视网膜变性小鼠视网膜组织中FasL蛋白表达的动态变化

背景 视网膜移植是治疗视网膜变性性疾病的新方法,但如何避免或减少视网膜移植后的免疫排斥反应是亟待解决的问题之一.目前的实验研究中常将正常C57 BL/6小鼠视网膜作为供体,视网膜变性(rd)小鼠作为受体.研究表明视网膜中Fas配体(FasL)蛋白通过FasL/Fas途径诱导Fas+炎症细胞凋亡,推测可能与视网膜移植后的免疫排斥反应密切相关. 目的 探讨FasL蛋白在不同鼠龄C57BL/6小鼠和rd小鼠视网膜中的表达特点,揭示小鼠视网膜的免疫特性,为视网膜移植免疫排斥反应的研究提供参考依据.方法 分别将出生后(PN)-0周(出生日)、PN-1周、PN-2周、PN-3周、PN-4周的正常C57BL/6小鼠和rd小鼠处死制备眼球冰冻切片,采用免疫荧光技术摄片,并经激光扫描共焦显微镜采集图片,用图像分析软件对各鼠龄不同品系小鼠间视网膜中FasL蛋白表达的荧光强度(FI)变化进行半定量分析. 结果 PN-1周C57BL/6小鼠视网膜发育尚不完善,FasL蛋白在视网膜各层均呈阳性表达.PN-2、3、4周C57BL/6小鼠已发育成10层的视网膜结构,FasL蛋白在视网膜色素上皮(RPE)、内节段(IS)、外界膜(OLM)、外丛状层(OPL)、内核层(INL)、内丛状层(IPL)及节细胞层(GCL)呈阳性表达.PN-1周rd小鼠视网膜结构与同龄C57BL/6小鼠接近,FasL蛋白在视网膜各层均呈阳性表达.PN-2周至PN-4周rd小鼠视网膜中外核层(ONL)细胞随着鼠龄增大逐渐减少,FasL蛋白在RPE、OPL、INL、IPL及GCL呈阳性表达;PN-2、3、4周rd小鼠RPE中FasL蛋白表达FI值分别为184.199±16.747、186.797±7.904和184.319±18.795,均明显高于同龄C57BL/6小鼠的160.402±22.851、160.995±22.799和105.787±17.676,差异均有统计学意义(t=-3.360,P=0.002;t’=-4.277,P=O.000;t=-12.175,P=0.000);各周龄rd小鼠与C57BL/6小鼠间视网膜IPL中FasL蛋白表达的FI值差异均无统计学意义(均P＞O.05).结论 rd小鼠随着鼠龄增加视网膜ONL细胞逐渐减少,其RPE内免疫赦免相关抗原FasL蛋白的表达强度明显高于同龄C57BL/6小鼠.     

