KOD DNA聚合酶荧光PCR技术在肺结核诊断中的应用评价

目的 评估基于KOD DNA聚合酶的荧光PCR技术在肺结核诊断中的临床应用价值。方法 采集2019年10月至2020年4月疑似肺结核的住院患者痰标本,进行涂片抗酸染色、MGIT960液体培养、KOD DNA聚合酶荧光PCR和Taq DNA聚合酶荧光PCR检测。以临床诊断结果为参照,MGIT960液体培养法为金标准,荧光PCR与Taq DNA聚合酶荧光PCR法比较,评价KOD DNA聚合酶荧光PCR法检测MTB的效能。结果 共对337例临床样本进行检测,MGIT960液体培养法、Taq DNA聚合酶荧光PCR和KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB的敏感度分别为71.56% (156/218)、76.15% (166/218) 和76.61% (167/218)。KOD DNA聚合酶荧光PCR与MGIT960液体培养检测敏感度差异无统计学意义 (χ²=1.445,P=0.229>0.05)。KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB的敏感度和特异度分别为92.31% (144/156)和86.39% (146/169),涂阴患者中检测敏感度和特异度分别84.21% (64/76)和88.48% (146/165)。结论 KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB敏感度和特异度较高,能够为临床诊断肺结核提供依据,操作简便、快速,适合在我国各级结核病实验室推广。     

不同检测方法在结核性脑膜炎诊断中的应用价值

搜集陕西省结核病防治院2015年5月至2017年5月疑似结核性脑膜炎的住院患者519例,最终根据2010年国际结核性脑膜炎协作组制定的诊断标准,354例被诊断为结核性脑膜炎,其余165例排除结核性胸膜炎的诊断。评价BACTEC MGIT 960液体快速培养(简称“MGIT 960培养”)、RNA恒温扩增实时荧光检测技术(SAT-TB技术)、聚合酶链式反应-荧光探针检测技术(简称“PCR技术”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)技术对结核性脑膜炎的诊断价值。MGIT 960培养、SAT-TB技术、PCR技术、GeneXpert技术检测结核性脑膜炎的敏感度及其95%CI值分别为23.7%(84/354;19.5%~28.4%)、7.6%(27/354;5.2%~10.7%)、12.4%(44/354;9.3%~16.2%)、39.5%(140/354;34.6%~44.7%),特异度分别为100.0%(165/165)、100.0%(165/165)、100.0%(165/165)、99.4%(164/165)。GeneXpert技术检测的敏感度明显高于MGIT 960培养、SAT-TB和PCR技术。     

恒温扩增荧光检测法检测结核分枝杆菌复合群的应用价值

目的:评价恒温扩增荧光检测法检测痰样本中结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex, MTBC)的临床应用价值。方法:选择上海市6家结核病定点医院作为研究现场,收集2020年1月至2020年11月各家医院肺科门诊初诊的1848例疑似肺结核患者痰样本,分别进行恒温扩增荧光检测法与传统的痰涂片、BACTEC MGIT 960液体培养(液体培养)及GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测。以液体培养为参照标准,分析比较恒温扩增荧光检测法、痰涂片及GeneXpert的检测效能。结果:在1848例患者痰样本中,恒温扩增荧光检测法、痰涂片、液体培养和GeneXpert检测MTBC的检出率分别为16.7%(309/1848)、14.4%(266/1848)、25.4%(470/1848)和28.7%(530/1848)。以液体培养为参照标准,恒温扩增荧光检测法、痰涂片和GeneXpert检测的敏感度分别为58.94%(277/470)、52.77%(248/470)、80.43%(378/470);特异度分别为97.68%(1...     

