ORP8对结直肠癌DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 观察和分析氧化固醇结合蛋白相关蛋白8(ORP8)蛋白对人结直肠癌DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探究其影响机制.方法 通过在结直肠癌DLD-1细胞中转染ORP8表达质粒或特异性沉默siRNA上调和下调ORP8的表达,采用CCK-8、Transwell实验检测干扰或过表达ORP8对DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot检测了 ORP8对DLD-1细胞细胞外蛋白调节激酶(ERK1/2)的总蛋白及其磷酸化(p-ERK1/2)水平和上皮-间质转化(EMT)相关分子标志物蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达的影响.结果 干扰DLD-1细胞ORP8表达,细胞增殖、迁移和侵袭能力均升高(P＜0.01),EMT相关分子标志物中上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平下降,间质标志物Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平升高,ERK1/2蛋白的磷酸化水平也升高;相反,过表达ORP8,细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05),上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平升高,间质标志物Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平降低,p-ERK1/2水平也降低.结论 ORP8蛋白能够抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与阻断EMT和抑制ERK1/2磷酸化有关.     

白藜芦醇对食管鳞癌Eca-109细胞侵袭迁移及EMT的影响

目的:研究白藜芦醇(RES)对食管鳞癌Eca-109细胞侵袭迁移及上皮间质转化(EMT)的影响.方法:用不同浓度(50和100 μmol/L)的RES处理Eca-109细胞,采用细胞划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力,荧光定量PCR检测EMT蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果:与对照组比较,RES各浓度(50 μmol/L和100 μmol/L)组均可明显抑制Eca-109细胞侵袭迁移(P<0.01),下调N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0.05~P<0.01),增加E-cadherin mRNA和蛋白表达(P<0.01).结论:RES抑制Eca-109细胞侵袭迁移能力,其机制可能通过下调MMP-2、MMP-9的表达,调控EMT蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)的表达、抑制上皮间质转化过程.     

LncRNA SNHG3对宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探究长链非编码RNA（lncRNA）小核仁RNA宿主基因3（SNHG3）对人宫颈癌细胞系SiHa增殖、迁移及侵袭的影响。方法 利用 GEO 数据库芯片分析 lncRNA SNHG3 在正常宫颈组织和宫颈癌样本中的表达;通过实时定量 PCR 检测LncRNA SNHG3、上皮-间质转化标志物 N-cadherin、Snail、Vimentin 和 E-cadherin 基因表达水平;通过 Western blot 检测 N-cadherin、Snail、Vimentin和E-cadherin蛋白表达水平;在SiHa细胞中转染siRNA干扰片段来敲低lncRNA SNHG3,并采用qRT-PCR验证转染效率;通过CCK8实验检测细胞增殖能力,划痕愈合实验检测细胞横向迁移能力,Transwell小室实验检测细胞纵向迁移及侵袭能力。结果 LncRNA SNHG3在宫颈癌组织及细胞系中高表达;敲低lncRNA SNHG3后,明显抑制SiHa细胞的增殖能力（P<0.001）、迁移能力（P<0.01）和侵袭能力（P<0.001）;qRT-PCR和Western blot结果显示敲低lncRNA SNHG3可下调N-cadherin、Snail和Vimentin表达水平（P<0.001）,同时上调E-cadherin表达水平（P<0.001）。结论 LncRNA SNHG3可通过激活EMT通路促进宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移及侵袭能力。     

