鼻咽癌端粒酶各组分基因表达与端粒酶活性的关系

目的明确鼻咽癌组织端粒酶各组分(hTR、TP1、hTERT)基因表达及其与端粒酶活性关系.方法采用RT-PCR和PCR-ELISA方法分别检测同一标本,包括鼻咽癌(NPC)组织、慢性鼻咽炎(CINE)组织端粒酶各组分基因表达和端粒酶活性.结果(1)43例NPC组织中,38例(88%)可检测到hTERTmRNA表达;16例CINE组织中均未能检测到hTERTmRNA表达,hTETRmRNA在NPC组织中表达显著高于CINE组织中hTERTmRNA的表达(P<0.05).(2)43例NPC组织中,39例(90.7%)表达hTR,38例(88%)表达TP1mRNA;16例CINE组织中,14例(87.5%)分别表达hTR和TP1mRNA.hTR或TP1mRNA在NPC和CINE组织中表达比较差异无显著意义(P>0.05).(3)NPC组织端粒酶活性(86%)显著高于CINE组织端粒酶的活性(0%)(P<0.05).(4)hTERTmRNA表达与端粒酶活性显著相关(P<0.05);而hTR或TP1mRNA的表达与端粒酶活性无关(P>0.05).(5)端粒酶各组分基因表达均与NPC临床分期和有无颈淋巴结转移无关(P>0.05).结论hTR和TP1mRNA在NPC和CINE组织中均高阳性率表达,并与端粒酶活性无关,hTERTmRNA仅在NPC组织中表达,与端粒酶活性呈高度一致性,提示hTERT在端粒酶活性调节中可能起决定性作用,对hTERTmRNA检测可以作为NPC临床诊断指标之一.     

乳癌组织中端粒酶活性与端粒酶RNA的表达

目的:分析乳癌组织中端粒酶(telomerase)活性和端粒酶mRNA(hTR)的表达.方法:采用PCR-TRAP-ELISA法对54例乳癌、配对癌旁及30例乳腺良性病变组织中端粒酶活性进行半定量检测,运用原位杂交方法检测hTR的表达.结果:癌组织中端粒酶活性及hTR表达率高于癌旁及良性病变组织(P＜0.01).乳癌组织中端粒酶活性的表达与患者年龄、肿块大小、分化程度无关(P＞0.05),但与组织学类型及淋巴结转移关系密切(P＜0.05).结论:端粒酶激活与乳癌的发生关系密切.     

Expression of telomerase and its RNA in nasopharyngeal carcinoma

Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ,ａｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎｔｈａｔｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｓｉｎｔｈｅｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｔｅｌｏｍｅｒｅｌｅｎｇｔｈ ,ｈａｓｂｅｅｎｆｏｕｎｄｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｃｅｌｌｉｍｍｏｒｔａｌｉｔｙａｎｄｍａｌｉｇｎａｎｃｙ Ｒｅｃｅｎｔｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｉｓａｈｉｇｈａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｉｎｍｏｓｔｈｕｍａｎｃａｎｃｅｒｓａｓｗｅｌｌａｓｉｎｉｍｍｏｒｔａｌａｎｄｔｕｍｏｒｃｅｌｌｌｉ…     

Telomerase activity in urine in diagnosis and recurrence surveillance of urothelial carcinoma

目的　探讨尿液中端粒酶活性在尿路上皮癌的诊断和监测复发中的意义。方法　采用PCR ELISA法对 5 4例尿路上皮癌尿液中端粒酶活性进行了检测 ,并观察了其中 2 3例术后尿液中端粒酶活性的变化 ,以 4 6例良性泌尿系统疾病患者作为对照组。结果　尿路上皮癌病人尿液中端粒酶活性明显增高 (P <0 0 0 1) ,肿瘤切除后恢复正常 ,在膀胱镜发现肿瘤复发前再次上升 ;随着肿瘤恶性程度的增加尿液中端粒酶活性逐渐升高 ;术前尿液中端粒酶活性与早期复发无关。结论　尿液中端粒酶活性的检测在尿路上皮癌的诊断中有参考价值 ,与肿瘤恶性程度有关 ,敏感度高于膀胱镜检查 ,可能成为监测尿路上皮癌复发的重要辅助手段     