rd11小鼠视锥细胞变性过程中视蛋白的变化特点

背景视网膜变性11（rd11）小鼠是近年来新发现的一种自发突变的视网膜变性小鼠。研究证实,rd11小鼠出生后随着鼠龄的增长出现快速的光感受器变性,且视杆细胞变性早于视锥细胞变性,但对于视网膜不同区域视锥细胞变性的特点还不十分清楚。目的应用视网膜铺片免疫荧光染色技术观察不同鼠龄rd11小鼠M-视蛋白和S-视蛋白在视网膜的表达分布及变化特点,为相关疾病的基因治疗研究提供实验依据。方法取出生后14、28、42d的rd11小鼠各5只,制备视网膜铺片,采用免疫荧光组织化学法分别标记小鼠视网膜后极部颞上、颞下、鼻上和鼻下象限M-视蛋白和S-视蛋白的表达,观察随rd11小鼠鼠龄的变化视网膜各区域M-视蛋白和S-视蛋白的荧光形态和密度,并与相应鼠龄的C57BL／6J小鼠进行比较。结果出生14d的rd11小鼠视网膜M-视蛋白和S-视蛋白的红色荧光形态和密度与C57BL／6J小鼠接近,但出生28d的rd11小鼠视网膜后极部颞上、颞下、鼻上、鼻下4个区域M-视蛋白和S-视蛋白表达密度均明显降低,荧光形态由纺锤形逐渐变为点状,出生42d的rd11小鼠视网膜部分区域M-视蛋白和S-视蛋白表达消失。出生28d的rd11小鼠视网膜后极部颞上、颞下、鼻上、鼻下区域M-视蛋白的表达密度分别为（414±32）、（300±8）、（324±22）和（250±20）个／0．037mm^2,明显低于同龄C57BL／6J小鼠的（484±21）、（442±19）、（459±34）和（436±12）个／0．037mm^2,差异均有统计学意义（t=4．114、15．225、7．505、17．990,均P〈0．05）;上述4个区域S-视蛋白的表达密度下降更明显,分别为（8±4）、（175±16）、（74±13）、（315±20）个／0．037mm^2,明显低于C57BL／6J小鼠的（73±16）、（436±30）、（393±30）和（480±19）个／0．037mm^2,差异均有统计学意义（t=8．555、17．076、21．637、13．498,均P〈0．05）。结论rd11小鼠视锥细胞中的M-视蛋白和S-视蛋白均随着鼠龄的增长而急剧减少,以S-视蛋白更为明显。随着鼠龄的增长,rd11小鼠M-视蛋白变性从视神经周围区向鼻下方,再向颞上方逐渐进展,而S-视蛋白变性由颞上方向鼻下方逐渐进展。     

沉默信号调控因子1在1型糖尿病模型小鼠角膜和三叉神经节中的表达及意义

背景 糖尿病是引发角膜神经病变的高危因素之一.沉默信号调控因子1(Sirt1)在糖代谢、脂代谢、胰岛素分泌调节中发挥着重要的作用,并与神经系统性疾病密切相关.目前,关于Sirt1与糖尿病性角膜神经病变的关系尚不完全清楚. 目的 探讨Sirt1在1型糖尿病C57BL/6-Ins2Akita/J小鼠角膜及三叉神经节中的表达及其意义,探讨Sirt1与糖尿病性角膜神经病变的关系. 方法 取C57BL/6-Ins2Akita/J雄性小鼠与同窝出生的野生型C57BL/6小鼠各8只,分别作为1型糖尿病模型组和正常对照组.两组小鼠均在12月龄时过量麻醉处死,处死前检测空腹血糖、测体质量.取小鼠三叉神经节和角膜组织,采用苏木精-伊红染色法检测两组小鼠三叉神经节和角膜组织的组织病理学变化,用免疫组织化学法检测三叉神经节和角膜组织中Sirt1蛋白的表达和定位;用荧光定量PCR法检测Sirt1 mRNA在三叉神经节和角膜组织中的表达;采用Western blot检测两组小鼠三叉神经节和角膜组织中Sirt1蛋白的相对表达量,并进行比较.结果 C57BL/6-Ins2Akita/J 小鼠三叉神经节细胞大小不均,细胞排列较为疏松,神经纤维排列紊乱,角膜上皮细胞层数减少,角膜变薄;野生型C57BL/6小鼠神经节细胞排列紧密,细胞形态均一,神经纤维排列整齐.免疫组织化学法检测结果显示,C57 BL/6-Ins2Akita/J小鼠角膜中Sirt1蛋白的表达强度低于野生型C57BL/6小鼠.荧光定量PCR结果显示,Sirt1 mRNA在C57B L/ 6-Ins2Akita/J小鼠角膜表达的灰度值显著低于野生型C57BL/6小鼠(0.56±0.03 vs.0.98±0.13),差异有统计学意义(t=5.853,P=0.010);C57BL/6-Ins2Akita/J小鼠三叉神经节中Sirt1 mRNA表达的灰度值为2.45±0.18,低于野生型C57 BL/6小鼠的2.51±0.22,但差异无统计学意义(t=0.587,P=0.599).Western blot检测结果显示,C57 BL/6-Ins2Akita/J小鼠角膜中Sirt1蛋白的表达显著低于野生型C57BL/6小鼠(0.780±0.017 vs.1.300±0.012),差异有统计学意义(t=33.140,P=0.001);两组小鼠间三叉神经节中Sirt1蛋白的表达差异无统计学意义(1.100±0.015 vs.1.110±0.017) (t=0.430,P=0.709).结论 12月龄C57B L/ 6-Ins2Akita/J小鼠角膜的神经和结构发育异常,Sirt1参与糖尿病角膜病变的发病,有可能是潜在的靶点分子.     