miR-122通过AXL/HIF-1α通路抑制子宫内膜癌细胞增殖和上皮间质转化

【摘要】 目的 探讨miR-122对子宫内膜癌细胞（RL-952）增殖、上皮间质转化(EMT)及受体酪氨酸激酶(AXL)/缺氧诱导因-1α(HIF-1α)信号通路的影响。方法 体外培养人子宫内膜癌细胞株RL-952,将细胞分为空白对照组(仅用培养基)、阴性对照组(转染miR-122 NC)、miR-122 mimics组(转染miR-122 mimics),采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组细胞miR-122水平,利用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白印迹（WB）法检测AXL、HIF-1α蛋白以及EMT相关蛋白E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin的表达变化。结果 与空白对照组、阴性对照组相比,miR-122 mimics组RL-952细胞转染后48小时细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、AXL、HIF-1α、N-cadherin和Vimentin蛋白表达均显著下降（P＜0.05）,E-cadherin、α-catenin蛋白表达、细胞凋亡率均明显升高（P＜0.05）,空白对照组与阴性对照组比较,细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、细胞凋亡率、细胞AXL、HIF-1α、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论 过表达miR-122可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化,促进细胞凋亡,可能是通过抑制AXL/HIF-1α通路而实现。     

转录因子HOXA5在乳腺癌细胞中的下游信号通路研究

目的:探究转录因子HOXA5在乳腺癌进展中的作用。方法:构建过表达HOXA5的稳定转染BT549和SUM159细胞系,在稳转BT549细胞系中利用Transwell检测细胞的转移能力;Western blotting检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平的变化;平板克隆实验检测细胞的增殖能力;转录组测序技术(RNA-seq)进一步分析HOXA5的调控基因,利用软件Cluster 3.0,treeview和DAVID生物信息数据库(DAVID Bioinformatics Resources)以及Enrichr分析KEGG信号通路,绘制热图(heatmap)。结果:BT549细胞系中,稳定转染HOXA5后的实验组细胞迁移能力显著降低(P<0.001),且上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平显著上调,间质标志物N-cadherin,Twist1,Slug蛋白表达水平显著下调;平板克隆结果表明,实验组形成的克隆数目明显减少(P<0.05),克隆大小明显降低。结论:HOXA5通过促进细胞由间质向上皮转化,抑制乳腺癌细胞迁移,并且抑制细胞增殖;HOXA5通过调节糖脂代谢途径调节癌细胞增殖,并且还通过调节细胞运动和粘附相关的基因抑制肿瘤细胞的迁移,通过肿瘤坏死因子(TNF)信号通路发挥抗肿瘤作用。总之,转录因子HOXA5对乳腺癌的发展和恶化起着显著的抑制作用。     

二甲双胍抑制人前列腺癌细胞上皮间质转化及其作用机制

目的 研究二甲双胍对前列腺癌Vcap细胞增殖、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响,初步探讨microRNA(miRNA) 相关的作用机制。方法 以PBS处理组作为对照,使用不同浓度二甲双胍(1~50mmol/L) 处理前列腺癌Vcap细胞,MTS比色法检测细胞的增殖能力;流式细胞术分析二甲双胍对Vcap细胞周期分布的影响;划痕和侵袭小室实验分别检测5mmol/L二甲双胍和miR30a对细胞迁移和侵袭能力的作用;使用RT-PCR和Western blotting测定5mmol/L二甲双胍对Vcap细胞上皮指标物（E-cadherin、β-catenin）和间质指标物（Vimentin、Snail）mRNA和蛋白表达水平的影响;使用RT-PCR检测miR30a、miR143、miR185、miR196、miR205的表达水平变化。结果 二甲双胍抑制前列腺癌Vcap细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖性。5mmol/L 二甲双胍明显影响Vcap细胞的周期分布并显著抑制Vcap细胞的迁移和侵袭能力。二甲双胍在mRNA和蛋白水平上,显著上调Vcap细胞中E-cadherin 和β-catenin的表达(P均<0.05) ,下调Vimentin和N-cadherin的表达(P均<0.05)。进一步的实验发现,二甲双胍显著上调miR30a的表达水平 (P<0.05),而后者可显著抑制Vcap细胞的增殖和EMT的发生。结论 二甲双胍明显抑制前列腺癌Vcap细胞的增殖、侵袭能力和上皮间质转化的过程。该过程可能涉及二甲双胍对miR30a的表达的上调。     

