精索静脉曲张对青春期大鼠生精细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的 研究精索静脉曲张(VC)对青春期大鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因Bcl-2／Bax表达的影响,探索精索静脉曲张致不育的机理。方法 通过部分结扎左肾静脉建立青春期大鼠实验性精索静脉曲张模型,分别于术后2周、4周、8周取双侧睾丸,用免疫组化SABC法检测Bcl-2／Bax基因表达。结果 随着精索静脉曲张时间的延长,Bcl-2表达呈下降趋势,曲张组比对照组低,左侧睾丸比右侧睾丸低;而Bax表达呈增加趋势,曲张组比对照组高,左侧睾丸比右侧睾丸高。结论 实验性精索静脉曲张可明显改变青春期大鼠睾丸组织生精细胞凋亡相关基因与Bcl-2／Bax表达。     

精索静脉曲张促生精细胞凋亡机制研究进展

精索静脉曲张(varicocele,VC)是男性常见病,普通人群发病率为15%,近1/3不育男性患有VC, WHO在男性不育研究中已把VC列为首位,然而其所致不育的机制至今仍未完全阐明。研究发现,VAC不育患者存在细胞分子及遗传学方面的异常,包括氧化     

精索静脉高位结扎术对精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡的影响

目的:通过建立实验性精索静脉曲张大鼠动物模型,探讨精索静脉高位结扎术对同侧睾丸生精细胞凋亡机制的影响。方法:雄性大鼠60只,随机分为对照组、假手术组、EV组(模型组)、Varicocelectomy组(治疗组),每组15只。术后取左侧睾丸,采用HE染色观察睾丸组织学变化,TUNEL法检测生精细胞凋亡指数,免疫组化和RT-PCR法分别检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达。结果:模型组大鼠左侧睾丸组织可见生精上皮排列紊乱,生精细胞广泛脱落,细胞凋亡指数明显高于对照组、假手术组(P<0.05),治疗后凋亡指数明显减少,与模型组比较,差异有显著性(P<0.05);治疗组中Bax、Caspase-3表达减少,Bcl-2表达增加,与模型组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:精索静脉高位结扎术可抑制睾丸生精细胞凋亡,且Bcl-2、Bax和Caspase-3通过线粒体信号转导通路参与并调控生精细胞凋亡过程,从而在精索静脉曲张疾病中发挥保护作用。     

通精灵对实验性精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡的影响

目的探讨通精灵对精索静脉曲张大鼠睾丸生精功能的保护作用。方法将50只成年清洁级雄性Wistar大鼠分为假手术组(10只)、模型组(10只)、通精灵低剂量组(10只)、通精灵中剂量组(10只)和通精灵高剂量组(10只),按Sapyol法制作左精索静脉曲张大鼠模型。造模1个月后,不同浓度通精灵水煎剂灌胃,每日1次,连续60d。采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测睾丸生精细胞凋亡,比较各组左睾丸凋亡指数(AI)。结果模型组左睾丸AI明显高于假手术组及通精灵各组(<0.01),通精灵各组左睾丸AI低于模型组(<0.05)。结论通精灵能降低实验性精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡,对睾丸生精功能有保护作用。     

精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸生精细胞HIF-1α和Bax表达的影响

目的 研究精索静脉曲张(varicocele, VC)对大鼠睾丸生精细胞低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α、HIF-1α)和Bax表达的影响,探索精索静脉曲张引起不育的机制.方法 采用青春期雄性Wistar大鼠复制左侧精索静脉曲张模型,将25只大鼠分为VC组(n=15)和假手术组(SOG)(n=10),于术后30 d一并处死,取左侧睾丸,用免疫组化S-P法检测HIF-1α和Bax的表达.结果 HIF-1α和Bax在VC组左侧睾丸组织中的表达均明显高于SOG组(P＜0.05),二者呈现一定的相关性(r=0.479 2,P＜0.05).结论 实验性精索静脉曲张可以改变青春期大鼠睾丸组织生精细胞HIF-1α和Bax的表达.     