NADPH氧化酶在rd小鼠遗传性视网膜变性中的活化表达

背景研究表明,小胶质细胞中烟酰胺二磷酸腺苷（NADPH）氧化酶的活化在中枢神经系统神经元损伤及神经变性疾病中发挥重要作用。已有研究证实NADPH氧化酶在rd小鼠视锥细胞退行性改变中的作用,但关于其在rd小鼠视网膜变性早期视杆细胞病变过程中的作用研究较少。目的研究NADPH氧化酶在rd小鼠感光细胞凋亡过程中的活化表达,探讨其在遗传性视网膜变性中的致病作用。方法取出生后8、10、12、14、16、18d的rd小鼠各18只,过量麻醉法处死后提取视网膜总RNA和总蛋白,并制备视网膜切片,分别用实时荧光定量PCR及Western blot法测定在rd小鼠感光细胞凋亡过程中视网膜中NADPH氧化酶亚单位gp91phox mRNA及蛋白的定量表达变化;采用免疫组织化学及gp91phox和CD11b免疫荧光双染法确定gp91phox在不同鼠龄rd小鼠视网膜中的表达及定位,并与其近交系C57BL／6N小鼠进行比较。结果实时荧光定量PCR研究证实,C57BL／6N小鼠视网膜中未见gp91phox mRNA的表达,而生后8d的rd小鼠视网膜中即有少量gp91phox mRNA的表达,随着鼠龄的增加,gp91phox mRNA表达量（gp91phox mRNA／β-actin）逐渐增加,生后14d达到高峰。不同鼠龄rd小鼠视网膜中gp91phox mRNA表达量差异有统计学意义（F=17．81,P=0．00）;生后10、12、14、16、18d的Td小鼠视网膜中gp91phox mRNA表达量均明显高于出生后8d小鼠,差异均有统计学意义（均P〈0．05）,以出生后14d表达量最高,为1．136±0．370。随着小鼠鼠龄的增加,视网膜中gp91phox蛋白表达量（A值）与其基因表达变化趋势一致,不同鼠龄及C57BL／6N对照小鼠间视网膜中gp91phox蛋白表达的差异有统计学意义（F=354．00,P〈0．01）,不同鼠龄rd小鼠出生后视网膜中gp91phox蛋白表达量均明显高于C57BL／6N对照小鼠,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。免疫组织化学法检测表明,rd小鼠出生后10d视网膜内层gp91phox阳性细胞开始增多,出生后14d达到高峰,外核层也可见到gp91phox阳性细胞。免疫荧光双染结果显示,gp91phox与小胶质细胞标志物CD11b共表达,呈现橙色荧光。结论NADPH氧化酶在rd小鼠视网膜中的表达随着鼠龄的增长而增多,其表达与小胶质细胞活化及感光细胞的凋亡相平行,提示NADPH氧化酶可能在小胶质细胞活化导致的感光细胞凋亡中发挥致病作用。     