miR-200及其靶基因ZEB1/2在急性肺损伤后早期肺纤维化中上皮-间质转化(EMT)过程

目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱发小鼠急性肺损伤后早期肺纤维化过程中miR-200b/c及其靶基因ZEB1/2的表达变化.方法 应用LPS 3次打击的方法构建小鼠急性肺损伤后早期肺纤维化模型,分别于造模后第3、7、14、21天处死小鼠,留取肺组织备用.各组小鼠肺组织切片行HE和Masson染色并在光学显微镜下观察病理改变;Real-time PCR检测肺组织miR-200b、miR-200c、ZEB1 m RNA、ZEB2 m RNA表达;Western blot检测肺组织ZEB1、ZEB2、E-cadherin、Vimentin、α-SMA蛋白表达.结果 (1)病理结果:与对照组相比,LPS处理后第3天肺组织胶原纤维开始沉积,随着时间延长,肺纤维化程度逐渐加重;(2)Real time-PCR结果:随着肺纤维化程度加重,miR-200b、miR-200c水平均呈下降趋势,第7、14、21天时均显著低于对照组(P<0.01);ZEB1 m RNA、ZEB2 m RNA水平呈上升趋势,且ZEB2 m RNA较ZEB1 m RNA表达增加更显著;(3)Western blot结果:随着急性肺损伤后肺纤维化的进展,ZEB1、ZEB2蛋白表达亦升高,与其m RNA表达变化相一致;上皮标志物E-cadherin蛋白表达逐渐减少,间质标志物Vimentin、α-SMA蛋白表达逐渐增多.结论 在LPS诱发急性肺损伤后早期肺纤维化过程中miR-200b/c表达降低,并通过负性调控其靶控基因转录抑制因子ZEB1/2的表达促进上皮向间质转化.     

溶酶体跨膜蛋白5在卵巢癌细胞上皮-间质转化中的作用

目的 检测溶酶体跨膜蛋白5 (LAPTM5)在人卵巢腺癌细胞(OVCAR3)中的表达,观察LAPTM5对OVCAR3细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨LAPTM5在上皮-间质转化(EMT)过程中的作用。方法 采用Western blotting检测OVCAR3中LAPTM5的表达情况;将OVCAR3细胞随机分为2组,分别转染空载质粒和LAPTM5沉默质粒,实时定量PCR检测转染效率和EMT相关标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin mRNA的表达水平。结果 LAPTM5在OVCAR3细胞中表达上调(P <0.01);与对照组相比,转染LAPTM5沉默质粒的OVCAR3细胞株迁移、侵袭能力明显下降(P <0.05),EMT上皮标志物E-cadherin mRNA表达水平显著上调(P <0.05),间质标志物N-cadherin mRNA和Vimentin mRNA表达下调(P <0.05)。结论 LAPTM5在人卵巢腺癌细胞OVCAR3中表达上调,LAPTM5可能通过EMT影响OVCAR3细胞迁移和侵袭的能力。     

miR-139-5p靶向Notch1抑制前列腺癌细胞上皮间质转化与转移

目的 探讨miR-139-5p靶向调节Notch1表达对前列腺癌(PCa)细胞上皮间质转化(EMT)和转移能力的影响。方法 收集福建医科大学附属泉州第一医院泌尿外科手术切除的PCa组织标本,购买PCa细胞系,分别以良性前列腺增生(BPH)标本和人前列腺上皮细胞系为对照。采用qRT-PCR实验和Western-blot实验分别检测组织和细胞中miR-139-5p和Notch1的表达;采用双荧光素酶报告实验验证miR-139-5p与Notch1的靶向关系;采用Western-blot实验检测细胞EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和Vimentin蛋白水平;采用Transwell实验检测细胞迁移能力;采用裸鼠尾静脉注射肿瘤细胞的方式建模,评估肺部肿瘤转移灶的情况。结果 在组织学和细胞水平上,与BPH组织比较,前列腺癌miR-139-5p低表达,而Notch1高表达,差别有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,高表达miR-139-5p的PC-3细胞E-cadherin表达升高,N-cadherin和Vimentin表达降低;Tra...     