三种实验室技术在涂阳患者中诊断肺结核及其耐药性的效能分析

目的 探讨BACTEC MGIT 960分枝杆菌液体培养(简称“MGIT 960培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和荧光PCR熔解曲线技术在涂阳肺结核患者中的检测效能和应用意义。方法 回顾性分析2016年10月至2018年2月沈阳市胸科医院收治的所有涂片阳性患者411例,经结核分枝杆菌抗原检测(MPB64检测)阳性并符合临床诊断标准,确诊肺结核患者392例,MPB64检测阴性且经基因芯片菌种鉴定为非结核分枝杆菌感染患者19例,比较MGIT 960培养、GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对涂阳肺结核患者的检测效能;以比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)为参考标准,分别比较三种方法对耐药表型和耐药基因的检测效能。结果 在临床确诊的392例涂阳肺结核患者中,MGIT 960培养、GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对痰标本检测的敏感度分别为96.17%(377/392)、99.74%(391/392)和92.09%(361/392),特异度均为100.00%(19/19)。以比例法药敏试验为参考标准,GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对利福平(RFP)耐药检测的敏感度相同,均为94.44%(119/126);荧光PCR熔解曲线技术在异烟肼(INH)、左氧氟沙星(Lfx)和阿米卡星(Am)耐药检测上的敏感度分别为74.84%(116/155)、83.33%(75/90)、44.00%(22/50);MGIT 960培养对RFP、INH、Lfx和Am耐药检测的敏感度分别为96.03%(121/126)、98.06%(152/155)、100.00%(50/50)、96.67%(87/90)。结论 GeneXpert法简便、快捷、安全,能够快速诊断肺结核及检测RFP是否耐药。荧光PCR熔解曲线技术可检测4种药物耐药情况,检测时间短,临床快速诊断耐多药肺结核/广泛耐药结核病,对指导临床用药具有重要意义。MGIT 960培养与比例法药敏试验耐药检测的一致性极高,是目前快速诊断结核病及一线药耐药检测的常用方法,可以缩短表型药敏试验时间。     

MTBDRplus 2.0技术对疑似肺结核和耐多药结核病患者的诊断价值

目的评价二代线性探针(GenoType MTBDRplus VER 2.0,简称"MTBDRplus 2.0")技术快速检测疑似肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌(MTB)及其对利福平和异烟肼耐药性的诊断价值。方法回顾性分析2018年1 12月就诊于西安市胸科医院的1065例疑似肺结核患者的实验室检测结果,剔除耐药不确定及痰标本污染者96例,最后纳入969例疑似患者作为研究对象。每例患者用同一份痰标本分别进行GeneXpert MTB/RIF(简称"GeneXpert")检测、MTBDRplus 2.0检测、BACTEC MGIT 960(简称"MGIT 960")液体培养,对培养阳性且鉴定为MTB的菌株进行MGIT 960药物敏感性试验(简称"MGIT 960药敏试验"),以MGIT 960液体培养结果为参考标准,评价MTBDRplus 2.0技术检测痰标本中MTB的检测效能;以MGIT 960药敏试验结果为参考标准,评价MTBDRplus 2.0技术检测利福平和异烟肼耐药性的检测效能。结果969例疑似肺结核患者中.MGIT 960液体培养检测MTB阳性409例,阴性560例。以MGIT 960液体培养检测结果为参考标准,MTBDRplus 2.0和GeneXpert检测疑似肺结核患者痰标本MTB的敏感度、特异度、Kappa值分别为91.0%(372/409)、93.8%(525/560)、0.848和92.9%(380/409)、92.5%(518/560)、0.850。以MGIT 960药敏试验结果为参考标准,MTBDRplus 2.0和GeneXpert检测利福平耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为89.8%(53/59)、95.8%(295/308)、0.817和91.5%(54/59)、95.8%(295/308)、0.828;MTBDRplus 2.0检测异烟肼耐药性的敏感度、特异度和Kappa值分别为80.4%(82/102)、96.3%(260/270)和0.791。结论 MTBDRplus 2.0技术对检出疑似肺结核患者痰标本中的MTB,以及对利福平和异烟肼的耐药性均具有较好的检测效能。     

不同细菌学与病理学检查技术对骨关节结核诊断的效能研究

目的:回顾性分析脓液标本细菌学检测技术和组织标本病理学检测技术诊断骨关节结核的检测效能。方法:以2016年1月至2018年12月在北京胸科医院住院治疗的213例送检同部位脓液和组织标本进行检测的疑似骨关节结核患者作为研究对象,取新鲜脓液标本进行涂片染色镜检、GeneXpert MTB/RIF(GeneXpert)检测、实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测和BACTEC MGIT 960液体培养(MGIT 960液体培养);组织标本经石蜡包埋后进行抗酸染色镜检和FQ-PCR检测。结果:根据骨结核临床诊断综合参考标准(CRS),186例纳入患者诊断为骨关节结核,其中124例为确诊结核患者,23例为高度疑似结核患者,39例为疑似结核患者;27例患者排除骨关节结核。与CRS比较,脓液标本涂片镜检、MGIT 960液体培养、FQ-PCR、GeneXpert以及组织标本抗酸染色和FQ-PCR检测的敏感度分别为28.7%(49/171)、49.0%(48/98)、58.1%(25/43)、87.5%(161/184)、48.6%(90/185)和85.4%(146/171);特异度分别为100.0...     