BMP-2在C57BL/6小鼠形觉剥夺性近视眼巩膜中表达的变化

目的:观察C57BL/6小鼠形觉剥夺性近视(form deprivation myopia,FDM)巩膜中BMP-2表达的变化,研究其在巩膜重塑中发挥的作用.方法:选择3～4周龄的C57BL/6小鼠64只,以随机数字表法随机分为形觉剥夺21d组(16只)、同龄对照组(16只);形觉剥夺28d组(16只)、同龄对照组(16只).形觉剥夺前后对所有小鼠进行带状光剪影验光检测小鼠眼球的屈光状态,游标卡尺测量小鼠的眼轴长度,造模后分别于21d和28d取小鼠的巩膜组织,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠巩膜组织形态学变化,用荧光定量RT-PCR和免疫组织化学检测各组小鼠巩膜BMP-2 mRNA和其蛋白的表达水平.结果:小鼠形觉剥夺21d和28d后,剥夺眼分别诱导出-1.60±1.03D和-3.10±1.19D的相对近视,眼轴分别拉长16±12μm和21±13μm,与自身对照组和正常对照相比较,差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色行巩膜形态学观察,可观察到剥夺眼巩膜变薄,胶原纤维排列紊乱.荧光定量RT-PCR和免疫组织化学结果显示实验眼BMP-2mRNA和蛋白的表达明显下调,与自身对照和正常对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:C57 BL/6小鼠形觉剥夺眼巩膜中BMP-2呈下调趋势,BMP-2可能参与了近视发展过程中的巩膜重塑作用,其具体机制有待进一步研究.     

视网膜新生血管动物模型的制备

目的制备视网膜新生血管动物模型,为今后的视网膜新生血管相关疾病的研究提供稳定的模型.方法以出生7d的C57BL/6J小鼠56只,雌雄兼有,随机将28只放入75%±2%高氧环境,控制室温23℃±2℃,日光照明,5d后返回空气环境;另一组28只置于23℃±2℃空气环境中饲养作为对照.随机于出生后12、14、17、21、22、25d取高氧组和空气组小鼠行视网膜铺片、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)免疫组化染色,观察VEGF的表达情况,并对出生后17d小鼠的视网膜铺片、石蜡切片HE染色、VEGF免疫组化染色.结果高氧诱导组出生后17d视网膜无血管区面积,穿过视网膜内界膜细胞核计数明显高于空气组.血管内皮细胞VEGF的表达从出生后14d开始有阳性表达,阳性表达逐渐增强,出生后17d达到高峰,之后逐渐下降,持续至出生后21d.结论该模型为一种合适的视网膜新生血管动物模型.     

NOX2基因缺陷对rd1小鼠感光细胞凋亡的保护作用

目的 观察NADPH氧化酶2(NOX2)基因缺陷对遗传性视网膜变性小鼠1(rd1)感光细胞的保护作用。设计 实验研究。研究对象 出生后14天的NOX2基因缺陷rd1小鼠(实验组)6只及同龄NOX2基因缺陷的C57BL/6N小鼠(对照组1)、无NOX2基因缺陷的rd1小鼠(对照组2)、C57BL/6N野生正常小鼠(对照组3)各6只(共24只)。方法 对照组1与对照组2小鼠多次交配获得实验组小鼠并进行基因型鉴定。取该实验鼠及对照组小鼠眼球,对视网膜进行HE染色并测量视网膜外核层厚度,TUNEL染色并计算凋亡细胞占外核层细胞总数百分比、免疫荧光法CD1 1b抗体标记小胶质细胞并检测NOX2主要亚单位gp91^pbox蛋白的表达。主要指标 视网膜外核层厚度,感光凋亡细胞百分比,gp91^pbox蛋白的表达量,小胶质细胞活化情况。结果 与同龄对照组2相比,实验组小鼠视网膜内外核层排列整齐,其外核层厚度(36.18±2.59)μm明显大于对照组2小鼠(21.45±1.33)μm(t=8.77,P=0.001)。实验组小鼠视网膜凋亡细胞主要出现于外核层,但数量...     