PD-L1激活NF-κB促进子宫内膜癌细胞上皮间质转化的作用研究

目的 探讨程序性死亡蛋白配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)过表达对子宫内膜癌细胞Ishikawa上皮间质转化的影响及可能机制。方法 使用实验室构建的PD-L1过表达稳转细胞株Ishikawa/PD-L1及稳转空载对照组Ishikawa/EV,qPCR及Western blot法检测PD-L1过表达效率,Transwell和划痕实验检测细胞迁移能力和侵袭活性,Western blot法检测上皮间质转化相关蛋白表达和核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)磷酸化水平。结果 与对照组相比,Ishikawa/PD-L1迁移能力与侵袭活性显著增强,Vimentin、N-cadherin、p-p65蛋白表达明显升高,E-cadherin表达明显下调。结论 PD-L1可通过诱导NF-κB信号通路激活,促进上皮间质转化,进而增强子宫内膜癌细胞的迁移、侵袭能力。     

miR-200C-3p靶向调控ZEB2抑制前列腺癌细胞增殖和迁移的实验研究

  目的  前列腺癌的进展与多种因素有关,本研究旨在探索miR-200C-3p对前列腺癌细胞系的影响,并分析miR-200C-3p与ZEB2的潜在机制。  方法  通过qRT-PCR检测miR-200C-3p在前列腺癌细胞系PC-3、DU145、前列腺上皮细胞RWPE-1的表达量。DU145转染miR-200C-3p后,通过CCK-8、划痕修复实验以及Transwell实验探究增殖与迁移能力。沉默ZEB2后分析DU145增殖和迁移能力的变化,采用双荧光素酶报告法蛋白免疫印迹实验测定miR-200C-3p与E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)的潜在关系。  结果  qRT-PCR结果显示RWPE-1中miR-200C-3p表达量是DU145的2.5倍左右。DU145转染miR-200C-3p mimics后CCK-8实验组的增殖能力明显弱于对照组,划痕修复实验实验组[(20.33±1.45)%]与对照组[(46.67±2.40)%]相比愈合能力明显减弱(P < 0.001),Transwell实验结果表明实验组(114.30±5.21)与对照组(212.00±6.49)相比迁移能力显著下降(P < 0.001)。沉默ZEB2可抑制DU145细胞的增殖和迁移能力(P < 0.05),双荧光素酶报告和蛋白免疫印迹实验证实miR-200C-3p在DU145中过表达降低了ZEB2的蛋白表达(P < 0.05)。  结论  miR-200C-3p通过介导ZEB2抑制DU145的增殖和迁移。      

MiR-4719通过靶向调控ARHGAP36抑制人乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 检测miR-4719在乳腺癌组织和细胞中的表达,研究其对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响及其分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR检测30对人乳腺癌组织和癌旁组织,乳腺癌细胞株（BT549和MDA-MB-231）以及正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）中miR-4719和ARHGAP36的表达水平。生物信息手段分析miR-4719对乳腺癌患者生存率的影响,并预测miR-4719的潜在靶基因。将miR-4719模拟物,靶向ARHGAP36的shRNA、ARHGAP36过表达质粒分别转染乳腺癌细胞。Western blot和免疫组化实验检测ARHGAP36的蛋白水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测癌细胞的迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-4719与ARHGAP36的mRNA 3'-非翻译区（3'-UTR）直接结合。结果 与癌旁组织、正常乳腺上皮细胞相比,miR-4719和ARHGAP36分别在乳腺癌组织(P<0.001)和乳腺癌细胞（P<0.01）中显著降低和增高。miR-4719低表达与乳腺癌患者不良预后密切相关（P<0.01）。过表达miR-4719或敲低ARHGAP36可明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移（P<0.01）。乳腺癌组织中miR-4719和ARHGAP36表达水平呈负相关（P<0.01）,双荧光素酶报告实验显示miR-4719可靶向调控ARHGAP36的表达（P<0.01）,向癌细胞外源性导入miR-4719可明显抑制ARHGAP36的表达（P<0.01）。此外,过表达ARHGAP36可逆转miR-4719模拟物对癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用（P<0.01）。结论 乳腺癌组织和癌细胞中miR-4719的丧失,导致靶基因ARHGAP36的异常高表达,促进了人乳腺癌细胞的迁移和侵袭。     