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药基因的结果分析

目的 分析和探讨荧光PCR熔解曲线法对结核病的诊断和耐药检测的应用价值。方法 收集2015年9月至2016年12月新疆维吾尔自治区胸科医院的976例疑似结核病患者的痰标本,运用探针荧光PCR熔解曲线法来检测结核分枝杆菌及其对利福平、异烟肼的耐药突变情况。以BACTEC MGIT 960液体培养法及液体药敏试验检测结果为标准,评价探针荧光PCR熔解曲线法鉴定结核分枝杆菌及其耐药突变检测的敏感度、特异度、一致率、Kappa值等。结果 以MGIT 960液体培养结果为标准,荧光PCR熔解曲线法鉴定结核DNA的敏感度为85.44%(135/158),特异度为94.01%(769/818),Kappa值为0.75,诊断符合率为92.62%(904/976)。以MGIT 960液体药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法对异烟肼耐药突变检测的敏感度为83.33%(20/24),特异度为94.59%(105/111),Kappa值为0.76,诊断符合率为92.59%(125/135);荧光PCR熔解曲线法对利福平耐药突变检测的敏感度为95.83%(23/24),特异度为95.50%(106/111),Kappa值为0.86,诊断符合率为95.56%(129/135)。结论 荧光PCR熔解曲线法检测速度快,对利福平和异烟肼耐药突变检测结果具有良好的敏感度和特异度,可用于临床上对结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药情况的快速筛查。     

交叉引物恒温扩增技术在初诊疑似肺结核患者诊断中的应用价值

目的: 评价交叉引物恒温扩增(cross-priming amplification,CPA)技术在初诊疑似肺结核患者诊断中的应用价值。方法: 选取2020年1月至2021年5月深圳市龙华区慢性病防治中心就诊的初诊疑似肺结核患者2408例作为研究对象。收集患者痰液标本分别采用萋-尼抗酸染色(acid-fast stain,AFS)法、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)液体培养法及CPA技术对治疗前痰液标本进行结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)检测,以MGIT 960液体培养法为参照标准,评价CPA诊断效能。结果: AFS法、MGIT 960液体培养法及CPA技术MTB阳性检出率分别为8.89%(214/2408)、27.99%(674/2408)及15.49%(373/2408),不同方法检测阳性率比较差异有统计学意义(χ²=314.619,P=0.000),其中MGIT 960液体培养法明显高于CPA技术和AFS法,而CPA技术高于AFS法,差异均有统计学意义(χ²=110.572、 292.158、 49.046,P值均=0.000)。以MGIT 960液体培养结果为参照标准,CPA检测MTB的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及符合率分别为52.37%(353/674)、98.85%(1714/1734)、94.64%(353/373)、84.23%(1714/2035)及85.84%(2067/2408),而AFS法分别为31.45%(212/674)、99.88%(1732/1734)、99.07%(212/214)、78.94%(1732/2194)及80.73%(1944/2408),其中CPA技术的敏感度[52.37%(95%CI:47.21%~59.64%)]明显高于AFS法[31.45%(95%CI:26.87%~35.72%)],差异有统计学意义(χ²=108.290, P=0.000)。CPA技术与MGIT 960液体培养法检测结果一致性较好(Kappa=0.592),而与AFS法一致性较差(Kappa=0.395)。涂阳培阴率为0.08%(2/2408),培养污染率为5.40%(130/2408),而CPA检测无效例数为0。结论: 初诊疑似肺结核分枝杆菌感染CPA技术阳性检出率和敏感度明显高于AFS法,且一致性好于AFS法,同时操作简单、快速、经济及无污染,对肺结核早期诊断具有应用价值。     

快速结核分枝杆菌菌型鉴定方法的应用评估

目的评估MGIT 960液体培养分枝杆菌阳性时,免疫胶体金法MPB64抗原检测及荧光探针PCR法在结核分枝杆菌快速菌型鉴定中的应用价值。方法临床MGIT960TM液体培养得到203例分枝杆菌阳性菌株,平行采用上述两种方法进行结核分枝杆菌菌型鉴定。结果免疫胶体金MPB64抗原检测法灵敏度为97.7%(169/173×100%),特异度为100%(30/30×100%);荧光探针PCR法灵敏度为100%(173/173×100%),特异度为96.7%(29/30×100%)。结论免疫胶体金法检测MPB64抗原及荧光探针PCR法作为液体培养时结核杆菌菌型鉴定的方法均是快速可靠的。免疫胶体金法检测MPB64抗原由于操作简便,实验要求条件低,更易为临床TB实验室接受。     