人端粒酶RNA的cDNA探针制备及其对胃粘膜细胞端粒酶RNA表达的检测

目的 建立人端粒酶RNA表达的检测方法。方法 制备人端粒酶RNA，(human telomeraseRNA，hTR)的cDNA探针，分别应用RNA斑点杂交与端粒重复序列扩增法(TRAP)分析检测不同胃粘膜的端粒酶RNA的表达与端粒酶活性。结果 人端粒酶RNA的cDNA探针制备成功。18例活检胃癌组织及45例手术胃癌组织RNA斑点杂交检测的阳性率均为l00％，相应TRAP分析的阳性率分别为88．89％、86．67％，低于RNA斑点杂交(P＜0．05)。同时RNA斑点杂交结果提示在非癌胃组织中随着肠化程度增高人端粒酶RNA表达也增强。结论 RNA斑点杂交检测人端粒酶RNA，具有高度的敏感性和特异性，弥补了TRAP分析敏感性不足的缺点。     

Expression of P16 protein and Bcl- 2 protein in malignant eyelid tumors

目的　探讨肿瘤抑制基因p16和细胞凋亡抑制基因Bcl 2的表达与眼睑恶性肿瘤发生、发展的关系。方法　应用链霉亲和素 生物素 过氧化物酶复合物免疫组化法检测 96例常见眼睑恶性肿瘤中p16和Bcl 2蛋白的表达。结果　在 96例眼睑恶性肿瘤中 ,其中基底细胞癌 (basalcellcarcinoma) 40例 (70 0 %) ,鳞状细胞癌 (squamouscellcarcinoma) 33例 (5 4 6 %) ,眼睑皮脂腺癌 2 3例 (5 6 5 %) ,p16呈阳性表达 (细胞核染色 ) ;p16蛋白阳性表达与肿瘤分化程度呈负相关 ,高分化癌与低分化癌间比较差异有显著性 (χ2 =5 19,P <0 0 5 )。Bcl 2蛋白阳性者均为细胞浆染色。 4 0例BCC均为Bcl 2蛋白阳性 ,且几乎所有肿瘤细胞均呈阳性胞浆反应 ;33例SCC中 ,仅有 1例呈局灶性阳性反应 ,且染色较弱 ;2 3例眼睑皮脂腺癌者均未见Bcl 2阳性表达。结论　p16蛋白的表达与眼睑恶性肿瘤的发生及分化程度有关。Bcl 2蛋白在BCC的普遍过度表达提示凋亡抑制作用可能是BCC发病的分子生物学机制之一。     

端粒酶活性与骨肉瘤细胞分化的关系

【目的】探讨人骨肉瘤细胞分化与端粒酶活性调节之间的关系。【方法】用维甲酸和地塞米松诱导人骨肉瘤细胞分化 ,用端粒重复序列扩增法 (TRAP)检测端粒酶活性及用Northern印迹法检测人端粒酶RNA(RNA ,hTR)表达水平的改变。【结果】经维甲酸和地塞米松处理后 ,骨肉瘤细胞生长受到抑制 ,碱性磷酸酶活性升高 ,端粒酶活性明显下降 ,且与剂量 作用时间成负相关 ,但hTR表达水平并无改变。【结论】维甲酸和地塞米松有抑制骨肉瘤细胞增殖和诱导分化的作用 ,端粒酶活性下调可作为细胞分化指标 ,但与hTR表达水平不平行。     

反义hTR对人胃癌细胞株SGC-7901恶性表型的逆转作用

目的 探讨反义ｈＴＲ基因转染对胃癌细胞系ＳＧＣ－７００１恶性有型的逆转作用及其在肿瘤基因治疗中的价值。方法 构建包含端粒重复序列模板区的反义ｈＴＲ基因真核表达载体用脂质体法将其转染率胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１,比较观察反义ｈＴＲ基因转染后７９０１细胞的ｈＴＲＲＮＡ表达、端粒酶活性、体外生长增殖降低,体外生长增殖能力降低,接触抑制恢复、细胞凋亡率增加、软琼脂集落形成能力和裸鼠体内致瘤能力完全消失。结     