精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸生精细胞HIF-1α和VEGF表达的影响

目的:研究精索静脉曲张(VC)对大鼠睾丸生精细胞低氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible facmr-1α、HIF-1α)和VEGF表达的影响,探索精索静脉曲张引起不育的机理.方法:采用青春期雄性Wistar大鼠复制左侧精索静脉曲张模型,分别于术后30天、60天处死、取左侧睾丸,用免疫组化SP法检测HIF-1α和VEGF的表达.结果:HIF-1α和VEGF在VC组左侧睾丸组织中的表达均明显高于假手术组(SOG),随着精索静脉时间延长,HIF-1α、VEGF表达降低,但仍高于假手术组.结论:实验性精索静脉曲张可以改变青春期大鼠睾丸组织生精细胞HIF-1α和VEGF的表达.     

通精灵对精索静脉曲张模型大鼠生精细胞凋亡及凋亡因子Cyt C、caspase-9的影响

[目的]探讨通精灵对精索静脉曲张模型大鼠睾丸组织的保护作用及与凋亡因子细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)、半胱氨酸蛋白酶-9(cysteine aspartic acid specific protease-9,caspase-9)表达的关系。[方法]72只SPF级Wistar大鼠,随机分成假手术组、模型组、通精灵低、中、高剂量组及左卡尼汀组。采用左肾静脉部分结扎法联合"夹尾激怒法"建立实验性精索静脉曲张合并中医肝气郁结证候复合大鼠模型。模型建立后,通精灵低、中、高剂量组分别给予浓度为1.6、3.2、6.4g·m L-1通精灵生药水煎液灌胃,假手术组和模型组予以0.9%氯化钠溶液灌胃,左卡尼汀组则予0.021g·mL-1左卡尼汀口服液灌胃,以上各组灌胃体积均为1mL/100g体质量,1次/d,持续8周。以HE染色观察睾丸组织结构;TUNEL染色和Annexin V-FITC法检测生精细胞凋亡情况;Western blot检测睾丸组织中Cyt C、caspase-9的表达。[结果]模型组中睾丸组织发生明显病理损伤,而通精灵各剂量组及左卡尼汀组中睾丸的病理损伤有不同程度改善。模型组中睾丸生精细胞凋亡率明显高于假手术组,差异有统计学意义(P0.05),通精灵中、高剂量组及左卡尼汀剂量组中生精细胞凋亡率明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。Western blot提示,模型组大鼠睾丸组织中Cyt C、caspase-9蛋白表达显著高于假手术组(P0.01);通精灵中、高剂量组及左卡尼汀组中Cyt C、caspase-9表达低于模型组(P0.05或P0.01);高剂量组中Cyt C、caspase-9蛋白表达明显低于左卡尼汀组(P0.05,P0.01)。[结论]通精灵可以有效改善精索静脉曲张大鼠睾丸组织损伤,降低Cyt C和caspase-9的表达,从而调控生精细胞的凋亡。这可能是通精灵改善精索静脉曲张患者生育能力的机制之一。     

生精中药对精索静脉曲张大鼠生殖作用的影响

目的:观察生精中药对精索静脉曲张大鼠生殖作用的影响.方法:90只大鼠随机分为3组,假手术组只开腹不做肾静脉结扎,模型组和生精中药组均建立精索静脉曲张模型.造模完成后15 d,生精中药组给予灌喂生精中药4 g/(kg·d),其他2组给予正常饮食.30 d后测定各组大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T),观察大鼠睾丸及附睾组织结构.结果:生精中药组血清T水平明显高于模型组,FSH与LH水平明显低于模型组(P均<0.05);光镜下大鼠睾丸及附睾组织结构优于模型组.结论:生精中药可以保护及修复功能受损的睾丸及附睾组织.     

补肾活血方对精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡的影响

目的探讨补肾活血方对精索静脉曲张模型大鼠生精细胞凋亡及各级生精细胞数的影响。方法将50只3月龄雄性SD大鼠先随机抽出10只为假手术组，其余40只大鼠采用肾静脉缩窄法建立精索静脉曲张病理模型，造模完成后再随机均分为模型组，补肾活血方低剂量组、中剂量组、高剂量组。造模后48d开始给药，连续给药60d，用流式细胞仪检测各纽大鼠睾丸生精细胞凋亡数、凋亡率及各级生精细胞数。结果假手术组未出现明显的凋亡峰，模型组与各治疗组均出现明显的凋亡峰，且模型组大鼠睾丸生精细胞凋亡率显著高于各治疗组（P〈0．01）。各级生精细胞数比较，1C细胞（精子细胞与精予）数模型组与各治疗组比较有显著性差异（P〈0．05）；2C细胞（次级精母细胞）数各组间比较无显著性差异；4C细胞数（初级精母细胞）模型组与治疗组比较有非常显著性差异（P〈0．01）。结论生精细胞大量凋亡是精索静脉曲张导致不育的重要病理机制，补肾活血方能降低生精细胞凋亡率，提高模型动物各级生精细胞数量。     