香椿叶提取物对高脂饮食小鼠视网膜损伤机制的影响

目的　探讨香椿叶提取物（toona sinensis leaf extract,TSLE）对高脂血症小鼠JAK2/STAT3信号通路介导的视网膜损伤的影响。方法　雄性C57BL/6J小鼠40只,随机分组:正常对照组、高脂组以及低剂量TSLE（50 mg·kg^-1·d^-1)用药组和高剂量TSLE（100 mg·kg^-1·d^-1)用药组,每组各10只。对小鼠进行视网膜电图（ERG）、血脂四项检测,对小鼠视网膜组织进行HE染色、免疫荧光组织化学染色检测,Western blot检测小鼠视网膜JAK2/STAT3通路的蛋白表达水平。结果　在第28周高脂饮食结束时,ERG检测结果显示,TSLE能够显著升高小鼠视网膜a波和b波振幅,且其作用具有剂量相关性,提示其减轻了高脂饮食引起的视网膜功能损害,改善了视网膜功能;血脂四项检测结果显示,TSLE可上调高密度脂蛋白胆固醇含量,同时下调甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量;HE染色结果显示,TSEL改善了高脂饮食引起的视网膜内核层、外核层细胞排列紊乱以及视网膜色素上皮层结构破坏程度;免疫荧光组织化学染色及Western blot检测结果显示,TSLE上调了JAK2、STAT3蛋白的表达。结论　TSLE对高脂饮食所致的小鼠视网膜损伤具有保护作用,其作用可能是在JAK2/STAT3通路上产生的。     

DJ-1蛋白对视神经钳夹伤后小鼠视网膜神经节细胞及视功能的影响

目的:观察Park7基因编码的DJ-1蛋白对小鼠视神经钳夹损伤（ONC）后视网膜神经节细胞（RGC）及视功能的影响。方法:健康雄性C57BL/6J小鼠37只和116只分别随机分为正常组、ONC 2 d组、ONC 5 d组、ONC 7 d组和对照组、Park7组、Park7-ONC组、ONC组、绿色荧光蛋白（GFP）-O...     

钙结合蛋白在C57BL／6小鼠内耳细胞发育过程中的表达特点

目的探讨在小鼠内耳发育过程中，钙结合蛋白（cB）在内耳耳蜗内的表达是否存在时限性。方法获取C57BL／6小鼠E8开始至出生后-直到成年的内耳标本：E8，E9，E10，E12，E14，E15-E21，D1-D21，成年，进行冷冻切片，进行cB的荧光免疫组织化学染色并观察其在内耳表达的变化情况。结果在C57BL／6小鼠，除了在E16可辨认出螺旋神经元有cB部分表达外，以后直到成年都没有cB的染色表达，而在Scarpa神经元则从E8开始就有表达，其从E19开始先在内毛细胞开始有表达，逐渐在内外毛细胞都有表达，直到成年时表达消失。结论cB在C57BL／6小鼠内耳耳蜗的表达具有时限性，因而可推测出对cB行免疫组织化学染色观察能有效鉴别C57BL／6小鼠及其他动物的再生毛细胞和原有毛细胞，但目前尚无法解释CB-些表达特点的相应机制。     

重力打击式小鼠外伤性视神经病变模型的建立及外伤性视神经病变发病机制的探讨

目的　通过建立重力打击式小鼠外伤性视神经病变模型探讨外伤性视神经病变的发病机制。方法　选取SPF级C57BL/6J成熟小鼠48只（96眼），均取小鼠左眼为实验眼进行造模，右眼为对照眼不做处理。采用重力打击建立小鼠外伤性视神经病变模型，造模后第1、3、5、7天对小鼠进行观察，每个时间点取6只小鼠进行闪光视觉诱发电位检查、视网膜组织HE染色，另取6只小鼠利用RT-PCR检测小鼠实验眼和对照眼视网膜中白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α mRNA的表达情况。结果　闪光视觉诱发电位检查结果显示，对照眼和实验眼均能检测出明显的负向波形，本实验命名为N1波。在造模后第1、3、5、7天，小鼠实验眼闪光视觉诱发电位振幅均显著低于对照眼，差异均有统计学意义（均为P<0.001）。造模后，对照眼的视网膜结构层次清晰，视网膜神经节细胞排列整齐，胞核清楚，核膜光滑完整；实验眼造模后视网膜轻度增厚，视网膜神经节细胞层可见细胞间空泡形成，视网膜神经节细胞排列出现紊乱，在造模后第7天可见神经节细胞核出现缺失。造模后第1、3、5、7天小鼠实验眼视网膜中IL-1β mRNA和TNF-α mRNA相对表达量均明显低于对照眼（均为P<0.05）；对照眼和实验眼视网膜中IL-1β mRNA和TNF-α mRNA相对表达量均随时间进展呈下降趋势（均为P<0.05）。结论　本研究建立的重力打击式小鼠外伤性视神经病变模型操作简便，模拟临床效果更好，外伤性视神经病变小鼠视网膜IL-1β、TNF-α呈现高表达。     