基因芯片与线性探针技术检测涂阳肺结核患者痰标本MTB耐药性的价值

目的 评价基因芯片技术与线性探针技术(GenoType MTBDRplus)快速检测MTB耐药性的临床应用价值。方法 选取西安市胸科医院2017年4月至2018年8月住院治疗的493例涂阳肺结核患者作为研究对象,收集其痰标本,痰标本量均不少于2ml。每例患者用同一份痰标本分别进行基因芯片检测、线性探针检测和BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960液体培养”),同时对培养阳性且鉴定为MTB的临床分离株进行MGIT 960液体药物敏感性试验(简称“药敏试验”)。以MGIT 960液体药敏试验结果为参照标准,分析基因芯片技术及线性探针技术检测涂阳肺结核患者痰标本MTB利福平和异烟肼耐药性的效能。结果 454例研究对象同时具有3种药敏试验检测结果。以MGIT 960液体药敏试验结果为参照标准,基因芯片法和线性探针法检测涂阳肺结核患者痰标本MTB利福平耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为89.0%(65/73)、96.1%(366/381)、0.82和90.4%(66/73)、96.1%(366/381)、0.83;检测涂阳肺结核患者痰标本MTB异烟肼耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为80.2%(93/116)、96.7%(327/338)、0.80和81.9%(95/116)、97.0%(328/338)、0.82。454例涂阳肺结核患者痰标本中,453例应用2种分子生物学检测方法检测MTB利福平耐药性结果相同,符合率为99.8%;445例应用2种分子生物学方法检测MTB异烟肼耐药性结果相同,符合率为98.0%。结论 基因芯片技术和线性探针技术(GenoType MTBDRplus)检测涂阳肺结核患者痰标本MTB利福平和异烟肼耐药性与MGIT 960液体药敏试验具有较高的一致性,二者均可为临床提供快速、特异的耐药检测结果。     

新型胶颗粒芯片技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究

目的 评估一种新型胶颗粒芯片技术[TruArray胶颗粒芯片(Gel element arrays),简称为“TruArray芯片”]用于痰标本中结核分枝杆菌及利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的检测效能。 方法 选取2016年8月在首都医科大学附属北京胸科医院就诊的149例疑似肺结核患者痰标本,分别进行涂片镜检、BACTEC MGIT 960快速液体培养系统(简称“MGIT 960”)、TruArray芯片和GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测,对液体培养阳性菌株进行测序菌种鉴定、MGIT 960药物敏感性试验(简称“药敏试验”)和耐药相关基因测序,分析TruArray芯片检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的检测效能。 结果 液体培养、GeneXpert和TruArray芯片对结核分枝杆菌的检出率分别为32.2%(48/149),53.7%(80/149)和57.0%(85/149),TruArray芯片和GeneXpert两种方法检出率差异无统计学意义(χ ²=0.34,P=0.560),但TruArray芯片检测阳性率高于液体培养(χ ²=18.59,P<0.01)。以MGIT 960试验结果为标准,TruArray芯片检测痰标本中结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为97.9%(47/48)和61.4%(62/101);以GeneXpert检测结果为标准,TruArray芯片检测结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为97.5%(78/80)和88.4%(61/69)。以MGIT 960药敏试验结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度分别为91.7%(11/12)和96.8%(30/31);以GeneXpert检测结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度为85.0%(17/20)和97.9%(47/48);以耐药基因测序结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度分别为92.3%(12/13)和100.0%(30/30)。以MGIT 960液体药敏试验结果为标准,TruArray芯片技术检测INH耐药的敏感度和特异度分别为78.6%(11/14)和93.8%(30/32);以耐药基因测序结果为判断标准,TruArray芯片检测INH耐药的敏感度和特异度分别为100.0%(11/11)和94.3%(33/35)。 结论 TruArray芯片检测技术快速、可靠,在结核病及耐多药结核病快速诊断方面具有非常好的应用前景。     

Application value of GeneXpert MTB/RIF system in diagnosis of pulmonary tuberculosis

