,较初治卵巢癌患者腹水Treg抑制率（52.82±8.18）%显著增强（P=0.000 1）。共培养体系内加入中合性抗IL-10抗体或/及中和性抗TGF-β1抗体,Treg对自体CD4+ CD25- T细胞增殖抑制率较对照组均显著降低（P < 0.05）。  结论  卵巢癌腹水内CD4+ CD25+ Treg介导免疫逃逸能力与肿瘤分期及复发、初治状态相关,且发挥免疫逃逸作用可能是与分泌抑制性细胞因子IL-10及TGF-β1有关。      

内皮生长抑制素对血管内皮细胞和成纤维细胞的生物学作用

目的 研究重组人内皮生长抑制素对人脐静脉内皮细胞（ECV304细胞）和成纤维细胞（WI－38细胞）的增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用,探讨内皮生长抑制素抑制细胞增殖的有效性、特异性和可能的作用机制。方法 将细胞在含有内皮生长抑制素的培养液中孵育一定时间,观察其形态,并用MTT法测定细胞的增殖抑制率和ELISA法定量检测细胞凋亡程度。结果 重组人内皮生长抑制素可显著抑制ECV304细胞的增殖,其作用呈剂量依赖性,ED50约15－20μg/ml,并能诱导ECV304细胞凋亡（富集因子2．44）;对WI－38细胞无增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用。结论 重组人内皮生长抑制素具有特异性抑制血管内皮细胞增殖作用,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。     

靶向PI3Kp85α的siRNA抑制人卵巢癌细胞系生长的实验研究

  目的  探讨siRNA靶向抑制卵巢癌细胞磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基p85α(phosphoinositide 3-kinase regulatory subunitp85 alpha, P13Kp85α)表达后, 对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。  方法  应用siRNA靶向PI3Kp85α转染人卵巢癌细胞系SKOV3, Re-altime PCR检测目的基因mRNA表达, Western blot和免疫荧光技术检测PI3Kp85α、AKT1、AKT2和Ki67的表达变化; M_rr法和an-nexin V标记评价细胞的增殖活性和凋亡, 流式细胞法分析细胞周期.Transwell法分析侵袭能力。  结果  转染PI3Kp85αsiRNA后PI3Kp85αmRNA表达下降; PI3Kp85α、AKT1、AKT2和Ki67的蛋白表达水平均明显降低(P < 0.01)。卵巢癌细胞增殖活性明显受到抑制, 细胞周期在G₀/G₁期有明显的阻滞, 早期凋亡的细胞教明显增多, 细胞的运动迁移能力降低(P < 0.01), 侵袭能力减弱(P < 0.01)。  结论  靶向PI3Kp85α的siRNA技术可抑制卵巢癌细胞PI3Kp85α的表达, 进而抑制肿瘤细胞的生长, 这可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。      

氯喹促进顺铂诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及其机制

  目的  研究自噬对顺铂（cisplatin,DDP）诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡的影响,并初步探讨其可能机制。  方法  DDP和（或）氯喹处理胃癌SGC7901细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,MDC染色后荧光显微镜观察自噬囊泡,West. ern Blot检测自噬和凋亡相关蛋白。  结果  5 mg/L的顺铂作用于胃癌SGC7901细胞24 h,细胞凋亡率为21.07%±2.12%,同时观测到自噬囊泡增多和LC3-Ⅱ蛋白表达升高;氯喹特异性抑制自噬活性后,提高了顺铂诱导的细胞凋亡率（30.16%±3.54%,P < 0.05）;检测到凋亡相关蛋白Caspase-3和P53表达增加,Bcl-2蛋白表达下降。  结论  自噬在顺铂诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的过程中起保护作用,氯喹抑制自噬后,可能通过激活P53蛋白及灭活Bcl-2蛋白的表达来促进细胞凋亡,联合应用顺铂和氯喹有望成为胃癌治疗的新策略。      