过表达miR-23b-3p对甲状腺未分化癌FRO细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨miR-23b-3p对甲状腺未分化癌(ATC)FRO细胞侵袭和迁移能力的影响。 方法qRT-PCR法检测52例ATC癌组织及其癌旁组织中miR-23b-3p和锌指E盒结合同源框1(ZEB1)的表达水平,并分析两者的相关性。培养人ATC细胞株FRO,将miR-23b-3p mimic及其阴性对照转染至FRO细胞中,qRT-PCR检测miR-23b-3p和ZEB1 mRNA表达水平。体外三维培养观察细胞血管生成拟态(VM)形成能力;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;Western blotting检测ZEB1、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平,双荧光素酶报告实验验证miR-23b-3p和ZEB1的靶向调控关系。 结果ATC组织中miR-23b-3p表达水平低于癌旁组织,而ZEB1的表达水平高于癌旁组织,且两者在ATC组织中的表达水平呈负相关。过表达miR-23b-3p能显著下调ZEB1表达水平,抑制FRO细胞VM形成以及侵袭和迁移能力,同时抑制细胞中VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达。荧光素酶报告实验证实ZEB1是miR-23b-3p的靶基因。 结论过表达miR-23b-3p可能通过靶向下调ZEB1表达抑制FRO细胞的侵袭和迁移能力。     

SHOX2体外增强膀胱癌细胞的迁移、侵袭和干细胞特性

目的 探讨人矮小同源盒基因2（SHOX2）对人膀胱癌细胞迁移、侵袭能力和干细胞特性的影响及其可能机制。方法 分析TCGA肿瘤数据库中SHOX2基因在膀胱癌标本和癌旁对照标本的表达情况,利用GEPIA网站对TCGA膀胱数据中的SHOX2基因表达量进行单因素生存分析,并利用GSEA软件预测其可能的生物学功能。选取对数生长期的人膀胱癌细胞T24,采用SHOX2 shRNA及SHOX2过表达质粒分别敲低、过表达SHOX2基因,用Western blot检测SHOX2蛋白表达量,通过划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力,悬浮成球、克隆形成实验检测细胞的干细胞特性。在光镜下观察细胞形态变化,并用Western blot检测细胞上皮间充质转化（EMT）标志分子E-cadherin、Vimentin蛋白表达量的变化和TGF-β信号通路重要组件TβR-I蛋白表达量的变化。结果 与癌旁膀胱组织相比,SHOX2基因在TCGA膀胱癌组织中表达升高（P=0.01）,在配对的膀胱癌组织中明显升高（P=0.001）,SHOX2基因表达与总生存率呈负相关（P=0.01）;GSEA显示SHOX2基因表达与EMT（P=0.002,P=0.03）及干细胞特性（P=0.006,P=0.008）呈正相关。在膀胱癌细胞 T24 中,两种不同的 SHOX2 shRNA 均能降低SHOX2的蛋白表达水平（shSHOX2-1,P=0.004;shSHOX2-2,P=0.03）,SHOX2过表达质粒则能提高SHOX2的蛋白表达水平（P=0.007）。划痕实验、Transwell侵袭实验结果显示,抑制SHOX2表达后膀胱癌细胞的迁移（P<0.001,P=0.02）、侵袭（P=0.002,P=0.003）能力明显降低,而SHOX2过表达则提高膀胱癌细胞的迁移（P<0.001）、侵袭（P=0.004）能力。悬浮成球、克隆形成实验结果显示,抑制SHOX2表达后明显减弱膀胱癌细胞的干细胞特性（P=0.002,P=0.007,P<0.001）;而SHOX2过表达则增强膀胱癌细胞的干细胞特性（P=0.002,P<0.001）。此外,抑制SHOX2表达可使细胞发生上皮样形态改变,而SHOX2过表达可使细胞发生间充质样形态改变;Western blot结果显示,抑制SHOX2表达可使膀胱癌细胞中的E-cadherin蛋白表达水平升高（P<0.00）,Vimentin（P<0.001,P=0.01）、TβR- I（P=0.03,P=0.02）蛋白表达水平降低;而 SHOX2 过表达可使膀胱癌细胞中的Vimentin（P=0.04）、TβR-I（P=0.003）蛋白表达水平升高。结论 SHOX2在膀胱癌中扮演致癌基因：SHOX2增强膀胱癌细胞的迁移、侵袭能力和干细胞特性,其作用机制可能与TGF-β信号通路参与调控的EMT有关。     

