温补肾阳方药治疗肾阳虚证作用机制分子生物学研究进展

肾阳虚证为临床常见的中医证候。温补肾阳方药因具其有补肾助阳、益精填髓、生精化气等功效,在治疗肾阳虚证的各类疾病中发挥了不同的治疗效果。现代分子生物学以基因、递质、激素、细胞、信号分子为切入点,研究温补肾阳方药对肾阳虚证在分子生物学层面发挥的作用,为临床疾病治疗提供了新的研究方向,不仅在一定意义上推动了中医药的现代化发展,也为更好地运用现代分子生物学技术研究中医、中药提供较好的思路与方法。     

张仲景温补肾阳合用助阳法治疗肾阳虚证探讨

仲景治疗肾阳虚证代表方为金匮肾气丸,还有回阳救逆的四逆汤、温阳利水的真武汤、温肾阳散寒除湿的附子汤、温肾阳化痰饮的苓桂术甘汤等。其温肾阳每每选用附子、桂枝、干姜等辛温之品,然常合用阴中求阳、利水通阳、健脾生阳、心肾相济、风药升阳等助阳法,有效地增强了温补肾阳的效果。     

温补肾阳法治疗变应性鼻炎之浅见

现多认为变应性鼻炎发病的基本环节是肺气虚弱,卫表不固,然而肾阳虚损才是其发病的根本,温补肾阳法是基本的治疗原则,在此基础上兼顾肺、脾两脏,有望从根本上治愈变应性鼻炎.     

温补肾阳药对甲状腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的:研究温补肾阳药对肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响.方法:12只SD大鼠,随机分为3组,每组4只.模型组和治疗组切除两侧甲状腺,正常组做相应的假手术,但不切除甲状腺.喂养7 d后模型组和治疗组大鼠出现拱背耸毛、大便稀溏等肾阳虚的症状.从第8天开始,治疗组每天喂饲温补肾阳药1次,给药剂量6.7 g·kg~(-1),其他2组喂饲等体积的生理盐水,连续6 d后,断头处死3组大鼠,分离提取其肝线粒体蛋白质,分别用荧光染料Cy3,Cy5标记,每个Cy3及Cy5标记的样品与等量Cy2标记的内标混合后在同一块凝胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCyder 6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:双向电泳后,平均每块胶检测到997个蛋白质点,其中所有图谱共有的点有687个,并从中筛选到22个差异蛋白,其中热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、氨甲酰磷酸合成酶I,ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白和类钙离子激活中性蛋白酶12在肾阳虚状态下表达量均增加,而二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、鸟氨酸转氨酶和GTP结合调节蛋白在肾阳虚状态下表达量均降低.经温补肾阳药治疗后,热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶和GTP结合调节蛋白表达量均增加,而氨甲酰磷酸合成酶I和类钙离子激活中性蛋白酶12表达量减少.结论:温补肾阳药可能通过调节物质代谢、保护线粒体膜稳定性和维护细胞内信号传导而起到治疗肾阳虚的作用.     

温补肾阳法治疗消渴病的临床研究进展

通过临床观察及古今文献研究,认为消渴病的病机当以阴虚燥热为标,肾气（阳）虚为本,温补肾阳法治疗消渴病为治本之法,临床有明显疗效.实验研究已证实温补肾阳药确有降糖作用.     

温补肾阳药对丙基硫氧嘧啶引起肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的：应用凝胶内差异显示电泳技术研究温补肾阳药对药物性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响。方法：正常大鼠、通过喂饲丙基硫氧嘧啶造成肾阳虚模型大鼠和温补肾阳药治疗大鼠的肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy2、Cy3、Cy5标记，等量混合后在同一胶中进行电泳分离，经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。经DeCyder软件进行差异蛋白质组分析，筛选出16个差异蛋白质。经质谱测定及数据库比对，其中10个蛋白质得到鉴定。结果：肾阳虚时氨甲酰磷酸合成酶1、二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、泛醇-细胞色素C还原酶核心蛋白I、异戊酰辅酶A脱氢酶、热休克蛋白60、琥珀酰CoA合成酶、羟氨基辅酶A脱氢酶／酮脂酰辅酶乙酰辅酶A脱氢酶α亚基、鸟氨酸转氨甲酰酶、谷胱甘肽过氧化物酶表达量均增加，而鸟氨酸氨基转移酶表达量降低。应用温补肾阳药治疗后，上述蛋白质的表达量均有不同程度的纠正。结论：喂饲温补肾阳药的肾阳虚模型大鼠糖、脂类和蛋白质代谢均得以改善，可能与温补肾阳药维护线粒体膜稳定性有关。     