端粒酶基因hTR在大肠癌中的表达及其临床意义

目的　探讨大肠癌中端粒酶基因hTR表达与临床参数的关系 ,评价hTR表达检测在大肠癌诊断中的价值。方法　用原位杂交的方法检测端粒酶基因hTR在大肠癌、癌旁组织和大肠良性病变中的表达和分布情况。结果　结果 5 1例大肠癌中hTR基因表达阳性率为 94 .1% (48 5 1) ,5 1例癌旁组织中hTR基因表达阳性率为 0 (0 5 1) ,31例大肠良性病变中hTR基因表达阳性率为 3.2 % (1 31)。大肠癌组织中hTR基因的表达与癌旁组织、大肠良性病变比较差异有显著性 (P均 <0 .0 1)。大肠癌组织中hTR的表达与患者性别、病变部位、病理分类大体类型、淋巴结转移和临床分期无相关性 (P均 >0 .0 5 ) ,但与肿瘤病理分级相关 (P <0 .0 5 )。结论　端粒酶基因hTR表达检测在大肠癌诊断中可能有一定的价值。     

分泌性蛋白hk10在眼睑基底细胞癌中的表达

目的:研究在眼睑基底细胞癌(basal cell carcinoma,BCC)中NES1基因的分泌蛋白(human kallikrein 10,hk10)的表达情况,并分析其表达与表型之间的关系,从蛋白水平上研究NES1在BCC的发生发展过程中的作用。方法:采用免疫组化的方法检测hk10在31例眼睑BCC中表达情况,并分析其表达与表型之间的关系,采用Image-Pro Plus5.0图像分析系统对免疫组化结果进行扫描,定量分析hk10在不同组眼睑BCC中的表达。结果:免疫组化结果显示hk10主要表达在细胞浆中,呈棕黄色。在正常眼睑上皮组织中,hk10主要分布在上皮各层的鳞状上皮细胞胞浆中,靠近基底细胞层表达稍强;BCC原发组与BCC复发组在平均光密度上无显著性差异(P>0.05),在累积光密度(IOD)上,二者的差异具有统计学意义,BCC原发组具有较强的表达。结论:hk10在正常眼睑上皮组织中高表达,在眼睑基底细胞癌(BCC)中,hk10明显表达下调;NES1阳性表达细胞的减少,可能在眼睑BCC的复发中起一定作用;NES1作为一种新的抑癌基因,其可以作为眼睑BCC的肿瘤分子标记。     

Stable expression of antisense hTR inhibits in vitro pancreatic cancer cell growth

目的：为探讨抑制人端粒酶的模板RNA成分（hTR）能否抑制人胰腺癌细胞的端粒酶活性及细胞生长能力。方法：用分子克隆方法将593bp的hTR全长cDNA反向亚克隆到哺乳细胞表达载体pcDNA3.1（-）的多克隆位点上,以构建hTR反义表达质粒。酶切及序列分析证实此质粒为hTR反义表达质粒。此重组表达质粒与空质粒一起,通过脂质体法转导到人胰腺癌panc1细胞,并用G418筛选抗性克隆,所产生的稳定生长克隆用位于pcDNA3.1多克隆位点两侧的T7及GBH引物进行PCR扩增以证实外源hTR的存在。最后,对这些细胞的生长曲线、内源性hTR的表达、端粒酶活性及锚着非依赖性生长特性进行了分析。结果：转导有反义hTR重组质粒的人胰腺癌细胞与转导空载体及未转导任何质粒的对照细胞相比,Northern Blot及RT-PCR方法证实其内源性hTR的表达明显下调,TRAP方法证实其端粒酶活性明显下降。而且,其细胞增殖速度和软琼脂集落形成能力亦较对照组细胞明显减慢。但没有观察到明显的细胞衰老或凋亡现象。结论：上述结果表明hTR是人端粒酶复合物的关键组成部分,提示抑制端粒酶的hTR组分可能是抗肿瘤治疗的有效靶点。     