为了解利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)在初诊肺结核患者诊断中的应用价值,作者收集了2015年1月至2016年12月浙江省嘉兴市第一医院就诊的初诊疑似肺结核患者361例,留取痰液标本分别进行涂片荧光金胺O染色镜检(简称“涂片镜检”)、结核分枝杆菌MGIT 320液体培养(简称“液体培养”)、GeneXpert MTB/RIF检测(简称“Xpert检测”)和固体比例法药物敏感性试验。最终临床诊断为:肺结核184例(50.97%),肺部感染162例(44.88%),非典型分枝杆菌肺部感染15例(4.15%)。361例疑似肺结核患者中,Xpert 检测的阳性率[32.41%(117/361)]明显高于涂片镜检[22.71%(82/361)](χ ²=8.49,P<0.05),与液体培养[26.32%(95/361)]比较不存在明显差异(χ ²=3.23,P=0.072),涂片镜检法与液体培养法比较差异无统计学意义(χ ²=1.26,P=0.261)。184例肺结核患者中,Xpert 检测的阳性率[63.59%(117/184)]高于涂片镜检[36.41%(67/184)]和液体培养[48.91%(90/184)](χ ²=27.17,P<0.01;χ ²=8.05,P<0.05);117例涂阴肺结核患者的Xpert检测阳性率[42.74%(50/117)]高于液体培养[24.79%(29/117)](χ ²=8.43,P=0.004)。以临床诊断为标准,Xpert检测初诊疑似肺结核患者的敏感度为63.59%(117/184),特异度为100.00%(177/177),正确指数为0.64。以固体比例法药物敏感性试验结果为金标准,Xpert 检测利福平耐药的敏感度为4/5,特异度为97.70%(85/87),正确指数为0.97。说明GeneXpert MTB/RIF在初诊疑似肺结核患者,尤其是涂阴肺结核患者中,检测结核分枝杆菌感染及对利福平耐药具有较高的效能。     

The diagnostic value of GeneXpert MTB/RIF of the lapping suspension of the thoracoscopic biopsy tissue in tuberculous pleural effusions

目的 评价内科胸腔镜胸膜活检组织标本研磨悬液行结核分枝杆菌GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)检测对结核性胸膜炎的诊断价值。方法 选择2017年1月1日至12月31日在沈阳市胸科医院胸膜炎病房住院,行内科胸腔镜检查的不明原因胸腔积液患者51例,均未经过抗结核药物治疗。所有患者胸膜活检组织标本一部分行常规病理检查,另一部分研磨处理后制成悬液,行BACTEC MGIT 960分枝杆菌液体培养(简称“MGIT 960培养”)及Xpert 检测。以MGIT 960培养阳性并菌种鉴定为结核分枝杆菌和胸膜组织活检病理肉芽肿性病变并抗酸染色阳性作为确诊标准,评价活检组织研磨悬液行Xpert检测在结核性胸膜炎诊断中的价值。结果 51例患者中有34例确诊为结核性胸膜炎,其中通过MGIT 960培养阳性并菌种鉴定为结核分枝杆菌而确诊者20例(39.2%,20/51),通过胸膜组织活检病理阳性而确诊者17例(33.3%,17/51),其中3例患者被2种检测方法同时确诊;17例(33.3%)诊断为非结核性胸腔积液。以最终诊断结果为金标准,Xpert法、MGIT 960培养法、病理检查诊断的敏感度和特异度分别为64.7%(22/34)和100.0%(17/17)、58.8%(20/34)和100.0%(17/17)、50.0%(17/34)和100.0%(17/17);Xpert 法检测的敏感度高于MGIT 960培养法和病理诊断,但差异无统计学意义(χ ²=1.53,P=0.466)。结论 内科胸腔镜直视下取胸膜组织活检标本,通过研磨后使其液化,再行结核分枝杆菌Xpert检测,敏感度及特异度均较高,对结核性胸膜炎的确诊具有一定的临床意义。     

GeneXpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌对利福平耐药假阳性与标本低水平荷菌量的关系

目的对GeneXpert MTB/RIF检测(简称"GeneXpert检测")结核分枝杆菌(MTB)及其对利福平耐药性的临床应用进行综合评价,并探讨GeneXpert检测MTB对利福平耐药假阳性与临床标本低水平荷菌量的关系。方法收集2016年4月至2017年9月在西安市胸科医院就诊的2707例疑似肺结核患者的临床标本,其中痰标本1945例,肺泡灌洗液标本762例,同时进行GeneXpert检测、BACTEC MGIT 960液体培养(简称"MGIT 960法")及药物敏感性试验(简称"药敏试验"),并将GeneXpert检测MTB对利福平耐药的标本进行GenoType MTBDRplus检测(简称"MTBDRplus检测")。结果GeneXpert检测临床标本的阳性率为39. 8%(1077/2707),对利福平是否耐药不确定者有7例,荷菌量水平均为"极低"。以MGIT 960药敏试验结果为标准,GeneXpert检测MTB对利福平耐药的敏感度和特异度分别为89. 4%(135/151)和94. 7%(721/761)。两种检测方法判断MTB对利福平耐药不一致的结果共56例,其中GeneXpert检测MTB对利福平耐药而MGIT 960药敏试验检测为敏感的40例患者中,处于"极低"、"低"、"中等"和"高"4个菌量水平的患者分别为10例、6例、14例和10例。以MGIT960药敏试验检测结果为标准,4个菌量级别中,GeneXpert检测MTB对利福平耐药的假阳性率分别为58.8%(10/17)、16.7%(6/36)、19.2%(14/73)和20.4%(10/49),差异有统计学意义(χ~2=13.981,P<0.05)。对40例患者进行MTBDRplus检测,结果显示,标本荷菌量水平为"低"、"中等"和"高"的30例标本均为对利福平耐药,与GeneXpert检测结果完全一致。标本荷菌量水平为"极低"的10例标本中,有2例MTBDRplus检测阴性,8例阳性;检测阳性的8例中有5例对利福平敏感,3例对利福平耐药。结论GeneXpert技术检测MTB是否对利福平耐药具有较高的敏感度和特异度,但在检测样本荷菌量极低时,可能会出现假耐药的情况。     