精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸生精细胞HIF-1α和Bax表达的影响

目的:研究精索静脉曲张(VC)对大鼠睾丸生精细胞低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α、HIF-1α)和Bax表达的影响,探索VC引起不育的机理.方法:采用青春期雄性Wistar大鼠复制左侧VC模型,将25只大鼠随机分为VC组(n=15)和假手术组(SOG)(n=10),于术后30天一并处死、取左侧睾丸,用免疫组化SP法检测HIF-1α和Bax的表达.结果:HIF-1α和Bax在VC组左侧睾丸组织中的表达均明显高于假手术组(SOG).结论:实验性VC可以改变青春期大鼠睾丸组织生精细胞HIF-1α和Bax的表达.     

雌激素替代治疗对去卵巢雌性大鼠萘性白内障晶状体上皮细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

目的 观察雌二醇及雌二醇联合孕酮对去卵巢雌性大鼠萘性白内障晶状体上皮细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法 将32只健康成年雌性SD大鼠随机分为4组,即对照组、卵巢切除组、雌二醇组(卵巢切除加雌二醇替代治疗组)、雌二醇加孕酮组(卵巢切除加雌二醇和孕酮替代治疗组).术后2周各组均用萘混悬液灌胃并行裂隙灯显微镜检查,观察各组大鼠晶状体变化;灌胃6周后处死大鼠,采用放射免疫法检测血清中雌二醇和孕酮浓度,免疫组化(S-P)法观察晶状体上皮细胞(LECs)中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果 雌二醇组、雌二醇加孕酮组以及对照组晶状体浑浊程度较卵巢切除组轻,出现时间晚;雌二醇组和雌二醇加孕酮组血清雌二醇与孕酮水平接近对照组(P>0.05);除卵巢切除组外,3组间Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);卵巢切除组血清雌二醇与孕酮水平显著低于其余3组(P<0.01),Bcl-2蛋白表达阳性率较其余3组低,Bax蛋白表达阳性率则较其余3组高(P<0.05).结论 抑制晶状体上皮细胞凋亡可能是雌二醇对萘处理去卵巢雌性大鼠晶状体保护作用的机制之一;雌二醇可能通过下调Bax蛋白表达和上调Bcl-2蛋白表达抑制LECs的凋亡而阻止晶状体混浊.     

甲醛对小鼠生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达及超微结构改变的影响

目的:研究甲醛对小鼠睾丸生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达及超微结构的改变.方法:取24只雄性清洁级(ICR)小鼠,随机分为4组,每组6只,用0.2、2、20 mg/kg甲醛腹腔注射,每天一次,连续5 d,第6天用免疫组化法测定小鼠睾丸生精细胞的Bcl-2、Bax蛋白表达率;用电镜观察小鼠睾丸生精细胞超微结构变化.结果:小鼠睾丸生精细胞的Bcl-2蛋白表达率明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.05),Bax蛋白表达率明显高于对照组,差异有显著性(P＜0.05);电镜观察结果显示,各浓度甲醛能使生精细胞的细胞核、染色质、线粒体等超微结构发生不同程度的病理改变.结论:甲醛可使小鼠生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达及超微结构发生显著性改变,从而诱导细胞凋亡.     

补肾生精丸对生精细胞损伤模型大鼠生精细胞凋亡与Bcl-2、Bax、Fas、FasL表达的影响

目的 观察补肾生精丸对腺嘌呤所致生精细胞损伤模型大鼠生精细胞凋亡的影响及凋亡相关基因的调控情况.方法 SD大鼠40只随机分为4组:正常组、模型组、中药治疗组(补肾生精丸组)、中药对照组(五子衍宗丸组).以腺嘌呤灌胃诱发生精细胞损伤肾阳虚模型,用TUNEL法检测各组大鼠睾丸组织生精细胞的凋亡情况;用免疫组化的方法检测Bcl-2、Bax、Fas及FasL的表达.结果 补肾生精丸能够抑制大鼠睾丸曲细精管生精细胞的凋亡,上调抑制凋亡基因Bcl-2的表达,下调促凋亡基因Bax、Fas、FasL的表达,与模型组比较有统计学意义(P<0.01).结论 补肾生精丸对腺嘌呤致生精细胞损伤模型大鼠生精细胞的凋亡有一定的抑制作用,其作用可能与该药调控Bcl-2、Bax、Fas、FasL的表达有关.     