LBH589对人上皮性卵巢癌OVCAR-3细胞增殖的抑制作用及机制探讨

  目的  探讨新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对人上皮性卵巢癌OVCAR-3细胞增殖抑制和促进凋亡作用及其机制。  方法  不同浓度LBH589处理细胞后, 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测对细胞增殖的影响; AO/EB(台盼蓝、吖啶橙溴化乙啶双染色法)检测细胞凋亡; Western blot检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白水平。  结果  LBH589明显抑制OVCAR-3细胞增殖, 48 h半数抑制浓度(IC50)为0.12μM。Western blot检测发现Caspsae-3、PARP-85kD剪切蛋白增加, Bax表达增加, Bcl-2表达减少。  结论  LBH589在体外条件下能明显抑制卵巢癌细胞OVCAR-3细胞增殖, 诱导细胞凋亡。      

MTDH基因下调抑制人乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖同黏附和迁移的研究

  目的  探讨MTDH基因对乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖、黏附和迁移能力的影响。  方法  采用RNA干扰技术, 下调乳腺癌MDA-MB-453细胞MTDH基因的表达.RT-PCR和免疫细胞化学技术检测MTDH下调效果.通过细胞增殖实验、黏附实验和迁移实验分别检测MTDH基因表达下调后细胞增殖、黏附和迁移能力的变化。  结果  MTDH-siRNA的转染效率达到90%, 转染48 11后实验组细胞MTDH的mRNA和蛋白质表达较对照组分别降低了45.8%和47.5%。MTDH表达下调后, 细胞增殖受到明显抑制, 48 h和72 h抑制率分别为41.5%和49.0%;细胞黏附力下降, 30min和60 imn黏附率较对照组分别降低42.0%和49.7%;细胞迁移能力显著降低, 迁移率下降33.3%。  结论  下调MTDH基因表达可明显抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞的增殖、黏附和迁移能力, 提示其在乳腺癌细胞的恶性生物学行为中发挥重要作用。      

LBH589或联合多烯紫杉醇对人卵巢癌OVCAR-3细胞增殖和凋亡的研究

  目的  探讨新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589或联合多烯紫杉醇（DTX）对人卵巢癌OVCAR-3细胞增殖和凋亡的影响。  方法  采用不同浓度LBH589、DTX或两者联合处理OVCAR-3细胞, 用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活力, 台盼兰、吖啶橙溴化乙啶（AO/EB）双染色法检测细胞凋亡; Western blot检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）、caspase-3、caspase-7、bcl-2、bax蛋白水平。  结果  LBH589、DTX均能抑制OVCAR-3细胞增殖, 诱导凋亡, 小剂量LBH589联合DTX作用更强。经Calcusyn软件分析证明两者联合具有明显的协同作用。Western blot检测发现caspsae-3、PARP-85kD剪切蛋白增加, bax表达增加, bcl-2表达减少。caspase-7无明显变化。  结论  LBH589、DTX能抑制OVCAR-3细胞增殖, 诱导凋亡, 两者联合有明显的协同作用。      

阻断NF-κB信号通路对人肝门部胆管癌细胞QBC939增殖的影响

  目的  研究阻断NF-κB信号通路对人肝门部胆管癌细胞QBC939生长增殖的影响。  方法  常规培养QBC939细胞, 采用PDTC(100μmol/L)阻断NF-κB信号通路, Western blot检测核内P65蛋白水平的表达, CCK-8检测细胞生长增殖抑制率, 流式细胞仪观察细胞周期与凋亡的变化情况。  结果  经PDTC阻断NF-κB信号通路后, 与对照组相比, 细胞核内P65蛋白水平明显下降(P < 0.05)。CCK-8检测显示细胞增殖活性明显受到抑制, 并随时间的延长而愈渐明显, 12、24、36h后细胞增殖抑制率分别为(22.53±0.03)%、(46.54±0.03)%、(58.02±0.03)%, 与对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05)。流式细胞仪检测发现实验组G₀/G₁期细胞比例高于对照组, 分别为(68.53±1.72)%、(38.3±1.35)%, 差异有统计学意义(P < 0.05);细胞凋亡率在实验组为(27.68±2.77)%, 对照组仅为(9.27±2.36)%, 差异有统计学意义(P < 0.05)。  结论  阻断NF-κB信号通路诱导人肝门部胆管癌细胞G₀/G₁期阻滞及细胞凋亡, 从而抑制细胞生长与增殖, 提示NF-κB信号通路组成性激活参与人肝门部胆管癌的发生发展, 以NF-κB信号通路作为治疗的靶点可能给人肝门部胆管癌带来新的治疗选择。      