CircRNA＿000809通过miR-200c-3p对子宫内膜异位症间质细胞的增殖、迁移及上皮间质转化的影响

目的：探讨circRNA＿000809通过靶向mi R-200c-3p调控子宫内膜异位症间质细胞增殖、迁移及上皮-间质转化（EMT）的作用。方法：收集2020年1月至2022年1月于温州医科大学附属第二医院育英儿童医院行卵巢囊肿剥除术患者的卵巢巧克力囊肿组织25例,设为子宫内膜异位症组;收集25例正常子宫内膜组织,标本来自于因早期宫颈癌行子宫切除术或者行宫腔镜检查术的育龄期非子宫内膜异位症患者,设为正常子宫内膜组。采用qRT-PCR法检测正常子宫内膜、异位内膜组织中circRNA＿000809、miR-200c-3p的表达量;分别采用EdU实验和Transwell实验检测异位子宫内膜间质细胞的增殖及迁移;采用蛋白质印迹法（Western blot）检测相关蛋白表达水平。结果：与正常子宫内膜组织比,异位子宫内膜中circRNA＿000809表达上调（P<0.05）,而miR-200c-3p的表达下调（P<0.05）;且Pearson相关性分析显示在异位子宫内膜组织中circRNA＿000809与miR-200c-3p的表达量呈负相关（P<0.05）;分别用siNC+in...     

血管抑制素-2通过调控上皮细胞间质化促进宫颈癌细胞的增殖和转移

目的 探讨血管抑制素-2（VASH2）能否促进宫颈癌细胞在体外的增殖和转移及其可能的分子机制。方法 在外源性过表达和干扰内源性flotillin-1表达的宫颈癌细胞中,通过公共数据库结合RNA-seq挖掘分析差异表达基因;在宫颈正常上皮细胞（HcerEpic细胞）和宫颈癌细胞（HeLa、C-33A、Ca ski、SiHa和MS751）以及不同淋巴结转移状态的新鲜宫颈癌组织中检测VASH2的表达;运用慢病毒稳定表达载体构建外源性过表达VASH2和干扰内源性VASH2表达的宫颈癌细胞及对照细胞,并检测其增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成的情况;在上述细胞模型中检测上皮细胞间质化（EMT）过程关键分子及TGF-β的表达水平。结果 RNA-seq发现在外源性过表达flotillin-1的宫颈癌细胞中VASH2的表达上调（P<0.05）,而在抑制内源性flotillin-1表达的细胞中VASH2表达下调（P<0.05）,并在公共数据库中证实VASH2在有淋巴结转移的宫颈癌组织中相对于无淋巴结转移的癌组织呈高表达（P<0.01）。相对于HcerEpic细胞和淋巴结未转移的宫颈癌组织,VASH2在Ca Ski、SiHa、MS751细胞和有淋巴结转移的宫颈癌组织中表达上调（P<0.05）;相对于对照细胞,外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成能力增强,而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞上述能力则受到抑制（P<0.05）;相对于对照细胞,外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞中EMT过程的关键分子E-cadherin下调,N-cadherin、Vimentin和VEGF-C上调,而抑制内源性 VASH2 表达的宫颈癌细胞中 E-cadherin 上调,N-cadherin、Vimentin 和 VEGF-C 下调（P<0.05）;外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞中TGF-β的mRNA表达水平上调,而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞中TGF-β的mRNA表达水平下调（P<0.001）。结论 flotillin-1可能通过下游靶基因VASH2参与 TGF-β信号通路诱导EMT过程在体外促进宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成。     