两种技术对不同手术标本进行检测诊断胸壁结核的价值

目的 探讨GeneXpert MTB/RIF 技术(简称“GeneXpert”)、BACTEC MGIT 960液体培养 (简称“MGIT 960”)对不同手术标本进行检测诊断胸壁结核的价值。方法 搜集2016年6月至2019年7月西安市胸科医院收治的疑似胸壁结核患者214例,通过外科手术获得病灶中的脓液152份、干酪样坏死组织128份及肉芽组织138份,同时采用GeneXpert及MGIT 960对上述标本进行检测。通过临床综合诊断、病理学检查确诊胸壁结核174例,非结核性胸壁疾病40例。以临床诊断结果为参考标准,评价GeneXpert及MGIT 960诊断胸壁结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值;对3种标本采用GeneXpert及MGIT 960的检测结果(阳性率差异)进行比较,统计学分析采用χ ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 214例疑似胸壁结核患者通过术前血液化验、影像学资料及术后病理结果临床最终诊断为胸壁结核174例,非结核性胸壁疾病40例(其中化脓性胸壁脓肿18例,胸壁囊肿并发普通细菌感染9例,软组织肿瘤8例,肋骨骨髓炎3例,胸壁放线菌病2例)。以临床诊断结果为标准,GeneXpert检测诊断胸壁结核的敏感度为82.18%(143/174),特异度为97.50%(39/40),阳性预测值为99.31%(143/144),阴性预测值为55.71%(39/70),Kappa值为0.618;MGIT 960检测诊断胸壁结核的敏感度为52.30%(91/174),特异度为100.00%(40/40),阳性预测值为100.00%(91/91),阴性预测值为32.52%(40/123),Kappa值为0.291。上述2种技术对3种类型手术标本的检测阳性率分别是:肉芽组织为81.9%(113/138),干酪样坏死组织为68.8%(88/128),脓液为44.7%(68/152);脓液与干酪样坏死组织两组之间的阳性率比较,χ ²=16.23,P<0.001;干酪样坏死组织和肉芽组织两组之间的阳性率比较,χ ²=4.19,P=0.013;肉芽组织和脓液两组之间的阳性率比较,χ ²=42.54,P<0.001。结论 GeneXpert检测诊断胸壁结核的敏感度明显高于MGIT 960,而特异度接近,可用于手术标本的快速检测。GeneXpert和MGIT 960联合检测可疑胸壁结核患者的3种类型手术标本,肉芽组织的阳性率较高。     

常用实验室技术诊断结核性脑膜炎效能的比较研究

目的 对常用实验室技术诊断结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的效能进行比较研究,以提高临床早期诊断TBM的水平。方法 采用BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960法”)、改良抗酸染色(简称“MZN法”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert法”)、荧光探针法聚合酶链式反应(简称“PCR-荧光探针法”)和结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)等5种实验室检测技术对西安市胸科医院2017年1月至2018年4月期间收治的244例成年疑似结核性脑膜炎患者脑脊液进行检测。包括71例TBM组患者(确诊组36例,很有可能组23例,可能组12例)及33例非TBM组患者。评价上述5种实验室技术诊断TBM的效能,并探讨细菌学方法组(MGIT 960和MZN法)、分子生物学方法组(GeneXpert和PCR-荧光探针法)、免疫学方法组(T-SPOT.TB),以及上述5种技术联合诊断组(简称“联合诊断组”)在TBM早期诊断中的价值,并比较5种实验室技术之间、4种方法组之间诊断TBM敏感度的差异。结果 以临床诊断为标准,5种检测技术诊断TBM的特异度和阳性预测值均为100.0%;MGIT 960法、MZN法、GeneXpert 法、PCR-荧光探针法和T-SPOT.TB检测技术诊断TBM的敏感度分别为19.7%(14/71)、26.8%(19/71)、42.3%(30/71)、35.2%(25/71)、29.6%(21/71);GeneXpert法和PCR-荧光探针法的敏感度均高于MGIT 960法,差异均有统计学意义(χ ²=8.43,P=0.004;χ ²=4.28,P=0.039)。细菌学方法组、分子生物学方法组、免疫学方法组及联合诊断组的敏感度分别为31.0%(22/71)、50.7%(36/71)、29.6%(21/71)、73.2%(52/71);分子生物学方法组和联合诊断组的敏感度高于细菌学方法组,差异均有统计学意义(χ ²=5.71,P=0.017;χ ²=73.20,P=0.000)。 结论 在TBM的早期诊断中,GeneXpert法与PCR-荧光探针法的敏感度高于MGIT 960法;各实验方法联合检测有助于提高诊断TBM的敏感度,并且与细菌学方法组相比,分子生物学方法组以及联合诊断组的敏感度更高。     