Bcl-2、CytC和caspase-3在实验性精索静脉曲张大鼠生精细胞中的表达及意义

目的探讨实验性精索静脉曲张（EV）青春期大鼠生精细胞Bcl-2、细胞色素C（CytC）和caspase-3的表达及意义。方法青春期雄性Wistar大鼠72只,随机分为6组,每组12只,分别为A1组、A2组、A3组、B1组、B2组、B3组,A1组、A2组和A3组为实验组,B1组、B2组和B3组为对照组。实验组大鼠通过行左肾静脉部分结扎术制作左侧精索静脉曲张模型（ELV）;对照组只显露和游离左肾静脉,不结扎,其余步骤与实验组相同。模型建立后2、4、8周分别处死A1和B1组、A2和B2组、A3和B3组大鼠,取左侧睾丸,并用免疫组化方法检测左侧睾丸生精细胞Bcl-2、CytC和caspase-3的表达,用TUNEL法检测左侧睾丸生精细胞的凋亡并计算凋亡指数（AI）。结果实验组大鼠Bcl-2表达较对照组显著降低（P〈0.05）,而实验组CytC、caspase-3表达较对照组明显升高（P〈0.05）,实验组AI较对照组明显升高（P〈0.05）。结论精索静脉曲张大鼠生精细胞Bcl-2表达降低,CytC和caspase-3表达升高,从而导致睾丸生精细胞凋亡增加。     

羊睾丸提取液对铅暴露小鼠睾丸生精细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的 研究羊睾丸提取液对铅暴露小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响.方法 30只成年雄性昆明种小鼠分为3组:对照组、实验1组和实验2组,分别给予生理盐水、醋酸铅、醋酸铅+羊睾丸提取液,每天1次,共14 d.停药1周后手术取睾丸.用免疫组织化学技术检测睾丸生精细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达.结果 实验1组细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达较对照组差异均有显著性(P<0.01),实验2组较对照组均无显著性差异(P>0.05).结论 一定量的铅负荷可导致小鼠生精细胞凋亡,而羊睾丸提取液可通过上调Bcl-2及下调Bax的表达抑制铅暴露所导致的生精细胞凋亡.     

健胃益气汤对急性损伤胃粘膜细胞的Bcl-2和Bax表达的影响

目的研究预先给予健胃益气汤对无水乙醇致太鼠急性胃粘膜损伤的细胞保护作用。方法①取腺胃区组织制作切片并作H-E染色，光学显微镜观察胃粘膜组织的病理变化。（多用免疫组织化学ABC法对大鼠胃粘膜组织细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax等进行检测并通过图像分析对以上结果做定性、定位、定量分析及统计学处理。结果健胃益气汤预防用药能降低胃粘膜组织细胞Bax蛋白表达，增加Bcl-2蛋白表达，与实验对照组比较。有显著性差异（P〈0．01）。结论给予中药健胃益气汤可抑制细胞凋亡。减轻胃粘膜损伤。     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的 观察大剂量甲基强的松龙（methylprednisolone,MP）对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后神经细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响.方法 72只健康雌性Wistar大鼠随机分为创伤对照组及MP治疗组,各36只.以Allen′s法制作大鼠SCI模型.MP的给药方法为术后30 min内经鼠尾静脉给予MP 30 mg/kg;创伤对照组给予等容积生理盐水.术后1 h、4 h、12 h、24 h、3 天、7 天处死动物,取出脊髓组织,TUNEL检测细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Bcl-2、Bax mRNA.结果 SCI 24 h时,脊髓组织细胞凋亡达高峰,然后逐渐下降,给予MP治疗后,与创伤对照组比较凋亡指数明显降低（P＜0.05或P＜0.01）.Bcl-2、Bax mRNA结果显示,在SCI 4 h后各时间点MP组大鼠Bcl-2/Bax比值高于创伤对照组,24 h时更明显（P＜0.05或P＜0.01）.结论 细胞凋亡是SCI早期主要的生物学事件;细胞凋亡的调控基因家族Bcl-2/Bax通过调节细胞凋亡参与SCI的发生发展;MP可抑制大鼠SCI细胞的凋亡,从而实现对SCI的影响.     