温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响的研究

 目的利用双向凝胶内差异显示电泳技术,分析温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响。方法正常大鼠、肾阳虚大鼠及温补肾阳药治疗大鼠肝线粒体蛋白质样品分别用荧光染料Cy2,Cy3,Cy5标记,经双向电泳后用不同波长光激发扫描后得到不同样品的蛋白质组图谱,经DeCyder软件分析,以肾阳虚动物与正常动物肝线粒体蛋白质相差1.2倍以上的蛋白作为差异蛋白,共获得16个差异蛋白质,经质谱测定和与蛋白质文库比对,其中11个蛋白质得到鉴定。结果肾阳虚动物由于肾上腺皮质功能受损,引起热休克蛋白60和70含量增加,可能起到调整处于应激状态的细胞存活、保护细胞免受损伤的作用;肾阳虚动物糖代谢和脂代谢功能降低,而蛋白质代谢和核酸代谢功能增强,表现为二氢硫辛酰胺脱氢酶和脂酰辅酶A脱氢酶活性降低,而肌氨酸脱氢酶、氨甲酰磷酸合成酶和亚硫酸氧化酶活性增加;肾阳虚动物由于三羧酸循环和脂肪酸β-氧化功能障碍,引起ATP合酶、醛脱氢酶和NADH脱氢酶活性代偿性增加,试图通过增加ATP的产量以缓解能量代谢的不足;但肾阳虚动物由于鸟氨酸氨基转移酶活性降低,导致储存能量的肌酸合成降低,使产生的ATP大部分通过热能形式消耗掉,从而导致肾阳虚的临床虚寒症状。应用温补肾阳药治疗后使热休克蛋白60更趋增加,可能加强对细胞的保护作用;温补肾阳药增加二氢硫辛酰胺脱氢酶的活性,可通过改善糖代谢和促进三羧酸循环功能使机体的能量代谢增强;温补肾阳药还可以通过增加ATP合酶和醛脱氢酶的含量,使ATP的产量增加,缓解能量代谢功能障碍。结论温补肾阳药可以通过调整线粒体内多种与能量代谢相关蛋白质表达而起到治疗肾阳虚的作用。     

温补肾阳法对肾阳虚变应性鼻炎大鼠模型鼻黏膜重塑的影响

目的:研究温补肾阳法对肾阳虚变应性鼻炎(AR)大鼠模型鼻黏膜重塑的影响。方法:在腺嘌呤致肾阳虚病理模型的基础上,用卵清蛋白为过敏原对大鼠致敏,建立肾阳虚变应性鼻炎大鼠模型。以温补肾阳代表方剂金匮肾气丸灌胃,鼻中隔黏膜组织标本石蜡包埋,采用苏木素-伊红(HE)、阿辛蓝-过碘酸-希夫(AB-PAS)和Masson三色胶原染色(MT)法染色,计数鼻中隔黏膜中嗜酸粒细胞、上皮杯状细胞数量、半定量测量鼻中隔黏膜和鼻甲基底膜区及上皮下胶原含量。结果:病理结果显示温补肾阳组鼻黏膜嗜酸粒细胞数、杯状细胞化生数、MT染色蓝色面积呈逐渐减少趋势,但仍明显高于正常对照组(P<0.05)。结论:AR鼻黏膜存在重塑,且随着变应原的持续接触,重塑将进一步加重,最终发生不可逆性改变。金匮肾气丸可有效控制AR,减缓或一定程度逆转鼻黏膜重塑,而对于已发生的不可逆性改变并无明显逆转或修复作用。     

温补肾阳治结石体会

泌尿系结石属中医“淋病”范畴。病机多为下焦湿热而蕴结成石。治法以清利湿热、利尿排石为常法。但临床上常常遇到用常法治疗无效,反而变生他证,并出现肾阳虚衰的症状,而同时用温补肾阳治疗,则结石自行排出。现例举典型病例将治疗经验体会介绍如下。 武某,男,36岁,农民,1999年12月24日初诊。主因肾结石在某乡医处服用排石汤剂10余剂,而出现腰酸肢冷,阳痿,早泄,小便末段有白浊之物排出,大便溏泄,舌质淡胖有齿痕,苔花剥,脉沉细。辅助检查:尿常规可见精虫2～3个,肾功能正常。B超:双肾大小正常,右肾中上极可见0.75cm强回声伴声影。因患者…     