氢离子对视网膜氧化应激损伤的保护作用机制研究

目的　探讨氢离子对氧化应激诱导的视网膜损伤的保护机制。方法　C57BL/6J 雄性小鼠30只,随机分为对照组、模型组和治疗组,其中治疗组给予氢离子水灌胃7 d、模型组给予蒸馏水灌胃7 d后均建立视网膜损伤动物模型,对照组仅用蒸馏水灌胃,之后按前述方法分别持续灌胃5 d后处死,HE染色观察视网膜形态;二氢乙啶染色观察视网膜中活性氧的含量;剥离视网膜,Western blot检测氧化应激标志性蛋白ogg1、Sirt3及衰老相关蛋白P53、P21和P16的表达。结果　视网膜HE染色结果显示,治疗组视网膜黑色玻璃膜疣沉积与模型组相比少且小;治疗组中氧化应激标志性蛋白ogg1相对表达量（0.63±0.04）明显低于模型组（0.96±0.02）,差异具有统计学意义（P＜0.05）,与对照组（0.42±0.05）相比差异无统计学意义（P>0.05）。二氢乙啶染色结果表明,治疗组的视网膜的活性氧含量较模型组低;治疗组中Sirt3蛋白相对表达量（1.02±0.05）较模型组（0.55±0.04）显著升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;治疗组中衰老相关蛋白P53、P21、P16的相对表达量（0.53±0.05、0.40±0.01、0.71±0.01）较模型组（1.06±0.04、0.70±0.03、1.29±0.05）均显著降低,差异均具有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　氢离子通过减少Sirt3表达的下调和抑制衰老对氧化应激诱导的视网膜损伤起保护作用。     

miR-26a/PTEN在糖尿病小鼠视网膜神经变性中的作用及其机制

目的　探讨 microRNA-26a-5p (miR-26a)/PTEN在早期糖尿病小鼠视网膜神经变性（DRN）中的作用及其机制。方法　66只C57BL/6J小鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病动物模型。实验组小鼠造模成功后随机分为糖尿病组和miR-26a组,miR-26a组小鼠玻璃体内注射miR-26a mimic上调视网膜组织中miR-26a的表达。玻璃体内注射2周后所有小鼠用100 g·L^-1水合氯醛腹腔注射麻醉并处死,立即摘除眼球。HE染色及透射电镜分别观察各组小鼠视网膜形态学及超微结构变化,免疫荧光半定量检测并定位PTEN、胶质细胞原纤维酸性蛋白（GFAP）在小鼠视网膜各层的表达,qRT-PCR测量各组小鼠视网膜中miR-26a、PTEN和GFAP的mRNA表达。结果　糖尿病组小鼠视网膜神经上皮层厚度较对照组变薄,视网膜神经节细胞(RGC)数量减少,差异均有统计学意义（均为 P<0.05）;视网膜组织中miR-26a mRNA表达下降（P<0.05）,GFAP及PTEN的mRNA表达较对照组小鼠均明显升高（均为 P<0.05）。与糖尿病组小鼠相比,miR-26a组小鼠视网膜全层厚度明显增厚（均为 P<0.05）,RGC丢失减少,视网膜组织中miR-26a mRNA表达升高,而GFAP及PTEN的mRNA表达均降低,差异均有统计学意义（均为 P<0.05）。结论　miR-26a可能通过下调视网膜组织中PTEN的表达减轻糖尿病小鼠的DRN。     