MicroRNA-93在宫颈癌中的表达及其对细胞生物学行为的影响

目的  探讨microRNA-93（miR-93）在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法  收集2014年1月-2014年7月中南大学湘雅医院有完整病历资料的41例宫颈癌患者组织标本及对应癌旁组织,实时荧光定量-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测宫颈癌组织中miR-93表达水平;采用脂质体转染法将miR-93模拟片段（mimic）转染入宫颈癌Hela细胞,恢复细胞内miR-93表达;活细胞计数试剂盒（CCK-8）和流式细胞术检测miR-93对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响;Transwell小室法检测其对Hela细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot检测Hela细胞中上皮生长因子受体（EGFR）及其下游蛋白的表达量变化。结果  41例宫颈癌患者肿瘤组织中miR-93表达量（0.048±0.013）低于癌旁组织（0.113±0.025）,差异有统计学意义（P =0.026）;转染miR-93模拟片段后,宫颈癌Hela细胞中miR-93表达恢复;与对照组和空白组比较,实验组宫颈癌细胞增殖能力下降（P =0.004）,早期凋亡比例增加（P =0.032）,侵袭（P =0.003）和迁移能力下降（P =0.003）;过表达miR-93的Hela细胞EGFR及下游的p-AKT表达下降（P =0.005）,而总AKT蛋白无明显变化（P =0.372）。结论  miR-93在宫颈癌组织中的表达量下降,恢复其在宫颈癌细胞中的表达能够明显抑制其细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制部分与miR-93抑制宫颈癌细胞EGFR/AKT信号通路活性有关。

     

miR-376c-3p通过靶向谷氨酸受体相互作用蛋白1影响乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-376c-3p在乳腺癌中的表达水平、生物学功能及分子调控机制.方法:通过实时荧光定量PCR检测乳腺上皮MCF-10A细胞及乳腺癌细胞中miR-376c-3p表达水平;然后,用miR-376c-3p mimic转染乳腺癌MCF-7与MDA-MB-231细胞,用平板克隆实验、划痕实验以及Transwell...     

前列腺癌中miR-140-5p靶向YES1抑制细胞增殖和迁移的作用研究

目的 研究miR-140-5p与YES1的靶向调控关系,阐明miR-140-5p通过YES1调控前列腺癌发生发展的作用,并研究miR-140-5p在前列腺癌细胞中的潜在作用机制.方法 采用实时定量PCR检测前列腺癌组织和细胞系中miR-140-5p的表达,采用CCK-8、细胞克隆实验、迁移和划痕实验测定miR-140-...     

miRNA-143对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miRNA-143对鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响.方法 利用荧光定量PCR检测人永生化鼻咽上皮细胞(NP69)、高分化鼻咽癌细胞(CNE-1)、低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平.利用感染慢病毒的方式建立稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞,并用荧光定量PCR法进行检测.通过CCK-8法检测过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞增殖的影响,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞迁移和侵袭的影响.结果 低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平显著低于CNE-1和NP69细胞(P<0.01).稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞(CNE-2Z/miR-143)中miRNA-143的表达水平显著高于CNE-2Z细胞(P<0.01)和慢病毒对照组细胞(CNE-2Z/miR-NC)(P<0.01).细胞增殖能力检测显示,与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比,CNE-2Z/miR-143组在72 h和96 h时细胞活力显著降低(P<0.05,P<0.01).Transwell迁移和侵袭试验结果显示,CNE-2Z/miR-143组与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01).结论 miR-143能够抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖、迁移和侵袭能力,提示其可能对鼻咽癌的诊断、治疗及预后评价有重要意义.