DNA实时荧光恒温扩增法在结核病临床检测中的应用价值

目的 分析DNA实时荧光恒温扩增法(简称“恒温扩增法”)在结核病临床检测中的应用价值。 方法 收集2019年1—6月西安市胸科医院收治的疑似肺结核患者2421例,其中共有356例患者留取的痰液标本同时进行了BACTEC MGIT 960液体培养、利福平耐药实时荧光定量核酸检测(GeneXpert MTB/RIF法)、传统DNA实时荧光定量核酸检测(FQ-PCR法)、结核分枝杆菌RNA实时荧光恒温扩增(SAT-RNA法)、恒温扩增法检测。以MGIT 960技术检测结果为金标准,计算其他4种检测技术的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、Kappa值。对恒温扩增法阳性的121份核酸样本使用熔解曲线法检测利福平ropB基因,研究恒温扩增法提取核酸应用于耐药基因检测的价值。 结果 以MGIT 960技术检测结果为金标准,恒温扩增法的敏感度(78.83%,108/137)低于GeneXpert MTB/RIF法 (95.62%,131/137),高于FQ-PCR法(74.45%,102/137)和SAT-RNA法(59.12%,81/137),差异均有统计学意义(χ ²值分别为47.437、43.654、29.467,P值均<0.001)。GeneXpert MTB/RIF法的ROC曲线下面积最大(0.910),随后依次为恒温扩增法(0.860)、FQ-PCR法(0.854)、SAT-RNA法(0.789)。恒温扩增法阳性的核酸标本用熔解曲线法检测利福平ropB耐药基因,原核酸和稀释5倍后核酸荧光检测的dt值(探测时间,detection time,1dt=1min)在26~30时,ropB基因的检出率分别为93.55%(29/31)和90.32%(28/31);dt值在15~25时,ropB基因的检出率分别为94.44%(34/36)和100.00%(36/36)。结论 通过与各种检测技术比较,恒温扩增法具有临床应用价值,并适用于基层医院的结核病诊断。     

Value of DNA real-time fluorescence isothermal amplification method in clinical detection of tuberculosis

目的 分析DNA实时荧光恒温扩增法(简称“恒温扩增法”)在结核病临床检测中的应用价值。 方法 收集2019年1—6月西安市胸科医院收治的疑似肺结核患者2421例,其中共有356例患者留取的痰液标本同时进行了BACTEC MGIT 960液体培养、利福平耐药实时荧光定量核酸检测(GeneXpert MTB/RIF法)、传统DNA实时荧光定量核酸检测(FQ-PCR法)、结核分枝杆菌RNA实时荧光恒温扩增(SAT-RNA法)、恒温扩增法检测。以MGIT 960技术检测结果为金标准,计算其他4种检测技术的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、Kappa值。对恒温扩增法阳性的121份核酸样本使用熔解曲线法检测利福平ropB基因,研究恒温扩增法提取核酸应用于耐药基因检测的价值。 结果 以MGIT 960技术检测结果为金标准,恒温扩增法的敏感度(78.83%,108/137)低于GeneXpert MTB/RIF法 (95.62%,131/137),高于FQ-PCR法(74.45%,102/137)和SAT-RNA法(59.12%,81/137),差异均有统计学意义(χ ²值分别为47.437、43.654、29.467,P值均<0.001)。GeneXpert MTB/RIF法的ROC曲线下面积最大(0.910),随后依次为恒温扩增法(0.860)、FQ-PCR法(0.854)、SAT-RNA法(0.789)。恒温扩增法阳性的核酸标本用熔解曲线法检测利福平ropB耐药基因,原核酸和稀释5倍后核酸荧光检测的dt值(探测时间,detection time,1dt=1min)在26~30时,ropB基因的检出率分别为93.55%(29/31)和90.32%(28/31);dt值在15~25时,ropB基因的检出率分别为94.44%(34/36)和100.00%(36/36)。结论 通过与各种检测技术比较,恒温扩增法具有临床应用价值,并适用于基层医院的结核病诊断。     