甘凉与甘温归肝肾经中药对雌二醇致小鼠肾阳虚的影响

目的观察比较甘凉归肝肾经(女贞子、龟甲)与甘温归肝肾经(海马、菟丝子)中药对雌二醇致小鼠肾阳虚的影响。方法ICR雄性小鼠,随机分为正常对照组、模型对照组、金匮肾气丸组、女贞子组、龟甲组、海马组、菟丝子组。采用腹腔注射苯甲酸雌二醇造成小鼠肾阳虚模型。灌胃给药,连续12d,每日1次。期间观察小鼠体征,测量小鼠肛温、抓力、自主活动;末次给药后取血,测血清TP、ALB、TC、TG、ALT、AST等生化指标;取肝、肾、睾丸、精囊腺,测定脏器指数。结果女贞子、龟甲能增加肾阳虚小鼠自主活动,升高血清TP、ALB水平,其中女贞子还能增加抓力,减少肝脏指数,升高血清TC、TG水平。海马、菟丝子能升高肾阳虚小鼠的肛温,增加抓力和自主活动,增加精囊腺指数,降低血清ALT、AST水平,减少肝脏指数,其中海马还能增加肾脏指数,菟丝子还能增加睾丸指数。结论四味中药均通过甘入肝肾而表现出改善腰膝酸软、精神萎靡的作用,但在改善畏寒肢冷、性欲减退、肝功能损害等方面有一定差异。说明性味归经相同的中药可表现出相近或相同的药理作用;甘温、甘凉归肝肾经中药虽然味甘、作用部位在肝肾经,但因药性不同,药理作用仍有较大差异,故在"性味结合归经"层面探讨中药功效的共同规律可能更有意义。     

Hsa-miR-3074在肾阳虚证中的表达差异性研究

目的探讨miR-3074-3p的表达对肾阳虚证发生的影响。方法采集14例肾阳虚证患者和10例健康者外周静脉血,取其白细胞,使用TRIzol法提取RNA并进行质量检测。将该样本的总RNA逆转录合成cDNA,通过实时定量PCR检测,分析miR-3074-3P的相对表达量。结果miR-3074-3p在肾阳虚证组中相对于健康对照组表达上调。结论miR-3074-3p在肾阳虚证患者基因表达中相对于健康人上调明显,其作用机制需进一步研究证实。     

热补针法对肾阳虚小鼠肾上腺皮质影响的研究

以血浆皮质酮和皮质醇浓度及光镜和电镜下的组织学观察为效应指标,观察热补针法对小鼠肾上腺皮质结构和功能的影响。结果表明：热补针法能明显改善肾阳虚小鼠的肾上腺皮质的结构和功能,提高血浆中皮质激素水平,抑制肾上腺皮质的萎缩,促进细胞内的物质代谢和激素合成过程。热补针法的调整效应明显优于捻转补法,说明热补针法对肾阳虚证小鼠的肾上腺皮质具有相对特异性。     

温阳补肾法治疗阳虚不寐体会

介绍运用温阳补肾法治疗阳虚不寐的经验。认为阳气不足或阳浮可导致心神失养而不寐,症状为夜寐困难、欲寐而不深、恶梦较多等,方予金匮肾气丸或右归丸等温补阳气。并举验案3则。     

肾阳虚大鼠垂体-甲状腺轴功能动态分析

目的:了解肾阳虚时垂体-甲状腺轴功能动态变化特征。方法:肌肉注射可的松复制肾阳虚大鼠模型,采用分批宰杀的方法观察早期、中期和晚期肾阳虚大鼠垂体-甲状腺轴功能指标,分析变化规律和特征。结果:肾阳虚不同时期垂体-甲状腺轴功能下降程度不一。结论:较理想的肾阳虚动物模型时间为15~30天。     

盐巴戟对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的调节作用

目的研究盐巴戟补肾壮阳作用增强的药效机制。方法采用甲巯咪唑灌胃给药的方法复制阳虚内寒证大鼠模型,以右归丸为阳性对照,分别给予模型大鼠巴戟肉、盐巴戟的高、中、低剂量的水煎液。测定大鼠血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、血清游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)、血清促甲状腺素(TSH)、下丘脑促甲状腺素释放激素(TRH)、血清一氧化氮(NO)、血浆环磷酸腺苷(c AMP)、血浆环磷酸鸟苷(c GMP)和c AMP/c GMP值,并作甲状腺病理学检查。结果巴戟肉和盐巴戟均可以改善大鼠甲状腺功能低下的症状,其中盐巴戟的治疗效果最为显著,较相同剂量的巴戟肉好。结论推测巴戟天补肾壮阳作用可能与调节大鼠的下丘脑-垂体-甲状腺轴功能有关。     