提前光刺激对小鼠神经节细胞感光视蛋白melanopsin表达的影响

目的探讨提前光刺激对小鼠神经节细胞发育不同阶段感光视蛋白melanopsin表达的影响。方法对出生4dC57BL/6J小鼠右眼建立提前开睑接受光刺激模型，左眼作为自身对照，应用免疫荧光、RT-PCR和Western blotting方法比较小鼠5天龄、6天龄、7天龄、14天龄和90天龄时提前开睑组和对照组视网膜感光视蛋白melanopsin的分布及转录和翻译水平的表达变化。结果Melanopsin阳性细胞在5天龄时就已经在视网膜上明显表达，随着小鼠视网膜发育的逐渐成熟，提前开睑组和对照组melanopsin表达均逐步下降；组内比较，在6天龄、7天龄、14天龄时melanopsin提前开睑组表达量均少于各自对照组，差异具有显著性（P〈0.05）：90天龄时melanopsin表达最少，且提前开睑组和对照组差异无显著性（P〉0.05）。结论小鼠14天龄之前是melanopsin阳性神经节细胞发育的关键阶段，在此阶段内，melanopain阳性神经节细胞数量逐渐减少，提前开睑光刺激使melanopsin阳性神经节细胞数量进一步减少。本研究结果有助于揭示melanopsin在视网膜神经节细胞发育过程中的表达变化及其可能的分子机制。     

替米沙坦对糖尿病小鼠早期视网膜病变的抑制作用及机制

目的　探讨玻璃体内注射替米沙坦对小鼠糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）的影响及其保护机制。方法　取健康成年雄性C57BL/6J小鼠70只,将小鼠随机分成空白对照组（10只）、溶剂对照组（10只）和糖尿病组（50只）;采用腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）建立糖尿病小鼠模型,溶剂对照组腹腔注射等剂量的柠檬酸钠缓冲液,依据造模后左眼玻璃体内所给予药物将糖尿病组小鼠随机分为替米沙坦组、康柏西普组和模型对照组。采用Western-blotting检测各组小鼠视网膜中血管内皮生长因子A （vascular endothelial growth factor-A,A VEGF-A）、晚期糖基化终末产物受体 （receptor for advanced glycosylation end product,RAGE）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）蛋白的表达,通过HE染色在光学显微镜下观察各组小鼠视网膜形态学的变化,利用荧光血管造影观察各组小鼠视网膜血流灌注的状态。结果　Western-blotting结果显示:模型对照组与空白对照组相比,VEGF-A、RAGE、TNF-α的蛋白表达均明显升高（均为P<0.001）;替米沙坦组左眼较右眼VEGF-A、RAGE、TNF-α的蛋白表达均明显降低（均为P<0.001）;康柏西普组左眼较右眼VEGF-A、RAGE、TNF-α的蛋白表达均降低（均为P<0.01）;溶剂对照组与空白对照组相比,VEGF-A、RAGE、TNF-α的蛋白表达差异均无统计学意义（均为P>0.05）,模型对照组左眼与右眼相比VEGF-A、RAGE、TNF-α的蛋白表达差异均无统计学意义（均为P>0.05）。HE染色显示,空白对照组小鼠视网膜各层细胞分界清晰,形态正常,神经细胞排列整齐;模型对照组小鼠视网膜各层分界不清,细胞发生空泡样变,神经细胞排列不整齐;替米沙坦组小鼠左眼较右眼视网膜损伤程度减轻;康柏西普组小鼠左眼较右眼视网膜损伤程度减轻。荧光血管造影显示:空白对照组视网膜血流灌注均匀充盈;模型对照组视网膜血流灌注不均匀,血管形态迂曲;替米沙坦组和康柏西普组左眼经过治疗后较右眼有明显改善。结论　玻璃体内注射替米沙坦通过抑制VEGF-A、RAGE及TNF-α的蛋白表达,可以改善糖尿病小鼠早期视网膜病变。     