端粒酶基因和Ki-67蛋白在Hodgkin淋巴瘤肿瘤细胞中的表达

目的:研究Hodgkin淋巴瘤R-S细胞端粒酶基因表达及与Ki-67表达的相关性,探讨Hodgkin淋巴瘤的生物学行为.方法:用原位杂交的方法在4例正常淋巴结、7例反应性增生淋巴结和35例Hodgkin淋巴瘤中检测端粒酶基因hTR和hTRT的表达,同时应用免疫组化技术检测了Ki-67蛋白表达.结果:端粒酶基因hTRT、hTR在正常淋巴结和反应性增生淋巴结内有低水平或中等量的表达,hTRT和hTR分别在30/35、32/35例Hodgkin淋巴瘤的R-S 细胞中具有高表达.Hodgkin淋巴瘤内反应性淋巴细胞hTRT的表达弱,且较少,而hTR较为广泛. Ki-67在R-S细胞中的表达与hTRT、hTR较为一致,具有明显表达.结论:[ HTSS Hodgkin淋巴瘤的肿瘤细胞大部分具有hTRT、hTR和Ki-67的表达,因此R-S细胞具有恶性增殖能力 .     

核酶对肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的:观察针对人端粒酶RNA模板区的核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法:利用脂质体Lipofectamine介导,将已构建好的带有端粒酶核酶基因的重组质粒pBBS212Rz及空载质粒pBBS212转染肝癌SMMC-7721细胞,采用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,用倒置相差显微镜及流式细胞仪观察细胞生长和凋亡情况。结果:重组质粒pBBS212Rz转染的肝癌SMMC-7721细胞的端粒酶活性明显下降,细胞生长速度明显变慢,凋亡加速。结论:端粒酶核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞生长有抑制作用,可望成为肝癌基因治疗的方法。     

人胰腺癌端粒酶亚单位的表达及其意义

目的：探讨端粒酶亚单位表达水平与人胰腺癌发生的关系，以及表达与端粒酶活性高低的相关性。方法：应用RT－PCR，DNA测序等技术研究端粒酶亚单位在胰腺癌中的表达情况，用ELISA法检测端粒酶活性。结果：24例胰腺癌标本中hTERT mRNA表达阳性率为83．3％，而癌旁组织为8．3％，两者有显著性差异。hTERT mRNA的表达是人端粒酶活性表达的关键性因素。hTR入TP1 mRNA在癌组织及癌旁组织中的表达无统计学差异，与端粒酶活性的表达无相关性。结论：端粒酶参与了胰腺癌的发生；hTERT mRNA表达水平的上调可能在胰腺癌形成过程中起重要作用。     

α干扰素对A_(549)细胞端粒酶活性和p53蛋白的表达

目的 :探讨α 干扰素 (IFN α)对人肺腺癌细胞株A549细胞端粒酶活性和p5 3蛋白质表达的影响。方法 :用两种不同质量浓度IFN α(2 5 μg L ,10 0 μg L)处理人肺腺癌细胞株A549细胞 ,并设空白对照。采用TRAP 银染法检测端粒酶活性 ,用免疫荧光标记法测定p5 3蛋白的表达。结果 :IFN α作用后的A549细胞 ,端粒酶活性明显降低 ,且p5 3蛋白表达明显减少。结论 :IFN α能抑制肺腺癌细胞的端粒酶活性和p5 3蛋白的表达     

人端粒酶逆转录酶在膀胱肿瘤中的表达及其与预后的关系

目的检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)在膀胱肿瘤中的定量表达,探讨hTERT与膀胱肿瘤预后复发的关系。方法采用免疫组织化学法和高清晰彩色医学图文分析系统,对45例膀胱移行细胞癌(BTCC)组织标本中的hTERT的表达情况进行定量检测,并用13例正常膀胱组织标本作为对照。结果BTCC组织标本中均可见有hTERT的表达,正常膀胱组织中无表达。hTERT的表达强度与患者的性别、年龄、肿瘤的大小、部位以及肿瘤的单多发等情况无关(P>0.05),而与肿瘤复发有关(P<0.05)。结论hTERT在膀胱肿瘤中表达上调,其活性与预后相关,可以作为检测肿瘤复发的指标。     