拉莫三嗪对慢性致痫大鼠海马细胞凋亡的影响

目的 通过观察拉莫三嗪对戊四氮慢性致痫大鼠海马Bcl-2和Bax表达的影响来探讨其抗凋亡作用. 方法 选取健康成年雄性Wistar大鼠80只,按体重随机分为:正常组;模型组;丙戊酸钠低、中、高剂量组;拉莫三嗪低、中、高剂量组;每组10只.模型组,丙戊酸钠和拉莫三嗪低、中、高剂量组,每日腹腔注射戊四氮35 mg/(kg·d)制作慢性点燃癫痫模型(大约2周).然后腹腔注射戊四氮35 mg/(kg·d),隔日一次;同时丙戊酸钠和拉莫三嗪各剂量组分别给予相应剂量的丙戊酸钠和拉莫三嗪灌胃,每天一次,共3周.然后取海马标本做免疫组化检测Bcl-2和Bax的表达. 结果 模型组Bcl-2和Bax表达显著高于正常组(P<0.001).与模型组比较,丙戊酸钠和拉莫三嗪各剂量组Bcl-2高表达,Bax低表达(P<0.001).其中拉莫三嗪低剂量组与丙戊酸钠低剂量组之间差异没有统计学意义(P>0.05);拉莫三嗪中剂量组与丙戊酸钠中、高剂量组之间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01). 结论 拉莫三嗪和丙戊酸钠对戊四氮慢性致痫大鼠海马细胞凋亡均具有抑制作用,但拉莫三嗪优于丙戊酸钠.     

皮质发育障碍模型鼠海马区神经元凋亡机制的研究

目的:探讨皮质发育障碍(Disorder of cortical developments,DCDs)模型鼠海马神经元的凋亡机制.方法:利用卡莫司汀(BCNU)诱导建立SD大鼠皮质发育障碍动物模型,在出生后0 d(P0)、15 d(P15)、30 d(P30)、45 d(P45)和60 d(P60)时,采用TUNEL,检测海马区神经元凋亡,RT-PCR方法和免疫组化分别对8只模型鼠和正常鼠检测海马区Bcl-2和Bax的在mRNA和蛋白水平的表达,并结合图像分析系统进行结果分析.结果:成功建立SD大鼠皮质发育障碍动物模型;与对照组比较,TUNEL、免疫组化和RT-PCR检测结果显示:Po模型鼠组海马区神经元凋亡无明显变化,P15、P30、P45、P60模型组神经元凋亡逐渐加重,有显著差异(P<0.05),且随存活时间延长,模型组海鸟神经元Bax表达逐渐增强,Bax/Bcl=2比值较对照组增高,具有显著统计学意义(19<0.05).结论:皮质发育障碍模型鼠海马区存在显著的神经元凋亡,Bcl-2和Bax参与了其凋亡过程;皮质发育障碍模型鼠海马神经元凋亡可能参与了皮质发育障碍所致的癫痫及难治性癫痫的发病机制.     

冬虫夏草对乳腺癌细胞凋亡的诱导及相关基因表达的调控

目的:明确中药冬虫夏草(cordyceps sinensis,CS)对人乳腺癌细胞凋亡的影响及凋亡相关基因表达的调控。方法:应用MTT比色法检测CS对乳腺癌细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡;采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达水平的改变。结果:CS对人乳腺癌细胞株MCF-7生长有抑制作用,且呈时间/浓度依赖性;CS使MCF-7细胞发生细胞凋亡,流式细胞仪DNA直方图上出现了凋亡峰,且凋亡率呈浓度依赖性;细胞NDA裂解成180～200bp及其倍数的片段,电泳得到特有的梯形条带;随着药物浓度的增加,Bcl-2表达逐渐减弱,Bax表达逐渐增强。结论:CS可诱导乳腺癌细胞凋亡,为CS的抗肿瘤应用提供了理论依据,CS可能通过调控Bcl-2、Bax基因表达而诱导凋亡。