经内科胸腔镜胸膜病变活检对结核性胸膜炎的诊断价值

目的 评价经内科胸腔镜胸膜病变活检对结核性胸膜炎的诊断价值及安全性。方法 2015年6月至2018年10月,首都医科大学附属北京胸科医院、首都医科大学附属北京朝阳医院、北京积水潭医院、卫生部北京医院等4家临床中心采用前瞻性多中心诊断试验方法,对参照入组标准顺序纳入的229例不明原因胸腔积液的入院患者行内科胸腔镜检查,并对活检留取胸膜病变组织标本行结核分枝杆菌GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和BACTEC MGIT 960培养(简称“MGIT 960”)及常规病原学检测和病理学检查。结果 229例患者经内科胸腔镜取胸膜活检组织行病理学和病原学检查结果显示,临床不能明确诊断者23例(10.0%),确诊者为206例(90.0%),其中129例(56.3%)确诊为结核性胸膜炎,77例(33.6%)诊断为其他原因所致的胸腔积液。胸膜活检组织经GeneXpert或MGIT 960检测结核感染的阳性率[分别为27.9%(64/229)和17.0%(39/229)]与病理学检测阳性率[(23.1%,53/229)]比较,差异无统计学意义(χ²=1.32,P=0.251;χ²=2.67,P=0.103);但GeneXpert+MGIT 960联合检测的阳性率[32.8%(75/229)]明显高于传统病理学检测(χ²=5.25,P=0.022)。结核性胸膜炎患者的胸腔镜镜下特征性表现在纤维粘连带[70.5%(91/129)]、弥漫性粟粒结节状病灶[41.1%(53/129)]、纤维素沉积[40.3%(52/129)]等方面均明显高于其他原因胸腔积液者[分别为32.5%(25/77)、6.5%(5/77)、15.6%(12/77)],但散在多发结节状病灶[26.4%(34/129)]明显低于其他原因胸腔积液者[53.2%(41/77)](χ²=28.41、28.52、24.42、15.06,P值均=0.000)。229例患者胸腔镜术后均未出现严重不良事件,224例(97.8%)有轻中度胸痛,口服止痛药2~3 d后可缓解;134例(58.5%)活检部位有少量出血,107(46.7%)例局部皮下气肿,均未给予特殊处理,拔管后2~3 d内吸收;仅2例患者术后出现脓胸,引流管留置14 d后行胸腔镜胸膜剥离术,随访6个月后均安全拔管。结论 内科胸腔镜镜下表现、胸膜病变活检组织标本病理和病原学检测均有助于结核性胸膜炎的诊断,而且安全性高,建议临床大力推广应用。     

三种快速检测技术诊断早期结核性脑膜炎的评价

目的 评价3种快速检测技术在早期结核性脑膜炎诊断中的应用价值。方法 采用离心涂片抗酸染色法、改良抗酸染色法、GeneXpert MTB/RIF技术(简称“GeneXpert技术”)对2016年8月至2018年6月河北省胸科医院和石家庄市第五医院收治的根据临床表现、影像学及实验室检查等临床确诊的45例结核性脑膜炎、42例非结核性脑膜炎患者的脑脊液标本进行分枝杆菌检测,并对结果进行分析。采用SPSS 19.0软件进行统计学分析,率的比较采用χ ²检验、校正χ ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 以临床诊断为标准,45例结核性脑膜炎患者脑脊液分别应用离心涂片抗酸染色法、改良抗酸染色法、GeneXpert技术检测分枝杆菌的敏感度分别为4.44%(2/45)、88.89%(40/45)、35.56%(16/45);依次两两比较,差异均有统计学意义(χ ²值分别为64.46、13.16、27.23,P值均=0.000)。42例非结核性脑膜炎患者的脑脊液用离心涂片抗酸染色法、改良抗酸染色法、GeneXpert技术检测分枝杆菌均为阴性。3种检测技术检测分枝杆菌的特异度均为100.00%。结论 改良抗酸染色法较离心涂片法及GeneXpert技术检测分枝杆菌阳性率高,具有较好的确诊结核性脑膜炎的价值。