溶血卵磷脂酰基转移酶1自发突变小鼠视网膜组织和闪光视网膜电图改变

目的 观察溶血卵磷脂酰基转移酶1（LPCAT1）自发突变小鼠视网膜组织和闪光视网膜电图（F-ERG）改变情况。方法 Lpcat1基因自发突变纯合子的rd11新生小鼠60只（实验组）和与之同龄的野生型C57BL/6J小鼠60只（对照组）纳入实验。采用免疫荧光法检测两组小鼠视网膜组织中LPCAT1的表达情况。出生后3、6、9 d和2、4、6、8周,行视网膜石蜡切片观察视网膜显微结构;行全视野F-ERG检测,记录暗视杆体反应和明视锥体反应。结果 实验组小鼠视网膜组织中LPCAT1呈阴性表达;对照组小鼠视网膜组织中LPCAT1呈阳性表达,主要分布于视网膜光感受器内节,神经节细胞层可见少量表达。光学显微镜观察发现,实验组小鼠于出生后9 d左右视网膜外核层已基本形成,其光感受器细胞核层数随年龄增长而逐渐减少。对照组小鼠视网膜显微结构正常。F-ERG检测结果 显示,实验组小鼠出生后2、4周暗视杆体系统反应存在,呈降低趋势,出生后6~8周暗视杆体系统反应消失;对照组小鼠各时间点暗视杆体系统反应正常。出生后2周,实验组和对照组小鼠b波振幅分别为（72.8±15.6）、（105.2±21.1） μV,实验组较对照组降低,但差异无统计学意义（t=-2.760,P=0.025）。出生后4周,实验组和对照组小鼠b波振幅分别为（20.6±6.4）、（231.8±32.0） μV,实验组较对照组明显降低,差异有统计学意义（t=-14.471,P=0.000）。实验组小鼠出生后2、4、6周明视锥体系统反应存在,呈降低趋势,出生后8周明视锥体系统反应消失;对照组小鼠各时间点明视锥体系统反应正常。出生后2、4周,实验组小鼠b波振幅分别为（46.8±7.2）、（78.0±8.2） μV;对照组小鼠b波振幅分别为（42.8±6.4）、（91.4±9.4） μV。两组比较,差异均无统计学意义（t=0.930、-2.401,P=0.379、0.043）。出生后6周,实验组和对照组小鼠b波振幅分别为（17.2±2.0）、（116.2±12.9） μV,实验组较对照组明显降低,差异有统计学意义（t=-17.008,P=0.000）。结论 LPCAT1自发突变小鼠视网膜外层光感受器细胞核层数随年龄增长而逐渐减少,F-ERG暗视杆体和明视锥体反应异常。     

β趋化因子受体CCR1在遗传性视网膜变性小鼠视网膜中的表达

目的探讨B趋化因子主要的受体之一β趋化因子受体1（CCR1）在视网膜变性模型小鼠（rd小鼠）的视网膜变性过程中的表达及其在感光细胞凋亡中的病理作用。设计实验研究。研究对象出生后8、10、12、14、16及18天的rd小鼠各10只（共60只）及同龄C57BL／6N对照小鼠各10只（共60只）。方法小鼠断颈处死,取双眼眼球制作冰冻切片或分离新鲜视网膜组织。逆转录多聚酶链反应（RT．PCR）测定各鼠龄rd小鼠及对照鼠视网膜CCR1mRNA的表达水平。免疫组织化学法观察CCR1蛋白在各鼠龄rd小鼠视网膜的定位表达。CCR1在感光细胞及凋亡细胞中的表达由免疫荧光双标法确定。主要指标视网膜CCR1mRNA及蛋白的表达、CCR1的细胞定位及与凋亡细胞的关系。结果CCR1mRNA在对照组及各鼠龄rd小鼠视网膜中均有表达,但在出生后12、14天rd小鼠视网膜中表达明显升高（光密度值分别为0．986±0．17和1．152＋0．22,P=0．010和0．008）。CCR1阳性染色细胞开始出现于出生后8天的rd视网膜外核层,并于12及14天达到高峰。对照组视网膜外核层无CCRl阳性染色。CCR1与视紫红质、CD11b或TUNEL染色免疫荧光双标结果显示,CCR1表达于感光细胞而非小胶质细胞中,部分CCR1表达于凋亡的感光细胞中。结论在rd小鼠视网膜中CCR1表达于感光细胞并随其变性程度加重表达升高。CCR1的活化可能在rd小鼠感光细胞凋亡中发挥作用。