食管癌及大肠癌和癌旁组织端粒酶活性的临床意义

目的：建立测定端粒酶活性的PCR－TRAP方法，并探讨其在食管癌、大肠癌诊断的意义。方法：应用端粒酶活性的PCR－TRAP方法，对36例食管癌、40例大肠癌及其癌旁组织进行了检测。结果：食管癌组织与癌旁组织端粒酶活性阳性检出率相比，差异有非常显性；伴随淋巴结转移的标本中端粒酶阳性检出率与未伴随淋巴结转移的标本比较，具有非常显性差异。40例大肠癌组织中端粒酶活性阳性检出率明显高于癌旁组织（P＜0．001）；伴随淋巴结转移的标本中端粒酶活性阳性检出率与未伴随淋巴结转移的标本相比，差异无显性。结论：端粒酶活性增高可能是致食管、大肠组织癌变的重要因素；端粒酶活性的检出可作为食管癌、大肠癌诊断的指标之一。     

大肠癌组织端粒酶活性检测

为研究大肠癌组织中端粒酶活性的表达情况 ,探讨其在大肠癌预防、诊断、治疗方面的临床价值。采用端粒重复扩增法 (TRAP)检测 4 0例大肠癌组织及其中 10例癌旁正常黏膜组织的端粒酶活性。发现 :4 0例大肠癌组织中 ,34例端粒酶活性阳性表达 ,阳性率为 85% ,10例癌旁正常黏膜组织端粒酶活性表达均为阴性。 2组阳性率比较差异有显著性 (P <0 .0 5)。端粒酶活性与大肠癌部位、细胞分化程度、Dukes分期及是否伴有淋巴结转移无关 (P >0 .0 5)。提示 :端粒酶普遍存在于大肠癌组织中 ,可作为大肠癌的基因标志物。检测大肠病变组织端粒酶活性有可能对大肠癌的早期发现、早期诊断和早期治疗有一定作用     

眼睑恶性肿瘤P53基因的表达

1目的　探讨 P5 3基因突变与眼睑恶性肿瘤发生的关系及临床病理学意义。 2方法　采用微波处理免疫组化 L SAB法 ,检测了 10 2例眼睑恶性肿瘤组织中 P5 3基因的表达。 3结果　原位癌及浸润癌 P5 3基因的表达强于正常上皮、轻度不典型增生及中度不典型增生组织 (H c=2 4.45 ,P<0 .0 5 )。鳞状细胞癌 (SCC)中低分化型癌的 P5 3基因表达强于高、中分化型 (H c=7.12 ,P<0 .0 5 )。眼睑 SCC,基底细胞癌及睑板腺癌的表达率分别为5 0 .0 % ,5 6 .6 % ,5 8.8% ,明显高于正常上皮组织及不典型增生组织 (χ2 =16 .73～ 2 5 .5 9,P均 <0 .0 1)。4结论　 P5 3基因突变与眼睑恶性肿瘤发生相关     

端粒酶基因在口腔黏膜白斑与口腔癌中的表达

目的 :探讨端粒酶基因在口腔黏膜白斑、口腔癌的表达相关性。方法 :应用原位杂交法检测端粒酶基因hTR和hTRT在 48例口腔黏膜白斑 (轻度增生 12例 ,中度增生 18例 ,重度增生 18例 )、口腔癌 3 2例中的表达。结果 :在口腔黏膜白斑轻、中度不典型增生组织中hTR ,hTRTmRNA呈弱表达 ( 1/ 12 ,1/ 12 ;3 / 18,4/ 18) ;在口腔黏膜白斑重度不典型增生中表达率明显增高 ( 13 / 18,72 .2 % ,12 / 18,66.7% ) ,口腔癌中端粒酶基因hTR ,hTRMTmRNA表达率很高 ( 2 9/ 3 2 ,90 .6% ,2 8/ 3 2 ,87.5 % ) ,口腔黏膜白斑的轻、中度不典型增生与重度不典型增生的表达比较有显著的意义 (P <0 .0 5 ) ,但与癌的表达无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论 :端粒酶基因hTR ,hTRT的表达与增生的程度有关 ,端粒酶的激活可能与口腔癌的发生有关