苁蓉总苷对氢化可的松致肾阳虚小鼠学习记忆功能的影响

目的:观察苁蓉总苷对氢化可的松所致肾阳虚模型小鼠学习记忆障碍的影响.方法:连续灌胃给予苁蓉总苷30d,于实验的第11～18天灌胃氢化可的松(正常对照组除外)复制肾阳虚模型,观察记录小鼠的一般状态及死亡情况,使用跳台法观察小鼠的学习记忆功能.结果:(1)苁蓉总苷各剂量组少动、竖毛、少食、少饮、颤抖等阳虚症状均有明显改善,动物死亡数明显减少.(2)苁蓉总苷各剂量组在给予氢化可的松后,各动物的跳台潜伏期明显延长,5min内的错误次数明显减少.结论:苁蓉总苷能明显改善氢化可的松致阳虚小鼠的一般状况及学习记忆功能障碍,并能明显降低小鼠的死亡率.     

铁皮石斛枸杞黄精片补肾壮阳作用的研究

目的:研究铁皮石斛枸杞黄精片的补肾壮阳作用。方法:采用去势幼年大鼠模型,观察给予铁皮石斛枸杞黄精片对大鼠体质量、附性器官系数以及血浆促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)、睾酮(T)水平的影响;采用氢化可的松造小鼠肾阳虚模型,观察给予铁皮石斛枸杞黄精片对小鼠体质量、低温游泳时间以及相关脏器系数的影响。结果:铁皮石斛枸杞黄精片0.6、0.3、0.15 g/kg剂量给药3周,能提高去势幼年大鼠前列腺+精囊以及提肛肌系数,降低血浆中FSH、T激素水平,但对体质量以及血浆LH水平无明显影响;0.8、0.4、0.2g/kg 3个剂量给药15 d,能明显延长氢化可的松诱发肾阳虚模型小鼠低温游泳时间,并使脾脏、肾上腺系数略有降低,高剂量组睾丸+附睾系数略有增加,但高剂量抑制该模型小鼠的体质量增长。结论:铁皮石斛枸杞黄精片对去势幼年大鼠模型有部分保护作用,并能部分改善氢化可的松诱发肾阳虚模型小鼠的肾阳虚指标。     

育麟方对肾阳虚大鼠排卵功能的影响

目的探讨育麟方对肾阳虚大鼠模型排卵功能的影响,并了解其药效学作用。方法大鼠肌注氢化可的松注射液36mg/kg×9d,再25mg/kg×5d造成肾阳虚证模型,随机分为模型组、西药组、育麟方低和高剂量组,另设10只大鼠为正常组。模型组和正常组均灌胃生理盐水,其余3组分别灌胃相应药物,连续15d,每日称体质量。于动情期取血,测定血浆β-内啡肽、血清E2和P含量。结果用药后育麟方高、低剂量组体质量显著高于其余组(P<0.05);β-内啡肽含量显著高于西药组(P<0.05),与正常组比较无显著性差异(P>0.05);育麟方高剂量组E2和P含量与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。结论育麟方能显著恢复造模后大鼠体质量、血浆β-EP、血清E2和P含量,作用优于克罗米芬或类似。     

苁蓉健肾丸配合阿仑磷酸钠治疗肾阳虚型老年性骨质疏松症疗效观察

目的观察苁蓉健肾丸配合阿仑磷酸钠治疗肾阳虚型老年性骨质疏松症的临床疗效。方法将68例肾阳虚型老年性骨质疏松症患者随机分为观察组和对照组各34例。对照组给予阿仑磷酸钠等常规药物治疗,观察组在此基础上给予苁蓉健肾丸治疗,2组均以2个月为1个疗程,连续治疗2个疗程。观察2组治疗效果及治疗前后骨密度及骨代谢生化指标变化情况,统计2组不良反应发生情况。结果治疗后观察组总有效率显著高于对照组(P0.05);治疗后2组股骨颈和腰椎骨密度及血钙、BGP和BALP水平均显著升高(P均0.05),而血磷、尿钙/肌酐及TRAP水平均显著降低(P均0.05),且观察组各指标改善情况均显著优于对照组(P均0.05)。2组均无明显不良反应发生。结论苁蓉健肾丸联合阿仑磷酸钠治疗肾阳虚型老年性骨质疏松症能够有效提高骨密度,改善骨代谢生化指标,疗效确切且安全。