siRNA特异性沉默TPX2基因对人宫颈腺癌Hela细胞体外生长的影响

  目的  应用TPX2-siRNA转染Hela细胞, 探讨TPX2基因沉默后对Hela细胞增殖和侵袭力及周期分布的影响。  方法  合成TPX2特异性的siRNA 4对, 随机siRNA阴性对照1对。Lipofectamine 2000介导siRNA转染Hela细胞株。RT-PCR检测转染前后mRNA表达的变化, Western blot检测转染前后蛋白表达的变化, MTT、流式细胞术(FCM)、Transwell小室和Matrigel基质侵袭实验观察细胞增殖、周期、及侵袭能力的变化。  结果  在600μL转染体积中, 在siRNA浓度为20μmoL/L时, siRNA和Lipoectamine2000以2.5:2比例搭配时, 转染效率最高, 24h为(98.33±1.53)%。TPX2mRNA沉默效果尤以TPX2-siRNA4最强达(82.5±0.43)%, 其蛋白表达水平明显降低, 抑制率达(63.4±1.05)%。TPX2-siRNA4转染组发生了明显的细胞周期S期停顿现象, 细胞增殖受到显著抑制。TPX2-siRNA4转染组穿膜细胞为13.33±1.53显著低于空白对照组54.33±2.52和阴性对照组53.00±4.00(P < 0.05)。  结论  siRNA干扰TPX2后能抑制Hela细胞增殖和侵袭, 影响其周期分布, 因此TPX2可以作为人宫颈腺癌基因治疗的候选靶点。      

PXD101对人乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡影响的机制探讨

  目的  探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂PXD101对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期及凋亡的影响及分子机制研究。  方法  应用不同浓度PXD101处理培养的乳腺癌细胞株MCF-7, 通过赛唑蓝比色(MTT)法和平板克隆形成实验检测药物对细胞增殖的影响; HoechSt33342荧光染色法观察细胞形态变化; 流式细胞仪PI染色法检测细胞周期变化以及AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况; Westen blot检测p21、CyclinB1、PARP、Bcl-2以及Bax的蛋白表达。  结果  PXD101以剂量时间依赖性抑制MCF-7细胞的增殖; 荧光显微镜观察发现细胞核碎裂, 出现凋亡小体; 0、0.1、1、10μmol/L PXD101作用24 h后, G₂/M期细胞比例增加, 分别为(12.66±1.55)%、(20.63±1.32)%、(23.20±1.82)%、(32.19±2.37)%(P < 0.05), 凋亡细胞也增加(P < 0.05);p21表达增多, CyclinBl表达减少, PARP剪切明显增加, Bcl-2表达减少, Bax表达增加。  结论  PXD101在体外条件下能够明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖, 诱导细胞周期阻滞及凋亡, 并呈剂量依赖性。      

海带多糖对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用

  目的  通过观察海带多糖(laminaria japonica polysaccharides, LJP)在体内外对人鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)细胞的抑制作用, 探讨其可能的抗癌机制。  方法  应用MTT法检测LJP对人NPC细胞株(HONE1和CNE2)增殖的抑制作用; 运用PI加Annexin V双染法检测LJP对HONE1细胞凋亡的影响; 以人NPC细胞株HONE1建立裸鼠皮下移植瘤模型及行体内抑瘤实验, 并在透射电镜(transmission electron microscopy, TEM)下观察移植瘤细胞超微结构。  结果  MTT显示LJP对人NPC细胞(HONE1和CNE2)的增殖有抑制作用, 且具有剂量相关性, 320 mg/L的LJP作用72h的抑制率分别为58.27%(P < 0.01)和55.00%(P < 0.01);流式细胞仪检测结果显示, LJP具有诱导HONE1细胞凋亡的作用, 凋亡率随着LJP浓度的增加而增高, 320mg/L的凋亡率为(49.51±1.89)%(P < 0.01)。体内实验中, LJP中、高剂量组抑瘤率分别为33.7%(P < 0.05)和47.0%(P < 0.01), 具有明显抑制移植瘤的作用, 而低剂量组的抑瘤率仅为16.4%(P > 0.05)。TEM结果提示癌细胞呈现凋亡特征的改变。  结论  LJP具有抑制NPC细胞生长的作用, 机制可能是通过诱导癌细胞凋亡而实现的。